Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
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GM은 NDSEG 대학원 펠로우십의 지원을 받습니다. VLT는 NIH NIGMS 보조금 #GM137906와 Rita Allen Foundation의 지원을 받습니다. AJS는 국방부 보조금 W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 및 Rita Allen Foundation의 지원을 받습니다. 우리는 챔버 2 층 및 프로브 플레이트에 대한 3D 프린터 파일을 설계하고 자유롭게 사용할 수있게 해준 워싱턴 대학 의과 대학의 Alexxai Kravitz 박사에게 감사드립니다.

생쥐의 사용과 그에 따른 절차와 관련된 모든 실험은 MD 앤더슨 암 센터 및 스탠포드 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었으며, 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 국립 보건원 가이드를 엄격히 준수했습니다.
1. MCA 건설
<ol><li>측벽, 바닥, 천장에 사용되는 불투명 한 흰색 3mm 두께의 아크릴에서 125mm x 125mm x 125mm (너비 x 깊이 x 높이)의 125mm ...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

모든 행동 테스트와 마찬가지로, 적절한 취급, 무작위 화 및 동물 치료에 대한 맹목은 전체적으로 필수적입니다. 복잡한 행동과 의사 결정에 대한 다요인적 투입을 감안할 때, 동물은 고통을 최소화하면서 가능한 한 일관되게 다루고, 습관화하고, 테스트해야합니다. 또한 챔버 1에서 마우스 배치 타이밍을 재현하고, LED 조명을 켜고, 장벽을 제거하는 데주의를 기울여야합니다.이 차이는 후속 동작?...

통증은 감각 및 정서적 구성 요소에 대한 복잡한 경험입니다. 통증 인식의 역치의 감소와 열 및 / 또는 기계적 자극에 대한 과민증은이 경험의 주요 특징이며, 자극으로 유발 된 통증 행동 테스트는 (Hargreaves의 열 감도 테스트 및 기계적 감도의 폰 프레이 테스트와 같은) 1,2. 이러한 테스트는 강력하고 재현 가능한 결과를 제공하지만, 인식 된 유해한 자극으로부터의 반사적 인 철수에 대한 의존으로 인해 제한됩니다. 이것은 이러한 검사에만 대한 통증 연구의 지속적인 의존에 의문을 제기했습니다. 이를 위해 통증 연구자들은 수년 동안 통증의 정서적 및 / 또는 동기 부여 구성 요소를 더 많이 포착하기 위해 설치류 통증 모델에 사용하기위한 대안 / 보완 행동 테스트를 모색 해 왔습니다. 이러한 유발되지 않은, 자발적인, 또는 비-반사적 조치들(예를 들어, 휠 러닝, 굴을 파는 활동, 컨디셔닝된 장소 선호 3,4,5)은 전임상 통증 연구의 번역성을 향상시키기 위한 시도로 구현되고 있다.
기계적 충돌 회피 (MCA) 분석은 원래 2016 년Harte et al. 6에 의해 기술되었고, 래트7,8에서 주로 사용되며, 이전 접근법의 변형을 나타낸다 - 장소 탈출 회피 패러다임. 이 접근법에서, 뒷발의 유해한 자극은 그러한 자극(9,10)을 탈출/회피하기 위해 동물의 의도적인 행동을 유도하기 위해 달리 바람직한 (어두운) 챔버에서 수행된다. 관찰자에 의한 뒷발의 수동 유해한 자극에 의존하는 대신, MCA 분석은 마우스가 혐오스러운 환경에서 벗어나 어두운 챔버에 도달하기 위해 잠재적으로 유해한 자극을 협상하도록 강요합니다. 분석에 그 이름을 부여하는 갈등 / 회피는이 두 가지 경쟁 동기에서 비롯됩니다 : 밝게 빛나는 영역을 탈출하고 발의 유해한 자극을 피하십시오. MCA 분석은 또한 통증 완화와 환경 단서의 결합이 통증 완화 / 보람있는 컨텍스트11에 대한 선호도를 반영하는 행동의 변화를 유도하는 조건화 된 장소 선호도 테스트와 기능을 공유합니다.
근본적으로 말해서,이 모든 분석은 비슷한 접근법을 공유합니다 : 정서적 / 동기 부여 상태의 지표로 한 혐오스러운 환경에 대한 동물의 선호도의 변화를 사용합니다. MCA 분석은 밝게 빛나는 챔버와 조절 가능한 높이 프로브가있는 어두운 중간 챔버와 혐오스러운 자극이없는 어두운 세 번째 챔버로 구성된 3 챔버 패러다임입니다. 부상을 입지 않은 마우스는 일반적으로 밝은 빛에 대한 설치류의 선천적 혐오감을 감안할 때 어두운 방으로 탈출하도록 동기 부여됩니다12. 이 예에서, 밝게 빛나는 환경에서 벗어나려는 자연스러운 동기는 어두운 환경에서만 독점적으로 발생하는 뒷발 자극 (조정 가능한 높이 프로브)을 만나는 경향을 극복합니다. 대조적으로, 통증을 경험하는 마우스는 (예를 들어, 염증 또는 신경병증으로 인해) 밝은 환경에서 더 많은 시간을 보내도록 선택할 수 있는데, 이는 진행중인 촉각 과민증의 설정에서 기계적 프로브의 불쾌한 촉각 경험을 피하려는 동기가 있기 때문이다.
이 문서에서는 MCA 분석의 수정된 버전에 대해 설명합니다. 우리는 마우스에서 사용하기 위해 원래의 방법 (래트6에서 수행됨)을 적응시켰다. 또한 데이터 수집을 간소화하기 위해 테스트된 프로브 높이의 수를 여섯 개에서 세 개(바닥 높이보다 0, 2, 5mm)로 줄였습니다. 이 접근법은 여러 통증 모델에 걸쳐 테스트되었으며 알려진 진통제로 검증되어 통증 과민증 및 / 또는 관련 정서적 및 동기 부여 변화가 이러한 행동 변화를 주도하고 있음을 나타냅니다. 이 접근법은 다른 비 반사 적 조치와 비교할 때 상대적으로 빠르고 적응력이 뛰어나며, 습관화 및 훈련 1,2의 며칠이 걸릴 수 있습니다. 통증의 다른 척도와 함께 MCA는 통증의 정서적 및 동기 부여 적 측면에 대한 귀중한 통찰력을 창출 할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

통증은 감각 (nociceptive) 및 정서적 (불쾌한) 차원으로 구성됩니다. 전임상 모델에서 통증은 전통적으로 통증의 nociceptive 성분에 대한 추론을 허용하지만 통증의 정서적 또는 동기 부여 성분에 대한 정보는 거의 제공하지 않는 반사 검사를 사용하여 평가되었습니다. 따라서 이러한 통증 성분을 포착하는 테스트를 개발하는 것은 번역적으로 중요합니다. 따라서 연구자들은 그 수준에서 통증 인식을 연구하기 위해 비 반사 행동 분석을 사용해야합니다. 기계적 충돌 회피 (MCA)는 3 챔버 패러다임에서 유해한 기계적 자극에 대한 동기 부여 반응을 연구하기 위해 확립 된 자발적 비 반사 행동 분석입니다. 경쟁하는 유해한 자극에 직면했을 때 마우스의 위치 선호도의 변화는 발의 촉각 자극과 비교하여 밝은 빛의 인식 된 불쾌감을 추론하는 데 사용됩니다. 이 프로토콜은 통증 연구자가 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적 동기 부여 반응을 이해하는 데 사용할 수있는 MCA 분석의 수정 된 버전을 간략하게 설명합니다. 여기에 구체적으로 설명되지는 않았지만, 우리의 예시적인 MCA 데이터는 MCA 절차를 설명하기 위해 발바닥 내 완전한 프로인트의 보조제 (CFA), 절약 신경 손상 (SNI) 및 골절 / 주조 모델을 통증 모델로 사용합니다.

MCA 분석은 여러 기계적으로 구별되는 마우스 통증 모델과 함께 성공적으로 사용되었습니다. 도 2는 선택의 결과 측정이 챔버 2 의 중간 지점을 횡단했던 데이터를 도시한다(도 2A). 챔버 3으로의 탈출 대 중간 지점을 사용하여 얻은 데이터는 매우 유사하며, 5 mm 프로브 높이를 갖는 신경병증성 통증의 절약 신경 손상 (SNI) 모델에서 챔버 3 탈출에 대한 중?...

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Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

이 방법은 다른 통증 조건에서 동물의 효과적 또는 동기 부여 상태에 대한 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그것은 전임상 연구의 번역을 개선하는 중요한 단계입니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 비교적 빠르고 쉽게 수행 할 수 있지만 통증 관련 행동에 영향을 미치는 복잡한 동기를 평가한다는 것입니다.불투명 한 흰색 세 밀리미터 두께의 아크릴을 사용하여 챔버의 측벽, 바닥 및 천장을 구성하는 것으로 시작하십시오. 정면을 향한 벽의 경우 투명한 세 밀리미터 두께의 아크릴을 사용하십시오. 챔버의 뚜껑을 힌지로 부착하여 마우스를 챔버에 쉽게 넣고 챔버에서 회수 할 수 있도록하십시오.그런 다음 자체 접착식 발광 다이오드 테이프를 뚜껑의 내부 표면에 부착하여 약 4, 800lux의 조명을 제공합니다. 불투명 아크릴 시트를 다른 MCA 장치로부터 챔버 하나를 닫을 수 있도록 위치 안팎으로 밀어 넣습니다. 다음으로, 270 밀리미터 길이의 조명이 켜지지 않은 챔버 2 개, MCA 테스트 챔버를 상단에 힌지 뚜껑이있는 사방에 반투명 진한 빨간색 아크릴을 사용하여 구성하십시오.그런 다음 챔버 바닥에 두 밀리미터 구멍이있는 13 x 31 그리드를 배치하여 직경 0.5 밀리미터 팁의 무딘 프로브 배열이 돌출 될 수 있습니다. 프로브 베이스 플레이트 아래에 아크릴 시트를 추가로 배치하여 프로브의 높이를 조정합니다. 이 방법을 사용하여 프로브 높이가 0, 두 밀리미터 및 다섯 밀리미터로 장치를 구성합니다.무딘 지도 핀 또는 유사한 재료에 대한 대안으로 3D 프린터 파일을 사용하여 나일론 12 플라스틱과 같은 세척 가능하고 생체 적합성 재료로 챔버 2 및 프로브 플레이트의 바닥을 인쇄하십시오. 마지막으로, 방과 비슷한 힌지 뚜껑이있는 모든면에 반투명 진한 빨간색 아크릴을 사용하여 어두운 챔버 세 개를 구성하십시오. 챔버 하나의 반대쪽 끝에 배치하여 챔버 두 개의 기계적 프로브에서 어두운 탈출 영역으로 사용하십시오.기준선 테스트를 스케줄링하기 하루 전에, 전체 장치의 사회적 탐구를 용이하게하기 위해 케이지 메이트와 함께 5 내지 15 분 동안 마우스를 MCA 유닛에 적응시킨다. 챔버 하나의 LED가 꺼져 있는지, 챔버 하나와 두 개 사이의 장벽이 열린 상태로 유지되고 프로브가 챔버 두 개의 바닥을 통해 돌출되지 않았는지 확인하십시오. 다음으로, 전체 MCA 장치의 측면 뷰가 있는 삼각대에 1080픽셀 푸티지를 녹화할 수 있는 비디오 카메라를 설정합니다.MCA가 녹화된 이미지를 채우도록 시야를 조정합니다. 녹화가 시작되면 카메라의 필드 뷰에 핸드헬드 드라이 지우기 보드를 잡고 동물의 테스트 실행에 대한 식별 정보와 함께 비디오의 시작 부분에 레이블을 지정합니다. 첫 번째 실행의 경우 프로브 높이를 0으로 설정하고 테스트 할 마우스를 홈 케이지에서 장벽 도어가 설치된 챔버로 옮깁니다.녹화된 푸티지에 표시되는 타이머를 시작합니다. 10초 후 챔버에 LED 하나를 켭니다. 마우스가 20초 동안 점등된 챔버에 들어간 후, 챔버 하나와 두 개 사이의 장벽을 철회한다.두 분 동안 동물을 관찰하고 테스트가 진행되는 동안 스톱워치로 대기 시간 또는 체류 시간을 측정하십시오. 챔버 두 개에 대한 첫 번째 진입까지의 대기 시간, 챔버 두 개를 가로 질러 절반 이상을 횡단하는 대기 시간, 챔버 두 개의 총 체류 시간, 챔버 세 개에 도달하는 대기 시간, 두 분 이내에 각 챔버의 총 체류 시간을 기록하고 비율로 변환하십시오. 테스트가 완료되면 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다.MCA 챔버를 70 % 에탄올로 청소하고 완전히 건조시킵니다. 프로브 높이가 0으로 설정된 코호트에서 모든 마우스를 실행한 후, 기계적 프로브 베이스 플레이트 아래에 세 밀리미터의 아크릴 시트를 삽입하고 두 밀리미터의 프로브 높이로 실행을 반복합니다. 프로브 높이가 두 밀리미터로 설정된 모든 마우스를 실행한 후, 프로브 베이스 플레이트 아래에 또 다른 세 밀리미터의 아크릴 시트를 삽입하고 프로브 높이가 다섯 밀리미터인 상태에서 실행을 반복합니다.테스트 세션이 끝날 때 소독제로 최종 청소를 수행하십시오. 완전한 프로인트의 아주반트-유도된 염증성 통증 모델에서, 식염수 주사는 기준선에 비해 탈출 지연시간을 변화시키지 않는다. 애쥬번트를 주사한 마우스는 주사 후 나흘 동안 탈출 레이턴시의 현저한 증가를 나타냈지만, 프로브 높이가 다섯 밀리미터로 상승되었을 때만 나타났다.이러한 증가된 잠복기는 시험 시작 90분 전에 카프로펜을 투여받은 마우스에서는 나타나지 않았다. 신경병증성 통증의 보존된 신경 손상 모델은 프로브 높이가 다섯 밀리미터로 설정되었을 때 기준선 대비 탈출 대기 시간을 상당히 증가시켰다. 이러한 증가는 시험 90분 전에 오피오이드 진통제 부프레노르핀의 투여에 의해 방지되었다.증가된 탈출 잠복기는 또한 신경 손상 전에 MCA 시험의 기준선 라운드를 겪지 않은 마우스에서 관찰되었다. 다섯 밀리미터에서 절약된 신경 손상 마우스에서 증가된 탈출 잠복기는 시험 90분 전에 가바펜틴 투여에 의해 예방되었다. 파단 또는 주조 모델에서, 챔버로부터 탈출하기 위한 레이턴시는 손상 전에 프로브 높이에 비례하여 증가하였다.부상 후 대기 시간은 0 밀리미터에서 변하지 않았지만 기준선과 비교할 때 남성의 경우 두 밀리미터 및 다섯 밀리미터 프로브 높이와 여성의 경우 다섯 밀리미터 프로브 높이에서 크게 증가했습니다. 이 절차를 시도 할 때 기억해야 할 가장 중요한 것은 모든 마우스가 MCA 장치에 습관화되어 있는지 확인하고 연구 전반에 걸쳐 적절한 무작위 배정 및 블라인드닝을 유지하는 것입니다. 이 방법은 폰 프레이 (von Frey) 또는 조건부 장소 선호도를 포함한 통증 민감성의 다른 측정과 함께 사용할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

분석의 방법 Drosophila 행동

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

연구

신경과학

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에<em&gt; 초파리</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

막 성인 쥐에서 Ventromedial 시상 하부 뉴런의 잠재적 인 염료 이미징은 포도당 감지를 연​​구하는

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

마우스에 콜드 민감도 및 적응을 결정하기위한 간단하고 저렴한 방법

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

분석은 UV 반사 구조를 검색 및 SailFin을 몰리를 사용하여 메이트 환경 설정에서 자신의 중요성을 확인하는 방법<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법<em&gt; 노랑 초파리</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

모터 뉴런과 유사한 NSC-34 세포 내에서 실시간으로 핵 세포질 수송을 측정하는 분석

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Drosophila 섬 분석 결과에서 운전 행동의 높은 처리량 분석

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic 쥐 행동에 Hippocampal 세타 진동의 유입

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...