Name: organic solvent-based protein precipitation for robust proteome purification ahead of mass spectrometry
Uploaded: 2022-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry at JoVE.com

Detta arbete finansierades av Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada. (Waterloo, Kanada) och SPARC BioCentre (Molecular Analysis) vid Hospital for Sick Children (Toronto, Kanada) för deras bidrag till förvärvet av MS-data.

1. Materiella överväganden och förberedning av prover
<ol><li>Använd endast lösningsmedel med hög renhet (aceton, kloroform, metanol) (>99,5%) och kemikalier, fria från överskott av fukt.</li>
	<li>Förbered natriumklorid- och zinksulfatlösningar (1 M) i vatten. OBS: Saltlösningar kan förvaras på obestämd tid vid rumstemperatur, så länge de är fria från föroreningar eller mikrobiell tillväxt.</li>
	<li>Använd den minsta injektionsflaskan med mikrocentrifug av polypropen (PP) som ...

Optimal MS-karakterisering uppnås när kvarvarande SDS är uttömt under 10 ppm. Medan alternativa metoder, såsom FASP och matsmältning på pärlor, erbjuder kvantitativ SDS-utarmning med variabel återhämtning 31,32,33, är det primära målet med nederbörd att maximera renhet och avkastning samtidigt. Detta beror på att effektivt isolera supernatanten (som innehåller SDS) utan att störa proteinpelleten. Med flaskbasera...

Proteomanalys med masspektrometri har blivit allt strängare på grund av den förbättrade känsligheten, upplösningen, skanningshastigheten och mångsidigheten hos moderna MS-instrument. Ms framsteg bidrar till större proteinidentifieringseffektivitet och mer exakt kvantifiering 1,2,3,4,5. Med förbättrad MS-instrumentering kräver forskare en motsvarande konsekvent front-end-provberedningsstrategi som kan kvantitativ återhämtning av proteiner med hög renhet på minimal tid i alla stadier av arbetsflödet 6,7,8,9,10,11 . För att korrekt återspegla proteomstatusen för ett biologiskt system måste proteiner isoleras från den ursprungliga provmatrisen på ett effektivt och opartiskt sätt. För detta ändamål, inklusive ett denaturerande ytaktivt medel, såsom natriumdodecylsulfat (SDS), säkerställer effektiv proteinextraktion och solubilisering12. SDS stör emellertid starkt elektrosprayjonisering, vilket orsakar allvarlig MS-signalundertryckning om den inte elimineras ordentligt13.
Olika SDS-utarmningsstrategier är tillgängliga för efterföljande proteomanalys, såsom retention av proteiner över ett molekylviktsavgränsningsfilter som finns i engångsspinnpatroner 14,15,16. Den filterstödda provberedningsmetoden (FASP) gynnas eftersom den effektivt tömmer SDS under 10 ppm, vilket underlättar optimal MS. Proteinåtervinning med FASP är dock variabel, vilket föranledde utforskningen av andra tekniker. Kromatografiska metoder som selektivt fångar protein (eller ytaktivt medel) har utvecklats till olika praktiska patroner eller pärlbaserade format 17,18,19,20,21. Med tanke på dessa enkla och (idealiskt) konsekventa strategier för proteinrening förbises ofta det klassiska tillvägagångssättet för proteinutfällning med organiska lösningsmedel som ett lovande tillvägagångssätt för proteinisolering. Medan lösningsmedelsutfällning har visat sig tömma SDS under kritiska nivåer framgångsrikt, har proteinåtervinning varit ett långvarigt problem för detta tillvägagångssätt. Flera grupper har observerat en proteinåtervinningsbias, med oacceptabelt låga utfällningsutbyten som en funktion av proteinkoncentration, molekylvikt och hydrofobicitet22,23. På grund av mångfalden av nederbördsprotokoll som rapporterats i litteraturen utvecklades standardiserade nederbördsförhållanden. rapporterade först beroendet av jonstyrka på utfällningseffektiviteten hos proteiner i 80% aceton24. För alla undersökta proteiner visade sig tillsatsen av upp till 30 mM natriumklorid vara avgörande för att maximera utbytet (upp till 100% återhämtning). visade nyligen att kombinationen av ännu högre jonstyrka (upp till 100 mM) med förhöjd temperatur (20 ° C) under acetonutfällning gav nära kvantitativ återhämtning på 2-5 min25. En liten minskning av återvinningen av proteiner med låg molekylvikt (LMW) observerades. därför visade en efterföljande rapport från Baghalabadi m.fl. den framgångsrika återhämtningen av LMW-proteiner och peptider (≤5 kDa) genom att kombinera specifika salter, särskilt zinksulfat, med en högre nivå av organiskt lösningsmedel (97% aceton)26.
Medan raffinering av nederbördsprotokollet ger en mer tillförlitlig proteinreningsstrategi för MS-baserad proteomik, är framgången för konventionell nederbörd starkt beroende av användarteknik. Ett primärt mål med detta arbete är att presentera en robust nederbördsstrategi som underlättar isoleringen av proteinpelleten från den förorenande supernatanten. En engångsfiltreringspatron utvecklades för att eliminera pipettering genom att isolera aggregerat protein ovanför ett poröst PTFE-membranfilter27. MS-störande komponenter i supernatanten avlägsnas effektivt i ett kort centrifugeringssteg med låg hastighet. Engångsfilterpatronen erbjuder också en utbytbar SPE-patron, vilket underlättar efterföljande provrensning efter resolubilisering och valfri proteinuppslutning, före masspektrometri.
En serie rekommenderade arbetsflöden för proteomutfällning presenteras här, inklusive modifierade aceton- och kloroform/metanol/vatten28-protokoll , i ett konventionellt (injektionsflaskabaserat) och ett halvautomatiskt format i en engångsfiltrerings- och extraktionspatron i två tillstånd. De resulterande proteinåtervinningarna och SDS-utarmningseffektiviteten framhävs, tillsammans med bottom-up LC-MS / MS-proteomtäckning, för att visa det förväntade resultatet från varje protokoll. De praktiska fördelarna och nackdelarna med varje tillvägagångssätt diskuteras.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Acetone</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >AC177170010</td>
			<td >&#8804;0.002 % aldehyde</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acetonitrile</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >A998-4</td>
			<td >HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ammonium Bicarbonate</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>A6141-1KG</td>
			<td >solid</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Beta mercaptoethanol</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>M3148-25ML</td>
			<td >Molecular biology grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bromophenol blue</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>B8026-5G</td>
			<td >Bromophenol blue sodium salt</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chloroform</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >C298-400</td>
			<td >Chloroform</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Formic Acid</td>
			<td >Honeywell</td>
			<td >56302</td>
			<td >Eluent additive for LC-MS</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fusion Lumos Mass Spectrometer</td>
			<td >ThermoFisher Scientific</td>
			<td ></td>
			<td >for analysis of standard protein mixture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glycerol</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td >356352-1L-M</td>
			<td >For molecular biology, &#62; 99%</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isopropanol</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >A4641</td>
			<td >HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Methanol</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >A452SK-4</td>
			<td >HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >75-400-102</td>
			<td >up to 21,000 xg</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >05-408-130</td>
			<td >tapered bottom</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge Tube&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (2 mL)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >02-681-321</td>
			<td >rounded bottom</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette Tips&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (0.1-10 &#956;L)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >21-197-28</td>
			<td >Universal pipet tip, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette Tips&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (1-200 &#956;L)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >07-200-302</td>
			<td >Universal pipet tip, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette Tips&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (200-1000 &#956;L)</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >07-200-303</td>
			<td >Universal pipet tip, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipettes</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >13-710-903</td>
			<td >Micropipet Trio pack</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pepsin</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>P0525000</td>
			<td >Lyophilized powder,&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#62;3200 units/ mg</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ProTrap XG</td>
			<td >Proteoform Scientific</td>
			<td >PXG-0002</td>
			<td >50 complete units per box</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Chloride</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td >S9888-1KG</td>
			<td >ACS reagent, &#62;99 %</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td >ThermoFisher Scientific</td>
			<td >28312</td>
			<td >powdered solid</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >timsTOF Pro Mass Spectrometer</td>
			<td >Bruker</td>
			<td ></td>
			<td >for analysis of liver proteome extract</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trifluoroacetic Acid</td>
			<td >ThermoFisher Scientific</td>
			<td >L06374.AP</td>
			<td >99%</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tris</td>
			<td >Fisher Scientific</td>
			<td >BP152-500</td>
			<td >Molecular biology grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trypsin</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td >9002-07-7</td>
			<td >From bovine pancreas, TPCK-treated</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Urea</td>
			<td >Bio-Rad</td>
			<td >1610731</td>
			<td >solid</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Water (deionized)</td>
			<td>Sartorius Arium Mini Water Purification System</td>
			<td>76307-662</td>
			<td >Type 1 ultrapure (18.2 M&#937; cm)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Zinc Sulfate</td>
			<td >Millipore Sigma</td>
			<td>307491-100G</td>
			<td >solid</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organic solvent-based protein precipitation for robust proteome purification ahead of mass spectrometry

Medan flera framsteg inom masspektrometri (MS) -instrument har förbättrat kvalitativ och kvantitativ proteomanalys, är mer tillförlitliga front-end-metoder för att isolera, berika och bearbeta proteiner före MS avgörande för framgångsrik proteomkarakterisering. Låg, inkonsekvent proteinåtervinning och kvarvarande föroreningar som ytaktiva ämnen är skadliga för MS-analys. Proteinutfällning anses ofta vara opålitlig, tidskrävande och tekniskt utmanande att utföra jämfört med andra provberedningsstrategier. Dessa problem övervinns genom att använda optimala proteinutfällningsprotokoll. För acetonutfällning är kombinationen av specifika salter, temperaturkontroll, lösningsmedelssammansättning och utfällningstid avgörande, medan effektiviteten hos kloroform / metanol / vattenutfällning beror på korrekt pipettering och injektionsflaska manipulation. Alternativt är dessa utfällningsprotokoll strömlinjeformade och halvautomatiserade i en engångsspinnpatron. De förväntade resultaten av lösningsmedelsbaserad proteinutfällning i konventionellt format och med användning av en engångsfiltrerings- och extraktionspatron i två steg illustreras i detta arbete. Detta inkluderar detaljerad karakterisering av proteomblandningar genom bottom-up LC-MS / MS-analys. Den överlägsna prestandan hos SDS-baserade arbetsflöden demonstreras också i förhållande till icke-förorenat protein.

Figur 4 sammanfattar den förväntade SDS-utarmningen efter injektionsflaskans eller patronunderstödda utfällning av proteiner i en engångsfilterpatron med aceton. Konventionell inkubation över natten (-20 °C) i aceton jämförs med protokollet för snabb acetonutfällning vid rumstemperatur (steg 2) samt CMW-utfällning (steg 4). Rest sds kvantifierades med analys av metylenblått aktiva substanser (MBAS)29. Kortfattat kombinerades 100 μL prov med 100 μL MBAS-...

Watch this Scientific Journal Video about Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry at JoVE.com

Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry

Detta protokoll beskriver lösningsmedelsbaserad proteinutfällning under kontrollerade förhållanden för robust och snabb återhämtning och rening av proteomprover före masspektrometri.

Organisk lösningsmedelsbaserad proteinutfällning för robust proteomrening före masspektrometri

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end ...

Dessa protokoll är utformade för att maximera återhämtningen såväl som renheten hos proteiner genom lösningsmedelsbaserad utfällning. Vi kommer att visa dig ett par knep för att utföra nederbörd i injektionsflaskor, samt ett halvautomatiskt tillvägagångssätt i ett spinnpatronformat. Vi har också optimerat nederbördsprotokollet för att vara konsekvent och snabbt.Hela protokollet tar bara några minuter. Dessa protokoll visar att lösningsmedelsutfällning av proteiner är idealisk för provförberedelse före masspektrometri. Protokollen passar sömlöst in i såväl underifrån och ner pro-arbetsflöden.Demonstrerar för oss idag kommer att vara Ziheng Dang och Victoria Miller, Senior forskare vid Proteoform Scientific i Halifax, Nova Scotia Pipette 90 mikroliter partikelfri proteinlösning i ett polypropenmikrocentrifugrör. Tillsätt sedan 10 mikroliter vattenhaltig natriumklorid och 400 mikroliter aceton i provlösningen, täck och knacka försiktigt på injektionsflaskan för att kombinera lösningsmedlen. Låt injektionsflaskan inkubera den.Rumstemperatur ostörd i minst två minuter efter inkubation, centrifugera proverna med angivande av injektionsflaskans orientering och snurra i minst två minuter vid 10 000 RCF eller högre vid rumstemperatur. Efter centrifugeringen observeras en synlig vit pellet i botten av röret. Vid denna tidpunkt, ta bort röret och dekantera supernatet i en avfallsbehållare genom att invertera röret.Använd en pappershandduk för att dra eventuell kvarvarande vätska från injektionsflaskan. För SDS som innehåller prover. Fördela försiktigt 400 mikroliter färsk aceton utan att störa pelleten.Centrera omedelbart provet i en minut vid 10 000 gånger G eller högre vid rumstemperatur genom att placera injektionsflaskan i rotorn i samma riktning som den ursprungliga snurrningen. Räkna bort tvättlösningsmedlet som beskrivits tidigare. Torka provet med locket öppet i ungefär en minut.I en dragskåp, före en pelletslösning. Dispensera 100 mikroliter av proteinlösningen i en injektionsflaska med polypropen. I dragskåpet tillsätter du 400 mikroliter metanol följt av 100 mikroliter kloroform.Täck injektionsflaskan och virveln kort för att blanda. Fördela snabbt 300 mikroliter vatten direkt i mitten av injektionsflaskan. Täck injektionsflaskan och låt den sitta ostört på bänkskivan i en minut, efter att injektionsflaskan av polypropen har placerats i en centrifug och snurrat den i fem minuter vid 10 000 gånger G eller högre vid rumstemperatur.Injektionsflaskan observeras ha två lösningsmedelsskikt och en synlig vit pellet till injektionsflaskan vid cirka 45 grader. Ta bort cirka 700 mikroliter av lösningsmedlet från det övre lagret med en jämn hastighet med en stor en milliliters mikropipettspets initialt och senare med en 200 mikroliters pipettspets tills den bildar en pärla i injektionsflaskan. Tillsätt 400 mikroliter färsk metanol till provflaskan utan att störa pelleten genom att fördela vätskan längs flaskans sida.Täck injektionsflaskan och kombinera lösningsmedelsskikten genom att försiktigt gunga injektionsflaskan för att virvla ihop lösningsmedlen. För att observera den vita proteinpelleten som noterar injektionsflaskans orientering i rotorcentrifugen i minst 10 minuter vid 10 000 gånger G eller högre vid rumstemperatur. Vinkla injektionsflaskan med pelleten nedåt.Placera en pipettspets längs injektionsflaskans övre kant och ta bort supernatanten med en milliliters mikropipettspets med en långsam men enhetlig hastighet. Behåller cirka 20 mikroliter lösningsmedel. Låt det kvarvarande lösningsmedlet torka i dragskåpet.Att fälla ut proteinet. Använd en engångsfiltreringspatron och fäst kontakten på den övre filtreringspatronen. Kombinera 90 mikroliter proteinlösning 10 mikroliter av en mol vatten, natriumklorid och 400 mikroliter aceton.Inkubera i minst två minuter på bänkskivan, centrifugera det beredda proteinprovet med pluggen fortfarande fäst vid filtreringspatronen i två minuter vid 2 500 gånger G.At rumstemperatur, vänd patronen och skruva loss och ta bort kontakten från patronbasen. Placera filtreringspatronen i en ren injektionsflaska centrifugera proteinprovet i tre minuter vid 500 gånger G vid rumstemperatur. Kassera flödet genom vätska från den nedre injektionsflaskan.Tvätta proteinpelleten genom att tillsätta 400 mikroliter aceton till filtreringspatronen, centrifugera i tre minuter vid 500 gånger G vid rumstemperatur eller tills inget lösningsmedel finns kvar i den övre patronen. Efter de tidigare demonstrerade proteinutfällningsprotokollen. Lös proteinet igen genom att väta membranet vid basen av filtreringspatronen genom att dispensera två till fem mikroliter ISO-propanol direkt till membranet omedelbart innan du fortsätter till återlösningsprotokollet för återlöslighet av proteinpelleten framställ 80% volymlösning av myrsyra i vatten.Förkyl denna syralösning vid minus 20 grader Celsius och filtreringspatronen innehåller utfällt protein. Fördela 50 mikroliter kall utspädd myrsyra i det kylda patronlocket och virveln i 30 sekunder. Sätt tillbaka filtreringspatronen i frysen vid minus 20 grader Celsius i 10 minuter.Upprepa föregående virvel- och inkubationssteg. Tillsätt 450 mikroliter vatten till en slutlig volym på 500 mikroliter. Späd myrsyran till 8% Invertera patronen skruva loss och ta bort kontakten från patronbasen och fäst SPE-patronen på injektionsflaskan.Snurra proteinet genom SPE-patronen i en centrifug vid rumstemperatur i fem minuter vid 800 gånger G.Om lösningsmedel finns kvar i den övre patronen återför patronen till centrifugen och upprepa snurret. Skölj genom att tillsätta 300 mikroliter 5% acetonitril med 0,1% TFA i vatten till SPE-patronen, strömma genom SPE-patronen i två minuter vid 2000 gånger G.För proteiner med låg molekylvikt eller smälta peptider eluerar provet genom att strömma 300 mikroliter. En 50% acetonitril med 0,1% TFA i fem minuter vid 2 500 gånger G.För intakta proteiner.Följ upp med ett ytterligare elusionssteg med 300 mikroliter 75% acetonitril med 0,1% Trifluorasketsyra. Kombinera de två resulterande extrakten. I figuren jämförs SDS-utarmningen efter injektionsflaska baserad eller utfällning av proteiner i en engångsfilterpatron.Använda aceton med de konventionella snabb- och CMW-protokollen. Alla metoder minskar SDS för att möjliggöra optimal masspektrometrianalys. Denna figur visar kvantitativ proteinåtervinning genom att följa snabb acetonutfällning och CMW-utfällning genom SDS-sidanalys av en bearbetad jäst total celllysat.Konsekvent återhämtning erhölls med alla nederbördsprotokoll. Utfällning i en engångsfiltreringspatron eliminerar behovet av att försiktigt pipettera SDS som innehåller supernatant samtidigt som de aggregerade proteinerna behålls ovanför ett membranfilter. Således detekterades inga synliga band i supernatantfraktionerna över tre oberoende replikat.Den patronbaserade proteinutfällningen visar överlägsen återvinning av ett Pepsin-smält prov av bovin plasma i förhållande till injektionsflaskabaserad utfällning. Mer signifikanta skillnader i utbyte noteras i patronen vid användning av natriumklorid medan zinklösningsmedel används resulterade i det högsta utbytet. Denna siffra kvantifierar peptidens toppintensitet från varje peptidprov med ett förhållande över ett som återspeglar ett högre peptidöverflöd för prover som bearbetas i engångsfilterpatronerna.Figuren jämför antalet identifierade peptider per protein över de tre replikatprovpreparaten. Korrelationskoefficienterna 0,94 till 0,95 i dessa grafer visar den höga konsistensen av provberedningsmetoden för masspektrometrianalys nedifrån och upp. Så när den pelleten har bildats vill du verkligen undvika att störa den.Om du behåller den som en intakt pellets får du ett högre utbyte. Så se till att inte glömma att tvätta pelleten med extra aceton. Detta är att se till att vi blir av med SDS och håller vårt prov så rent som möjligt och det ger oss den bästa masspektrometrianalysen.Så vi fann att det är mycket enklare att ta bort överflödigt lösningsmedel genom att invertera det än att försöka pipettera provet. Du får mer konsekventa avkastningar på detta sätt. Att utföra acetonutfällning vid rumstemperatur resulterade i en mer konsekvent och snabbare återhämtning än traditionell nederbörd i frysen.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Analytical Chemistry

Chemistry

Unit 1

Complexometric Titration, Precipitation Titration, and Gravimetry

SCIENTISTS IN ACTION

Analyzing Protein Dynamics Using Hydrogen Exchange Mass Spectrometry

Analysera Protein Dynamics Använda Hydrogen Exchange masspektrometri

All cellular processes depend on the functionality of proteins. Although the functionality of a given protein is the direct consequence of its unique ...

Analysis of Volatile and Oxidation Sensitive Compounds Using a Cold Inlet System and Electron Impact Mass Spectrometry

Analys av flyktiga och Oxidation Känsliga Föreningar med kall Inlet System och Electron Impact masspektrometri

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

Visualisering av Ambient masspektrometri med användning av schlierenfotografering

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

En HS-MRM analysmetod för kvantifiering av värdcellen proteiner i Protein Biopharmaceuticals genom vätskekromatografi Ion rörlighet QTOF masspektrometri

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry

Fizzy Extraction av flyktiga organiska föreningar kombinerat med atmosfärstryck Kemisk ionisering Quadrupole Mass Spectrometry

Chemical analysis of volatile and semivolatile compounds dissolved in liquid samples can be challenging. The dissolved components need to be brought to ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Realtid andedräkt analys med hjälp av sekundära Nanoelectrospray jonisering kopplat till hög upplösning masspektrometri

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Syntes och masspektrometri analys av Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analysera Protein arkitekturer och Protein-Ligand komplex av integrativ strukturella masspektrometri

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Mass Spectrometry-Guided Genome Mining as a Tool to Uncover Novel Natural Products

Mass pektrometri-guidad genombrytning som ett verktyg för att avslöja nya naturliga produkter

The chemical space covered by natural products is immense and widely unrecognized. Therefore, convenient methodologies to perform wide-ranging evaluation ...

Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry Approaches for Characterization of the Protein and Metabolite Corona Acquired by Nanomaterials

Kapillärelektrofores masspektrometri metoder för karakterisering av protein och metabolit korona förvärvas av nanomaterial

The adsorption of biomolecules from surrounding biological matrices to the surface of nanomaterials (NMs) to form the corona has been of interest for the ...