Name: organic solvent-based protein precipitation for robust proteome purification ahead of mass spectrometry
Uploaded: 2022-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada. Forfatterne takker Bioinformatics Solutions (Waterloo, Canada) og SPARC BioCentre (Molecular Analysis) ved Hospital for Sick Children (Toronto, Canada) for deres bidrag til oppkjøpet av MS-data.

1. Materielle hensyn og prøveforberedelse
<ol><li>Bruk bare løsemidler med høy renhet (aceton, kloroform, metanol) (>99,5%) og kjemikalier, fri for overflødig fuktighet.</li>
	<li>Forbered natriumklorid- og sinksulfatløsninger (1 M) i vann. MERK: Saltløsninger kan lagres på ubestemt tid ved romtemperatur, så lenge de er fri for forurensning eller mikrobiell vekst.</li>
	<li>Bruk det minste mikrosentrifugehetteglasset av polypropylen (PP) som er tilstrekkelig til å beholde det nødvendige vo...

Optimal MS-karakterisering oppnås når gjenværende SDS tømmes under 10 ppm. Mens alternative tilnærminger, som FASP og fordøyelse på perler, tilbyr kvantitativ SDS-uttømming med variabel utvinning 31,32,33, er hovedmålet med nedbør å maksimere renhet og utbytte samtidig. Dette avhenger av å effektivt isolere supernatanten (som inneholder SDS) uten å forstyrre proteinpelleten. Med hetteglassbasert nedbør, når hovedd...

Proteomanalyse ved massespektrometri har blitt stadig strengere på grunn av den forbedrede følsomheten, oppløsningen, skannehastigheten og allsidigheten til moderne MS-instrumenter. MS-fremskritt bidrar til større proteinidentifikasjonseffektivitet og mer presis kvantifisering 1,2,3,4,5. Med forbedret MS-instrumentering krever forskere en tilsvarende konsistent front-end prøveprepareringsstrategi som er i stand til kvantitativ utvinning av proteiner med høy renhet på minimal tid på tvers av alle stadier av arbeidsflyten 6,7,8,9,10,11 . For å nøyaktig gjenspeile proteomstatusen til et biologisk system, må proteiner isoleres fra den opprinnelige prøvematrisen på en effektiv og objektiv måte. For dette formål, inkludert et denaturerende overflateaktivt middel, slik som natriumdodecylsulfat (SDS), sikrer effektiv proteinekstraksjon og oppløsning12. SDS forstyrrer imidlertid sterkt elektrosprayionisering, noe som forårsaker alvorlig MS-signalundertrykkelse hvis den ikke elimineres riktig13.
Ulike SDS-uttømmingsstrategier er tilgjengelige for påfølgende proteomanalyse, for eksempel oppbevaring av proteiner over et molekylvekt cutoff filter inneholdt i engangsspinnpatroner 14,15,16. Den filterstøttede prøveprepareringsmetoden (FASP) favoriseres da den effektivt tømmer SDS under 10 ppm, noe som letter optimal MS. Imidlertid er proteinutvinning med FASP variabel, noe som førte til utforskning av andre teknikker. Kromatografiske tilnærminger som selektivt fanger protein (eller overflateaktivt middel) har utviklet seg til forskjellige praktiske patroner eller perlebaserte formater 17,18,19,20,21. Gitt disse enkle og (ideelt) konsistente strategiene for proteinrensing, blir den klassiske tilnærmingen til proteinutfelling med organiske løsningsmidler ofte oversett som en lovende tilnærming til proteinisolasjon. Mens løsningsmiddelutfelling er vist å tømme SDS under kritiske nivåer med hell, har proteinutvinning vært en langvarig bekymring for denne tilnærmingen. Flere grupper har observert en proteinutvinningsskjevhet, med uakseptabelt lave nedbørsutbytter som en funksjon av proteinkonsentrasjon, molekylvekt og hydrofobisitet22,23. På grunn av mangfoldet av nedbørsprotokoller rapportert i litteraturen, ble standardiserte nedbørsforhold utviklet. I 2013 rapporterte Crowell og medarbeidere først avhengigheten av ionstyrke på nedbørseffektiviteten til proteiner i 80% aceton24. For alle undersøkte proteiner ble tilsetningen av opptil 30 mM natriumklorid vist å være avgjørende for å maksimere utbyttet (opptil 100% utvinning). Mer nylig viste Nickerson og medarbeidere at kombinasjonen av enda høyere ionstyrke (opptil 100 mM) med forhøyet temperatur (20 °C) under acetonutfelling ga nær kvantitativ utvinning i 2-5 min25. En liten nedgang i utvinningen av proteiner med lav molekylvekt (LMW) ble observert. Derfor viste en påfølgende rapport fra Baghalabadi og medarbeidere vellykket gjenvinning av LMW-proteiner og peptider (≤5 kDa) ved å kombinere spesifikke salter, spesielt sinksulfat, med et høyere nivå av organisk løsningsmiddel (97% aceton)26.
Mens raffinering av nedbørsprotokollen gir en mer pålitelig proteinrensingsstrategi for MS-basert proteomikk, er suksessen til konvensjonell nedbør avhengig av brukerteknikk. Et hovedmål med dette arbeidet er å presentere en robust nedbørsstrategi som letter isoleringen av proteinpelleten fra den forurensende supernatanten. En engangsfiltreringspatron ble utviklet for å eliminere pipettering ved å isolere aggregert protein over et porøstPTFE-membranfilter 27. MS-forstyrrende komponenter i supernatanten fjernes effektivt i et kort sentrifugeringstrinn med lav hastighet. Engangsfilterpatronen tilbyr også en utskiftbar SPE-patron, som muliggjør påfølgende prøveopprydding etter resolubilisering og valgfri proteinfordøyelse, i forkant av massespektrometri.
En rekke anbefalte arbeidsflyter for proteomutfelling presenteres her, inkludert modifiserte aceton- og kloroform/metanol/vann28-protokoller , i et konvensjonelt (hetteglassbasert) og et halvautomatisk format i en engangs to-tilstandsfiltrerings- og ekstraksjonspatron. De resulterende proteingjenvinningene og SDS-uttømmingseffektivitetene fremheves, sammen med bottom-up LC-MS / MS proteomdekning, for å demonstrere det forventede resultatet fra hver protokoll. De praktiske fordelene og ulempene forbundet med hver tilnærming diskuteres.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Acetone</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >AC177170010</td>
			<td >&#8804;0.002 % aldehyde</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acetonitrile</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >A998-4</td>
			<td >HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ammonium Bicarbonate</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>A6141-1KG</td>
			<td >solid</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Beta mercaptoethanol</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>M3148-25ML</td>
			<td >Molecular biology grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bromophenol blue</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>B8026-5G</td>
			<td >Bromophenol blue sodium salt</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chloroform</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >C298-400</td>
			<td >Chloroform</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Formic Acid</td>
			<td >Honeywell</td>
			<td >56302</td>
			<td >Eluent additive for LC-MS</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fusion Lumos Mass Spectrometer</td>
			<td >ThermoFisher Scientific</td>
			<td ></td>
			<td >for analysis of standard protein mixture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glycerol</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td >356352-1L-M</td>
			<td >For molecular biology, &#62; 99%</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isopropanol</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >A4641</td>
			<td >HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Methanol</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >A452SK-4</td>
			<td >HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >75-400-102</td>
			<td >up to 21,000 xg</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >05-408-130</td>
			<td >tapered bottom</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge Tube&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (2 mL)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >02-681-321</td>
			<td >rounded bottom</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette Tips&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (0.1-10 &#956;L)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >21-197-28</td>
			<td >Universal pipet tip, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette Tips&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (1-200 &#956;L)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >07-200-302</td>
			<td >Universal pipet tip, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette Tips&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (200-1000 &#956;L)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >07-200-303</td>
			<td >Universal pipet tip, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipettes</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >13-710-903</td>
			<td >Micropipet Trio pack</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pepsin</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>P0525000</td>
			<td >Lyophilized powder,&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#62;3200 units/ mg</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ProTrap XG</td>
			<td >Proteoform Scientific</td>
			<td >PXG-0002</td>
			<td >50 complete units per box</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Chloride</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td >S9888-1KG</td>
			<td >ACS reagent, &#62;99 %</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td >ThermoFisher Scientific</td>
			<td >28312</td>
			<td >powdered solid</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >timsTOF Pro Mass Spectrometer</td>
			<td >Bruker</td>
			<td ></td>
			<td >for analysis of liver proteome extract</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trifluoroacetic Acid</td>
			<td >ThermoFisher Scientific</td>
			<td >L06374.AP</td>
			<td >99%</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tris</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >BP152-500</td>
			<td >Molecular biology grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trypsin</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td >9002-07-7</td>
			<td >From bovine pancreas, TPCK-treated</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Urea</td>
			<td >Bio-Rad</td>
			<td >1610731</td>
			<td >solid</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Water (deionized)</td>
			<td>Sartorius Arium Mini Water Purification System</td>
			<td>76307-662</td>
			<td >Type 1 ultrapure (18.2 M&#937; cm)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Zinc Sulfate</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>307491-100G</td>
			<td >solid</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organic solvent-based protein precipitation for robust proteome purification ahead of mass spectrometry

Mens flere fremskritt innen massespektrometri (MS) instrumenter har forbedret kvalitativ og kvantitativ proteomanalyse, er mer pålitelige front-end tilnærminger for å isolere, berike og behandle proteiner foran MS avgjørende for vellykket proteomkarakterisering. Lav, inkonsekvent proteingjenvinning og gjenværende urenheter som overflateaktive stoffer er skadelig for MS-analyse. Proteinutfelling anses ofte som upålitelig, tidkrevende og teknisk utfordrende å utføre sammenlignet med andre prøveprepareringsstrategier. Disse bekymringene overvinnes ved å bruke optimale proteinutfellingsprotokoller. For acetonutfelling er kombinasjonen av spesifikke salter, temperaturkontroll, løsningsmiddelsammensetning og utfellingstid kritisk, mens effektiviteten av kloroform / metanol / vannutfelling avhenger av riktig pipettering og manipulering av hetteglass. Alternativt er disse nedbørsprotokollene strømlinjeformet og halvautomatisert i en engangsspinnpatron. De forventede resultatene av løsningsmiddelbasert proteinutfelling i konvensjonelt format og bruk av en engangs, to-trinns filtrerings- og ekstraksjonspatron er illustrert i dette arbeidet. Dette inkluderer detaljert karakterisering av proteomiske blandinger ved bottom-up LC-MS / MS-analyse. Den overlegne ytelsen til SDS-baserte arbeidsflyter er også demonstrert i forhold til ikke-forurenset protein.

Figur 4 oppsummerer forventet SDS-deplesjon etter hetteglassbasert eller patron-tilrettelagt utfelling av proteiner i en engangsfilterpatron ved bruk av aceton. Konvensjonell inkubering over natten (-20 °C) i aceton sammenlignes med den raske acetonutfellingsprotokollen ved romtemperatur (trinn 2), samt CMW-utfelling (trinn 4). Resterende SDS ble kvantifisert ved metylenblå virkestoff (MBAS) analyse29. Kort fortalt ble 100 μL-prøve kombinert med 100 μL MBAS-reage...

Watch this Scientific Journal Video about Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry at JoVE.com

Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry

Denne protokollen beskriver løsningsmiddelbasert proteinutfelling under kontrollerte forhold for robust og rask gjenvinning og rensing av proteomprøver før massespektrometri.

Organisk løsemiddelbasert proteinutfelling for robust proteomrensing før massespektrometri

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end ...

Disse protokollene er utformet for å maksimere utvinningen så vel som renheten av proteiner gjennom løsningsmiddelbasert utfelling. Vi skal vise deg et par triks for å utføre nedbør i hetteglass, samt en halvautomatisk tilnærming i et spinnpatronformat. Vi har også optimalisert nedbørsprotokollen for å være konsistent og rask.Hele protokollen tar bare noen få minutter. Disse protokollene viser at løsningsmiddelutfelling av proteiner er ideell for prøvepreparering foran massespektrometri. Protokollene vil passe sømløst inn i bottom up så vel som ovenfra og ned pro arbeidsflyter.Demonstrere for oss i dag vil være Ziheng Dang og Victoria Miller, seniorforsker ved Proteoform Scientific i Halifax, Nova Scotia Pipette 90 mikroliter partikkelfri proteinløsning i et polypropylen mikrosentrifugerør. Tilsett deretter 10 mikroliter av en mol vandig natriumklorid og 400 mikroliter aceton i prøveløsningen, lokk og trykk forsiktig på hetteglasset for å kombinere løsningsmidlene. La hetteglasset inkubere det.Romtemperatur uforstyrret i minst to minutter etter inkubasjon, sentrifuger prøvene som noterer orienteringen av hetteglasset og spinner i minst to minutter ved 10.000 RCF eller høyere ved romtemperatur. Etter sentrifugering observeres en synlig hvit pellet på bunnen av røret. På dette punktet, løsne røret og dekanter supernaten i en avfallsbeholder ved å invertere røret.Bruk et papirhåndkle til å trekke opp gjenværende oppløsningsvæske fra hetteglasset. For SDS som inneholder prøver. Dispenser forsiktig 400 mikroliter fersk aceton uten å forstyrre pelleten.Sentreng prøven umiddelbart i ett minutt ved 10 000 ganger G eller høyere ved romtemperatur ved å plassere hetteglasset i rotoren i samme retning som det første spinnet. Tell oppløsningsvæsken opp som beskrevet tidligere. Tørk prøven med hetten åpen i omtrent ett minutt.I en avtrekkshette, før en pelletsoppløseliggjøring. Dispenser 100 mikroliter av proteinoppløsningen i et hetteglass av polypropylen. I avtrekkshetten, tilsett en 400 mikroliter metanol etterfulgt av 100 mikroliter kloroform.Sett lokk hetteglasset og virvelen kort for å blande. Dispenser raskt 300 mikroliter vann direkte inn i midten av hetteglasset. Sett på lokk hetteglasset og la det stå uforstyrret på benken i ett minutt, etter at hetteglasset med polypropylen er plassert i en sentrifuge og spinn det i fem minutter ved 10 000 ganger G eller høyere ved romtemperatur.Hetteglasset observeres å ha to lag med oppløsningsvæske og en synlig hvit pellet til hetteglasset ved ca. 45 grader. Fjern ca. 700 mikroliter av oppløsningsvæsken fra det øvre laget med jevn hastighet ved hjelp av en stor pipettespiss på en milliliter mikro først og senere med en pipettespiss på 200 mikroliter til den danner en perle i hetteglasset. Tilsett 400 mikroliter fersk metanol i prøveflasken uten å forstyrre pelleten ved å dispensere oppløsningsvæsken ned på siden av hetteglasset.Sett lokk hetteglasset og kombiner lagene med oppløsningsvæske ved å vippe hetteglasset forsiktig for å virvle oppløsningsvæskene sammen. For å observere den hvite proteinpelleten som noterer orienteringen av hetteglasset i rotorsentrifugen i minst 10 minutter ved 10.000 ganger G eller høyere ved romtemperatur. Vinkel hetteglasset med pelleten vendt nedover.Plasser en pipettespiss langs øvre kant av hetteglasset og fjern supernatanten med en mikroliter mikropipettespiss i langsom, men jevn hastighet. Beholder ca. 20 mikroliter løsningsmiddel. La det gjenværende løsningsmidlet tørke i avtrekkshetten.Å utfelle proteinet. Bruk en engangsfiltreringspatron til å feste pluggen til den øvre filtreringspatronen. Kombiner 90 mikroliter proteinoppløsning 10 mikroliter av en mol aquas, natriumklorid og 400 mikroliter aceton.Inkuber i minst to minutter på benken, sentrifuger den tilberedte proteinprøven med pluggen fortsatt festet til filtreringspatronen i to minutter ved 2.500 ganger G.At romtemperatur, snu patronen og skru av og fjern pluggen fra patronbunnen. Plasser filtreringspatronen i et rent hetteglass som sentrifugerer proteinprøven i tre minutter ved 500 ganger G ved romtemperatur. Kast gjennomstrømningen gjennom oppløsningsvæsken fra det nedre hetteglasset.Vask proteinpelleten ved å tilsette 400 mikroliter aceton til filtreringspatronen, sentrifuger i tre minutter ved 500 ganger G ved romtemperatur eller til det ikke er noe løsningsmiddel igjen i den øvre patronen. Etter de tidligere demonstrerte proteinutfellingsprotokollene. Resolubiliser proteinet ved å fukte membranen ved foten av filtreringspatronen ved å dispensere to til fem mikroliter ISO-propanol direkte til membranen umiddelbart før du fortsetter til reoppløseligiseringsprotokollen for reoppløseligisering av proteinpelleten, lag 80% volumvis oppløsning av maursyre i vann.Avkjøl denne syreoppløsningen ved minus 20 grader Celsius og filtreringspatronen som inneholder utfelt protein. Dispenser 50 mikroliter kald fortynnet maursyre i den kjølte patronhetten og virvelen i 30 sekunder. Sett filtreringspatronen tilbake i fryseren ved minus 20 grader Celsius i 10 minutter.Gjenta de forrige virvel- og inkubasjonstrinnene. Tilsett 450 mikroliter vann til et endelig volum på 500 mikroliter. Fortynn maursyren til 8 %Skru av sylinderampullen og fjern støpselet fra sylinderampullebunnen og fest SPE-sylinderampullen til hetteglasset.Spinn proteinet gjennom SPE-sylinderampullen i en sentrifuge ved romtemperatur i fem minutter ved 800 ganger G.Hvis oppløsningsvæsken forblir i den øvre sylinderampullen, returner sylinderampullen til sentrifugen og gjenta spinnet. Skyll ved å tilsette 300 mikroliter 5% acetonitril med 0,1% TFA i vann til SPE-patronen, flyt gjennom SPE-patronen i to minutter ved 2000 ganger G.For proteiner med lav molekylvekt eller fordøyede peptider eluerer prøven ved å strømme 300 mikroliter. En 50% acetonitril med 0,1% TFA i fem minutter ved 2, 500 ganger G.For intakte proteiner.Følg opp med et ekstra unnvikelsestrinn ved bruk av 300 mikroliter 75% acetonitril med 0,1% Trifluoro-asketisk syre. Kombiner de to resulterende ekstraktene. Figuren sammenligner SDS-uttømming etter hetteglassbasert eller utfelling av proteiner i en engangsfilterpatron.Bruke aceton med de konvensjonelle hurtig- og CMW-protokollene. Alle tilnærminger reduserer SDS for å muliggjøre optimal massespektrometrianalyse. Denne figuren viser kvantitativ proteinutvinning ved å følge rask acetonutfelling og CMW-utfelling gjennom SDS-sideanalyse av et bearbeidet gjær totalt cellelysat.Konsekvent utvinning ble oppnådd med alle nedbørsprotokoller. Utfelling i en engangsfiltreringspatron eliminerer behovet for å forsiktig pipette SDS som inneholder supernatant mens du beholder de aggregerte proteinene over et membranfilter. Dermed ble det ikke påvist synlige bånd i supernatantfraksjonene over tre uavhengige replikasjoner.Den patronbaserte proteinutfellingen viser overlegen gjenvinning av en Pepsin-fordøyd prøve av bovint plasma i forhold til hetteglassbasert utfelling. Mer signifikante forskjeller i utbytte er notert i patronen ved bruk av natriumklorid mens bruk av sinkløsningsmiddel resulterte i det høyeste utbyttet. Denne figuren kvantifiserer maksimal peptidintensitet fra hver peptidprøve med et forhold over en som reflekterer en høyere peptidmengde for prøver behandlet i engangsfilterpatronene.Figuren sammenligner antall identifiserte peptider per protein på tvers av de tre replikasjonsprøvepreparatene. Korrelasjonskoeffisientene på 0,94 til 0,95 i disse grafene viser den høye konsistensen av prøveprepareringsmetoden for bottom up massespektrometrianalyse. Så når pelleten er dannet, vil du virkelig unngå å forstyrre den.Hvis du holder den som en intakt pellet, får du et høyere utbytte. Så sørg for ikke å glemme å vaske pelleten med ekstra aceton. Dette sørger for at vi blir kvitt SDS som holder prøven vår så ren som mulig, og det gir oss den beste massespektrometrianalysen.Så vi fant ut at fjerning av overflødig løsningsmiddel ved å invertere er mye enklere enn å prøve å pipette prøven. Du får mer konsistente utbytter på denne måten. Utfelling av aceton ved romtemperatur resulterte i mer konsistent og raskere gjenvinning enn tradisjonell nedbør i fryseren.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Analytical Chemistry

Chemistry

Unit 1

Complexometric Titration, Precipitation Titration, and Gravimetry

SCIENTISTS IN ACTION

Analyzing Protein Dynamics Using Hydrogen Exchange Mass Spectrometry

Analysere Protein Dynamics Bruke Hydrogen Exchange-massespektrometri

All cellular processes depend on the functionality of proteins. Although the functionality of a given protein is the direct consequence of its unique ...

Analysis of Volatile and Oxidation Sensitive Compounds Using a Cold Inlet System and Electron Impact Mass Spectrometry

Analyse av flyktige og oksidasjon Sensitive Forbindelser hjelp av en kald Inlet System og Electron Impact massespektrometri

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

Visualisering av Ambient massespektrometri med bruk av Schlieren Photography

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

HS-MRM analysen for kvantifisering av verten celle proteiner i Protein Biopharmaceuticals av flytende kromatografi Ion mobilitet QTOF massespektrometri

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry

Fizzy Ekstraksjon av flyktige organiske forbindelser kombinert med atmosfærisk trykk kjemisk ionisering Quadrupole massespektrometri

Chemical analysis of volatile and semivolatile compounds dissolved in liquid samples can be challenging. The dissolved components need to be brought to ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Sanntid pusten analyse ved hjelp av sekundære Nanoelectrospray Ionization koblet til høy oppløsning massespektrometri

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Syntese og massespektrometri analyse av Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analysere Protein arkitekturer og Protein-Ligand komplekser av integrerende strukturelle massespektrometri

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Mass Spectrometry-Guided Genome Mining as a Tool to Uncover Novel Natural Products

Massespektrometristyrt genomgruvedrift som et verktøy for å avdekke nye naturlige produkter

The chemical space covered by natural products is immense and widely unrecognized. Therefore, convenient methodologies to perform wide-ranging evaluation ...

Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry Approaches for Characterization of the Protein and Metabolite Corona Acquired by Nanomaterials

Kapillær elektroforese massespektrometri tilnærminger for karakterisering av protein og metabolitt korona ervervet av nanomaterialer

The adsorption of biomolecules from surrounding biological matrices to the surface of nanomaterials (NMs) to form the corona has been of interest for the ...