Name: a tnbs-induced rodent model to study the pathogenic role of mechanical stress in crohn's disease
Uploaded: 2022-03-01T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease at JoVE.com

يتم دعم هذا العمل جزئيا من خلال منح من المعاهد الوطنية للصحة (R01 DK124611 إلى XZS) ووزارة الدفاع الأمريكية (W81XWH-20-1-0681 إلى XZS). تم إجراء أعمال علم الأنسجة بمساعدة مختبر علم الأمراض الجراحي UTMB.

أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة للفرع الطبي لجامعة تكساس (#0907051C). تم استخدام ذكور أو إناث فئران Sprague-Dawley ، التي يبلغ عمرها حوالي 8-9 أسابيع ، للدراسة.
1. إعداد الحيوان
<ol><li>الفئران السريعة لمدة 24 ساعة ومعالجتها...

<ol>
	<li>Kappelman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prevalence+and+geographic+distribution+of+Crohn's+disease+and+ulcerative+colitis+in+the+United+States.">The prevalence and geographic distribution of Crohn's disease and ulcerative colitis in the United States.</a> Clinical Gastroenterology and Hepatology. 5 (12), 1424-1429 (2007).</li><li>Hwang, J. M., Varma, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+inflammatory+bowel+disease.">Surgery for inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (17), 2678-2690 (2008).</li><li>Latella, G., Rieder, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+fibrosis:+Ready+to+be+reversed.">Intestinal fibrosis: Ready to be reversed.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 33 (4), 239-245 (2017).</li><li>Rieder, F., Fiocchi, C., Rogler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms,+management,+and+treatment+of+fibrosis+in+patients+with+inflammatory+bowel+diseases.">Mechanisms, management, and treatment of fibrosis in patients with inflammatory bowel diseases.</a> Gastroenterology. 152 (2), 340-350 (2017).</li><li>Bettenworth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Crohn's+disease-associated+small+bowel+strictures+and+fibrosis+on+cross-sectional+imaging:+A+systematic+review.">Assessment of Crohn's disease-associated small bowel strictures and fibrosis on cross-sectional imaging: A systematic review.</a> Gut. 68 (6), 1115-1126 (2019).</li><li>Chen, W., Lu, C., Hirota, C., Iacucci, M., Ghosh, S., Gui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+hyperplasia/hypertrophy+is+the+most+prominent+histological+change+in+Crohn's+fibrostenosing+bowel+strictures:+A+semiquantitative+analysis+by+using+a+novel+histological+grading+scheme.">Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme.</a> Journal of Crohn's and Colitis. 11 (1), 92-104 (2017).</li><li>Olaison, G., Smedh, K., Sj&#246;dahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+course+of+Crohn's+disease+after+ileocolic+resection:+Endoscopically+visualised+ileal+ulcers+preceding+symptoms.">Natural course of Crohn's disease after ileocolic resection: Endoscopically visualised ileal ulcers preceding symptoms.</a> Gut. 33 (3), 331-335 (1992).</li><li>Lin, Y. M., Li, F., Shi, X. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+is+a+pro-inflammatory+stimulus+in+the+gut:+In+vitro,+in+vivo+and+ex+vivo+evidence.">Mechanical stress is a pro-inflammatory stimulus in the gut: In vitro, in vivo and ex vivo evidence.</a> PLoS One. 9, 106242 (2014).</li><li>Gabella, G., Yamey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+collagen+by+smooth+muscle+in+the+hyertrophic+intestine.">Synthesis of collagen by smooth muscle in the hyertrophic intestine.</a> Experimental Physiology. 62 (3), 257-264 (1977).</li><li>Katsanos, K. H., Tsianos, V. E., Maliouki, M., Adamidi, M., Vagias, I., Tsianos, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstruction+and+pseudo-obstruction+in+inflammatory+bowel+disease.">Obstruction and pseudo-obstruction in inflammatory bowel disease.</a> Annals of Gastroenterology. 23 (4), 243-256 (2010).</li><li>Johnson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+stiffness+corresponding+to+strictured+bowel+induces+a+fibrogenic+response+in+human+colonic+fibroblasts.">Matrix stiffness corresponding to strictured bowel induces a fibrogenic response in human colonic fibroblasts.</a> Inflammatory Bowel Disease. 19 (5), 891-903 (2013).</li><li>Gayer, C. P., Basson, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+mechanical+forces+on+intestinal+physiology+and+pathology.">The effects of mechanical forces on intestinal physiology and pathology.</a> Cell Signalling. 21 (8), 1237-1244 (2009).</li><li>Cox, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertonic+saline+modulation+of+intestinal+tissue+stress+and+fluid+balance.">Hypertonic saline modulation of intestinal tissue stress and fluid balance.</a> Shock. 29 (5), 598-602 (2008).</li><li>Shi, X. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+gene+expression+in+gut+smooth+muscle+cells.">Mechanical regulation of gene expression in gut smooth muscle cells.</a> Frontiers in Physiology. 8, 1000 (2017).</li><li>Shi, X. Z., Lin, Y. M., Powell, D. W., Sarna, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+motility+dysfunction+in+bowel+obstruction:+Role+of+stretch-induced+COX-2.">Pathophysiology of motility dysfunction in bowel obstruction: Role of stretch-induced COX-2.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 99-108 (2011).</li><li>Gutierrez, J. A., Perr, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stretch+modulates+TGF-beta1+and+alpha1(I)+collagen+expression+in+fetal+human+intestinal+smooth+muscle+cells.">Mechanical stretch modulates TGF-beta1 and alpha1(I) collagen expression in fetal human intestinal smooth muscle cells.</a> American Journal of Physiology. 277 (5), 1074-1080 (1999).</li><li>Lipson, K. E., Wong, C., Teng, Y., Spong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+is+a+central+mediator+of+tissue+remodeling+and+fibrosis+and+its+inhibition+can+reverse+the+process+of+fibrosis.">CTGF is a central mediator of tissue remodeling and fibrosis and its inhibition can reverse the process of fibrosis.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 5, 24 (2012).</li><li>Chaqour, B., Goppelt-Struebe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+the+Cyr61/CCN1+and+CTGF/CCN2+proteins.">Mechanical regulation of the Cyr61/CCN1 and CTGF/CCN2 proteins.</a> The FEBS Journal. 273 (16), 3639-3649 (2006).</li><li>Shi, X. Z., Winston, J. H., Sarna, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+immune+and+genetic+responses+in+rat+models+of+Crohn's+colitis+and+ulcerative+colitis.">Differential immune and genetic responses in rat models of Crohn's colitis and ulcerative colitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 41-51 (2011).</li><li>Antoniou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TNBS-induced+colitis+animal+model:+An+overview.">The TNBS-induced colitis animal model: An overview.</a> Annals of Medicine and Surgery (London). 11, 9-15 (2016).</li><li>Shi, X. Z., Sarna, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+of+Cav1.2+channel+with+VIP+and+VIP+receptor+agonists+and+antagonists:+A+novel+approach+to+designing+promotility+and+antimotility+agents.">Gene therapy of Cav1.2 channel with VIP and VIP receptor agonists and antagonists: A novel approach to designing promotility and antimotility agents.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 295 (1), 187-196 (2008).</li><li>Lin, Y. M., Sarna, S. K., Shi, X. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prophylactic+and+therapeutic+benefits+of+COX-2+inhibitor+on+motility+dysfunction+in+bowel+obstruction:+Roles+of+PGE2+and+EP+receptors.">Prophylactic and therapeutic benefits of COX-2 inhibitor on motility dysfunction in bowel obstruction: Roles of PGE2 and EP receptors.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 302 (2), 267-275 (2012).</li><li>Morris, G. P., Beck, P. L., Herridge, M. S., Depew, W. T., Szewczuk, M. R., Wallace, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hapten-induced+model+of+chronic+inflammation+and+ulceration+in+the+rat+colon.">Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon.</a> Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).</li><li>Mudter, J., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Il-6+signaling+in+inflammatory+bowel+disease:+Pathophysiological+role+and+clinical+relevance.">Il-6 signaling in inflammatory bowel disease: Pathophysiological role and clinical relevance.</a> Inflammatory Bowel Disease. 13 (8), 1016-1023 (2007).</li><li>Geesala, R., Lin, Y. M., Zhang, K., Shi, X. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+mechano-transcription+process+as+therapeutic+intervention+in+gastrointestinal+disorders.">Targeting mechano-transcription process as therapeutic intervention in gastrointestinal disorders.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 809350 (2021).</li></ol>

تم إدخال التهاب القولون الناجم عن TNBS في عام 1989 وتم استخدامه كنموذج تجريبي لمرض كرون منذ ذلك الحين19،20،23. تشمل السمات المهمة لهذا النموذج في القوارض تطور التهاب عبر الجدارية يشبه إلى حد كبير الآفات النسيجية المرضية التي تطورت في مرض كرون ا?...

يتميز مرض التهاب الأمعاء (IBD) ، بما في ذلك التهاب القولون التقرحي (UC) ومرض كرون (CD) ، بالتهاب مزمن في الجهاز الهضمي (GI). يؤثر على ~ 1-2 مليون أمريكي1. تبلغ التكاليف السنوية المقدرة لرعاية مرض الأمعاء الالتهابي في الولايات المتحدة 11.8 مليار دولار. على عكس UC ، يتميز القرص المضغوط بالتهاب عبر الجدارية وتشكيل تضيق 2,3. يحدث تكوين التضيق (التضيق) في ما يصل إلى 70٪ من مرضى CD3 وقد يكون سببه التهاب عبر الجدارية (تضيق التهابي) أو تليف معوي (تضيق ليفي)4,5. يتميز التليف المعوي بترسب الكولاجين المفرط والمصفوفات الأخرى خارج الخلية (ECM) مع خلايا العضلات الملساء (SMC) كأحد أنواع الخلايا الوسيطة الرئيسية المشاركة في العملية 3,4. تضخم العضلات الملساء المرتبط بالتضخم هو تغيير نسيجي كبير آخر في تضيق التضيق الليفي في CD6. على الرغم من أن تكوين التضيق في CD يرتبط بالالتهاب المزمن ، إلا أنه لا يوجد علاج مضاد للالتهابات فعال ، باستثناء العلاج الجراحي 2,6. ومع ذلك ، فإن تكرار ما بعد الجراحة هو ما يقرب من 100 ٪ ، مع إعطاء الوقت الكافي 2,7. كاستجابة التهابية ، قد يتطور التليف وتضخم SMC أيضا في الحالات غير الالتهابية (أي انسداد الأمعاء) في الأمعاء 8,9 ؛ ويعتقد أن كلا من الآليات المعتمدة على الالتهاب والمستقلة تشارك في تشكيل تضيق 3,4. بالنظر إلى أن الأبحاث المكثفة في الآليات المعتمدة على الالتهاب لم تترجم إلى أي علاج فعال لتشكيل التضيق ، هناك حاجة إلى دراسات حول الدور المحتمل للآليات المستقلة عن الالتهاب في التليف المعوي.
كعامل غير التهابي ، عادة ما يصادف الإجهاد الميكانيكي (MS) المرتبط بالوذمة ، وتسلل الخلايا الالتهابية ، وتشوه الأنسجة ، والتليف ، والتضيق 10،11،12،13 في IBD ، وخاصة CD ، الذي يتميز بالالتهاب عبر الجدارية. الإجهاد الميكانيكي هو الأكثر بروزا في CD stenotic ، حيث يمثل التضيق (التهابي أو الليفي) في موقع الالتهاب إجهادا ميكانيكيا في الأنسجة المحلية ويؤدي إلى انتفاخ التجويف في الجزء القريب من موقع الانسداد10,14. وقد أظهرت الدراسات السابقة في المختبر أن الإجهاد الميكانيكي يغير التعبير الجيني لوسطاء التهابيين محددين (أي COX-2 ، IL-6) 8،14،15 وعوامل النمو (أي TGF-β) في أنسجة الجهاز الهضمي ، وخاصة خلايا العضلات الملساء المعوية (SMC) 16. وجدت الدراسات الحديثة أيضا أن التعبير عن وسطاء محددين مؤيدين للتليف مثل عامل نمو النسيج الضام (CTGF) حساس للغاية للإجهاد الميكانيكي17,18. كان من المفترض أن الإجهاد الميكانيكي قد يلعب دورا مسببا مستقلا للأمراض في الالتهاب المرتبط بالقرص المضغوط والتليف وإعادة تشكيل الأنسجة. ومع ذلك ، فإن الأهمية المسببة للأمراض للإجهاد الميكانيكي في التهاب الأمعاء والتليف وتضخم العضلات الملساء في CD لا تزال غير مستكشفة إلى حد كبير. قد يكون هذا جزئيا لأن الالتهاب هو عملية أكثر وضوحا وأفضل دراسة من الإجهاد الميكانيكي. الأهم من ذلك ، لم يكن هناك نموذج حيواني محدد جيدا ل IBD للتمييز بين تأثير الإجهاد الميكانيكي وتأثير الالتهاب.
يصف العمل الحالي نموذجا للقوارض لالتهاب القولون الشبيه بكرون الناجم عن الحقن داخل القولون لكاشف هابتن 2,4,6-ثلاثي نيتروبنزين حمض السلفونيك (TNBS)19,20 ، والذي قد يخدم الغرض من دراسة دور الإجهاد الميكانيكي في CD. وقد وجد أن تقطير TNBS تسبب في التهاب موضعي (~ 2 سم في الطول) عبر الجدارية مع تضييق التجويف (تضيق) في القولون البعيد. يؤدي التضيق إلى انتفاخ الأمعاء الملحوظ (الإجهاد الميكانيكي) 14,15 ولكن لا يوجد التهاب مرئي في الجزء الذكري القريب من موقع التقطير. على العكس من ذلك ، فإن جزء القولون البعيد إلى موقع التضيق لا يمثل التهابا أو إجهادا ميكانيكيا. لوحظت تغيرات كبيرة خاصة بالموقع في التعبير الجيني والالتهاب والتليف وتضخم SMC في المواقع الثلاثة المختلفة. وتشير النتائج إلى أن الإجهاد الميكانيكي، وخاصة التعبير الجيني الناجم عن الإجهاد الميكانيكي، قد يلعب دورا حاسما في تطوير التليف وتضخم التنسج في التهاب القولون كرون.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACT-1 Control Software Ver2.63</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DXM1200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C1000 Touch Thermal Cycler with 96-Well Fast Reaction Module</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1851196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFX96 Optical Reaction Module for Real-Time PCR Systems</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1845097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Agilent Artisan Link Pro Special stainer</td>
			<td>Dako</td>
			<td>AR310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako-Agilent Masson&#39;s Trichrome Kit ref# AR173</td>
			<td>Dako</td>
			<td>AR173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DXM1200 Digital Color HR Camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DXM1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukaryotic 18S rRNA Endogenous Control</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4352930E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-Z Anesthesia</td>
			<td>E-Z Systems Inc.</td>
			<td>EZ-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>9.0.2 (161)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates, low profile, thin wall, skirted, white/clear</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>HSP9601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (Corning Hank&#39;s Balanced Salt Solution, 1x without calcium and magnesium)</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>21-021-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HM 325 Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>23-900-667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LI-COR Odyssey Digital Imaging System</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>9120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastercycler epGradient Thermal Cycler with Control Panel 5340 Thermal Cycler</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical grade open end polyurethane catheter</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8890703013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometers</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND2000CLAPTOP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse E800 Upright Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>E800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrocellulose/Filter Paper Sandwiches Pkg of 50, 0.45 &#956;m, 7 x 8.5 cm</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1620215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene Glycol 3350, Osmotic Laxative</td>
			<td>Miralax</td>
			<td>C8175</td>
			<td>Dose: 17g in 226 mL of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit (250) 
			250 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 mL and 2 mL), RNase-free Reagents and Buffers</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III First-Strand Synthesis System</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>18080051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assays Rn00573960_g1 CTGF Probe</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assays Rn99999011_m1 IL6 Probe</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Fast Advanced Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4444557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Prisma H&#38;E Stain Kit #1</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Prisma Plus Automated Slide Stainer</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNBS (Picrylsulfonic acid solution)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>92822</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a tnbs-induced rodent model to study the pathogenic role of mechanical stress in crohn's disease

أمراض الأمعاء الالتهابية (IBD) مثل مرض كرون (CD) هي اضطرابات التهابية مزمنة في الجهاز الهضمي تؤثر على ما يقرب من 20 لكل 1,00,000 في أوروبا والولايات المتحدة الأمريكية. يتميز CD بالالتهاب عبر الجدارية والتليف المعوي وتضيق اللمعان. على الرغم من أن العلاجات المضادة للالتهابات قد تساعد في السيطرة على الالتهاب ، إلا أنها لا تحتوي على أي فعالية على التليف والتضيق في CD. التسبب في CD ليست مفهومة جيدا. تركز الدراسات الحالية بشكل أساسي على تحديد آليات الاستجابة المناعية للأمعاء غير المنظمة. في حين أن الالتهاب عبر الجدارية المرتبط ب CD والتليف المعوي والتضيق المضيء كلها تمثل إجهادا ميكانيكيا لجدار الأمعاء ، فإن دور الإجهاد الميكانيكي في CD غير محدد جيدا. لتحديد ما إذا كان الإجهاد الميكانيكي يلعب دورا إمراضيا مستقلا في CD ، تم تطوير بروتوكول لنموذج التهاب القولون الشبيه بالقرص المضغوط الناجم عن TNBS في القوارض. يشبه هذا الالتهاب والتليف عبر الجدارية الناجم عن TNBS السمات المميزة المرضية ل CD في القولون. يتم تحريضه عن طريق التقطير داخل القولون من TNBS في القولون البعيد من الفئران Sprague-Dawley البالغة. في هذا النموذج ، يؤدي الالتهاب عبر الجدارية إلى تضيق في موقع تقطير TNBS (الموقع الأول). لوحظ انتفاخ ميكانيكي في الجزء القريب من موقع التقطير (الموقع P) ، مما يمثل الإجهاد الميكانيكي ولكن الالتهاب غير المرئي. الجزء القولوني البعيد عن الالتهاب (الموقع D) لا يمثل التهابا ولا إجهادا ميكانيكيا. لوحظت تغيرات مميزة في التعبير الجيني والاستجابة المناعية والتليف ونمو العضلات الملساء في مواقع مختلفة (P و I و D) ، مما يسلط الضوء على التأثير العميق للإجهاد الميكانيكي. لذلك ، سيساعدنا هذا النموذج من التهاب القولون الشبيه ب CD على فهم آليات CD المسببة للأمراض بشكل أفضل ، وخاصة دور الإجهاد الميكانيكي والتعبير الجيني الناجم عن الإجهاد الميكانيكي في خلل التنظيم المناعي والتليف المعوي وإعادة تشكيل الأنسجة في CD.

منظر عياني لالتهاب القولون الشبيه بكرون الناجم عن التقطير داخل القولون ل TNBS كما هو موضح في الشكل 1 ، أدى التقطير داخل القولون ل TNBS في الفئران إلى التهاب موضعي عبر الجدارية (~ 2 سم في الطول) مع جدار الأمعاء السميك وتجويف ضيق (تضيق) في موقع التقطير في القولون البعيد (<st...

Watch this Scientific Journal Video about A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease at JoVE.com

A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease

يصف البروتوكول الحالي تطوير نموذج التهاب القولون الشبيه بكرون في القوارض. يؤدي الالتهاب عبر الجدارية إلى تضيق في موقع تقطير TNBS ، ويلاحظ تضخم ميكانيكي في الجزء القريب من التضيق. تسمح هذه التغييرات بدراسة الإجهاد الميكانيكي في التهاب القولون.

نموذج القوارض الناجم عن TNBS لدراسة الدور الممرض للإجهاد الميكانيكي في مرض كرون

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn&#39;s disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting ...

لذلك في بروتوكولنا ، يؤدي التقطير داخل القولون من TNBS إلى التهاب عبر الجدارية في موقع التقطير والانتفاخ الميكانيكي في الجزء القريب من الالتهاب. لذلك هذا يحاكي مرض كرون الضيق. نظرا لأن الجزء القريب منتفخ ميكانيكيا ولكنه لا يظهر التهابا مرئيا ، فإن دراسة مقارنة للجزء القريب وموقع الالتهاب تساعد على تحديد ما إذا كان الإجهاد الميكانيكي يلعب دورا في التهاب القولون كرون.تركز الدراسات السابقة على موقع الالتهاب فقط. يسلط بروتوكولنا الذي يعمل على مواقع مختلفة في النموذج الضوء على الدور الحاسم للإجهاد الميكانيكي في مرض كرون ، وخاصة في مرض كرون الضيق. للبدء ، ضع الفئران على طاولة التخدير في وضع ضعيف.للحث على التهاب القولون ، أدخل قسطرة البولي يوريثين ذات المستوى الطبي المفتوح من خلال فتحة الشرج لمدة سبعة إلى ثمانية سنتيمترات تقريبا من حافة الشرج ، وغرس TNBS بلطف في القولون. إدارة الفئران السيطرة الوهمية مع 250 ميكرولتر من المياه المالحة. للمساعدة في توزيع TNBS أو المالحة وتجنب الانسكابات ، حافظ على الفئران في وضع ضعيف مع توجيه رأسها لأسفل بزاوية 30 درجة تقريبا ، مع إغلاق فتحة الشرج لمدة دقيقتين.افتح بطن الفئران باستخدام مقص وملقط جراحي. قم بإزالة القولون بالكامل بعناية فوق القناة الشرجية ، وانقل القولون على الفور إلى المخزن المؤقت 1x HBSS البارد على الجليد. قم بتصويب القولون في المخزن المؤقت، وقم بقياس طول القولون باستخدام مسطرة.خذ خيطا من النايلون ، وقم بتدويره حول القولون لقياس المحيط الخارجي لأجزاء القولون في السيطرة والفئران المعالجة ب TNBS. خذ أنسجة كاملة السماكة لعلم الأنسجة. اقطع القولون على طول لوح المساريقي ، ونظف القولون جيدا باستخدام المخزن المؤقت HBSS.تقييم القولون للحصول على درجة الالتهاب العياني بناء على المعايير المحددة مسبقا مع الحد الأدنى من التعديلات. جمع عينات أنسجة القولون من الفئران المعالجة ب TNBS في المواقع P و I و D.Site P هو الجزء من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات قبل الهامش الفموي لموقع الالتهاب. الموقع الأول هو موقع الالتهاب حيث يتم غرس TNBS ، وعادة ما يكون من أربعة إلى ستة سنتيمترات من نهاية القولون.وأخيرا ، فإن الموقع D هو الجزء من واحد إلى سنتيمترين بعيدا عن الهامش الفموي لموقع الالتهاب. أدى التقطير داخل القولون ل TNBS في الفئران إلى التهاب موضعي عبر الجدارية يبلغ طوله حوالي سنتيمترين مع جدار الأمعاء السميك وضيق التجويف في موقع التقطير في القولون البعيد. تمت الإشارة إلى موقع تقطير TNBS باسم الموقع I.As نتيجة للالتهاب والتضيق عبر الجدارية ، وكان كل من الالتهاب والإجهاد الميكانيكي موجودين في الموقع I.أدى التضيق في الموقع الأول إلى انتفاخ ملحوظ في التجويف في الجزء القريب من موقع تقطير TNBS ، المشار إليه باسم الموقع P.زاد محيط القولون بشكل كبير في الموقعين P و I مقارنة بالقولون الوهمي.على الرغم من انتفاخه ميكانيكيا ، إلا أن الموقع P لم يظهر التهابا مرئيا. على العكس من ذلك ، فإن الجزء الاستعماري البعيد عن تقطير TNBS المشار إليه باسم الموقع D لم يقدم أي التهاب أو انتفاخ ميكانيكي. زادت درجة الالتهاب العيانية في الموقع الأول في الفئران المعالجة ب TNBS بشكل كبير مقارنة بالضوابط الزائفة في الموقعين P و D لفئران التهاب القولون.لم يتم زيادة درجات الالتهاب في المواقع P و D بشكل كبير مقارنة بالخدعة. لذلك من المهم دراسة ليس فقط الموقع الأول ولكن المواقع P و D في النموذج ، لأن هذا يساعد على التعرف على الأهمية المسببة للأمراض للإجهاد الميكانيكي في مرض كرون. لمزيد من التحديد ما إذا كان الإجهاد الميكانيكي عاملا مسببا للأمراض في التهاب الأمعاء ، قد يحاول المرء أيضا إطلاق الانتفاخ الميكانيكي عن طريق إطعام الحيوانات حصريا بنظام غذائي سائل ومعرفة ما إذا كان هذا يساعد في الالتهاب ووظيفة الأمعاء.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

داء الليشمانيات الجلدي في الجلد الظهرية من الهامستر: نموذجا مفيدا لفحص المخدرات مضاد الليشمانيات

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

تحريض الطعم ضد المضيف المرض و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; مراقبة الخلايا T باستخدام نموذج MHC المطابقة الفئران

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

استخدام متوسط ​​البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في شروط أكثر ملاءمة لالرئة التليف الكيسي

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

دراسة دور النسيج اللمفي البلعوم المرتبط (NALT) في الردود الفأر إلى اللقاحات

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

و<em&gt; في المختبر</em&gt; المشارك عدوى نموذج لدراسة<em&gt; المتصورة المنجلية</em&gt; HIV-1-التفاعلات في الإنسان خلايا الوحيدات المشتقة الابتدائية المناعي

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

على<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة عدم تجانس التمايز بلعم الإنسان والاستقطاب

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

نموذج وينف - غير مكلفة و تراكتابل مصغر من المخاط توصيل القصبات لدراسة الأحياء الدقيقة من التهابات الرئة

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

نموذج السابقين فيفو الابتدائي بورسال خلية ثقافة دجاج لدراسة الأمراض المعدية بورسال الفيروسات المرضية

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Production of Pseudotyped Particles to Study Highly Pathogenic Coronaviruses in a Biosafety Level 2 Setting

إنتاج جسيمات بسيودوتيبيد لدراسة كورونافيروس شديد العدوى في إعداد 2 مستوى السلامة الأحيائية

The protocol aims to generate coronavirus (CoV) spike (S) fusion protein pseudotyped particles with a murine leukemia virus (MLV) core and luciferase ...