Name: exploring biomolecular interaction between the molecular chaperone hsp90 and its client protein kinase cdc37 using field-effect biosensing technology
Uploaded: 2022-03-31T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring Biomolecular Interaction Between the Molecular Chaperone Hsp90 and Its Client Protein Kinase Cdc37 using Field-Effect Biosensing Technology at JoVE.

इस शोध को द्विराष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (BSF) से S.K.S. और N.Q. को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।

नोट: इस अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले पुनः संयोजक प्रोटीन, Hsp90 और Cdc37, व्यावसायिक रूप से प्राप्त किए गए थे ( सामग्री की तालिका देखें)।
1. चिप सक्रियण
नोट: प्रयोग में उपयोग की ?...

इस अध्ययन में, एचएसपी 90 और सीडीसी 37 के बीच बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन को निर्धारित करने के लिए फेब तकनीक (एक वास्तविक समय गतिज लक्षण वर्णन दृष्टिकोण) का उपयोग करने की व्यवहार्यता का मूल्यांकन किया गया था?...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Automated analysis software</td>
			<td>Agile plus software, Cardea (Nanomed)</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td>Referred to in the text as the automated analysis software supplied with the instrument. Generates automated analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COOH-BPU (Biosensing Processing Unit)</td>
			<td>Agile plus software, Cardea (Nanomed)</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td>biosensor chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data review software</td>
			<td>Datalign 1.0, Cardea (Nanomed)</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td>Referred to as the supplied data review software in the text. Supplied with the instrument and allows to review and export the information data points.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bag</td>
			<td>CelluSep,&#160; Membrane filtration products</td>
			<td>T2-10-15 
			CAS number: NA</td>
			<td>T2 tubings (6,000-8,000 MWCO), (10 mm fw, 6.4mm &#216;, 0.32ml/cm, 15m)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC (1-Ethyl-3-(3-dimethylamino propyl) carbodiimide)</td>
			<td>Cardea (Nanomed)</td>
			<td>EDC160322-02 
			CAS number: 25952-53-8</td>
			<td>White powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITC (Isothermal titration calorimetry) system</td>
			<td>Microcal-PEAQ-ITC (Malvern, United Kingdom)</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES (2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid) buffer</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M3671-50G 
			CAS number: 4432-31-9</td>
			<td>White powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NHS (N-Hydroxysulfosuccinimide) chips</td>
			<td>Cardea (Nanomed)</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td>Graphene-based chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-buffered saline) X 10</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>001623237500&#160; 
			CAS number: 7758-11-4</td>
			<td>Liquid transparent solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipete</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>11855231 
			CAS number: NA</td>
			<td>Finnpipette F3 5-50 &#181;L, yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench 1 (3.9 mM amino-PEG5-alcohol in 1 X PBS)</td>
			<td>Cardea (Nanomed)</td>
			<td>0105-001-002-001 
			CAS number: NA</td>
			<td>Liquid, transparent solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quench 2 (1 M ethanolamine (pH=8.5))</td>
			<td>Cardea (Nanomed)</td>
			<td>0105-001-003-001 
			CAS number: NA</td>
			<td>Liquid, transparent solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant protein Cdc37</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab256157 
			CAS number: NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant protein Hsp90 beta</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80033 
			CAS number: NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet</td>
			<td>Excel, Microsoft office</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical software</td>
			<td>GraphPad, Prism</td>
			<td>NA 
			CAS number: NA</td>
			<td>Referred to as the other statistical software. Sigma plot, phyton or other statistical programes may also be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS</td>
			<td>Cardea (Nanomed)</td>
			<td>NHS160321-07 
			CAS number: 106627-54-7</td>
			<td>White powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips</td>
			<td>Alex red</td>
			<td>LC 1093-800-000 
			CAS number: NA</td>
			<td>Tip 1-200 &#181;l, in bulk, 1,000 pcs</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exploring biomolecular interaction between the molecular chaperone hsp90 and its client protein kinase cdc37 using field-effect biosensing technology

बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन कार्यात्मक रूप से प्रासंगिक जैविक घटनाओं को विनियमित और समन्वयित करके कई सेलुलर प्रक्रियाओं में बहुमुखी भूमिका निभाते हैं। प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट, विटामिन, फैटी एसिड, न्यूक्लिक एसिड और एंजाइम जैसे बायोमोलेक्यूल्स जीवित प्राणियों के मौलिक निर्माण खंड हैं; वे जीवन की घटनाओं के असंख्य सिंक्रनाइज़ करने के लिए biosystems में जटिल नेटवर्क में इकट्ठा. प्रोटीन आमतौर पर अपने कार्यों को पूरा करने के लिए जटिल इंटरैक्टोम नेटवर्क का उपयोग करते हैं; इसलिए सेलुलर और जीव दोनों स्तरों पर कोशिकाओं में उनके महत्व को उजागर करने के लिए इस तरह की बातचीत का मूल्यांकन करना अनिवार्य है। इस लक्ष्य की ओर, हम विशिष्ट बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन निर्धारित करने के लिए एक तेजी से उभरती हुई तकनीक, फील्ड-इफेक्ट बायोसेंसिंग (एफईबी) पेश करते हैं। FEB एक बेंचटॉप, लेबल-मुक्त, और विश्वसनीय बायोमोलेक्यूलर डिटेक्शन तकनीक है जो विशिष्ट इंटरैक्शन को निर्धारित करने के लिए है और उच्च गुणवत्ता वाले इलेक्ट्रॉनिक-आधारित बायोसेंसर का उपयोग करता है। FEB तकनीक अपने बायोसेंसर सतह पर उपयोग किए जाने वाले बायोकंपैटिबल नैनोमैटेरियल्स के कारण नैनोमोलर रेंज में इंटरैक्शन की निगरानी कर सकती है। अवधारणा के प्रमाण के रूप में, गर्मी सदमे प्रोटीन 90 (Hsp90) और सेल डिवीजन चक्र 37 (Cdc37) के बीच प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन (पीपीआई) को स्पष्ट किया गया था। Hsp90 एक एटीपी-निर्भर आणविक चैपरोन है जो कई प्रोटीनों के तह, स्थिरता, परिपक्वता और गुणवत्ता नियंत्रण में एक आवश्यक भूमिका निभाता है, जिससे कई महत्वपूर्ण सेलुलर कार्यों को विनियमित किया जाता है। Cdc37 को प्रोटीन किनेज-विशिष्ट आणविक चैपरोन के रूप में माना जाता है, क्योंकि यह विशेष रूप से अपने डाउनस्ट्रीम सिग्नल ट्रांसडक्शन मार्गों को विनियमित करने के लिए Hsp90 में प्रोटीन किनेसेस को पहचानता है और भर्ती करता है। इस प्रकार, Cdc37 को Hsp90 का एक सह-चैपरोन माना जाता है। चैपरोन-किनेज मार्ग (Hsp90/ Cdc37 कॉम्प्लेक्स) सेलुलर विकास को बढ़ावा देने वाले कई दुर्दमताओं में हाइपर-सक्रिय है; इसलिए, यह कैंसर चिकित्सा के लिए एक संभावित लक्ष्य है। वर्तमान अध्ययन Hsp90 / Cdc37 मॉडल प्रणाली का उपयोग करके FEB प्रौद्योगिकी की दक्षता को दर्शाता है। FEB ने दो प्रोटीनों के बीच एक मजबूत PPI का पता लगाया (तीन स्वतंत्र प्रयोगों में 0.014 μM, 0.053 μM, और 0.072 μM केK D मान)। संक्षेप में, FEB एक लेबल-मुक्त और लागत प्रभावी पीपीआई डिटेक्शन प्लेटफ़ॉर्म है, जो तेज़ और सटीक माप प्रदान करता है।

प्रयोग 1 से परिणाम: लक्ष्य प्रोटीन Hsp90 (500 nM) को ऊपर वर्णित लक्ष्य स्थिरीकरण प्रोटोकॉल के बाद चिप में स्थिर कर दिया गया था। पहले प्रयोग के लिए, विश्लेषक प्रोटीन की 10 सांद्रता, Cdc37, 25 nM से 5,000 nM तक, साहित्य मे...

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Exploring Biomolecular Interaction Between the Molecular Chaperone Hsp90 and Its Client Protein Kinase Cdc37 using Field-Effect Biosensing Technology

फील्ड-इफेक्ट बायोसेंसिंग (फेब) बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन का पता लगाने के लिए एक लेबल-मुक्त तकनीक है। यह graphene biosensor के माध्यम से विद्युत प्रवाह को मापता है जिसके लिए बाध्यकारी लक्ष्य ों को स्थिर किया जाता है। फेब तकनीक का उपयोग एचएसपी 90 और सीडीसी 37 के बीच बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था और दो प्रोटीनों के बीच एक मजबूत बातचीत का पता लगाया गया था।

आणविक चैपरोन Hsp90 और इसके ग्राहक प्रोटीन किनेज Cdc37 के बीच बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन की खोज फील्ड-इफेक्ट बायोसेंसिंग तकनीक का उपयोग करके

Biomolecular interactions play versatile roles in numerous cellular processes&#160;by regulating and coordinating functionally relevant biological events. ...

FEB एक लेबल-मुक्त और लागत प्रभावी ____ ___ इंटरैक्शन डिटेक्शन प्लेटफ़ॉर्म है जो तेजी से और सटीक माप प्रदान करता है। यह विधि ज्ञात या अज्ञात इंटरैक्शन का सत्यापन और बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन के संभावित अवरोधकों के लिए परीक्षण करने का एक आसान तरीका प्रदान करती है। FEB का मुख्य लाभ इसका स्वचालित, उपयोगकर्ता के अनुकूल सॉफ़्टवेयर है जो उपयोगकर्ता को खुले, हाथ से पाइपेटिंग प्लेटफ़ॉर्म के साथ प्रयोग के दौरान गेट करता है, जिससे उपयोगकर्ताओं को बहुत कम या यहां तक कि कोई प्रशिक्षण नहीं मिलता है।FEB प्रौद्योगिकी भी फार्मास्यूटिकल्स के विविध क्षेत्रों में अनुप्रयोगों, छोटे अणुओं, पेप्टाइड्स और प्रोटीन के biomolecular विश्लेषण, विवो प्रभावकारिता में आसानी से इन विट्रो जैविक गतिविधि में अनुवाद करके दवा सत्यापन प्रदान करता है। एक शुरुआत होने के नाते, आपको एक विश्वसनीय केडी मूल्य प्राप्त करने के लिए प्रयोग को अनुकूलित करने के लिए सही विश्लेषक सांद्रता चुनने में चुनौतियों का सामना करना पड़ सकता है। हम चिप functionalization प्रक्रिया और उचित बफर विनिमय पर ध्यान देने की सलाह देते हैं।ऊपर और नीचे pipetting द्वारा EDC और sulfo-NHS समाधान के बराबर मात्रा मिश्रण से शुरू करो. कंपनी द्वारा आपूर्ति की गई बायोसेंसर चिप को एक फिट ढक्कन के साथ एक ग्लास पेट्री डिश में रखें। चिप सक्रियण में शामिल सभी कार्यात्मकता चरणों को पेट्री डिश के भीतर किए जाने का सुझाव दिया जाता है।बायोसेंसर चिप पर एक-दाढ़ एमईएस बफर के 50 माइक्रोलीटर लागू करें। कमरे के तापमान पर एक मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। फिर, बफर aspirate और सेंसर चिप के लिए तुरंत EDC sulfo-NHS समाधान के 50 microliters लागू होते हैं।पेट्री डिश को कवर करें और कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। चिप से EDC sulfo-NHS समाधान aspirate और एक दाढ़ एमईएस बफर के 50 माइक्रोलीटर लागू होते हैं। Aspirate एमईएस बफर और 1X PBS के 50 microliters के साथ चिप दो बार कुल्ला।चिप से PBS को एस्पिरेट करें और लक्ष्य अणु Hsp90 जोड़ें। कांच के पेट्री डिश को कवर करें और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। फिर, लक्ष्य अणु वाले समाधान को एस्पिरेट करें और 1X PBS के 50 माइक्रोलीटर के साथ तीन बार कुल्ला करें।चिप से 1X PBS समाधान aspirate और बुझाने एक समाधान के 50 microliters जोड़ें। ग्लास पेट्री डिश को कवर करें और कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। चिप से एक समाधान बुझाने के aspirate और बुझाने दो समाधान के 50 microliters जोड़ें.ग्लास पेट्री डिश को कवर करें और कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। उसके बाद, चिप से दो समाधान को बुझाने और सेंसर पर अंतिम पीबीएस बूंद को छोड़ने वाले 1X पीबीएस के 50 माइक्रोलीटर का उपयोग करके चिप को पांच बार कुल्ला करें। वांछित एकाग्रता सीमा में Cdc37 के लिए विश्लेषक कमजोर पड़ने श्रृंखला तैयार करें।एक विश्वसनीय पृथक्करण स्थिरांक, या केडी मान प्राप्त करने के लिए कम से कम आठ अलग-अलग विश्लेषक सांद्रता को शामिल करने के लिए प्रयोग को डिज़ाइन करें, और अंशांकन और लक्ष्य प्रोटीन के लिए उपयोग किए जाने वाले एक ही बफर में इन विभिन्न dilutions को तैयार करें। चिप को ध्यान से उपकरण पर रखें। सुनिश्चित करें कि सॉफ़्टवेयर चालू है और एलईडी लाइट हरे रंग की हो जाती है।अगला, स्वचालित सॉफ़्टवेयर पर रन एक्सपेरिमेंट मॉड्यूल दबाएं और पुनर्जनन या किसी अन्य वांछित प्रोटोकॉल के साथ 10 अंक चुनें। ऑपरेटर नाम, प्रयोग का नाम, दिनांक, पुनर्जनन बफर, immobilized लक्ष्य, और समाधान में विश्लेषक के रूप में विवरण भरें। सॉफ़्टवेयर पर प्रदर्शित प्रयोग प्रारंभ करें बटन दबाएँ और स्वचालित सॉफ़्टवेयर द्वारा दिखाए गए निर्देशों का पालन करें.साधन अंशांकन करने के लिए, चिप से शेष PBS समाधान aspirate और अंशांकन बफर के 50 microliters लागू होते हैं। जारी रखें बटन दबाएँ और अंशांकन चरण समाप्त होने तक पाँच मिनट तक प्रतीक्षा करें. सॉफ़्टवेयर अनुवर्ती करने के लिए एक चेतावनी अलार्म के साथ अंशांकन चरण के लिए निर्धारित समापन बिंदु प्रदर्शित करता है।इसके बाद, चिप से अंशांकन बफर aspirating और सबसे कम विश्लेषक एकाग्रता के 50 microliters लागू करके एक विश्लेषक एसोसिएशन प्रदर्शन। जारी रखें बटन दबाएँ और पांच मिनट के लिए प्रतीक्षा करें जब तक कि संबद्धता चरण समाप्त नहीं हो जाता है। सॉफ़्टवेयर आगे बढ़ने के लिए चेतावनी अलार्म के साथ संबद्धता चरण के लिए अंतिम बिंदु प्रदर्शित करता है।एक विश्लेषक पृथक्करण करने के लिए, चिप से विश्लेषक समाधान को एस्पिरेट करें और पृथक्करण बफर के 50 माइक्रोलीटर लागू करें। जारी रखें बटन दबाएँ। पृथक्करण चरण अवधि के बाद, सॉफ़्टवेयर एक चेतावनी अलार्म के साथ पृथक्करण चरण के लिए समापन बिंदु प्रदर्शित करता है।इसके बाद, चिप से पृथक्करण समाधान aspirating और पुनर्जनन बफर के 50 microliters लागू करके चिप पुनर्जनन प्रदर्शन। उसके बाद, जारी रखें बटन दबाएँ। पुनर्जनन चरण आमतौर पर समाप्त होने में लगभग 30 सेकंड लेता है।उसके बाद, सॉफ़्टवेयर का पालन करने के लिए एक चेतावनी अलार्म के साथ पुनर्जनन चरण के लिए अंतिम बिंदु प्रदर्शित करता है। अंत में, चिप को धोने के लिए, चिप से पुनर्जनन समाधान को एस्पिरेट करें और वॉश बफर के 50 माइक्रोलीटर लागू करें। चिप से समाधान aspirate और यह पांच बार दोहराने.चिप पर धोने बफर की अंतिम बूंद छोड़ दें। उसके बाद, जारी रखें बटन दबाएँ और 30 सेकंड के लिए प्रतीक्षा करें जब तक कि धोने के चरण की अवधि सॉफ़्टवेयर प्रदर्शन में समाप्त नहीं हो जाती है। उपयोग किए गए प्रत्येक विश्लेषक एकाग्रता के लिए चरणों को दोहराएं।अंशांकन के पांच चरण, विश्लेषक संघ, पृथक्करण, पुनर्जनन, और पांच बार धोने से एक चक्र का गठन होता है। प्रयोग के अंत में स्वचालित विश्लेषण सॉफ़्टवेयर में विश्लेषण बटन दबाएँ। सभी प्रयोगात्मक बिंदुओं वाली एक प्रदर्शन विंडो दिखाई देगी।सुनिश्चित करें कि निर्धारित प्रोटोकॉल के लिए उपयोग की जाने वाली विश्लेषक सांद्रता सही है। स्वचालित रूप से KD मान जनरेट करने के लिए विश्लेषण चलाएँ बटन दबाएँ। सॉफ़्टवेयर संबंधित I-प्रतिक्रियाओं के खिलाफ विश्लेषक सांद्रता की साजिश करके एक पहाड़ी फिट प्लॉट उत्पन्न करता है जिसमें से संतुलन पर पृथक्करण स्थिरांक की गणना की जाती है।लक्ष्य प्रोटीन Hsp90 को चिप में स्थिर कर दिया गया था, और पहले प्रयोग के लिए, विश्लेषक प्रोटीन Cdc37 की 10 सांद्रता 25 नैनोमोलर से लेकर 5, 000 नैनोमोलर तक तैयार की गई थी। प्रयोग एक से उत्पन्न डेटा फ़ाइलें यहाँ दिखाया गया है। वास्तविक समय में निगरानी किए गए प्रयोगात्मक डेटा को यहां दिखाया गया है।वाई-अक्ष बायोसेंसर इकाइयों में आई-प्रतिक्रिया से मेल खाती है, और एक्स-अक्ष प्रयोग में विश्लेषक के विभिन्न समय बिंदुओं और सांद्रता से मेल खाती है। यहां दिखाई गई ग्राफिकल छवि स्वचालित विश्लेषण सॉफ़्टवेयर से उत्पन्न पहाड़ी फिट प्लॉट का प्रतिनिधित्व करती है। वाई-अक्ष बायोसेंसर इकाइयों में आई-प्रतिक्रिया से मेल खाती है, और एक्स-अक्ष प्रयोग में विभिन्न विश्लेषक सांद्रता से मेल खाती है।यहां दिखाई गई ग्राफिकल छवि सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके उत्पन्न एसोसिएशन प्लॉट का प्रतिनिधित्व करती है। Y-अक्ष एसोसिएशन चरण के अंत में I-प्रतिक्रिया से मेल खाती है, और X-अक्ष विश्लेषक Cdc37 की विभिन्न सांद्रता से मेल खाती है। प्रयोग दो में, 0.4 नैनोमोलर से लेकर 200 नैनोमोलर तक की सांद्रता के एक अलग सेट का उपयोग किया गया था, और उत्पन्न डेटा फ़ाइलों को यहां दिखाया गया है।चित्रमय छवियाँ Hsp90 और Cdc37 इंटरैक्शन के ITC थर्मोग्राम का प्रतिनिधित्व करती हैं। यहां दिखाया गया है कि 298.15 केल्विन पर Hsp90 में Cdc37 के लगातार इंजेक्शन के कारण प्राप्त इसी गर्मी-विकसित घटता है। यहां उपयोग की जाने वाली विभेदक शक्ति समय का एक कार्य है।इस प्लॉट में एकीकृत डेटा अंक इसी सामान्यीकृत गर्मी बनाम Hsp90 के मुलर अनुपात को Cdc37 के लिए नामित करते हैं। यहां उपयोग किए जाने वाले खुले पिपेटिंग दृष्टिकोण की आवश्यकता होती है कि उपयोगकर्ता के पास हाथ पिपेटिंग की बुनियादी महारत है, जिससे यह सुनिश्चित हो जाता है कि टिप के साथ बायोसेंसर को स्पर्श न करें। चरण समय की पुनरुत्पादकता पूरी तरह से उपयोगकर्ता पर निर्भर करती है।एक बार जब शोधकर्ता दो बायोमोलेक्यूल्स के बीच बातचीत की विशेषता रखता है, तो हम संभावित अवरोधकों या मॉड्यूलेटरों को डिजाइन करके एक स्क्रीनिंग प्रयोग कर सकते हैं जो एफईबी सिस्टम का उपयोग करके विशिष्ट बायोमोलेक्यूलर इंटरैक्शन को लक्षित करते हैं। इस प्रक्रिया का उपयोग प्रोटीन के साथ-साथ दवाओं और पेप्टाइड्स सहित छोटे अणुओं के बीच ज्ञात और उपन्यास बातचीत की पहचान, सत्यापन और मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

HCN1 और TRIP8b बीच प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत के छोटे अणु inhibitors की पहचान के लिए विधि

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

प्रोटीन संरचना और गतिशीलता के अध्ययन के लिए समय का समाधान electrospray ionization हाइड्रोजन-ड्यूटेरियम एक्सचेंज मास स्पेक्ट्रोमेट्री

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Assaying Protein Kinase Activity with Radiolabeled ATP

रेडियोलैलेड एटीपी के साथ प्रोटीन किनास गतिविधि पर काबू पाने

Protein kinases are able to govern large-scale cellular changes in response to complex arrays of stimuli, and much effort has been directed at uncovering ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

रै10 फॉस्फोरिलेशन का आकलन करके पार्किंसंस के एसोसिएटेड LRRK2 Kinase पाथवे से पूछताछ के लिए मानव परिधीय रक्त न्यूट्रोफिल अलगाव

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

उपंयास की पहचान CK2 kinase एक बहुमुखी जैव रासायनिक दृष्टिकोण का उपयोग substrates

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

स्तनधारी कोशिका चक्र के दौरान सक्रिय प्रोटीन काइनेज आरएनए के आरएनए इंटरएक्टर्स का अध्ययन

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...

Characterization at the Molecular Level using Robust Biochemical Approaches of a New Kinase Protein

एक नई Kinase प्रोटीन के मजबूत जैव रासायनिक दृष्टिकोण का उपयोग कर आणविक स्तर पर विशेषता

Extensive whole genome sequencing has identified many Open Reading Frames (ORFs) providing many potential proteins. These proteins may have important ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

Kinase अवरोधक स्क्रीनिंग में स्वयं इकट्ठे मानव प्रोटीन Microarrays

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...

Quantification of Protein Interaction Network Dynamics using Multiplexed Co-Immunoprecipitation

मल्टीप्लेक्स्ड सह-प्रतिरक्षा का उपयोग कर प्रोटीन इंटरेक्शन नेटवर्क गतिशीलता का परिमाणीकरण

Dynamic protein-protein interactions control cellular behavior, from motility to DNA replication to signal transduction. However, monitoring dynamic ...

Monitoring Protein-RNA Interaction Dynamics In Vivo at High Temporal Resolution Using &#967;CRAC

Monitoring Protein-RNA Interaction Dynamics In Vivo at High Temporal Resolution Using ÃƒÂÃ¢â‚¬Â¡CRAC

उच्च अस्थायी रिज़ॉल्यूशन पर विवो में प्रोटीन-आरएनए इंटरैक्शन डायनामिक्स की निगरानी

The interaction between RNA-binding proteins (RBPs) and their RNA substrates exhibits fluidity and complexity. Within its lifespan, a single RNA can be ...