Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

GM støttes av et NDSEG Graduate Fellowship. VLT støttes av NIH NIGMS grant #GM137906 og Rita Allen Foundation. AJS støttes av Forsvarsdepartementets tilskudd W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 og Rita Allen Foundation. Vi er takknemlige til Dr. Alexxai Kravitz ved Washington University School of Medicine for å designe og gjøre fritt tilgjengelige 3D-skriverfiler for kammeret 2 etasje og sondeplate.

Alle eksperimenter som involverte bruk av mus og prosedyrene som fulgte der, ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committees ved MD Anderson Cancer Center og Stanford University, i henhold til National Institutes of Health's Guide for care and use of Laboratory Animals.
1. MCA-konstruksjon
<ol><li>Konstruksjonskammer 1 med følgende dimensjoner: 125 mm x 125 mm x 125 mm (bredde x dybde x høyde) fra ugjennomsiktig hvit 3 mm tykk akryl som brukes til sid...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

Som med alle atferdstester er riktig håndtering, randomisering og blinding til behandling av dyr viktig gjennom hele. Gitt de multifaktorielle inngangene til kompleks atferd og beslutningstaking, er det viktig at dyr håndteres, vanedannes og testes så konsekvent som mulig mens de minimerer nød. Det bør også tas hensyn til å reprodusere tidspunktet for museplassering i kammer 1, slå på LED-lysene og fjerne barrieren, siden forskjeller her kan påvirke etterfølgende oppførsel. 
Det sk...

Smerte er en kompleks opplevelse med sensoriske og affektive komponenter. En reduksjon i terskelen for smerteoppfattelse og overfølsomhet overfor termiske og/ eller mekaniske stimuli er viktige trekk ved denne opplevelsen, som stimulus-fremkalte smerteadferdstester kan fange (som Hargreaves' test av varmefølsomhet og von Frey-testen av mekanisk følsomhet)1,2. Selv om slike tester gir robuste og reproduserbare resultater, er de begrenset av deres avhengighet av refleksiv tilbaketrekking fra en oppfattet skadelig stimulans. Dette har stilt spørsmål ved en pågående avhengighet av smerteforskning på disse testene alene. I den forbindelse har smerteforskere i flere år utforsket alternative / komplementære atferdstester for bruk i gnagersmerter modeller i et forsøk på å fange mer av de affektive og / eller motiverende komponentene av smerte. Disse ikke-fremkalte, frivillige eller ikke-refleksive tiltakene (f.eks. hjulkjøring, graveaktivitet, betinget stedspreferanse 3,4,5) implementeres i et forsøk på å forbedre overførbarheten av preklinisk smerteforskning.
Den mekaniske konfliktunngåelse (MCA) analysen ble opprinnelig beskrevet av Harte et al. i 20166, brukes hovedsakelig hos rotter 7,8, og representerer en modifikasjon av en tidligere tilnærming - stedet escape-avoidance paradigm. I denne tilnærmingen utføres en skadelig stimulans av bakpoten i et ellers ønskelig (mørkt) kammer for å drive målrettet oppførsel av dyret for å unnslippe / unngå slik stimulering 9,10. I stedet for å stole på manuell skadelig stimulering av bakpoten av en observatør, tvinger MCA-analysen mus til å forhandle om en potensielt skadelig stimulans for å unnslippe et aversivt miljø og nå det mørke kammeret. Konflikten/unngåelse som gir analysen navnet sitt oppstår fra disse to konkurrerende motivasjonene: unnslippe sterkt opplyste områder og unngå skadelig stimulering av potene. MCA-analysen deler også funksjoner med betinget stedspreferansetesting, der sammenkobling av smertelindring med miljøsignaler driver endringer i atferd som gjenspeiler en preferanse for den smertelindrende / givende konteksten11.
I utgangspunktet deler alle disse analysene en lignende tilnærming: ved å bruke et skifte i et dyrs preferanse for ett aversivt miljø over et annet som en indikator på deres affektive / motiverende tilstand. MCA-analysen er et 3-kammerparadigme som består av et sterkt opplyst kammer etterfulgt av et mørkt midtkammer med justerbare høydesonder og et mørkt tredjekammer uten aversive stimuli. En uskadet mus er vanligvis motivert til å unnslippe til et mørkt kammer, gitt medfødt aversjon av gnagere til sterkt lys12. I dette eksemplet overvinner den naturlige motivasjonen for å unnslippe et sterkt opplyst miljø disinclination for å møte bakpotestimulering (de justerbare høydesondene), som utelukkende forekommer i det mørke miljøet. I motsetning kan en mus som opplever smerte (for eksempel på grunn av betennelse eller nevropati) velge å tilbringe mer tid i det sterkt opplyste miljøet, siden det er motivasjon for å unngå den ubehagelige taktile opplevelsen av de mekaniske sondene i innstillingen av pågående taktil overfølsomhet.
Denne artikkelen beskriver en modifisert versjon av MCA-analysen. Vi har tilpasset den opprinnelige metoden (som ble utført hos rotter6) for bruk hos mus. Vi har også redusert antall sondehøyder testet fra seks til tre (0, 2 og 5 mm over gulvhøyde) for å effektivisere datainnsamlingen. Denne tilnærmingen har blitt testet på tvers av flere smertemodeller, og validert med kjente smertestillende midler, noe som indikerer at smerteoverfølsomhet og / eller de tilhørende affektive og motiverende endringene driver disse endringene i atferd. Denne tilnærmingen er relativt rask å gjennomføre og tilpasningsdyktig sammenlignet med andre ikke-refleksive tiltak, noe som kan ta mange dager med habituation og trening 1,2. I samråd med andre smertemål kan MCA generere verdifull innsikt i de affektive og motiverende aspektene ved smerte.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

Smerte består av både sensoriske (nociceptive) og affektive (ubehagelige) dimensjoner. I prekliniske modeller har smerte tradisjonelt blitt vurdert ved hjelp av refleksive tester som tillater slutninger angående smertes nociceptive komponent, men gir lite informasjon om den affektive eller motiverende komponenten av smerte. Det er derfor viktig å utvikle tester som fanger opp disse smertekomponentene. Derfor må forskere bruke ikke-refleksive atferdsanalyser for å studere smerteoppfatning på det nivået. Mekanisk konfliktunngåelse (MCA) er en etablert frivillig ikke-refleksiv atferdsanalyse, for å studere motiverende responser på en skadelig mekanisk stimulans i et 3-kammerparadigme. En endring i musens stedspreferanse, når den står overfor konkurrerende skadelige stimuli, brukes til å utlede den oppfattede ubehageligheten av sterkt lys kontra taktil stimulering av potene. Denne protokollen skisserer en modifisert versjon av MCA-analysen som smerteforskere kan bruke til å forstå affektive motivasjonsresponser i en rekke musesmerter. Selv om det ikke er spesifikt beskrevet her, bruker vårt eksempel MCA-data intraplantar complete Freunds adjuvans (CFA), spart nerveskade (SNI) og en brudd/ støpemodell som smertemodeller for å illustrere MCA-prosedyren.

MCA-analysen har blitt brukt med hell med flere mekanistisk distinkte musesmerter. Figur 2 viser data der utfallsmål for valg krysset midtpunktet i kammer 2 (figur 2A). Dataene som oppnås ved å bruke halvveis versus unnslippe i kammer 3 er svært like, ~ 40 s for halvveis versus ~ 45 s for kammer 3 unnslippe i spart nerveskade (SNI) modell av nevropatisk smerte med 5 mm sonde høyde13.
I den CFA-induserte in...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Den mekaniske konfliktunngåelsesanalysen brukes som en ikke-refleksiv avlesning av smertefølsomhet hos mus som kan brukes til å bedre forstå affektive motivasjonsresponser i en rekke musesmerter.

Mekanisk konfliktunngåelsesanalyse for å måle smerteatferd hos mus

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Denne metoden kan bidra til å svare på spørsmål om dyrs effektive eller motiverende tilstand under forskjellige smerteforhold. Det er et viktig skritt i å forbedre oversettelsen av preklinisk forskning. Den største fordelen med denne teknikken er at den er relativt rask og enkel å utføre, men likevel vurderer komplekse motivasjoner som påvirker smerterelatert oppførsel.Begynn med å konstruere sidevegger, gulv og tak i kammer en ved hjelp av en ugjennomsiktig hvit tre millimeter tykk akryl. For frontvendt vegg, bruk en klar tre millimeter tykk akryl. Fest lokket på kammer en med et hengsel slik at mus lett kan plasseres i og hentes fra kammeret.Fest deretter selvklebende lys som avgir diodebånd til den indre overflaten av lokket for å gi belysning på rundt 4800 lux. Skyv et ugjennomsiktig akrylark inn og ut av posisjon for å lukke kammer 1 fra resten av MCA-enheten. Deretter konstruerer du et 270 millimeter langt ubelyst kammer to, MCA-testkammeret, ved hjelp av gjennomsiktig mørk rød akryl på alle sider med et hengslet lokk på toppen.Plasser deretter et 13 x 31 rutenett med to millimeter hull på gulvet i kammeret gjennom hvilke en rekke stumpe sonder med 0,5 millimeter diameter spisser kan stikke ut. Juster høyden på sondene ved å plassere flere akrylplater under sondebaseplaten. Bruk denne fremgangsmåten til å konfigurere enheten med null, to og fem millimeter sondehøyder.Som et alternativ til stumpe kartpinner eller lignende materialer, bruk 3D-skriverfilene til å skrive ut gulvet i kammer to og sondeplaten med et vaskbart og biokompatibelt materiale som nylon 12 plast. Til slutt konstruerer du et mørkt kammer tre ved hjelp av gjennomsiktig mørk rød akryl på alle sider med et hengslet lokk som ligner kamre en og to. Plasser den i motsatt ende av kammer en for å tjene som et mørkt rømningsområde fra de mekaniske sondene i kammer to.En dag før planleggingen av basistestingen, akklimatisere musene til MCA-enheten i 5 til 15 minutter med burkameratene sine for å lette sosial utforskning av hele enheten. Påse at lysdiodene i kammer en er slått av, barrieren mellom kamre en og to holdes åpen og sondene ikke stikker ut gjennom gulvet i kammer to. Deretter konfigurerer du et videokamera som kan ta opp opptak på 1080 piksler på et stativ med sidevendt visning av hele MCA-enheten.Juster synsfeltet slik at MCA fyller det innspilte bildet. Når opptaket begynner, holder du et håndholdt tørt slettebrett i kameraets feltvisning for å merke starten på videoen med identifiserende informasjon om dyrets testkjøring. For første gangs løp, sett sondehøyden til null og overfør musen som skal testes fra hjemmeburet til kammer en med barrieredøra på plass.Start en tidtaker som er synlig i de innspilte opptakene. Etter 10 sekunder slår du på kammeret en led. Etter at musen har vært i det opplyste kammeret i 20 sekunder, trekk barrieren mellom kamre en og to.Vær oppmerksom på dyret i to minutter og mål ventetider eller oppholdstider med en stoppeklokke mens testen pågår. Registrer ventetiden til den første inngangen til kammer to, ventetid for å krysse mer enn halvveis over kammer to, den totale oppholdstiden i kammer to, ventetiden for å nå kammer tre, og den totale oppholdstiden i hvert kammer innen to minutter og konvertere dem til proporsjoner. Når testingen er fullført, returnerer du musen til hjemmeburet.Rengjør MCA-kamrene med 70% etanol og la det tørke helt. Etter å ha kjørt alle musene i kohorten med sondehøyden satt til null, sett inn et tre millimeter ark akryl under den mekaniske sondebaseplaten og gjenta løpet med en sondehøyde på to millimeter. Etter å ha kjørt alle mus med sondehøyden satt til to millimeter, sett inn ytterligere tre millimeter ark akryl under sondebaseplaten og gjenta løpet med en sondehøyde på fem millimeter.Utfør en sluttrengjøring med et desinfeksjonsmiddel på slutten av testøkten. I den komplette Freunds adjuvant-induserte inflammatoriske smertemodell endrer ikke en saltvannsinjeksjon fluktventetid sammenlignet med baseline. Mus injisert med adjuvansen viste en betydelig økning i fluktforsinkelse fire dager etter injeksjon, men bare når sondehøyden ble hevet til fem millimeter.Denne økte ventetiden ble ikke sett hos mus som fikk carprofen 90 minutter før begynnelsen av testingen. Den sparte nerveskademodellen for nevropatisk smerte økte ventetiden betydelig for å unnslippe kontra baseline når sondehøyden ble satt til fem millimeter. Denne økningen ble forhindret ved administrering av opioid smertestillende buprenorfin 90 minutter før testing.Økt fluktforsinkelse ble også observert hos mus som ikke gjennomgikk en basisrunde med MCA-testing før nerveskade. Den økte fluktventetiden hos sparte nerveskademus ved fem millimeter ble forhindret av gabapentin administrert 90 minutter før testing. I brudd- eller støpemodellen økte ventetiden for å unnslippe fra kammer en proporsjonalt til sondehøyden før skade.Etter skaden forble ventetiden uendret på null millimeter, men økte betydelig ved to millimeter og fem millimeter sondehøyde for menn og fem millimeter sondehøyde for kvinner sammenlignet med baseline. Det viktigste å huske når du prøver denne prosedyren er å sørge for at alle mus er vant til MCA-enheten, og å opprettholde riktig randomisering og blinding gjennom hele studien. Denne metoden kan brukes sammen med andre mål på smertefølsomhet, inkludert von Frey eller betinget stedspreferanse.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

Metoder til Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly analysen for Foraging Behavior i<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

Membranpotensialet Dye Imaging av ventromedial Hypothalamus nerveceller fra voksne mus for å studere Glukose Sensing

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

En enkel og rimelig metode for å bestemme Cold Følsomhet og Adaptation i Mus

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Metoder for å detektere UV-reflekterende Structures og bestemme deres betydning i Mate Preference hjelp av Seilfinnemolly<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

En enkel måte å måle endringer i Reward-søkende atferd med<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Analyse for å måle nukleocytoplasmisk transport i sanntid innen Motor Neuron-lignende NSC-34-celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Høy gjennomstrømming analyse av Locomotor atferd i Drosophila øya analysen

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic Entrainment av hippocampus Theta svingninger i oppfører seg mus

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...