Name: intraductal delivery and x-ray visualization of ethanol-based ablative solution for prevention and local treatment of breast cancer in mouse models
Uploaded: 2022-04-01T14:15:00
Duration: 13 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intraductal Delivery and X-ray Visualization of Ethanol-Based Ablative Solution for Prevention and Local Treatment of Breast Cancer in Mouse Models at JoVE.co

Detta arbete stöddes delvis av National Cancer Institute R21 CA226579 och R01 CA258314 bidrag till LFS och av National Institute of Biomedical Imaging and Bioengineering R01 EB029418 bidrag till EMS. Vi vill tacka MSU Institute for Quantitative (IQ) Health Science and Engineering Imaging Core-anläggningen för användning av deras bildsystem och tekniska expertis. Vi vill tacka Dr. Danielle Ferguson för att ha granskat innehållet i videon och siffrorna för efterlevnaden av djurskyddsriktlinjerna.

Alla experiment som beskrivs här utfördes enligt protokoll som godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee vid Michigan State University.
1. Utökad antiinflammatorisk behandling
<ol><li>Se till att möss som får injektionslösningar som innehåller EtOH eller andra potentiella irriterande ämnen förses med antiinflammatorisk behandling från 2 dagar före injektion till 7 dagar efter injektionen. Den föredragna doseringsmetoden är oral leverans genom en sukralosgelkopp som innehåller carprofen vid en lämplig koncentration.</li>
	<li>Förbered carprofen med önskad koncentration. För detta experiment framställdes en arbetslösning på 2 mg/ml (Stocklösning är 50 mg/ml) genom utspädning i steril PBS för att injicera 0, 5 ml för att uppnå en slutlig dos på 1 mg per kopp. Tillsätt 1% v/v sterilt blått matfärgämne (BFD) i stället för en bråkdel av PBS av den totala volymen som behövs för utspädning för att bättre visualisera fullständig blandning av läkemedlet i sukralosgelen.</li>
	<li>Förbered en kopp för carprofen-tillsats enligt tillverkarens rekommendation. Om inget annat rekommenderas, placera koppen i 60 °C vattenbad i 15 min. Ta bort kopparna och torka av dem för att minimera risken för förorening.<ol>
<li>Använd 70% EtOH eller en EtOH-torka för att rengöra ytan på kopplocket och låt torka. Använd en spruta för att injicera den nödvändiga mängden carprofenlösning genom locket. För detta experiment injiceras 500 μL. Täck injektionsstället med ett klistermärke och skaka kraftigt i 15 s.</li>
		<li>Virvel koppen för 15 s, och sedan lagra för senare användning efter visuellt verifierad fullständig blandning. Kontrollera kopparna för homogen blandning genom att leta efter mörkblå klumpar. Låt kopparna komma till rumstemperatur innan du flyttar till kylskåpet för förvaring upp till en månad. OBS: Dessa koppar kan också förvaras i rumstemperatur när de har doserings, om det behövs, men var noga med att vara uppmärksam på läkemedelseffektivitetsvägledning från tillverkaren. Att datera klistermärket hjälper till att hålla reda på injektionsdatumet utan att riskera en penna eller en skarp markör som punkterar locket.</li>
	</ol>
</li>
	<li>När du är klar att använda, torka av utsidan av koppen med 70% EtOH. Skala av locket och placera koppen i buret med mössen. Byt ut kopparna varannan dag eller när de är tomma. En kopp bör räcka för upp till fem möss i 1-2 dagar.</li>
</ol>2. Preoperativ förberedelse
OBS: Detta steg kommer att ske 2-3 dagar före injektionen.
<ol><li>Bedöva musen med en isofluranförångare (2%-3% isofluran, 1,5 L/min syre) och applicera ögonsmörjmedel. Håll anestesi vid 1%-3% isofluran efter behov under hela proceduren med en noskon samtidigt som du noggrant övervakar djurets andningshastighet.</li>
	<li>Applicera ögonsmörjmedlet på musögonen medan du sitter vid noskonen och placera sedan musen på ryggen. Använd en bomullsspetsad applikator för att applicera receptfri depilatorisk kräm på bröstvårtan (det område av bröstkörteln som kommer att injiceras). Gnid in grädden i området i 10-30 s med applikatorn för att hjälpa till att lossa pälsen snabbt. OBS: Lämna inte krämen på djuret längre än nödvändigt och ta bort helt för att undvika att bränna huden.</li>
	<li>Efter 10-30 s av applikationen, använd varmt vatten på gasväv för att helt ta bort grädden och lossa pälsen från djuret. Utför minst två till fyra sköljningar av området med färsk gasväv för gräddborttagning innan du torkar med en ren torr gasväv efter den slutliga sköljningen. Kontrollera området för pälsborttagning för att bekräfta god sikt och tillgång till bröstvårtorna. Upprepa med depilatorisk krämapplikation om det behövs.</li>
	<li>Placera musen i en separat ren, torr återhämtningsbur på en värmeplatta för att återhämta sig från anestesi. Observera musen tills den har återhämtat sig helt från anestesi och returnera den till hemburen.</li>
	<li>Förse mössen med en kopp sukralosgellösning som innehåller carprofen (1 mg/kopp) för fördosering av det antiinflammatoriska medlet efter återhämtning. En kopp kan ge upp till fem möss med carprofen i upp till 2 dagar. Kontrollera koppen dagligen och byt ut vid behov, eller varannan dag om den inte är helt förbrukad.</li>
</ol>3. Intraduktiv injektion
OBS: Detta steg kommer att inträffa 2-3 dagar efter preoperativ förberedelse.
<ol><li>Förbered 333,3 mM tantaloxid (TaOx) buljonglösning från upphandlad pulverformulering enligt beskrivningen i 16 med hjälp av fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Använd mild värme om pulvret inte löses upp helt i lösningen.</li>
	<li>Gör en ablativ avbildningslösning genom att blanda tre delar lager TaOx med sju delar 100% EtOH för en slutlig 70% EtOH 100mM TaOx lösning. Tillsätt 1% v/v blått matfärgämne till den slutliga lösningen för stödd visualisering under injektionen. Förbered en volym baserat på behovet av experimentet. OBS: Körtelparen 1 och 5 kan rymma upp till 30 μL av lösningen medan alla andra par kan injiceras med upp till 50 μL hos 9 veckors ålder eller äldre FVB-möss.</li>
	<li>Bedöva musen med isofluran som i preoperativ förberedelse och flytta musen till noskonen när den är helt bedövad. Applicera ögonsmörjmedel innan du placerar djuret på ryggen för injektionen. Fäst musen under stereoskopet med tejp om det behövs.</li>
	<li>Förbered sprutan med önskad injektionslösning. Ladda 21-51 μL av injektionslösningen i en 50 μL spruta med en 34 G nål fastsatt. Ladda ytterligare 1 μL av lösningen för att ta hänsyn till det potentiella läckaget av den volymen efter att nålen har tagits bort från nippeln. OBS: Volymerna ovan är för de typiska procedurer som presenteras här. Man kan injicera vilken volym som helst som önskas med förståelsen att de flesta körtlar kommer att överfyllas om man går över 30 μL respektive 50 μL i körtelpar 1 respektive 5, eller 2-4. Det är bra att fylla nålen med ytterligare volym av injektionslösningen för att testa för lösningens fria flöde omedelbart före injektionen. Om du injicerar mer än en bröstkörtel, förfyll flera sprutor för att spara tid. Lämna dock inte lösningen i sprutan länge.</li>
	<li>Förbered bröstvårtorna för injektionen genom att ta bort eventuell död hud som täcker bröstvårtans öppning med fina spetsiga tångar.</li>
	<li>Håll nippeln försiktigt med pincett. Med nålens avfasning synlig, sätt in nålen i nippelöppningen tills avfasningen är helt täckt med vägledning från fina tippade tångar. Det kan vara nödvändigt att dra upp bröstvårtan på nålen i stället för att trycka in nålen i bröstvårtan (tabell 1).</li>
	<li>När nålfasningen är helt omgiven av nippeln och är i huvudkanalen, börja injicera lösningen med en jämn hastighet av cirka 40 μL/min. Undvik att injicera för snabbt för att säkerställa att duktalträdet inte skadas. Håll nålen i bröstvårtan i 30 s efter att volymen är helt injicerad innan du tar bort nålen med hjälp av tången. Detta görs för att undvika att lösningen rinner ut ur bröstvårtan (bild 2).<ol>
<li>Utvärdera området för tecken på misslyckad injektion. Ett kupolutseende kan tyda på en fettkudde injektion eller trauma till området.</li>
		<li>Fortsätt att injicera de återstående bröstkörtlarna.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Medan djuret fortfarande bedövas, injicera 200-250 μL 5% sackaroslösning (upp till 10 ml/kg) intraperitoneally för att minimera de potentiella effekterna av alkoholförgiftning.</li>
</ol>4. Mikro-CT-avbildning
<ol><li>Efter att ha injicerat alla önskade körtlar, flytta djuret snabbt till mikro-CT-systemet och fortsätt att upprätthålla anestesi med hjälp av den inbyggda isofluranförångaren. Djuret kan tejpas för att standardisera bildåtergivningspositionen. Till exempel hjälper tejpning av varje bakben i ett förlängt läge till att hålla djurets benben längre från de nedre körtlarna av intresse för den resulterande bilden. OBS: Djuren kan avbildas med hjälp av olika skanningsparametrar för visualisering av dukträdet om man är noga med att fastställa en lämplig acceptabel livstidsdos av strålning för djuret och de kumulativa doserna inte överstiger denna nivå. Fluoroskopi stillbilder och videor kan genereras utan att skannas för att ytterligare minska strålningsexponeringen (figur 2).</li>
	<li>Placera musen i lämpligt synfält med funktionen för förhandsgranskning av fluoroskopi.</li>
	<li>Utför TaOx-avbildning av musdkottalträdet med god upplösning och möjlighet till upprepade standard (2 min) förvärvsskanningar. Använd följande skanningsparametrar: 90 kVp/88 μA; synfält (FOV), 36 mm; antal skivor, 512; skiva tjocklek, 72 μm; voxelupplösning, 72 μm3.<ol>
<li>Skaffa längre (4 eller 14 min) högupplösta skanningar för ännu bättre upplösning hos djur. Dessa är godtagbara som terminala förfaranden före dödshjälp. Dessa är dock inte godtagbara för djur att skannas längsgående med samma parametrar som det kommer att orsaka strålningssjuka.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Efter att bildprotokollet har slutförts, avlägsna djuret från anestesi och överför till en separat ren, torr återhämtningsbur på en värmeplatta. Observera djuret tills det är helt återställt och returnera det sedan till hemburet. Håll djuren injicerade med ablativ lösning på carprofen till 7 dagar efter injektionen.</li>
	<li>Gör snabba återgivningar av alla skannade bilder i mikro-CT-programvaran (inbyggt system) för att bättre uppskatta eventuella kontrastläckor eller brist på fyllning (figur 2) utan formell analys.</li>
	<li>Utför ytterligare formell bildanalys för publicering eller detaljerad analys av skanningar som möjliggör segmentering av intresseområdet om så önskas (figur 3). OBS: Den primära skillnaden mellan dessa metoder kommer att vara möjligheten att tröskel endast duktalträdet (formell återgivning) jämfört med att behöva tröskel hela bilden (snabb återgivning). Andra mätningar och bilder kan genereras med hjälp av programvarupaketen för att på bästa sätt visa framgången med duktal trädfyllning.</li>
</ol>5. Bildanalys
<ol><li>Utför rendering av det injicerade duktalträdet med hjälp av ett specialiserat programvarupaket. För att göra detta, segmentera ut bröstfettplattan med ytterligare bildbehandling.<ol>
<li>Om du vill segmentera fettkudden (mörkare fack jämfört med peritoneal hålighet, lårbensmuskler och hud) där duktalträdet av intresse finns, välj alternativet Spline Trace på den manuella menyn. Spåra fettkuddens kontur vid var tredje datasegment.</li>
		<li>Klicka på alternativet Sprid objekt från den halvautomatiska menyn för att ansluta alla spårade och odelade segment till ett enda objekt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Välj alternativet Tröskelvärdesvolym på den halvautomatiska menyn för att mata in önskat HU-intervall (300-3 000 HU är en bra utgångspunkt) och klicka sedan på knappen Tröskelåtergivning för att skapa en återgivning som bara visar kontrasten (TaOx) i duktalträdet och eliminerar mjukvävnad.</li>
	<li>Växla knappen Visa till Återgivning som primär om du bara vill visa 3D-återgivningen utan omgivande strukturer. OBS: Ytterligare programvarufunktioner gör det möjligt att mäta 3D-återgivningen (dvs. längd, volym osv.).</li>
</ol>

Författarna har inget att avslöja.

Profylaktisk mastektomi är för närvarande den mest effektiva interventionen för bröstcancer, men det har några allvarliga negativa effekter. Lokal ablation av bröst epitelial celler med en EtOH-baserad lösning är en lovande alternativ terapi som vi visade i en proof-of-concept studie på den aggressiva FVB-Tg-C3(1)-TAg mus modell av bröstcancer3. ID-injektion av denna ablativa lösning möjliggör inriktning av de bröst epitelceller från vilka bröstcancer uppstår med begränsad säkerhet skada. Tillägg av ett röntgenkontrastmedel till den ablativa lösningen möjliggör ökad förståelse för lösningens effektivitet vid förebyggande, eftersom vi kan se om varje duktalträd är framgångsrikt fyllt efter injektion (figur 2B). Att visa injicerade körtlar genom fluoroskopi omedelbart efter injektion speglar vad som sannolikt kommer att göras i kliniken för att bekräfta framgångsrik fyllning av duktalträdet. Visuell bekräftelse av lösningsleveransen informerar bäst om alla delar av trädet har nåtts i realtid. Detta kan göra det möjligt att utföra ytterligare injektion för att slutföra fyllningen vid den tidpunkten eller i en framtida session. Det är av stor vikt att ablativ lösning når alla delar av dukträdet för att säkerställa att alla epitelceller kan nås för avlivning (figur 3). Att lämna levande epitelceller i trädet skulle möjliggöra möjligheten att bröstcancer fortfarande kan uppstå. Använda kontrast i ID injektioner för att bild framgång av injektionen kan också vara användbart för andra formuleringar. Tabell 1 innehåller felsökning och användbara tips. Andra studier har beskrivit ID-leveransprotokoll för viruspartiklar (t.ex. AdCre, CRISPR guide RNAs), hormoner, cytotoxiska föreningar, siRNAs och/eller målmedel hos möss3,16,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37 38, råttor24,32,39,40,41 och kaniner42,43,44,45,46,47. Oberoende kliniska studier rapporterade framgångsrika cannulation av upp till åtta kanaler per bröst för lokal leverans av kemoterapi40,48,49. Att visualisera full fyllning när man levererar andra lösningar som syftar till förebyggande eller inriktad på behandling skulle vara värt av liknande skäl. Vetskapen om att lösningen har nått alla grenar och terminala ändar av trädet kommer att vara informativ för att bedöma framgångsrik förebyggande eller behandling.
Vi känner inte till några andra intraduktala avbildningsmetoder hos möss33,34 eller andra djurmodeller47 som ger hög upplösning av TaOx nanopartiklar. Observera att TaOx i murin duktalträdet överträffar FDA-godkända kontrastmedel för diagnostisk dukografi3,16. När vi fortsätter att bedöma ID-ablativproceduren för dess förmåga att förhindra bröstcancer, kommer vi att kunna bestämma mer exakt från vilka körtlar cancer uppstår med hjälp av ytterligare data som ges genom avbildning efter ID-leverans. Till exempel kan man avgöra om en körtel som bara var delvis fylld är mer sannolikt än en icke-injicerad körtel att resultera i tumörbildning, som adresserar säkerhetsprofilen och oron för misslyckade injektioner på en högriskkvinna. Denna teknik har vissa begränsningar. Detta är en relativt utmanande musteknik som kräver fingerfärdighet och skicklighet hos operatören för att manipulera och framgångsrikt kanylera varje kanal. Varje enskild injektion är en oberoende händelse så misslyckad injektion på en eller flera körtlar kan äventyra resultat tolkning. Med tanke på storleken på mkörteln och skörheten i bröstvårtan är fluoroskopi eller liknande bildvägledningsteknik inte tillgänglig för att informera i realtid när infusionen ska stoppas. Denna realtidsbild-vägledning kommer att vara ett krav för klinisk implementering av lokal leverans av en ablativ lösning.

Bröstcancer är en vanlig och potentiellt dödlig sjukdom med få alternativ tillgängliga för förebyggande1. Den mest effektiva interventionen är profylaktisk mastektomi; Emellertid, endast högrisk individer väljer att genomgå denna procedur eftersom det är en operation med stora livsförändrande konsekvenser2. Förfarandet tar helt bort de bröst epitelceller från vilka bröstcancer uppstår tillsammans med den omgivande vävnaden. Detta kan resultera i fysisk, psykisk och social stress för individen, och ofta avskräcker individer från att fortsätta med detta kirurgiska ingrepp som sin första rad av primära ingripande.
Vi har visat att leverans av en ablativ lösning som innehåller 70% etanol (EtOH) direkt i duktal träd är effektivt för att döda bröst epitelial celler med begränsad säkerhet vävnad skador och att förebygga bröst tumörer i mus modeller3. EtOH har länge använts kliniskt som ablativt eller skleroserande medel för lokal behandling. Perkutan EtOH injektion används som ett ablativt medel för ouppnåeliga levertumörer, njur- och binjurenematörplasmer och bukspottskörteln cystic tumörer4,5,6; för celiac plexus neurolys för att minska smärta7; och för behandling av bröst pseudoaneurysms8. Intravaskulära EtOH injektion används som skleroserande medel för att eliminera svullnad och deformation från arteriovenous missbildningar (AVM), och för kosmetisk behandling av spindelvener och åderbråck9,10,11,12,13. Liksom profylaktisk mastektomi beror framgången med förebyggande med lokal leverans av en ablativ lösning på förmågan att helt ta bort alla bröst epitelceller från vilka cancer potentiellt kan uppstå. Detta kräver bekräftelse på att det ablativa ämnet framgångsrikt har fyllt duktalträdet och därmed kontaktat alla bröst epitelceller direkt. Kliniska medel för att injicera ämnen i bröstkörtlarna och visualisera dem genom bildstyrd fluoroskopi eller duktografi är lätt tillgängliga14,15. Därför kommer det att vara möjligt att både leverera och bekräfta framgångsrik leverans när detta förfarande kan motivera utvärdering i kliniska prövningar.
Att påvisa genomförbarheten av denna bildstyrda metod i laboratoriedjur är ett viktigt steg för att fastställa effektiviteten och translationell genomförbarhet av intraduktal (ID) ablation som en förebyggande åtgärd för bröstcancer. I vårt laboratorium har vi utvecklat en metod för att framgångsrikt injicera alla bröstkörtlar hos möss med en ablativ lösning som innehåller ett kontrastmedel under en veckoinjektion för att säkerställa att djuret inte ger efter för en överdos av EtOH (figur 1, figur 2, referensnr. 3,16). Denna procedur placerar en 34 G nål inuti bröstvårtans öppning av en isofluran-sövd mus för att injicera testlösningen. Några viktiga förbättringar av förfarandet inkluderar användning av gastäta sprutor för vätska och gaser, injektion av högre volymer per duktal träd17 och utökad antiinflammatorisk behandling. Den prekliniska behandlingen av 5 mg/kg carprofen, ett NSAID, från 2 d före till 7 d efter ID-förfarandet är i linje med den kliniska sklerosbehandlingen för AVM. Vanligtvis, efter systemisk anestesi, patienterna får antiinflammatoriska läkemedel, såsom NSAID, i 2 dagar efter ingreppet som kan förlängas för att mildra eventuell lokal inflammation eller smärta12. Alkoholförgiftning mildras avsevärt genom intraperitoneal injektion av en 5% sackaroslösning hos möss. Med administrering av denna sackaroslösning kan möss injiceras säkert med upp till 160 μL av 70% EtOH (upp till fyra duktalträd; ca 0,4 g/dL EtOH-innehåll i blod); djur som helt återhämtat sig inom 4 timmar efter ID-injektioner. För injektion av mer än fyra körtlar hos möss och/eller högre EtOH koncentrationer, utför vi sekventiella sessioner för att tillåta tillräckligt med återhämtningstid. Alkoholförgiftning hos kvinnor skulle vara ett mindre problem på grund av den lägre andelen alkoholmängd till kroppsvikt. Med tanke på antalet duktalträd i mänskliga bröst14,15, cirka 16, och uppskattad volym för att fylla varje trädkanal18,19, kommer upp till 32 ml 70% EtOH att administreras. Denna mängd kommer att vara mycket lägre än 50 ml 95% EtOH administreras i andra kliniska förfaranden4,9. Intravenös administrering av tiamin- och glukoslösning kan användas för att ytterligare minimera effekterna av EtOH-förgiftning, särskilt i fall där en större total volym EtOH kan behöva injiceras och/eller för kvinnor som har en lägre tolerans mot alkoholkonsumtion (t.ex. allelicvarianter i alkohol eller aldehyddehydrogenaser).
Avbildning via mikro-CT/fluoroskopi gör det möjligt för oss att bekräfta framgångsrik duktal fyllning av varje körtel (figur 1, figur 2, figur 3). Detta kan registreras för framtida analys, eller bedömas i ögonblicket via fluoroskopiavbildning i realtid, som skulle göras vid klinisk tillämpning, för att begränsa den totala strålningsbördan som åläggs djuret. För att ytterligare förbättra specifika egenskaper hos denna ablativa lösning för bildstyrd leverans i realtid in vivo jämförde vi tidigare FDA-godkänd jodinnehållande kontrast till en tantaloxid (TaOx)-innehållande nanopartikel som syntetiserats av Shapiro lab3,16. TaOx visade överlägsen prestanda som ett mikro-CT kontrastmedel för att visualisera den första fyllningen av duktal träd (figur 2, figur 3). TaOx kan användas som referenskontrast för att utföra en mer systematisk och longitudinell bedömning av andra nanopartikelbaserade kontrastmedel i blodpoolen (t.ex. jod-, vismut- eller guldhaltigt) och kompatibilitet hos TaOx med olika koncentrationer av etylcellulosa som geleringsmedel20,21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AnalyzeDirect v12.0</td>
			<td>Caliper</td>
			<td>n/a</td>
			<td>For micro-CT image processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprieve, Carprofen 50 mg/mL</td>
			<td>Allivet</td>
			<td>50647</td>
			<td>For anti-inflammatory treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2129-50G</td>
			<td>For injection visualization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot water bath</td>
			<td>Toolots</td>
			<td>Yidu_HH-S2</td>
			<td>For preparing carprofen cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>n/a</td>
			<td>For confocal image processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MediGel Sucralose Cups</td>
			<td>ClearH2O</td>
			<td>74-02-5022</td>
			<td>For delivery of carprofen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 1705 RN Syringe, 50&#956;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7655-01</td>
			<td>For intraductal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop 2021</td>
			<td>Adobe</td>
			<td>n/a</td>
			<td>For image processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantum GX2 microCT Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>CLS149276</td>
			<td>For micro-CT image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Hub RN Needle, 34 gauge, custom (12&#176; bevel angle, 0.375 in, point style 4)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>207434</td>
			<td>For intraductal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope SZM Series</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>SM-4TPZ-144</td>
			<td>For intraductal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile blue food dye</td>
			<td>McCormick</td>
			<td>930641</td>
			<td>For injection visualization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td>For solution preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stickers</td>
			<td>DOT Scientific</td>
			<td>DOTSCI-C50</td>
			<td>For preparing carprofen cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>8550-5KG</td>
			<td>For intraductal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-826-79</td>
			<td>For preparing carprofen cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-834</td>
			<td>For preparing carprofen cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pump/pad(s)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>HTP-1500 120V; AP-R 26E</td>
			<td>For intraductal injection/preoperative preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intraductal delivery and x-ray visualization of ethanol-based ablative solution for prevention and local treatment of breast cancer in mouse models

Bröstcancer är den vanligaste cancerformen och den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad död för kvinnor i USA. För högriskkvinnor är profylaktisk mastektomi den mest effektiva primära förebyggande strategin. Profylaktisk mastektomi är ett aggressivt kirurgiskt ingrepp som helt tar bort de bröst epitelceller från vilka bröstcancer uppstår tillsammans med den omgivande vävnaden. Vi försöker utveckla en minimalt invasiv intradukttal förfarande som ett alternativ till profylaktisk mastektomi att lokalt ablatera bröst epitelial cellerna innan de kan bli maligna. Vi och andra har utvecklat en intraduktrisk leverans förfarande för att nå och behandla dessa epitelial celler i gnagare modeller av bröstcancer. Medan mus bröstkörteln med en enda icke-anastomosed duktal trädöppning vid bröstvårtan har en mycket mindre komplex och plågsam arkitektur än det mänskliga bröstet, kemiskt inducerad och genetiskt konstruerade musmodeller av bröstcancer är värdefulla för att producera proof-of-concept studier av nya förebyggande strategier. Här beskriver vi ett förfarande för intraduktrisk leverans av en etanol-baserade ablativ lösning som innehåller micro-CT/röntgen tantal-baserade kontrastmedel inom musen bröst duktal träd för terapeutiska ändamålet primära förebyggande av bröstcancer. Intradukttal leverans av vattenhaltiga reagenser (t.ex. cytotoxiska föreningar, siRNAs, AdCre) har tidigare beskrivits i musmodeller. Således fokuserar vi vår protokollbeskrivning på metodologiska modifieringar och unika experimentella överväganden för att optimera leverans av etanol, för att minimera lokala och systemiska biverkningar av etanoladministration och för in vivo visualisering av duktal trädfyllning via mikro-CT / fluoroskopi imaging. Visualisering av duktalträdet omedelbart efter injektion av en kontrasthaltiga lösning möjliggör bekräftelse av fullständig fyllning eller misslyckade resultat som underfyllning eller överfyllning. Denna procedur kan tillämpas för leverans och avbildning av andra ablativa föreningar som syftar till antingen förhindra tumör bildas eller lokalt behandla tidiga tumörer tillgängliga via duktal träd.

Honmöss har fem par bröstkörtlar med ett enda duktalträd som öppnas vid bröstvårtan orifice22. Vid spetsarna på det utvecklande duktalträdet finns de slutliga ändknopparna (TEB), proliferativa strukturer som styr tillväxt och förgrening. Efter puberteten när förlängningsfasen är klar, återgår TEBs och blir funktionellt och anatomiskt oskiljbara från terminalkanaler eller alveolar knoppar23. Terminala duktal lobulär enheter tjänar en liknande funktion hos människor som TEBs gör hos möss och är de platser från vilka bröstcancer främst uppstår24,25. Vi kan injicera upp till 50 μL 70% EtOH-lösning för att fylla hela duktalträdet i bröst- och buktjurar hos 9 veckor gamla FVB/N, NSG och andra musstammar (figur 1, figur 2, figur 3, se referenser3,16). I ett typiskt experiment kan vi injicera upp till åtta bröstkörtlar med en ablativ lösning på 70% EtOH och 100 mM TaOx i två på varandra följande ID-förfaranden separerade med 7 dagar för att möjliggöra djuråtervinning (figur 2). Djuren avbildas med mikro-CT omedelbart efter den sista injektionen iD för att bedöma framgångsrik leverans av lösningen till hela dukträdet (figur 2). Enligt vår erfarenhet är bröstvårtorna av inguinallymfknutor körtlar lämpliga för injektion i cirka 60% av djuren och bröstvårtorna i livmoderhalskörtlarna i ca 40%. När det är lämpligt kan vi injicera upp till 30 μL 70% EtOH-lösning för att fylla hela duktalträdet i livmoderhals- och inguinallymfknutor (figur 2). FVB- och NSG-stammar uppvisar i allmänhet mer lämpliga bröstvårtor för injektion än C57BL/6J eller blandade genetiska bakgrundsstammar. Hela montering dubbel färgning protokoll eller 3D confocal mikroskopi är bra ortogonala metoder för att bekräfta i vilken utsträckning duktal träd fylldes (figur 3). Dessa vävnad-korrelera analyser är kompatibla med och kan utföras efter in vivo imaging. Den uppenbara begränsningen av dessa ortogonala metoder är att de kräver djuravslut för vävnadsuppsamling och analys; Men i en optimeringsfas av en ny ablativ formulering ger de oberoende validering.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63457/63457fig01.jpg"> Bild 1: Arbetsflöde för intradukttal procedur och bildanalys. Viktiga steg i ID-proceduren markeras. Se videon för mer information. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63457/63457fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63457/63457fig02.jpg"> Figur 2: Framgångsrik kannulation och leverans av ablativ lösning till flera bröstkörtlar. A) Representativ nippelvariation i musstammarna FVB och NSG. Långa bröstvårtor är lättare att kanylera än korta bröstvårtor, medan för korta eller vestigiala bröstvårtor inte kanyleras. När du kanyleras påverkar storleken på bröstvårtan inte framgångsrik intraduktal leverans. (B) Grov anatomisk analys av blått färgämne i en ablativ lösning ger ex vivo bevis på duktal trädfyllning och leveransframgång. (C,D) Fluoroskopi i realtid och 3D-mikro-CT-återgivning i realtid ger in vivo-bevis på leveransframgång. (D) Framgångsrik injektion av både buk- och inguinalkörtlar och tre av fyra bröstkörtlar (fettkudde injektion i körtel #2). Skalningsstaplar motsvarar 1 mm i bilder vid olika förstoring. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63457/63457fig02large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63457/63457fig03.jpg"> Figur 3: In vivo - och ex vivo-demonstration av duktal trädfyllning. 70% EtOH/100 mM TaOx nanopartiklar/Evans Blå lösning injicerades intraduktally i musen buken bröstkörteln och omedelbart avbildas av micro-CT och bearbetas för dubbla hela montering färgning. Duktal träd rekonstruerades med hjälp av en bild analys programvara paket. Lösningen fyller helt det karminalumfärgade dukträdet. En separat körtel var immunstained för E-Cadherin (Cdh1), rensas med hjälp av Benzyl Alcohol:Benzyl Benzoate och avbildas av confocal mikroskopi som beskrivs26. Duktal träd rekonstruerades med hjälp av bild analys programvara. Pseudofärgningsåtergivning av konfokal bild (dvs. svart bakgrund till vit, grön markörsignal till magenta) erhölls med bildinvertfunktionen hos bildredigeringsprogramvaran. Skalningsstaplar motsvarar 1 mm i bilder vid olika förstoring. Denna siffra har ändrats från referens nr 3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63457/63457fig03large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Utfärda</td>
			<td colspan="2">Utseende</td>
			<td colspan="3">Lösning</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kort nippel (Bild 2)</td>
			<td colspan="2">Bröstvårtan har låg profil – svårt att greppa</td>
			<td colspan="3">Det är ibland lättare att hålla huden nära bröstvårtan och rikta in sig på mitten av bröstvårtan med nålen. Nålen kommer sannolikt att dyka under huden. Att dra upp långsamt kan avslöja att bröstvårtan är något över nålens spets och ge utrymme att ta tag i och dra den resten av vägen på nålen. Var mycket försiktig när du dyker under huden om nålens vinkel. Det är lätt att oavsiktligt få en fettkudde injektion genom att sticka i fel vinkel.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Fett bröstvårta</td>
			<td colspan="2">Mycket större än andra bröstvårtor med liten skalade död hud – lätt synlig utan omfång</td>
			<td colspan="3">Mycket lätt att få en fett pad injektion på dessa bröstvårtor. Var mycket försiktig med nålens vinkel när du sätter in i bröstvårtan.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Fettkudde injektion (Bild 2)</td>
			<td colspan="2">Svullen runt bröstvårtan och eventuellt i själva bröstvårtan – lättast att se om färg läggs till injektionslösningen</td>
			<td colspan="3">Om bröstvårtan sväller med de första ul injiceras, ta bort nålen och försök att sätta in igen med mer försiktighet. Börja injektionen igen och se upp för ytterligare svullnad. Om svullnaden fortsätter, överge försöket. Det är mycket sällsynt att framgångsrikt injicera en bröstvårta som har börjat som en fettkudde injektion.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sår/skabbning</td>
			<td colspan="2">Öppet sår eller skabbning nära injektionsstället för EtOH-lösning</td>
			<td colspan="3">Applicera trippel antibiotikasalva på öppna sår men lämna skabbade sår ifred. Att applicera salva på scabs kan öka sannolikheten att djuret kommer att störa scab och ta bort den. Kontrollera var 1-2 dag tills den är läkt beroende på svårighetsgraden av såret. Carprofen ska ges tills den är läkt även om den är bortom det normala fönstret.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1: Felsökning och användbara tips.

Watch this Scientific Journal Video about Intraductal Delivery and X-ray Visualization of Ethanol-Based Ablative Solution for Prevention and Local Treatment of Breast Cancer in Mouse Models at JoVE.co

Intraductal Delivery and X-ray Visualization of Ethanol-Based Ablative Solution for Prevention and Local Treatment of Breast Cancer in Mouse Models

En metod för intraduktrisk injektion av reagenser för en etanol-baserade ablativ lösning på musen bröst duktal träd för in vivo imaging och bröstcancer förebyggande beskrivs. Injektion direkt i bröstvårtans öppning gör det möjligt att rikta in sig på bröst epitelceller med minimala skador på vävnad.

Intraduktiv leverans och röntgenvisualisering av etanolbaserad ablativ lösning för förebyggande och lokal behandling av bröstcancer i musmodeller

Breast cancer is the most prevalent cancer and the second-leading cause of cancer-related death for women in the USA. For high-risk women, prophylactic ...

Bröstcancer är den vanligaste cancerformen och den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad död för kvinnor i USA. Nuvarande förebyggande metoder är begränsade och kommer med en mängd olika negativa biverkningar. Det behövs nya insatser för primärprevention. Vi har utvecklat en metod för intraduktrisk leverans av en etanolbaserad ablativ lösning på musryten epitel för förebyggande av bröstcancer.Injektion direkt i bröstvårtans öppning gör det möjligt att rikta epitelceller som fodrar dukträdet med minimala sidovävnadsskador. Denna metod möjliggör samtidig in vivo-avbildning med tantaloxidnanopartiklar som ett högupplöst kontrastmedel. Denna metod kan anpassas för användning med andra röntgenkontrastmedel och olika förebyggande behandlingar med olika kemiska eller termiska ablativa lösningar.Det första steget med denna metod för bildstyrd bröstcancer förebyggande är att inducera utökad antiinflammatorisk behandling genom oral dosering av carprofen med hjälp av sukralos gel koppar beredda i labbet. Vi förbereder djuret genom att använda depilatorisk kräm för att ta bort pälsen från området kring bröstvårtorna som ska injiceras. Sedan utförs intraduktala injektioner med hjälp av ett stereoskop för att bäst lokalisera och visualisera öppningen av bröstvårtan för nålinsättning.Efter leverans av lösningen avbildas djuren med mikro-CT eller fluoroskopi för att avgöra hur framgångsrika injektionerna var. Micro-CT skanningar kan bearbetas för att skapa 3D-rekonstruktioner av det injicerade bröst duktal träd för ytterligare analys av framgångsrik fyllning och andra mätvärden. Förbered först carprofen vid önskad koncentration.Vi gör en arbetslösning på två mg per ml för att injicera 0,5 ml och uppnå en slutlig dos på en mg per kopp. Du kan lägga sterilt matfärg till blandningen för att bättre bekräfta fullständig blandning av läkemedlet i koppens sukralos. Placera sedan kopparna i ett vattenbad vid 60 grader Celsius i 15 minuter.Ta bort kopparna och torka av dem för att minimera risken för förorening. Använd 70% etanol- eller etanolservetter för att rengöra ytan på kopplocket och låt torka. Använd en spruta för att injicera nödvändig mängd carprofenlösning genom locket.I det här fallet måste vi injicera 500 mikroliter för önskat resultat. Placera ett klistermärke över hålet från nålen och skaka koppen i 15 sekunder innan du virvlar i ytterligare 15 sekunder. Kontrollera koppen för homogen blandning genom att leta efter klumpar av mörkblå.Koppar kan sedan förvaras i kylskåp i upp till en månad. Beredning av djuret bör ske två till tre dagar före intraduktalt förfarande. Börja med att bedöva djuret med isofluran.Överför sövd mus till en noskon som fortsätter att leverera isofluran. Applicera ögonsmörjmedel på musen medan du sitter vid noskonen och placera sedan musen på ryggen. Använd en bomullsspetsad applikator för att applicera depilatorisk kräm på området av bröstkörtlarna du planerar att injicera.Gnugga applikatorn upp och ner över djurets hud i önskat område för att hjälpa till med snabbare lossning av pälsen. Det är viktigt att lämna krämen på musen så lite tid som möjligt för att undvika att bränna huden. Efter 10 till 30 sekunders applicering, använd varmt vatten på gasväv för att helt ta bort grädden.Använd två till fyra sköljningar för att säkerställa fullständig borttagning innan du torkar huden med ren gasväv. Kontrollera områdena för pälsborttagning för att bekräfta god synlighet och tillgång till bröstvårtorna. Upprepa depilatoriska proceduren om det behövs.Placera musen i en ren återhämtningsbur på en värmande kudde för att återhämta sig från anestesi. Ge en carprofen kopp för att förbereda möss i deras hembur efter återhämtning. Du kommer igen att börja med att bedöva djuret med isofluranbedövning och flytta musen till en näskon när den har blivit helt inducerad.Ögonsmörjmedel kommer att appliceras innan djuret placeras på ryggen för injektioner. Det kan vara bra att tejpa ner benen nära bröstkörtlarna som kommer att injiceras, men är inte nödvändigt. Förbered sprutan med önskad injektionslösning plus en mikroliter om det skulle spilla ut efter nålborttagning.Det kan vara bra att fylla med ytterligare volym för att testa nålen för fritt flöde av lösningen omedelbart före injektionen. Om du injicerar mer än en bröstkörtel kan det spara tid att fylla i flera sprutor om det finns tillgängligt. Var försiktig så att du inte gör detta för tidigt om lösningen är benägen att täppa till när den lämnas att sitta.Förbered bröstvårtan genom att ta bort synlig död hud med fina tippade tångar om möjligt. Det är inte nödvändigt att ta bort all död hud om den inte blockerar bröstvårtöppningen och den är resistent mot tugging. Detta kan ibland orsaka skador och svullnad i bröstvårtan om död hud fästs på levande hud för tätt.Med nålens avfasning synlig, sätt in nålen i nippelns öppning med vägledning från de fina tippade tångarna. Beroende på bröstvårtans längd och fasthet kanske det inte alltid är möjligt att hålla bröstvårtan medan du styr i nålen. Det är ibland nödvändigt att manövrera bröstvårtan med nålen så att tången kan dra bröstvårtan upp över nålen snarare än att styra nålen ner i bröstvårtan.När nålfasningen är helt omgiven av nippeln och i huvudkanalen, börja långsamt injicera lösningen. Önskad hastighet är cirka 40 mikroliter per minut. Undvik att injicera snabbare än så för att förhindra eventuella skador på dukträdet.Efter fullständig injektion, vänta 30 sekunder innan du tar bort nålen från bröstvårtan med hjälp av tången. Detta minimerar eventuellt läckage från nippeln. Utvärdera området för tecken på en misslyckad injektion.Ett kupolutseende kan tyda på en fettkudde injektion eller trauma till området. Det är ofta möjligt att se att en injektion i fettkudden sker om lösningen innehåller färgämne eller om du letar noga efter doming på injektionsstället som kan ses här. Fortsätt att injicera de återstående bröstkörtlarna som krävs för ditt experiment på liknande sätt, notera injektionsvolymer och eventuella incidenser av läckage.Vissa delar av musen kan vara svårare att injicera på grund av problem som besvärlig handplacering eller andningsstörningar. Till exempel kommer en högerhänt injektor sannolikt att ha svårast att injicera körtlarna på musens övre högra sida som ses här. Dessa rör sig mer på grund av närheten till lungorna och det kan vara svårt att hitta bra handplacering med djurets kropp i vägen för att vila handleden på ytan.Vissa kan ha lättare att flytta musen om noskonen tillåter. Vid injektion av en etanolhaltiga lösning måste man vara försiktig så att man undviker systemisk alkoholförgiftning. Detta kräver att man vet hur mycket etanol som kan injiceras under en session och administrerar sackarosinnehållande lösning IP under proceduren för att motverka effekterna.Efter intraduktala ingrepp kan djuren återvinnas i en ren bur på en värmedyna eller flyttas till mikro-CT-systemet för avbildning av fyllda dukträd. Musen ska också återställas efter någon avbildningssession. Efter att ha flyttat det injicerade djuret till mikro-CT-systemet, fortsätt att administrera isofluran för att upprätthålla anestesi under avbildning.Det kan vara bra att standardisera bildpositionen genom att tejpa ner benen nära platsen som ska avbildas. Till exempel kan tejpning av bakbenen i ett förlängt läge hålla benens ben från att hindra utsikten över de injicerade körtlarna. Tejpning av frambenen i ett uppåtriktat förlängt läge kan på samma sätt hjälpa till att se de övre körtlarna.Vi har också funnit att tejpning över musens buk kan bidra till att minska andningsartefakt för underkörtlarna. Det finns många acceptabla skanningsparametrar för visualisering av dukträdet. Var alltid försiktig så att stråldosen till följd av dessa skanningar inte överskrider strålningsgränserna för en viss stam av möss.Strålningsdosering kan minskas avsevärt genom att titta på fluoroskopi och notera leveransframgång snarare än att förvärva bilder med längre exponeringstider. Våra standardskanningsparametrar är acceptabla för upprepad avbildning om de bara får korta tvåminuters standardskanningar. Högre upplösning längre skanningar upp till 14 minuter är acceptabla som terminal förfarande före dödshjälp.Dessa längre skanningar är inte acceptabla för longitudinella studier eftersom de kan orsaka strålningssjuka hos djuret. Detta djur injicerades med en etanollösning som innehåller 100 millimolar tantaloxid kontrast i körtlar fyra och nio. Det nuvarande förvärvet är en 14-minuters högupplöst skanning av de injicerade nedre körtlarna.Fluoroskopi av djuret gör att vi kan se duktal trädarkitektur markeras av kontrasten inom injektionslösningen. Mikro-CT-systemet vi använder har inbyggd programvara som möjliggör skapandet av snabba återgivningar för att bedöma framgången med injektion utan formell analys. Den här funktionen har ett enkelt kontrastreglage som möjliggör rimlig signal-till-brusreducering.Begränsningen av dessa återgivningar är att samma signaltrösklar tillämpas på hela bilden. Detta gör att ljusa signaler som uppenbarligen inte är en del av dukträdet, såsom järn i kosten, kan förbli i återgivningen. Bättre formella återgivningar kan göras med hjälp av mer sofistikerad analysprogramvara som möjliggör segmentering av intresseområdet.För att få den bästa renderingen av det enda duktalträdet rekommenderar vi att du segmenterar ut bröstfettplattan för vidare bildbehandling. Denna process kräver linjespårning av gränserna för fettkudden under djurets hela tjocklek. Vi har funnit att det räcker att spåra var tredje sektor och sprida objektet för att fånga hela kanalen.Detta kan vara en subjektiv process, som kräver efterlevnad av labbstandarder för spårning för att säkerställa liknande utdata från alla individer som analyserar skanningar. Förtrogenhet med anatomi kan hjälpa till med bedömningssamtal om vilka områden som ska inkluderas. Efter förökning av spår är det sedan möjligt att tröskelåtergivningen inom ett visst intervall för att endast visa kontrasten i bröstkörteln.Detta bör vara lösningen i dukträdet, liksom eventuellt läckage i omedelbar närhet. Ett intervall på 300 till 3 000 HU tenderar att fungera bra när det gäller tantaloxidhaltiga lösningar. Ett exempel på en fullständigt bearbetad återgivning kan ses här i flera aspekter.Beroende på hur djuret är orienterat i mikro-CT kan det vara nödvändigt att omorientera DICOM-filer i analysprogramvaran för att representera intuitiv anatomisk positionering med djurets huvud högst upp på bilden. Det kan också vara svårt att avgöra vilken körtel som ses om du inte är noga med att rotera bilden på liknande sätt varje gång. Ytterligare mätningar som volym eller längd kan göras när du har skapat en rekonstruktion av dukträdet.Validering för framgångsrik leverans genom denna procedur kan demonstreras inte bara genom 3D micro-CT återgivningar som beskrivs här, men också genom dubbla fläckar hela fästen med injicerade Evans blå överlappande hela duktal träd markerade med carmine alum. 3D confocal mikroskopi kan markera arkitekturen i duktal träd i en rensad körtel färgade med e-cadherin. Stam-till-stam och mus-till-mus variabilitet och nippel anatomi kan göra det mer eller mindre svårt att injicera körtlar.Detta är ett exempel på en idealisk bröstvårta för injektion med hög profil för enkel greppning. Bröstvårtor med lägre profiler, som den här, kan vara svårare att kanylera framgångsrikt. Dessa skillnader kan göra det mer sannolikt att uppnå en framgångsrik injektion utan trauma eller doming som ses här eller mer sannolikt att misslyckas som visas av det kupolformade utseendet på denna fett pad injektion.När det gäller förebyggande av bröstcancer används för närvarande två huvudtaktiker. Den första, vaksamma väntan, innebär inget verkligt ingripande. Individer som följer denna väg övervakas regelbundet för eventuella klumpar i bröstvävnaden som skulle indikera att cancerbildning förekommer.Sjukdomsdetektering skulle då leda till behandling. Profylaktisk mastektomi är ett mer invasivt förfarande som tar bort alla epitelceller från vilka bröstcancer kan uppstå tillsammans med den omgivande stroma. Denna operation kan ha allvarliga negativa biverkningar och väljs sällan som ett profylaktiskt alternativ för individer med låg eller måttlig risk för sjukdom.Vårt tillvägagångssätt innebär lokala epitelial ablation genom injektion av en ablativ lösning direkt i bröst duktal träd. Denna metod minskar indirekta skador och skulle sannolikt vara ett mer tilltalande alternativ för de individer som inte löper allvarlig risk för sjukdom. Tillägget av kontrast för omedelbar avbildning efter injektion gör också detta lätt att översätta till kliniken.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal skiva Tumör Modell: Visualisering och kvantifiering av genuttryck och tumör invasiv använda genetiska mosaiker

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Identifiering, histologiska karakteriseringen och dissektion av mus prostata lober för i Vitro 3D sfäroid kultur modeller

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modellering bröst cancer via en intraductal injektion av CRE-uttrycker adenovirus i musen bröstkörteln

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Inrättande av patienter med Ventrikelhärledd xenograft-modell och primära cellinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Erhålla Cancer Stem Cell Spheres från gynekologiska och bröstcancertumörer

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Differentiation of Mouse Breast Epithelial HC11 and EpH4 Cells

Differentiering av Musbröstepitel HC11 och EpH4 Celler

Cadherins play an important role in the regulation of cell differentiation as well as neoplasia. Here we describe the origins and methods of the induction ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studera Triple negativ bröstcancer med ortopotopic bröstcancer modell

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Ortopisk transplantation av brösttumörer som prekliniska modeller för bröstcancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modellering av bröstcancer i bröstvävnad hos människa med hjälp av ett mikrofysiskt system

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Övervakning av bröstcancertillväxt och metastatisk kolonibildning hos möss med bioluminescens

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...