Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

GM נתמכת על ידי מלגת בוגר NDSEG. VLT נתמכת על ידי מענק NIH NIGMS #GM137906 וקרן ריטה אלן. AJS נתמך על ידי מענקי משרד ההגנה W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197, וקרן ריטה אלן. אנו מודים לד"ר Alexxai Kravitz בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון על תכנון והפיכת קבצי המדפסת התלת-ממדית לזמינים באופן חופשי עבור רצפת החדר 2 וצלחת הבדיקה.

כל הניסויים שכללו שימוש בעכברים והנהלים שבוצעו בהם אושרו על ידי ועדות הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדיים של מרכז הסרטן MD Anderson ואוניברסיטת סטנפורד, בהתאם קפדנית למדריך של המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.
1. בניית MCA
<ol><li>מבנה תא 1 עם הממדים ה?...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

כמו בכל המבחנים ההתנהגותיים, טיפול נכון, אקראיות ועיוורון לטיפול בבעלי חיים הם חיוניים לאורך כל הדרך. בהתחשב בתשומות הרב-גורמיות להתנהגויות מורכבות ולקבלת החלטות, חובה על בעלי חיים להיות מטופלים, מורגלים ונבדקים באופן עקבי ככל האפשר תוך מזעור המצוקה. יש להקפיד גם לשחזר את תזמון מיקום העכב...

כאב הוא חוויה מורכבת עם מרכיבים חושיים ורגשיים. הפחתה בסף תפיסת הכאב ורגישות יתר לגירויים תרמיים ו/או מכניים הם מאפיינים מרכזיים של חוויה זו, שמבחני התנהגות כאב מעוררי גירוי יכולים ללכוד (כמו מבחן רגישות החום של Hargreaves ומבחן פון פריי של רגישות מכנית)1,2. למרות שמבחנים כאלה נותנים תוצאות חזקות וניתנות לשחזור, הם מוגבלים על ידי הסתמכותם על נסיגה רפלקסיבית מגירוי מרושע נתפס. זה הטיל ספק בהסתמכות מתמשכת של מחקרי כאב על בדיקות אלה בלבד. לשם כך, חוקרי כאב בוחנים כבר מספר שנים מבחנים התנהגותיים חלופיים/משלימים לשימוש במודלים של כאב מכרסמים במאמץ ללכוד יותר מהמרכיבים הרגשיים ו/או המוטיבציוניים של הכאב. אמצעים לא מעוררים, רצוניים או לא רפלקסיביים אלה (למשל, ריצת גלגלים, פעילות מחילה, העדפת מקום מותנית 3,4,5) מיושמים בניסיון לשפר את יכולת התרגום של מחקר כאב פרה-קליני.
הבדיקה למניעת קונפליקט מכני (MCA) תוארה במקור על ידי Harte et al. בשנת 20166, משמשת בעיקר בחולדות 7,8, ומייצגת שינוי של גישה קודמת - פרדיגמת ההימנעות ממקום בריחה. בגישה זו, גירוי מזיק של הכפה האחורית מבוצע בתא רצוי (כהה) אחרת כדי להניע התנהגות תכליתית של החיה כדי לברוח / למנוע גירוי כזה 9,10. במקום להסתמך על גירוי ידני של הכפה האחורית על ידי משקיף, מבחן ה-MCA מאלץ את העכברים לנהל משא ומתן על גירוי שעלול להיות מזיק כדי להימלט מסביבה מרתיעה ולהגיע לתא החשוך. הקונפליקט/ההימנעות שמעניקים לבדיקה את שמה נובעת משני המניעים המתחרים הללו: לברוח מאזורים מוארים היטב ולהימנע מגירוי מרושע של כפות הרגליים. בדיקת MCA גם חולקת תכונות עם בדיקות העדפת מקום מותנות, שבהן השילוב של שיכוך כאבים עם רמזים סביבתיים מניע שינויים בהתנהגות המשקפים העדפה להקשר משכך הכאבים/מתגמל11.
ביסודו של דבר, כל המבחנים הללו חולקים גישה דומה: שימוש בשינוי בהעדפתו של בעל חיים לסביבה מרתיעה אחת על פני אחרת כאינדיקטור למצב הרגשי/מוטיבציוני שלהם. מבחן MCA הוא פרדיגמה של 3 תאים המורכבת מתא מואר בהיר ואחריו תא אמצעי כהה עם בדיקות גובה מתכווננות ותא שלישי כהה ללא כל גירויים מרתיעים. עכבר לא מרוסן הוא בדרך כלל מוטיבציה לברוח לחדר חשוך, בהתחשב בסלידה המולדת של מכרסמים מאור בהיר12. בדוגמה זו, המוטיבציה הטבעית לברוח מסביבה מוארת בבהירות מתגברת על חוסר ההתאמה להיתקל בגירוי כפות אחוריות (בדיקות הגובה המתכווננות), המתרחש אך ורק בסביבה החשוכה. לעומת זאת, עכבר החווה כאב (עקב דלקת או נוירופתיה, למשל) עשוי לבחור לבלות זמן רב יותר בסביבה המוארת, שכן יש מוטיבציה להימנע מחוויית המישוש הלא נעימה של הגשושיות המכניות בהגדרת רגישות יתר מתמשכת למישוש.
מאמר זה מתאר גרסה שונה של בדיקת MCA. התאמנו את השיטה המקורית (שבוצעה בחולדות6) לשימוש בעכברים. כמו כן, הפחתנו את מספר גבהי הגשושית שנבדקו משישה לשלושה (0, 2 ו-5 מ"מ מעל גובה הרצפה) על מנת לייעל את איסוף הנתונים. גישה זו נבדקה על פני מודלים רבים של כאב, ואומתה באמצעות משככי כאבים ידועים, מה שמצביע על כך שרגישות יתר לכאב ו/או השינויים הרגשיים והמוטיבציוניים הנלווים מניעים שינויים אלה בהתנהגות. גישה זו מהירה יחסית לניצוח וניתנת להתאמה בהשוואה לאמצעים אחרים שאינם רפלקסיביים, שיכולים לקחת ימים רבים של הרגלה ואימון 1,2. בשילוב עם מדדים אחרים של כאב, MCA יכול לייצר תובנות חשובות על ההיבטים הרגשיים והמוטיבציוניים של הכאב.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

הכאב מורכב הן מממדים חושיים (nociceptive) והן מממדים רגשיים (לא נעימים). במודלים פרה-קליניים, כאב הוערך באופן מסורתי באמצעות מבחנים רפלקסיביים המאפשרים מסקנות לגבי המרכיב הנוציפטי של הכאב, אך מספקים מידע מועט על המרכיב הרגשי או המוטיבציוני של הכאב. פיתוח מבחנים הלוכדים את מרכיבי הכאב הללו הם אפוא חשובים מבחינה תרגומית. לפיכך, חוקרים צריכים להשתמש במבחנים התנהגותיים לא רפלקסיביים כדי לחקור את תפיסת הכאב ברמה זו. הימנעות מקונפליקט מכני (MCA) היא בדיקת התנהגות לא רפלקסיבית מרצון מבוססת, לחקר תגובות מוטיבציה לגירוי מכני רעיל בפרדיגמה של 3 תאים. שינוי בהעדפת המיקום של העכבר, כאשר הוא מתמודד עם גירויים רעילים מתחרים, משמש כדי להסיק את אי הנעימות הנתפסת של אור בהיר לעומת גירוי מישושי של כפות הרגליים. פרוטוקול זה מתווה גרסה שונה של בדיקת MCA שבה חוקרי כאב יכולים להשתמש כדי להבין תגובות רגשיות-מוטיבציוניות במגוון מודלים של כאב עכברים. אף על פי שלא תוארו כאן באופן ספציפי, נתוני ה-MCA לדוגמה שלנו משתמשים באדג'ובנט התוך-פלנטרי השלם של פרוינד (CFA), בפגיעה עצבית שנחסכה (SNI) ובמודל שבר/יציקה כמודלים של כאב כדי להמחיש את הליך ה-MCA.

בדיקת MCA שימשה בהצלחה עם מספר מודלים של כאב עכברים שונים מבחינה מכניסטית. איור 2 מציג נתונים שבהם מדד התוצאה של הבחירה היה חציית נקודת האמצע של תא 2 (איור 2A). הנתונים המתקבלים על ידי שימוש בנקודת אמצע הדרך לעומת הבריחה לחדר 3 דומים מאוד, ~ 40 שניות למחצית הדרך לעו...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

הבדיקה המכנית למניעת קונפליקטים משמשת כקריאה לא רפלקסיבית של רגישות לכאב בעכברים, שבה ניתן להשתמש כדי להבין טוב יותר תגובות רגשיות-מוטיבציוניות במגוון מודלים של כאב עכברים.

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות על מצב יעיל או מוטיבציה של בעלי חיים בתנאי כאב שונים. זהו צעד חשוב בשיפור התרגום של המחקר הפרה-קליני. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מהירה וקלה יחסית לביצוע, אך עדיין מעריכה מניעים מורכבים המשפיעים על התנהגות הקשורה לכאב.התחילו בבניית הדפנות, הרצפה והתקרה של החדר הראשון באמצעות אקריליק לבן אטום בעובי שלושה מילימטרים. עבור הקיר הפונה לחזית, השתמש באקריליק שקוף בעובי שלושה מילימטרים. חברו את המכסה של החדר עם ציר, כך שניתן יהיה להכניס עכברים בקלות לתוכה ולאחזר אותם מהתא.לאחר מכן חברו סרט דיודה פולט אור דבק עצמי למשטח הפנימי של המכסה כדי לספק תאורה של כ-4, 800 לוקס. החלק יריעת אקריליק אטומה לתוך ומחוץ למקומה כדי לסגור את תא אחד משאר מכשיר ה- MCA. לאחר מכן, בנו תא לא מואר באורך 270 מ"מ, תא הבדיקה MCA, תוך שימוש באקריליק אדום כהה שקוף מכל הצדדים עם מכסה צירי למעלה.לאחר מכן מניחים רשת בגודל 13 על 31 עם שני חורים מילימטרים על רצפת התא שדרכם יכול לבלוט מערך של בדיקות קהות עם קצוות בקוטר 0.5 מילימטר. התאימו את גובה הגשושיות על ידי הצבת יריעות אקריליות נוספות מתחת ללוח הבסיס של הגשושית. באמצעות גישה זו, הגדר את המכשיר בגבהי בדיקה אפס, שניים וחמישה מילימטרים.כחלופה לסיכות מפה קהות או חומרים דומים, השתמש בקבצי המדפסת התלת-ממדית כדי להדפיס את רצפת החדר השני ואת לוחית הבדיקה עם חומר רחיץ וניתן להתאמה ביולוגית כגון ניילון 12 פלסטיק. לבסוף, בנו תא כהה שלושה באמצעות אקריליק אדום כהה שקוף מכל הצדדים עם מכסה ציר הדומה לתאים אחד ושניים. הניחו אותו בקצה הנגדי של תא אחד כדי שישמש כאזור מילוט חשוך מהגשושיות המכניות בתא השני.יום אחד לפני תזמון הבדיקה הבסיסית, התאקלמו בעכברים ליחידת ה-MCA למשך 5 עד 15 דקות עם חבריהם לכלוב כדי להקל על חקירה חברתית של המכשיר כולו. יש לוודא כי נוריות ה- LED בתא אחד כבויות, המחסום בין תאים אחד ושניים נשאר פתוח והגששים אינם בולטים דרך רצפת התא השני. לאחר מכן, הגדר מצלמת וידאו המסוגלת להקליט קטעי וידאו של 1080 פיקסלים על חצובה עם מבט פונה הצידה של כל מכשיר ה- MCA.התאם את שדה הראייה כך שה- MCA ימלא את התמונה המוקלטת. לאחר תחילת ההקלטה, החזיקו לוח מחיק יבש כף יד בתצוגת השדה של המצלמה כדי לתייג את תחילת הסרטון במידע מזהה על ריצת הניסוי של החיה. בהפעלה הראשונה, הגדר את גובה הגשושית לאפס והעביר את העכבר לבדיקה מהכלוב הביתי שלו לתא אחד עם דלת המחסום במקומה.הפעילו טיימר שנראה לעין בקטעים המוקלטים. לאחר 10 שניות, הפעל את התא נוריות LED אחד. לאחר שהעכבר נמצא בתא המואר במשך 20 שניות, משכו את המחסום בין תאים אחד ושניים.התבוננו בבעל החיים במשך שתי דקות ומדדו את העיכובים או את זמני השהייה באמצעות שעון עצר בזמן שהבדיקה נמשכת. רשמו את ההשהיה לכניסה הראשונה לתא השני, את ההשהיה לחצות יותר ממחצית הדרך על פני תא שני, את זמן השהייה הכולל בתא השני, את ההשהיה כדי להגיע לתא השלישי ואת זמן השהייה הכולל בכל תא תוך שתי דקות ולהמיר אותם לפרופורציות. לאחר השלמת הבדיקה, החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו.נקו את תאי ה-MCA עם 70% אתנול ואפשרו לו להתייבש לחלוטין. לאחר הרצת כל העכברים בקבוצה כאשר גובה הבדיקה נקבע לאפס, הכנס יריעה של שלושה מילימטרים של אקריליק מתחת ללוחית הבסיס של הגשושית המכנית וחזור על הריצה עם גובה בדיקה של שני מילימטרים. לאחר הפעלת כל העכברים עם גובה הגשושית המוגדר לשני מילימטרים, הכניסו עוד יריעת אקריליק של שלושה מילימטרים מתחת ללוח הבסיס של הגשושית וחזור על הריצה עם גובה בדיקה של חמישה מילימטרים.בצעו ניקוי סופי עם חומר חיטוי בסוף הבדיקה. במודל הכאב הדלקתי השלם של פרוינד המושרה על ידי אדג'ובנט, הזרקה מלוחה אינה משנה את חביון הבריחה בהשוואה לנקודת ההתחלה. עכברים שהוזרק להם האדג'ובנט הראו עלייה משמעותית בהשהיית מילוט ארבעה ימים לאחר ההזרקה, אך רק כאשר גובה הגשושית הועלה לחמישה מילימטרים.ההשהיה המוגברת הזו לא נראתה בעכברים שקיבלו קרפרופן 90 דקות לפני תחילת הבדיקה. מודל הפגיעה העצבית שנחסך של כאב נוירופתי הגדיל משמעותית את ההשהיה כדי לברוח לעומת קו הבסיס כאשר גובה הבדיקה נקבע לחמישה מילימטרים. עלייה זו נמנעה על ידי מתן של בופרנורפין משכך כאבים אופיואידי 90 דקות לפני הבדיקה.חביון מילוט מוגבר נצפה גם בעכברים שלא עברו סבב בסיסי של בדיקות MCA לפני פגיעה עצבית. ההשהיה המוגברת של הבריחה בעכברים שנחסכו מפגיעה עצבית בחמישה מילימטרים נמנעה על ידי גאבאפנטין שניתן 90 דקות לפני הבדיקה. במודל השבר או היציקה, ההשהיה לברוח מתא אחד עלתה באופן פרופורציונלי לגובה הגשושית לפני הפציעה.לאחר הפציעה, ההשהיה נותרה ללא שינוי ברמה של אפס מילימטרים, אך עלתה משמעותית בגובה הגשושית של שני מילימטר וחמישה מילימטרים לזכרים ובגובה הגשושית חמישה מילימטרים לנקבות בהשוואה לקו הבסיס. הדבר החשוב ביותר שיש לזכור כאשר מנסים הליך זה הוא לוודא שכל העכברים מורגלים למכשיר MCA, ולשמור על אקראיות וסנוור נאותים לאורך כל המחקר. ניתן להשתמש בשיטה זו לצד מדדים אחרים של רגישות לכאב, כולל פון פריי או העדפת מקום מותנית.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב<em&gt; דרוזופילה</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

ממברנה דיי הדמיה אפשרית של ventromedial היפותלמוס נוירונים מעכברים בוגרים ללמוד גלוקוז חישה

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

מבחנים כדי זיהוי מבנים המשקף-UV ו לקבוע וחשיבותם העדפות Mate באמצעות מולי המפרש<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Assay למדוד Nucleocytoplasmic התחבורה בזמן אמת בתוך מוטורי נוירון כמו NSC-34 תאים

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

ניתוח תפוקה גבוהה של התנהגות גינקולוגיות וזמינותו האי דרוזופילה

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic Entrainment התנודות תטא בהיפוקמפוס ב מתנהג עכברים

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...