Name: analyses of proteinuria, renal infiltration of leukocytes, and renal deposition of proteins in lupus-prone mrl/lpr mice
Uploaded: 2022-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyses of Proteinuria, Renal Infiltration of Leukocytes, and Renal Deposition of Proteins in Lupus-prone MRL/lpr Mice at JoVE.com

Nous remercions le Flow Cytometry Core Facility, le laboratoire d’histopathologie, le Fralin Imaging Center du Virginia Polytechnic Institute et l’Université d’État pour leur soutien technique. Ce travail est soutenu par diverses subventions internes et NIH.

Le présent protocole est approuvé par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de Virginia Tech. Étant donné que la maladie du lupus a une incidence plus élevée chez les femelles, seules les souris LMR / LPR femelles ont été utilisées. Le prélèvement de l’échantillon a commencé à l’âge de 4 semaines et s’est terminé à 15 semaines. Les souris ont été obtenues de sources commerciales (voir le tableau des matériaux) et ont été élevées et maintenues dans un enviro...

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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+performing+immunofluorescence+staining.">An introduction to performing immunofluorescence staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1897, 299-311 (2019).</li><li>Okutucu, B., D&#305;n&#231;er, A., Habib, &. #. 2. 1. 4. ;., Z&#305;hn&#305;oglu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+five+methods+for+determination+of+total+plasma+protein+concentration.">Comparison of five methods for determination of total plasma protein concentration.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 70 (5), 709-711 (2007).</li></ol>

La LN est l’une des principales causes de mortalité chez les patients atteints de LED et les facteurs aggravant la maladie restent incertains. L’application de ce protocole consiste à caractériser la fonction rénale à l’aide de multiples méthodes, y compris la mesure de la protéinurie, l’analyse FACS de leucocytes rénaux isolés et la coloration par immunofluorescence de sections rénales congelées.
Un point important à considérer lors de la collecte d’urine est que l’on...

La fonction première du rein est l’élimination des substances toxiques par l’urine tout en maintenant l’homéostasie de l’eau et des sels1. Cette fonction est menacée chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé (LED), conduisant à ce que l’on appelle la néphrite lupique (LN). La LN est une conséquence de l’attaque du système immunitaire sur les reins, entraînant une inflammation rénale persistante, perdant ainsi sa capacité à nettoyer les déchets du sang et à réguler les concentrations de sel et de liquide. Cela conduira éventuellement à une insuffisance rénale, qui peut être fatale. Au cours du processus néphritique, les cellules B circulantes, les cellules T et les monocytes sont recrutés dans le rein, sécrétant des chimiokines, des cytokines et des autoanticorps formant des complexes immunitaires. Cela entraîne finalement des lésions des cellules endothéliales, des lésions membraneuses, une atrophie tubulaire rénale et une fibrose2.
LMR/Mp-Fas lpr (LMR/lpr) Les souris sujettes au lupus sont un modèle de souris classique présentant des signes cliniques semblables au lupus qui ressemblent à SLE3 humains. Ce modèle a joué un rôle déterminant dans la compréhension de l’une des principales causes de mortalité chez les patients atteints de LED à la lupie (LN)4. Dans le LED humain et chez la souris, le LN se caractérise par une inflammation progressive déclenchée par le dépôt rénal de complexes immuns, suivie de l’activation du complément, du recrutement de cellules inflammatoires et de la perte de la fonction rénale5. Le dépôt du complexe immunitaire est la première étape pour induire la production de chimiokines et de cytokines par les cellules rénales intrinsèques, ce qui élargit la réponse inflammatoire en recrutant des cellules immunitaires6. Le protocole actuel présente plusieurs techniques pour suivre la progression de la maladie rénale qui analysent l’infiltration cellulaire et le dépôt de complexes immuns.
L’urine recueillie chaque semaine permet de détecter et de visualiser l’évolution de la protéinurie avant, pendant et après l’apparition du lupus. La protéinurie en tant que biomarqueur peut déterminer la progression biologique de la LN. Les autres avantages de cette technique sont qu’elle est non invasive, rentable et facile à mettre en œuvre7. Lorsque le rein fonctionne parfaitement, le taux de protéinurie est constamment bas; Cependant, chez les souris LMR/LPR, après l’âge de 8-9 semaines, on observe une augmentation progressive du taux de protéinurie, qui est finalement suffisamment élevé pour provoquer une insuffisance rénale8. Plusieurs bandelettes de réactifs et réactifs colorimétriques sont disponibles dans le commerce pour surveiller le problème. Cependant, le test de Bradford est bon marché et très précis pour déterminer l’apparition de la protéinurie et l’évolution de la néphrite lupique. Ce test est rapide et le réactif n’est pas affecté par la présence de solvants, de tampons, d’agents réducteurs et d’agents chélatants métalliques qui peuvent se trouver dans votre échantillon 9,10,11.
Un aspect important à considérer est l’infiltration cellulaire dans le rein. Ces infiltrats favorisent la pathogenèse en déclenchant la sécrétion de facteurs solubles tels que les cytokines pour aggraver l’inflammation12. Pour mieux comprendre quelles populations cellulaires sont présentes dans les infiltrats, une méthode utile consiste à isoler les leucocytes13. Ici, la détection de l’infiltration rénale des cellules B est utilisée comme exemple. La procédure commence par un processus de digestion avec de la désoxyribonucléase (DNase) et de la collagénase, suivi d’une séparation du gradient de densité qui élimine les débris, les globules rouges et les granulocytes denses. La raison de l’isolement des lymphocytes B (CD19+) et des plasmocytes (CD138+) est que les reins lupiques peuvent concentrer ces cellules14. Il est suggéré que la présence de cellules B dans de petits agrégats dans le rein peut indiquer une expansion clonale et, par conséquent, la production d’immunoglobulines (Ig). Les plasmocytes sont bien connus pour être présents dans ces agrégats ainsi que15. Une fois les leucocytes isolés, le tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) peut être utilisé pour analyser les cellules d’intérêt lors de la coloration avec différents anticorps conjugués à la fluorescence.
L’immunofluorescence est l’une des méthodes de détection immunohistochimique (IHC) qui permet la visualisation fluorescente des protéines dans des échantillons de tissus rénaux de 4 μm d’épaisseur. D’autres méthodes de détection de l’IHC dépendent de la nature des analytes, de la chimie de liaison et d’autres facteurs16. L’immunofluorescence est une méthode d’identification rapide qui expose l’antigène à son anticorps homologue marqué avec un fluorochrome spécifique (ou un colorant fluorescent). Lorsqu’il est excité, il produit de la lumière qu’un microscope à fluorescence peut détecter. Cette technique permet d’observer le dépôt du complément C3 et des IgG2a17. Une activation excessive en cascade du complément pourrait être associée à une réponse immunitaire incontrôlée et à une perte de fonction18. Le dépôt immunitaire d’autoanticorps anti-double brin d’ADN (anti-ADNds) dans le rein est une préoccupation majeure19, où ceux avec l’isotype IgG2a ont été associés à LN20. Plus précisément, les anticorps anti-ADNds présentent plus de pathogénicité et d’affinité pour les matières nucléaires, formant des complexes immuns21. Lorsque l’IgG2a est présente, la cascade du complément, y compris C3, est activée pour éliminer les complexes immuns22. Les marqueurs C3 et IgG2a peuvent être quantifiés individuellement ou superposés pour établir leur corrélation.
Notamment, la mesure de la créatinine sérique est une autre technique fiable qui peut être utilisée avec une hématurie microscopique et des biopsies rénales pour diagnostiquer LN23. Cependant, la présence de protéinurie est un indicateur fort de lésions glomérulaires. En ce sens, la surveillance du niveau de protéinurie pendant le lupus peut détecter l’apparition de la maladie et compléter d’autres méthodes de diagnostic du lupus. De plus, les complexes immuns déposés dans les glomérules peuvent induire une réponse inflammatoire, activer le système du complément et recruter davantage de cellules inflammatoires. Un autre point remarquable de ce protocole est l’infiltration des cellules B dans le rein. Ceci, avec les cellules T infiltrées, amplifie les réponses immunitaires locales qui déclenchent des dommages aux organes. Il est important de noter que la classification du LN n’est pas seulement basée sur les changements morphologiques glomérulaires observés en microscopie, mais aussi sur les dépôts immunitaires observés avec l’immunofluorescence. Par conséquent, dans ce protocole, des méthodes précises et rentables pour l’analyse de la fonction rénale sont proposées en laboratoire.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>10x Tris-Buffered Saline (TBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>J60764.K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human/Mouse C3</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>CL7632F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD138 BV711</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>142519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD45 AF700</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11088882001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope LSM 880</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin jar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-212-281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomold</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9511236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Density gradient medium</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td>Percoll</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC-Treated water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dsDNA-EC</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>tlrl-ecdna</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S311-500</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS M5000 Microscope imaging system</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMF5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Fusion Cell sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Fusion</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum - Premium, Heat Inactivated</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>S11150H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 96-Well Polystyrene Plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad prism</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s Balanced Salt Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactobacillus reuteri Kandler et al.</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>23272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM non-essential amino acids</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRL/MpJ-Fas lpr /J Mice (MRL/lpr)</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail enamel</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any conventional store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T compound</td>
			<td>Tisse-Tek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peel-A-Way Disposable Embedding Molds</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>R-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>70011069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce 20x TBS Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>28358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Coomassie Plus (Bradford) Assay kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23236</td>
			<td>Albumin standard included</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLon Gold Antifade Mountant</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553141</td>
			<td>FcR block</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax M5</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>N/A</td>
			<td>SoftMax Pro 6.1 software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cell Strainers 100 &#181;M</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin Hydrochloride</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>V-200-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zombie Aqua</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>423102</td>
			<td>fluorescent dye for flow cytometry analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyses of proteinuria, renal infiltration of leukocytes, and renal deposition of proteins in lupus-prone mrl/lpr mice

Le lupus érythémateux disséminé (LED) est une maladie auto-immune sans remède connu et se caractérise par une inflammation persistante de nombreux organes, y compris les reins. Dans de telles circonstances, le rein perd sa capacité à nettoyer les déchets du sang et à réguler les concentrations de sel et de liquide, conduisant éventuellement à une insuffisance rénale. Les femmes, en particulier celles en âge de procréer, sont diagnostiquées neuf fois plus souvent que les hommes. La maladie rénale est la principale cause de mortalité chez les patients atteints de LED. Le présent protocole décrit une méthode simple et rapide pour mesurer les niveaux de protéines excrétées dans l’urine recueillie, en suivant la progression du lupus au fil du temps. En outre, une approche pour isoler les cellules mononucléaires rénales est fournie en fonction de la sélection de la taille et de la densité pour étudier l’infiltration rénale des leucocytes. De plus, une méthode immunohistochimique a été développée pour caractériser le dépôt de protéines dans les glomérules et l’infiltration leucocytaire dans l’espace tubulo-interstitiel. Ensemble, ces méthodes peuvent aider à étudier la progression de l’inflammation chronique associée aux reins des souris LMR / LPR sujettes au lupus.

Le protocole utilise plusieurs méthodes pour évaluer les LMR / lpr chez les souris pour la néphrite lupique. Tout d’abord, une procédure est décrite pour étudier l’augmentation des niveaux de protéinurie due à un dysfonctionnement rénal au fil du temps. Comme le montre la figure 1, des souris femelles ont été traitées avec un gavage oral de 200 μL de solution saline tamponnée au phosphate (1x PBS) comme groupe témoin et avec le probiotique Lactobacillus reuteri co...

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Analyses of Proteinuria, Renal Infiltration of Leukocytes, and Renal Deposition of Proteins in Lupus-prone MRL/lpr Mice

Le présent protocole décrit une méthode pour suivre la progression du lupus chez la souris. Deux procédures supplémentaires sont présentées pour caractériser la néphrite lupique basée sur l’infiltration cellulaire et le dépôt de protéines dans les reins.

Analyses de la protéinurie, de l’infiltration rénale des leucocytes et du dépôt rénal de protéines chez les souris LMR/LPR sujettes au lupus

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disorder with no known cure and is characterized by persistent inflammation in many organs, including ...

Ces méthodes peuvent aider à étudier la progression de l’inflammation chronique associée aux reins chez les patients atteints de lupus. Nous offrons une alternative fiable et rentable qui peut être utilisée pour surveiller l’évolution de la maladie dans le lupus. Commencez à stériliser la hotte en pulvérisant de l’éthanol à 70% et placez une feuille de plastique stérile sur la surface.Préparez ensuite des embouts, des tubes de 1,5 millilitre et une pipette pour recueillir environ 20 microlitres d’urine. Prenez la cage et vaporisez de l’éthanol à 70% avant de la placer à l’intérieur de la hotte. Ensuite, tenez la souris d’une main et utilisez l’autre main pour masser doucement la région ventrale de haut en bas.À l’aide d’un tube ou d’une pipette de 1,5 millilitre, recueillir l’urine directement. Ou si les gouttes d’échantillon le recueillent sur la feuille de plastique. Remettez ensuite la souris dans la cage.Couper les reins disséqués en granulométrie et les digérer dans cinq millilitres de tampon de digestion contenant de la collagénase et de la DNase 1 dans un milieu RPMI 1640 contenant de l’HEPES pendant une heure avec agitation douce continue à 37 degrés Celsius. Ajouter 10 millilitres de PBS glacé contenant 10 millimolaires d’EDTA et incuber pendant 10 minutes sur de la glace. Puis vortex la suspension deux fois.Plus tard, filtrez la suspension cellulaire à travers une passoire de 100 micromètres et lavez avec 10 millilitres de HBSS plein. Ensuite, centrifuger à 350 fois G pendant 10 minutes à température ambiante. Préparer une solution de Percoll isotonique à 30, 37 et 70 % et ajouter une couche de solution de Percoll à 37 % par-dessus la solution à 70 %.Re suspendre les cellules dans cinq millilitres de Percoll isotonique à 30%. À l’aide d’une pipette Pasteur, chargez lentement 37% de cinq millilitres en haut et 70% de cinq millilitres en bas, ce qui rend le gradient de Percoll isotonique du stock. Ensuite, centrifuger avec le numéro neuf et le numéro zéro à 1000 fois G pendant 30 minutes à température ambiante.Ensuite, collectez les leucocytes de l’interface 37 à 70% et remettez-les en suspension dans cinq millilitres de C 10. Encore une fois, centrifuger à 350 fois G pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius. Par la suite, remettre en suspension la pastille de la cellule dans trois millilitres de tampon de télécopie et centrifugeuse à 350 fois G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius.Jetez ensuite le surnageant en laissant environ 50 microlitres du volume total. Ajouter 50 microlitres de bloc récepteur FC par tube. Ensuite, mélangez et incuber sur de la glace dans l’obscurité pendant 10 minutes.Plus tard, ajoutez deux millilitres de tampon fax pour le lavage. Ensuite, centrifuger à 350 fois G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius et jeter le surnageant en laissant environ 50 microlitres du volume total. Ensuite, ajoutez 20 microlitres du colorant fluorescent approprié et laissez-le reposer pendant 15 à 30 minutes sur de la glace.Ajouter 50 microlitres de mélange d’anticorps par tube contenant CD 138 brilliant violet seven 11 et CD 45 Alexa Fluor 700 et incuber sur de la glace dans l’obscurité pendant 15 à 30 minutes. Ensuite, ajoutez trois millilitres de tampon de fax. Centrifuger à 350 fois G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius.Retirer le surnageant par aspiration en laissant environ 50 microlitres du volume total. Plus tard, remettre en suspension la pastille de cellule dans 200 microlitres de PBS. Pour prélever l’échantillon, intégrez le demi-rein dans le petit cryomoule en plastique avec le composé à température de coupe optimale.Ensuite, ajoutez de la glace sèche dans une boîte en mousse de polystyrène et placez soigneusement le cryomoule sur la glace sèche. Ensuite, retirez le cryomoule, enveloppez-le dans du papier d’aluminium et stockez-le à moins 80 degrés Celsius jusqu’à une utilisation ultérieure. Ensuite, fixez les sections sèches à quatre micromètres avec de l’acétone froide pendant 10 minutes.Après avoir fixé les lames, séchez-les à l’air pendant 0,5 à une heure et conservez-les à moins 20 degrés Celsius pendant une courte période ou moins 80 degrés Celsius pendant une longue période. Pour colorer les échantillons, refixez les lames dans de l’acétone froide pendant cinq à 10 minutes et laissez les sections se réchauffer à température ambiante. Ensuite, à l’aide d’un stylo pat, tracez un cercle hydrophobe autour de la section et laissez-la sécher.Ensuite, placez les lames dans TBS dans le pot Copeland pendant 20 minutes et agitez doucement en mettant le pot sur le shaker. Ensuite, versez TBS et remplissez le pot avec TBS 5% BSA et 0,1% TW 20. Plus tard, incuber le pot pendant 20 minutes en agitant doucement sur le shaker.Ensuite, retirez les diapositives et essuyez le bas des diapositives. Ajouter 100 microlitres d’anticorps conjugués C3 fit C et IgG2 APE à la section et incuber la température ambiante dans une chambre humidifiée pendant une heure. Laver la section trois fois dans du PBS 5%BSA et 0,1%TW 20 pendant 10 minutes sur le vibreur, puis sécher les lames.Montez la section avec un réactif anti-décoloration, puis avec un couvercle. Conservez ensuite les lames à quatre degrés Celsius jusqu’à ce qu’elles soient observées au microscope. Pour l’analyse d’image à l’aide du logiciel image J, décrivez la région souhaitée.Ensuite, définissez les paramètres standard en cliquant sur analyser, puis définissez les mesures et mesurez la zone pour obtenir les résultats. Ensuite, transférez les données obtenues à partir des fenêtres de mesure vers une feuille de calcul. Une fois cela fait, cliquez sur analyser pour mesurer la région et transférez à nouveau les données vers la feuille de calcul précédente.Les niveaux de protéines dans l’urine des souris LMR LPR ont été détectés au fil du temps lorsqu’elles ont été traitées avec une solution saline tamponnée au phosphate comme groupe témoin et lactobacillus reuteri comme groupe de traitement. Le groupe de souris traitées avec L. reuteri à une progression protéinurique plus agressive que le groupe témoin. L’analyse par fax a été effectuée pour les leucocytes rénaux isolés afin d’analyser les plasmocytes.En outre, les souris ont été traitées avec de la vancomycine ou de la vancomycine avec de l’ADN double brin d’Escherichia coli. Bien que l’on s’attendait à ce que l’ADN double brin d’Escherichia coli déclenche l’infiltration rénale, aucune différence significative n’a été observée dans le pourcentage de plasmocytes. Le complément C3 et les IgG2a ont été détectés par coloration par immunofluorescence sur des coupes rénales LMR féminines IPR.Les facteurs environnementaux efficaces sur les dépôts rénaux de C3 et d’IgG2a ont été comparés pour le pain de souris maison dans l’animalerie et ceux achetés auprès d’un vendeur. L’analyse immunohistochimique n’a montré aucune différence entre les deux groupes. L’ajout de chaque couche de la solution ISO 20 Percoll en pourcentage peut être difficile, et si elles se mélangent, vous devez recommencer.Cette procédure aide avec le cytomètre de flux et dans les expériences de vitter, de sorte que vous ne pouvez pas étudier les différents types de cellules rénales des populations. Cette procédure nous permet d’étudier les infiltrats de cellules B dans les reins et il n’y a pas beaucoup d’informations dans la littérature.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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Recherche

Immunologie et infection

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Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

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Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Analyser les effets des cellules stromales sur le recrutement des leucocytes de débit

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

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Selective Harvesting of Marginating-pulmonary Leukocytes

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Récolte sélective de Marginating-hépatiques Leucocytes

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Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

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Lavage bronchoalvéaire des poumons murins pour analyser l&#39;infiltration cellulaire inflammatoire

Bronchoalveolar Lavage (BAL) is an experimental procedure that is used to examine the cellular and acellular content of the lung lumen ex vivo to gain ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Transplantation sous-capsulaire rénale du thym embryonnaire Murine traité à la déoxyguanosine de 2'-Deoxyguanosine chez les souris nues

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...