Name: a tnbs-induced rodent model to study the pathogenic role of mechanical stress in crohn's disease
Uploaded: 2022-03-01T14:30:00
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Ce travail est soutenu en partie par des subventions des NIH (R01 DK124611 à XZS) et du département de la Défense des États-Unis (W81XWH-20-1-0681 à XZS). Le travail d’histologie a été réalisé avec l’aide du laboratoire de pathologie chirurgicale de l’UTMB.

Toutes les expériences sur les animaux ont été menées selon le comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de la branche médicale de l’Université du Texas (#0907051C). Des rats Sprague-Dawley mâles ou femelles, âgés d’environ 8 à 9 semaines, ont été utilisés pour l’étude.
1. Préparation des animaux
<ol><li>Jeûnez les rats pendant 24 heures et traitez-les avec un laxatif (nettoyant pour l’intestin, voir tableau des matériaux...

<ol>
	<li>Kappelman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prevalence+and+geographic+distribution+of+Crohn's+disease+and+ulcerative+colitis+in+the+United+States.">The prevalence and geographic distribution of Crohn's disease and ulcerative colitis in the United States.</a> Clinical Gastroenterology and Hepatology. 5 (12), 1424-1429 (2007).</li><li>Hwang, J. M., Varma, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+inflammatory+bowel+disease.">Surgery for inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (17), 2678-2690 (2008).</li><li>Latella, G., Rieder, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+fibrosis:+Ready+to+be+reversed.">Intestinal fibrosis: Ready to be reversed.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 33 (4), 239-245 (2017).</li><li>Rieder, F., Fiocchi, C., Rogler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms,+management,+and+treatment+of+fibrosis+in+patients+with+inflammatory+bowel+diseases.">Mechanisms, management, and treatment of fibrosis in patients with inflammatory bowel diseases.</a> Gastroenterology. 152 (2), 340-350 (2017).</li><li>Bettenworth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Crohn's+disease-associated+small+bowel+strictures+and+fibrosis+on+cross-sectional+imaging:+A+systematic+review.">Assessment of Crohn's disease-associated small bowel strictures and fibrosis on cross-sectional imaging: A systematic review.</a> Gut. 68 (6), 1115-1126 (2019).</li><li>Chen, W., Lu, C., Hirota, C., Iacucci, M., Ghosh, S., Gui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+hyperplasia/hypertrophy+is+the+most+prominent+histological+change+in+Crohn's+fibrostenosing+bowel+strictures:+A+semiquantitative+analysis+by+using+a+novel+histological+grading+scheme.">Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme.</a> Journal of Crohn's and Colitis. 11 (1), 92-104 (2017).</li><li>Olaison, G., Smedh, K., Sj&#246;dahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+course+of+Crohn's+disease+after+ileocolic+resection:+Endoscopically+visualised+ileal+ulcers+preceding+symptoms.">Natural course of Crohn's disease after ileocolic resection: Endoscopically visualised ileal ulcers preceding symptoms.</a> Gut. 33 (3), 331-335 (1992).</li><li>Lin, Y. 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Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+gene+expression+in+gut+smooth+muscle+cells.">Mechanical regulation of gene expression in gut smooth muscle cells.</a> Frontiers in Physiology. 8, 1000 (2017).</li><li>Shi, X. Z., Lin, Y. M., Powell, D. W., Sarna, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+motility+dysfunction+in+bowel+obstruction:+Role+of+stretch-induced+COX-2.">Pathophysiology of motility dysfunction in bowel obstruction: Role of stretch-induced COX-2.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 99-108 (2011).</li><li>Gutierrez, J. A., Perr, H. 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E., Wong, C., Teng, Y., Spong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+is+a+central+mediator+of+tissue+remodeling+and+fibrosis+and+its+inhibition+can+reverse+the+process+of+fibrosis.">CTGF is a central mediator of tissue remodeling and fibrosis and its inhibition can reverse the process of fibrosis.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 5, 24 (2012).</li><li>Chaqour, B., Goppelt-Struebe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+the+Cyr61/CCN1+and+CTGF/CCN2+proteins.">Mechanical regulation of the Cyr61/CCN1 and CTGF/CCN2 proteins.</a> The FEBS Journal. 273 (16), 3639-3649 (2006).</li><li>Shi, X. Z., Winston, J. H., Sarna, S. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+of+Cav1.2+channel+with+VIP+and+VIP+receptor+agonists+and+antagonists:+A+novel+approach+to+designing+promotility+and+antimotility+agents.">Gene therapy of Cav1.2 channel with VIP and VIP receptor agonists and antagonists: A novel approach to designing promotility and antimotility agents.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 295 (1), 187-196 (2008).</li><li>Lin, Y. M., Sarna, S. K., Shi, X. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prophylactic+and+therapeutic+benefits+of+COX-2+inhibitor+on+motility+dysfunction+in+bowel+obstruction:+Roles+of+PGE2+and+EP+receptors.">Prophylactic and therapeutic benefits of COX-2 inhibitor on motility dysfunction in bowel obstruction: Roles of PGE2 and EP receptors.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 302 (2), 267-275 (2012).</li><li>Morris, G. P., Beck, P. L., Herridge, M. S., Depew, W. T., Szewczuk, M. R., Wallace, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hapten-induced+model+of+chronic+inflammation+and+ulceration+in+the+rat+colon.">Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon.</a> Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).</li><li>Mudter, J., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Il-6+signaling+in+inflammatory+bowel+disease:+Pathophysiological+role+and+clinical+relevance.">Il-6 signaling in inflammatory bowel disease: Pathophysiological role and clinical relevance.</a> Inflammatory Bowel Disease. 13 (8), 1016-1023 (2007).</li><li>Geesala, R., Lin, Y. M., Zhang, K., Shi, X. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+mechano-transcription+process+as+therapeutic+intervention+in+gastrointestinal+disorders.">Targeting mechano-transcription process as therapeutic intervention in gastrointestinal disorders.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 809350 (2021).</li></ol>

La colite induite par le TNBS a été introduite en 1989 et a été utilisée comme modèle expérimental de la maladie de Crohn depuis lors 19,20,23. Les caractéristiques importantes de ce modèle chez les rongeurs comprennent le développement d’une inflammation transmurale qui ressemble beaucoup aux lésions histopathologiques développées dans la maladie de Crohn humaine19,20<sup class=...

Les maladies inflammatoires de l’intestin (MII), y compris la colite ulcéreuse (CU) et la maladie de Crohn (MC), se caractérisent par une inflammation chronique du tractus gastro-intestinal (GI). Il affecte ~ 1-2 millions d’Américains1. Les coûts annuels estimés des soins des MII aux États-Unis sont de 11,8 milliards de dollars. Contrairement à la CO, la MC est caractérisée par une inflammation transmurale et la formation de sténoses 2,3. La formation de sténoses (sténose) survient chez jusqu’à 70 % des patients atteints de la MC3 et peut être causée par une inflammation transmurale (sténose inflammatoire) ou une fibrose intestinale (sténose fibrotique)4,5. La fibrose intestinale est caractérisée par un dépôt excessif de collagène et d’autres matrices extracellulaires (ECM) avec des cellules musculaires lisses (SMC) comme l’un des principaux types de cellules mésenchymateuses impliquées dans le processus 3,4. L’hyperplasie musculaire lisse associée à l’hypertrophie est un autre changement histologique important de la sténose fibrotique dans laCD 6. Bien que la formation de sténoses dans la MC soit associée à une inflammation chronique, aucun traitement anti-inflammatoire n’est efficace, à l’exception du traitement chirurgical 2,6. Cependant, les récidives post-opératoires sont presque de 100%, avec suffisamment de temps 2,7. En tant que réponse inflammatoire, la fibrose et l’hyperplasie SMC peuvent également se développer dans des conditions non inflammatoires (c.-à-d. occlusion intestinale) dans l’intestin 8,9; on pense que des mécanismes dépendants de l’inflammation et indépendants sont impliqués dans la formation desténoses 3,4. Étant donné que des recherches approfondies sur les mécanismes dépendants de l’inflammation ne se sont pas traduites par un traitement efficace pour la formation de sténoses, des études sur le rôle possible des mécanismes indépendants de l’inflammation dans la fibrose intestinale sont nécessaires.
En tant que facteur non inflammatoire, le stress mécanique (SEP) associé à l’œdème, à l’infiltration de cellules inflammatoires, à la déformation tissulaire, à la fibrose et à la sténose 10,11,12,13 est couramment rencontré dans les MII, en particulier la MC, qui se caractérise par une inflammation transmurale. Le stress mécanique est le plus remarquable dans la CD sténotique, où la sténose (inflammatoire ou fibrotique) dans le site de l’inflammation présente un stress mécanique dans le tissu local et conduit à une distension de la lumière dans le segment proximal au site d’obstruction10,14. Des études in vitro antérieures ont démontré que le stress mécanique modifie l’expression génique de médiateurs inflammatoires spécifiques (c.-à-d. COX-2, IL-6)8,14,15 et les facteurs de croissance (c.-à-d. TGF-β) dans les tissus gastro-intestinaux, en particulier les cellules musculaires lisses intestinales (SMC)16. Des études récentes ont également révélé que l’expression de médiateurs pro-fibrotiques spécifiques tels que le facteur de croissance du tissu conjonctif (CTGF) est très sensible au stress mécanique17,18. On a émis l’hypothèse que le stress mécanique pourrait jouer un rôle pathogène indépendant dans l’inflammation, la fibrose et le remodelage des tissus associés à la MC. Cependant, l’importance pathogène du stress mécanique dans l’inflammation intestinale, la fibrose et l’hyperplasie des muscles lisses dans la MC reste largement inexplorée. Cela peut être dû en partie au fait que l’inflammation est un processus plus visible et mieux étudié que le stress mécanique. Plus important encore, il n’y a pas eu de modèle animal bien défini de MII pour distinguer l’effet du stress mécanique de celui de l’inflammation.
Les travaux actuels décrivent un modèle rongeur de colite de type Crohn induite par injection intracolonique de réactif haptène acide 2,4,6-trinitrobenzène sulfonique (TNBS)19,20, qui pourrait servir à étudier le rôle du stress mécanique dans la MC. Il a été constaté que l’instillation de TNBS induisait une inflammation transmurale localisée (~ 2 cm de longueur) avec rétrécissement de la lumière (sténose) dans le côlon distal. La sténose entraîne une distension intestinale marquée (stress mécanique)14,15 mais une inflammation non visible dans le segment colique proximal du site d’instillation. Au contraire, le segment du côlon distal au site de la sténose ne présente ni inflammation ni stress mécanique. Des changements significatifs spécifiques au site dans l’expression des gènes, l’inflammation, la fibrose et l’hyperplasie SMC ont été observés dans les trois sites différents. Les résultats suggèrent que le stress mécanique, en particulier l’expression génétique induite par le stress mécanique, peut jouer un rôle essentiel dans le développement de la fibrose et de l’hyperplasie dans la colite de Crohn.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACT-1 Control Software Ver2.63</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DXM1200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C1000 Touch Thermal Cycler with 96-Well Fast Reaction Module</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1851196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFX96 Optical Reaction Module for Real-Time PCR Systems</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1845097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Agilent Artisan Link Pro Special stainer</td>
			<td>Dako</td>
			<td>AR310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako-Agilent Masson&#39;s Trichrome Kit ref# AR173</td>
			<td>Dako</td>
			<td>AR173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DXM1200 Digital Color HR Camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DXM1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukaryotic 18S rRNA Endogenous Control</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4352930E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-Z Anesthesia</td>
			<td>E-Z Systems Inc.</td>
			<td>EZ-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>9.0.2 (161)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates, low profile, thin wall, skirted, white/clear</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>HSP9601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (Corning Hank&#39;s Balanced Salt Solution, 1x without calcium and magnesium)</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>21-021-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HM 325 Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>23-900-667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LI-COR Odyssey Digital Imaging System</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>9120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastercycler epGradient Thermal Cycler with Control Panel 5340 Thermal Cycler</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical grade open end polyurethane catheter</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8890703013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometers</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND2000CLAPTOP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse E800 Upright Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>E800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrocellulose/Filter Paper Sandwiches Pkg of 50, 0.45 &#956;m, 7 x 8.5 cm</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1620215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene Glycol 3350, Osmotic Laxative</td>
			<td>Miralax</td>
			<td>C8175</td>
			<td>Dose: 17g in 226 mL of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit (250) 
			250 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 mL and 2 mL), RNase-free Reagents and Buffers</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III First-Strand Synthesis System</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>18080051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assays Rn00573960_g1 CTGF Probe</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assays Rn99999011_m1 IL6 Probe</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Fast Advanced Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4444557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Prisma H&#38;E Stain Kit #1</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Prisma Plus Automated Slide Stainer</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNBS (Picrylsulfonic acid solution)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>92822</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a tnbs-induced rodent model to study the pathogenic role of mechanical stress in crohn's disease

Les maladies inflammatoires de l’intestin (MII) telles que la maladie de Crohn (MC) sont des troubles inflammatoires chroniques du tractus gastro-intestinal affectant environ 20 pour 1 000 000 en Europe et aux États-Unis. La MC se caractérise par une inflammation transmurale, une fibrose intestinale et une sténose luminale. Bien que les thérapies anti-inflammatoires puissent aider à contrôler l’inflammation, elles n’ont aucune efficacité sur la fibrose et la sténose dans la MC. La pathogenèse de la MC n’est pas bien comprise. Les études actuelles se concentrent principalement sur la délimitation des mécanismes de réponse immunitaire intestinale dérégulés. Alors que l’inflammation transmurale associée à la MC, la fibrose intestinale et la sténose luminale représentent toutes un stress mécanique à la paroi intestinale, le rôle du stress mécanique dans la MC n’est pas bien défini. Pour déterminer si le stress mécanique joue un rôle pathogène indépendant dans la MC, un protocole de modèle de colite de type CD induite par TNBS chez les rongeurs a été développé. Ce modèle d’inflammation transmurale et de fibrose induit par le TNBS ressemble aux caractéristiques pathologiques de la MC dans le côlon. Elle est induite par instillation intracolononique de TNBS dans le côlon distal des rats Sprague-Dawley adultes. Dans ce modèle, l’inflammation transmurale entraîne une sténose au site d’instillation du TNBS (site I). Une distension mécanique est observée dans la portion proximale au site d’instillation (site P), représentant un stress mécanique mais pas d’inflammation visible. La partie colique distale à l’inflammation (site D) ne présente ni inflammation ni stress mécanique. Des changements distinctifs de l’expression des gènes, de la réponse immunitaire, de la fibrose et de la croissance musculaire lisse à différents sites (P, I et D) ont été observés, soulignant un impact profond du stress mécanique. Par conséquent, ce modèle de colite de type CD nous aidera à mieux comprendre les mécanismes pathogènes de la MC, en particulier le rôle du stress mécanique et de l’expression des gènes induits par le stress mécanique dans la dérégulation immunitaire, la fibrose intestinale et le remodelage tissulaire dans la MC.

Vue macroscopique de la colite de type Crohn induite par l’instillation intracolique du TNBS Comme le montre la figure 1, l’instillation intracolonique de TNBS chez le rat a induit une inflammation transmurale localisée (~2 cm de longueur) avec une paroi intestinale épaissie et une lumière rétrécie (sténose) dans le site d’instillation dans le côlon distal (figure 1A). Le site d’instillation du TNBS est appelé site I. En raiso...

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A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease

Le présent protocole décrit le développement d’un modèle de colite semblable à celui de Crohn chez les rongeurs. L’inflammation transmurale entraîne une sténose au site d’instillation du TNBS et un élargissement mécanique est observé dans le segment proximal de la sténose. Ces changements permettent d’étudier le stress mécanique dans la colite.

Un modèle de rongeur induit par le TNBS pour étudier le rôle pathogène du stress mécanique dans la maladie de Crohn

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn&#39;s disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting ...

Ainsi, dans notre protocole, l’instillation intra-colique de TNBS conduit à une inflammation transmurale au site d’instillation et à la distension mécanique dans le segment proximal à l’inflammation. Cela imite donc la maladie de Crohn sténotique. Comme le segment proximal est distendu mécaniquement mais ne montre pas d’inflammation visible, une étude comparative du segment proximal et du site d’inflammation aide à déterminer si le stress mécanique joue un rôle dans la colite de Crohn.Les études précédentes se concentrent uniquement sur le site de l’inflammation. Notre protocole travaillant sur différents sites du modèle met en évidence un rôle critique du stress mécanique dans la maladie de Crohn, en particulier dans la maladie de Crohn sténotique. Pour commencer, placez les rats sur la table d’anesthésie en position couchée.Pour induire la colite, insérez un cathéter en polyuréthane ouvert de qualité médicale à travers l’anus sur environ sept à huit centimètres du bord anal et instillez doucement le TNBS dans le côlon. Administrer les rats témoins simulés avec 250 microlitres de solution saline. Pour faciliter la distribution du TNBS ou de la solution saline et éviter les déversements, maintenez les rats en position couchée, la tête tournée vers le bas à un angle d’environ 30 degrés, l’anus étant fermé pendant deux minutes.Ouvrez l’abdomen du rat à l’aide de ciseaux et de pinces de qualité chirurgicale. Retirez soigneusement tout le côlon au-dessus du canal anal et transférez immédiatement le côlon dans un tampon HBSS glacé 1x. Redressez le deux-points dans la mémoire tampon et mesurez la longueur du côlon à l’aide d’une règle.Prenez un fil de nylon et encerclez-le autour du côlon pour mesurer la circonférence externe des segments du côlon en contrôle et des rats traités au TNBS. Prenez des tissus de pleine épaisseur pour l’histologie. Coupez le côlon le long de la planche mésentérique et nettoyez soigneusement le côlon avec un tampon HBSS.Évaluez le côlon pour le score d’inflammation macroscopique en fonction des critères prédéfinis avec un minimum de modifications. Prélever des échantillons de tissu colique de rats traités par TNBS aux sites P, I et D.Site P est la partie deux à trois centimètres avant la marge buccale du site d’inflammation. Le site I est le site d’inflammation où le TNBS est instillé, généralement à quatre à six centimètres de l’extrémité du côlon.Enfin, le site D est la partie d’un à deux centimètres distale à la marge aborale du site d’inflammation. L’instillation intracolique de TNBS chez le rat a induit une inflammation transmurale localisée d’environ deux centimètres de long avec une paroi intestinale épaissie et une lumière rétrécie dans le site d’instillation dans le côlon distal. Le site d’instillation du TNBS a été appelé site I.As la suite d’une inflammation transmurale et d’une sténose, l’inflammation et le stress mécanique étaient présents dans le site I.La sténose du site I a entraîné une distension lumineuse marquée dans le segment proximal au site d’instillation du TNBS, appelé site P.La circonférence du côlon a été significativement augmentée dans les sites P et I par rapport au côlon témoin simulé.Bien que distendue mécaniquement, le site P ne présentait pas d’inflammation visible. Au contraire, le segment colique distal à l’instillation de TNBS appelé site D ne présentait ni inflammation ni distension mécanique. Le score macroscopique de l’inflammation au site I chez les rats traités par TNBS a été considérablement augmenté par rapport aux témoins simulés dans les sites P et D des rats colites.Les scores d’inflammation dans les sites P et D n’ont pas été significativement augmentés par rapport à sham. Il est donc important d’étudier non seulement le site I, mais aussi les sites P et D du modèle, car cela aide à reconnaître l’importance pathogène du stress mécanique dans la maladie de Crohn. Pour déterminer davantage si le stress mécanique est un facteur pathogène dans l’inflammation intestinale, on peut également essayer de libérer la distension mécanique en nourrissant les animaux exclusivement avec un régime liquide et voir si cela aide à l’inflammation et à la fonction intestinale.

Research

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