Name: eye removal in living zebrafish larvae to examine innervation-dependent growth and development of the visual system
Uploaded: 2022-02-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System at JoVE.com

Finansiering til dette arbejde blev primært støttet af opstartsmidler fra Reed College til KLC, Helen Stafford Research Fellowship midler til OLH og et Reed College Science Research Fellowship til YK. Dette projekt begyndte i Steve Wilsons laboratorium som et samarbejde med HR, som blev støttet af et Wellcome Trust Studentship (2009-2014). Vi takker Máté Varga, Steve Wilson og andre medlemmer af Wilson-laboratoriet for indledende diskussioner om dette projekt, og vi takker især Florencia Cavodeassi og Kate Edwards, som var de første til at lære KLC, hvordan man monterer embryoner i agarose og udfører zebrafisk hjernedissektioner. Vi takker også Greta Glover og Jay Ewing for hjælp til at samle vores wolframnåleslibeanordning.

Metoderne i dette papir blev udført i overensstemmelse med retningslinjer og godkendelse af Institutional Animal Care and Use Committees of Reed College og University College London. Se materialetabellen for detaljer om zebrafiskestammer, der anvendes i denne undersøgelse.
1. Forbered materialer og værktøjer
<ol><li>Lav løsninger.<ol>
<li>Lav embryomedium (E314) ved at fortynde en 60x stamme (300 mM NaCl, 10,2 mM KCl, 20 mM CaCl<...

<ol>
	<li>Butler, A. B., Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+tectum.">Optic tectum.</a> Comparative Vertebrate Neuroanatomy: Evolution and Adaptation. , 311-340 (2005).</li><li>Cang, J., Feldheim, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+mechanisms+of+topographic+map+formation+and+alignment.">Developmental mechanisms of topographic map formation and alignment.</a> Annual Review of Neuroscience. 36 (1), 51-77 (2013).</li><li>Basso, M. A., Bickford, M. E., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+circuits+of+visual+perception+and+cognition+through+the+superior+colliculus.">Unraveling circuits of visual perception and cognition through the superior colliculus.</a> Neuron. 109 (6), 918-937 (2021).</li><li>Burrill, J. D., Easter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+retinofugal+projections+in+the+embryonic+and+larval+zebrafish+(Brachydanio+rerio).">Development of the retinofugal projections in the embryonic and larval zebrafish (Brachydanio rerio).</a> The Journal of Comparative Neurology. 346 (4), 583-600 (1994).</li><li>Regeneration in the goldfish visual system. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System Available from: <a target="_blank" href="https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-goldfish-visual-system/">https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-goldfish-visual-system/</a> (2021)</li><li>Regeneration in the visual system of adult mammals. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System Available from: <a target="_blank" href="https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-visual-system-of-adult-mammals/">https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-visual-system-of-adult-mammals/</a> (2021)</li><li>Cerveny, K. L., Varga, M., Wilson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continued+growth+and+circuit+building+in+the+anamniote+visual+system.">Continued growth and circuit building in the anamniote visual system.</a> Developmental Neurobiology. 72 (3), 328-345 (2012).</li><li>Lindsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midbrain+tectal+stem+cells+display+diverse+regenerative+capacities+in+zebrafish.">Midbrain tectal stem cells display diverse regenerative capacities in zebrafish.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4420 (2019).</li><li>Soares, D., Yamamoto, Y., Strickler, A. G., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lens+has+a+specific+influence+on+optic+nerve+and+tectum+development+in+the+blind+cavefish+Astyanax.">The lens has a specific influence on optic nerve and tectum development in the blind cavefish Astyanax.</a> Developmental Neuroscience. 26 (5-6), 308-317 (2004).</li><li>White, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+study+of+the+relationship+between+the+size+of+the+eye+and+the+size+of+the+optic+tectum+in+the+brain+of+the+developing+teleost,+Fundulus+heteroclitus.">An experimental study of the relationship between the size of the eye and the size of the optic tectum in the brain of the developing teleost, Fundulus heteroclitus.</a> Journal of Experimental Zoology. 108 (3), 439-469 (1948).</li><li>Raymond, P., Easter, S., Burnham, J., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postembryonic+growth+of+the+optic+tectum+in+goldfish.+II.+Modulation+of+cell+proliferation+by+retinal+fiber+input.">Postembryonic growth of the optic tectum in goldfish. II. Modulation of cell proliferation by retinal fiber input.</a> The Journal of Neuroscience. 3 (5), 1092-1099 (1983).</li><li>Sato, Y., Yano, H., Shimizu, Y., Tanaka, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+nerve+input-dependent+regulation+of+neural+stem+cell+proliferation+in+the+optic+tectum+of+adult+zebrafish.">Optic nerve input-dependent regulation of neural stem cell proliferation in the optic tectum of adult zebrafish.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 474-482 (2017).</li><li>Hall, Z. J., Tropepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+experience+facilitates+BDNF-dependent+adaptive+recruitment+of+new+neurons+in+the+postembryonic+optic+tectum.">Visual experience facilitates BDNF-dependent adaptive recruitment of new neurons in the postembryonic optic tectum.</a> The Journal of Neuroscience. 38 (8), 2000-2014 (2018).</li><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish. , (2002).</li><li>Cold Spring Harbor Protocols. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marc's+modified+Ringer's+(MMR)+(10X,+pH+7.4).">Marc's modified Ringer's (MMR) (10X, pH 7.4).</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).</li><li>Turner, K. J., Bracewell, T. G., Hawkins, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+dissection+of+zebrafish+brain+development.">Anatomical dissection of zebrafish brain development.</a> Brain Development. 1082, 197-214 (2014).</li><li>Brady, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+making+very+fine,+durable+dissecting+needles+by+sharpening+tungsten+wire+electrolytically.">A simple technique for making very fine, durable dissecting needles by sharpening tungsten wire electrolytically.</a> Bulletin of the World Health Organization. 32 (1), 143-144 (1965).</li><li>. ZFIN Tricaine recipe Available from: <a target="_blank" href="https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE">https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE</a> (2018)</li><li>Zhang, L., Leung, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+of+zebrafish+embryonic+eye+tissues.">Microdissection of zebrafish embryonic eye tissues.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (40), e2028 (2010).</li><li>. ZFIN protocols Available from: <a target="_blank" href="https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/overview">https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/overview</a> (2021)</li><li>Engerer, P., Plucinska, G., Thong, R., Trov&#242;, L., Paquet, D., Godinho, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+subcellular+structures+in+the+living+zebrafish+embryo.">Imaging subcellular structures in the living zebrafish embryo.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (110), e53456 (2016).</li><li>ImageJ with batteries included. Fiji Available from: <a target="_blank" href="https://figi.sc/">https://figi.sc/</a> (2021)</li><li>O'Brien, J., Hayder, H., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantification+and+analysis+of+cell+counting+procedures+using+ImageJ+plugins.">Automated quantification and analysis of cell counting procedures using ImageJ plugins.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54719 (2016).</li><li>Poggi, L., Vitorino, M., Masai, I., Harris, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+on+neural+lineage+and+mode+of+division+in+the+zebrafish+retina+in+vivo.">Influences on neural lineage and mode of division in the zebrafish retina in vivo.</a> The Journal of Cell Biology. 171 (6), 991-999 (2005).</li><li>Karlstrom, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutations+affecting+retinotectal+axon+pathfinding.">Zebrafish mutations affecting retinotectal axon pathfinding.</a> Development. 123 (1), 427-438 (1996).</li><li>Harvey, B. M., Baxter, M., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+nerve+regeneration+in+larval+zebrafish+exhibits+spontaneous+capacity+for+retinotopic+but+not+tectum+specific+axon+targeting.">Optic nerve regeneration in larval zebrafish exhibits spontaneous capacity for retinotopic but not tectum specific axon targeting.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218667 (2019).</li><li>Robles, E., Filosa, A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+lamination+of+retinal+axons+generates+multiple+parallel+input+pathways+in+the+tectum.">Precise lamination of retinal axons generates multiple parallel input pathways in the tectum.</a> Journal of Neuroscience. 33 (11), 5027-5039 (2013).</li><li>Vargas, M. E., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+Is+Wallerian+degeneration+in+the+CNS+so+slow.">Why Is Wallerian degeneration in the CNS so slow.</a> Annual Review of Neuroscience. 30 (1), 153-179 (2007).</li><li>Hughes, A. N., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+phagocytose+myelin+sheaths+to+modify+developmental+myelination.">Microglia phagocytose myelin sheaths to modify developmental myelination.</a> Nature Neuroscience. 23 (9), 1055-1066 (2020).</li><li>de Calbiac, H., Dabacan, A., Muresan, R., Kabashi, E., Ciura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+physiological+analysis+in+a+zebrafish+model+of+epilepsy.">Behavioral and physiological analysis in a zebrafish model of epilepsy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (176), e58837 (2021).</li><li>Adams, S. L., Zhang, T., Rawson, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+external+medium+composition+on+membrane+water+permeability+of+zebrafish+(Danio+rerio)+embryos.">The effect of external medium composition on membrane water permeability of zebrafish (Danio rerio) embryos.</a> Theriogenology. 64 (7), 1591-1602 (2005).</li><li>Fredj, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+and+activity-dependent+competition+regulates+axon+arbor+maturation,+growth+arrest,+and+territory+in+the+retinotectal+projection.">Synaptic activity and activity-dependent competition regulates axon arbor maturation, growth arrest, and territory in the retinotectal projection.</a> Journal of Neuroscience. 30 (32), 10939-10951 (2010).</li><li>Alberio, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+light-gated+potassium+channel+for+sustained+neuronal+inhibition.">A light-gated potassium channel for sustained neuronal inhibition.</a> Nature Methods. 15 (11), 969-976 (2018).</li><li>Kay, J. N., Finger-Baier, K. C., Roeser, T., Staub, W., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ganglion+cell+genesis+requires+lakritz,+a+zebrafish+atonal+homolog.">Retinal ganglion cell genesis requires lakritz, a zebrafish atonal homolog.</a> Neuron. 30 (3), 725-736 (2001).</li><li>Gnuegge, L., Schmid, S., Neuhauss, S. C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+activity-deprived+zebrafish+mutant+macho+reveals+an+essential+requirement+of+neuronal+activity+for+the+development+of+a+fine-grained+visuotopic+map.">Analysis of the activity-deprived zebrafish mutant macho reveals an essential requirement of neuronal activity for the development of a fine-grained visuotopic map.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (10), 3542-3548 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astyanax+surface+and+cave+fish+morphs.">Astyanax surface and cave fish morphs.</a> EvoDevo. 11 (1), 14 (2020).</li><li>Sieger, D., Peri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+microglia:+The+first,+the+popular,+and+the+new.">Animal models for studying microglia: The first, the popular, and the new.</a> Glia. 61 (1), 3-9 (2013).</li><li>Svahn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ramified+microglia+from+early+macrophages+in+the+zebrafish+optic+tectum.">Development of ramified microglia from early macrophages in the zebrafish optic tectum.</a> Developmental Neurobiology. 73 (1), 60-71 (2013).</li><li>Herzog, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+clearance+of+cellular+debris+by+microglia+limits+secondary+neuronal+cell+death+after+brain+injury+in+vivo.">Rapid clearance of cellular debris by microglia limits secondary neuronal cell death after brain injury in vivo.</a> Development. 146 (9), (2019).</li><li>Chen, J., Poskanzer, K. E., Freeman, M. R., Monk, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+astrocyte+morphogenesis+and+function+in+zebrafish+neural+circuits.">Live-imaging of astrocyte morphogenesis and function in zebrafish neural circuits.</a> Nature Neuroscience. 23 (10), 1297-1306 (2020).</li></ol>

De teknikker, der er beskrevet i dette papir, illustrerer en af mange tilgange til at studere hvirveldyrs visuelle systemudvikling i zebrafisk. Andre forskere har publiceret metoder til at dissekere den embryonale nethinde og udføre genekspressionsanalyser19 eller visualisere neuronal aktivitet i det optiske tektum30. Dette papir giver en tilgang til at undersøge, hvordan differentiel retinal input kan påvirke celleadfærd i det optiske tektum.
<p class="jove_content...

Målet med denne metode er at undersøge, hvordan retinal input påvirker væksten og udviklingen af det optiske tektum, det visuelle behandlingscenter i zebrafiskens hjerne. Ved at fjerne det ene øje og derefter sammenligne de to sider af det optiske tektum kan tektale ændringer inden for den samme prøve observeres og normaliseres, hvilket muliggør sammenligning på tværs af flere prøver. Moderne molekylære tilgange kombineret med denne teknik vil give indsigt i de mekanismer, der ligger til grund for visuel systemvækst og udvikling, samt aksonal degeneration og regenerering.
Sensoriske systemer - visuelle, auditive og somatosensoriske - indsamler information fra eksterne organer og videresender disse oplysninger til centralnervesystemet og genererer "kort" over den ydre verden på tværs af midterhjernen 1,2. Vision er den dominerende sensoriske modalitet for næsten alle hvirveldyr, herunder mange fisk. Nethinden, det neurale væv i øjet, samler information med et neuronalt kredsløb, der primært består af fotoreceptorer, bipolære celler og retinale ganglionceller (RGC'er), nethindens projektionsneuroner. RGC'er har lange axoner, der finder vej over nethindens indre overflade til det optiske nervehoved, hvor de fascikulerer og rejser sammen gennem hjernen og i sidste ende slutter i det visuelle behandlingscenter i den dorsale midterhjerne. Denne struktur kaldes det optiske tektum hos fisk og andre ikke-pattedyrs hvirveldyr og er homologt med den overlegne colliculus hos pattedyr3.
Det optiske tectum er en bilateralt symmetrisk flerlags struktur i den dorsale midterhjerne. I zebrafisk og de fleste andre fisk modtager hver lap af det optiske tectum udelukkende visuelt input fra det kontralaterale øje, således at den venstre optiske nerve slutter i højre tektale lap og den højre optiske nerve slutter i venstre tektale lap4 (figur 1). Ligesom sin pattedyrs modstykke, den overlegne colliculus, integrerer det optiske tectum visuel information med andre sensoriske input, herunder audition og somatosensation, der styrer skift i visuel opmærksomhed og øjenbevægelser såsom saccader 1,5,6. I modsætning til pattedyrets overlegne colliculus genererer det optiske tectum kontinuerligt nye neuroner og glia fra en specialiseret stamcelleniche nær de mediale og kaudale kanter af de tektale lobes kaldet den tektale proliferationszone7. Vedligeholdelse af proliferative forfædre i det optiske tektum og andre regioner i centralnervesystemet bidrager til dels til den bemærkelsesværdige regenerative kapacitet, der er dokumenteret i zebrafisk8.
Tidligere arbejde med at undersøge hjernen hos blinde eller enøjede fisk afslørede, at optisk tektumstørrelse er direkte proportional med mængden af retinal innervering, den modtager 9,10,11. Hos voksne hulefisk, hvis øjne degenererer i tidlig embryogenese, er det optiske tektum mærkbart mindre end for nært beslægtede, seende overfladefisk9. Cave fisk øjendegeneration kan blokeres ved at erstatte den endogene linse med en linse fra en overfladefisk under embryogenese. Når disse enøjede hulefisk opdrættes til voksenalderen, indeholder den innerverede tektale lap ca. 10% flere celler end den ikke-innerverede tektale lap9. På samme måde var siden af tektumet med mere innervering større og indeholdt flere neuroner10 i larve killifish, der blev inkuberet med kemiske behandlinger for at generere øjne af forskellig størrelse inden for det samme individ. Beviser fra optiske nerveknusningsforsøg i voksne guldfisk indikerer, at innervering fremmer spredning, hvor tektal celleproliferation falder, når innervation blev forstyrret11.
Ved at bekræfte og udvide disse klassiske undersøgelser giver flere nylige rapporter data, der tyder på, at spredning som reaktion på innervering moduleres, i det mindste delvist, af BDNF-TrkB-vejen12,13. Mange åbne spørgsmål om optisk tektumvækst og -udvikling forbliver, herunder hvordan et udviklende sensorisk system håndterer skade og axondegeneration, hvilke cellulære og molekylære signaler der muliggør retinal input til at regulere optisk tektumvækst, hvornår disse mekanismer bliver aktive, og om innerveringsbundet proliferation og differentiering gør det muligt for nethinden og dets målvæv at koordinere vækstrater og sikre nøjagtig retinotopisk kortlægning. Derudover er der meget større spørgsmål om aktivitetsafhængig udvikling, der kan løses ved at forhøre zebrafiskens visuelle system med kirurgiske tilgange som den, der er beskrevet nedenfor.
For at undersøge de cellulære og molekylære mekanismer, hvormed neural aktivitet, specifikt fra visuelt input, ændrer celleoverlevelse og proliferation, sammenligner den beskrevne tilgang direkte innerverede og denervaterede tektale lobes (figur 1) inden for individuelle zebrafisklarver. Denne metode muliggør dokumentation af RGC axondegeneration i det optiske tectum og bekræftelse af, at antallet af mitotiske celler korrelerer med innervering.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63509/63509fig01.jpg"> Figur 1: Skitser af zebrafiskelarver før og efter ensidig øjenfjernelse. (A) Tegning af 5 dpf larver set under et dissekerende mikroskop. Hver larve er indlejret i agarose med lavt smeltepunkt og orienteret sideværts, før en wolframnål med en skarp, kroget spids bruges til at øse øjet ud mod op (venstre øje i dette eksempel). (B) Tegning af dorsal visning af en 9 dpf larve som følge af operationen afbildet i A. Kun tre stærkt skematiserede RGC-axoner fra højre øje er vist defascikulerende og forbinde med neuroner i venstre tektale lap. Forkortelser: dpf = dage efter befrugtning; dps = dage efter operationen; RGC = retinale ganglionceller. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63509/63509fig01large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment and supplies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breeding boxes</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZHCT100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dow Corning high vacuum grease</td>
			<td>Sigma or equivalent supplier</td>
			<td>Z273554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks (125 mL)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For making Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) with antibiotics for post-surgery incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps - Dumont #5</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>DWK Lifescience</td>
			<td>63A53 &#38; 63A53WT</td>
			<td>For pipetting embryos and larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides for microscopy</td>
			<td>VWR or equivalent supplier</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>Standard glass microscope slides can be ordered from many different laboratory suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glassware including graduated bottles and graduated cylinders</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For making and storing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-part epoxy resin</td>
			<td>ACE Hardware or other equivalent supplier of Gorilla Glue or equivalent</td>
			<td>0.85 oz syringe</td>
			<td>https://www.acehardware.com/departments/paint-and-supplies/tape-glues-and-adhesives/glues-and-epoxy/1590793</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube (1.7 mL)</td>
			<td>VWR or equivalent supplier</td>
			<td>22234-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel plated pin holder (17 cm length)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>26018-17</td>
			<td>To hold tungsten wire while sharpening and performing surgeries/dissections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh tea strainer or equivalent</td>
			<td>Ali Express or equivalent</td>
			<td></td>
			<td>For harvesting zebrafish eggs after spawning; https://www.aliexpress.com/item/1005002219569756.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 100 mm</td>
			<td>Fischer Scientific or equivalent supplier</td>
			<td>50-190-0267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 35 mm</td>
			<td>Fischer Scientific or equivalent supplier</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette pump</td>
			<td>SP Bel-Art or equivalent</td>
			<td>F37898-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>909122</td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device. Make a 10% w/v solution of KOH in the hood by adding pellets to deionized water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply (variable voltage)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device. Any power supply with variable voltage will work (even one used for gel electrophoresis).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Elastomer kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3097358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire (0.125 mm diameter)</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>TGW0515</td>
			<td>Sharpen to remove eye and dissect larvae.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable temperature heat block</td>
			<td>The Lab Depot or equivalent supplier</td>
			<td>BSH1001 or BSH1002</td>
			<td>Set to 40-42 &#176;C ahead of experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-mouth glass jar with lid (e.g., clean jam or salsa jar)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wires with alligator clip leads</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopes:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any type will work but having adjustable transmitted light on a mirrored base is preferred.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning confocal microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>High NA, 20-25x water dipping objective lens is recommended. 
			Microscope control and image capture software (Elements) is used here but any confocal microscope will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for surgeries and dissections:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7902</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7006</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520-050</td>
			<td>Make 1% in embryo medium (E3) or Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1374248</td>
			<td>For embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7506</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19210</td>
			<td>Dilute 8% (w/v) stock with 2x concentrated PBS (diluted from 10x PBS stock).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-20ML</td>
			<td>Dilute 1:100 in Marc&#39;s Modified Ringers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS) tablets</td>
			<td>Diagnostic BioSystems</td>
			<td>DMR E404-01</td>
			<td>Make 10x stock in deionized water, autoclave and store at room temperature. Dilute to 1x working concentration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3911</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9888</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5881</td>
			<td>Make 10 M and use to adjust pH of MMR to 7.4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine-S</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>100G #TRS1</td>
			<td>Recipe: https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for immunohistochemistry:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexafluor 568 tagged Secondary antibody to detect rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11011</td>
			<td>Use at 1:500 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI or ToPro3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1306 or T3605</td>
			<td>Make up 1 mg/mL solutions in DMSO; 1:5,000 dilution for counterstaining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418</td>
			<td>A component of immunoblock buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (MeOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>34860</td>
			<td>Mixing MeOH with aqueous solutions like PBST is exothermic. Make the MeOH/PBST solutions at least several hours ahead of time or cool them on ice before using.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-062Z</td>
			<td>A component of immunoblock buffer. Can be aliquoted in 1-10 mL volumes and stored at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody to detect phosphohistone H3</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>06-570</td>
			<td>Use at 1:300 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody to detect Red Fluorescent Protein (RFP; detects dsRed derivatives)</td>
			<td>MBL International</td>
			<td>PM005</td>
			<td>Use at 1:500 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K (PK)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2308-10MG</td>
			<td>Make up 10 mg/mL stock solutions in PBS and use at 10 &#181;g/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Useful to make a 20% (v/v) stock solution in PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for data analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ (Fiji)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware for image analysis; https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware for statistical analysis and data visualization; https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop or GIMP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Proprietary image processing software (Adobe Photoshop and Illustrator) are often used to compose figures). A freeware alternative is Gnu Image Manipulation Program (GIMP; https://www.gimp.org/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>available from the&#160; Zebrafish International Resource Centers in the US (https://zebrafish.org/home/guide.php) or in Europe (https://www.ezrc.kit.edu/). Specialized transgenic strains that have not yet been deposited in either resource center can be requested from individual labs after publication.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eye removal in living zebrafish larvae to examine innervation-dependent growth and development of the visual system

Zebrafisk udviser bemærkelsesværdig livslang vækst og regenerative evner. For eksempel understøtter specialiserede stamcellenicher etableret under embryogenese kontinuerlig vækst af hele det visuelle system, både i øjet og hjernen. Koordineret vækst mellem nethinden og det optiske tektum sikrer nøjagtig retinotopisk kortlægning, da nye neuroner tilføjes i øjnene og hjernen. For at imødegå, om retinale axoner giver afgørende information til regulering af tektal stamme og stamcelleadfærd såsom overlevelse, proliferation og / eller differentiering, er det nødvendigt at kunne sammenligne innerverede og denerverede tektale lobes inden for det samme dyr og på tværs af dyr. 
Kirurgisk fjernelse af det ene øje fra levende larvezebrafisk efterfulgt af observation af det optiske tektum opnår dette mål. Den ledsagende video viser, hvordan man anæstetiserer larver, elektrolytisk skærper wolframnåle og bruger dem til at fjerne det ene øje. Det næste viser, hvordan man dissekerer hjerner fra faste zebrafisklarver. Endelig giver videoen et overblik over protokollen for immunhistokemi og en demonstration af, hvordan man monterer farvede embryoner i lavsmeltepunktsalgarose til mikroskopi.

For at bekræfte, om øjenfjernelsen var fuldstændig og vurdere, hvordan det optiske tektum ændres, blev der udført operationer i Tg[atoh7:RFP]-stammen, som mærker alle RGC'er med en membranmålrettet RFP og dermed alle axoner, der projicerer fra nethinden og danner synsnerven24. Selvom det ikke er absolut nødvendigt at bruge denne stamme, muliggør det ligetil observation og visualisering af de optiske nerveterminini i den optiske tectum neuropil. Andre tilgange til mærkning af syn...

Watch this Scientific Journal Video about Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System at JoVE.com

Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System

Artiklen forklarer, hvordan man kirurgisk fjerner øjne fra levende zebrafisklarver som det første skridt i retning af at undersøge, hvordan retinal input påvirker optisk tektumvækst og udvikling. Derudover giver artiklen information om larveanæstetisering, fiksering og hjernedissektion efterfulgt af immunohistokemi og konfokal billeddannelse.

Øjenfjernelse hos levende zebrafisklarver for at undersøge innerveringsafhængig vækst og udvikling af det visuelle system

Zebrafish exhibit remarkable life-long growth and regenerative abilities. For example, specialized stem cell niches established during embryogenesis ...

Så mit laboratorium er interesseret i at forstå, hvordan øjet og hjernen vokser sammen. Denne teknik giver os mulighed for at studere, hvordan retinal input påvirker hjernens vækst og udvikling. Kirurgisk fjernelse af det ene øje fra den levende larve zebrafisk, efterfulgt af observation af det optiske tectum giver os mulighed for at sammenligne innerverede og denervated tektale lobes inden for samme dyr og på tværs af dyr.Ved at kombinere denne teknik med moderne molekylære tilgange kan der gives ny indsigt i mekanismer, der ligger til grund for neural udvikling, regenerering og degeneration. Til at begynde med skal du tilslutte katode- og anodeledningerne til strømforsyningen. Fastgør alligatorklemmen i enden af katodetråden til en delvist rettet papirclips og indsæt papirclipsen i kaliumhydroxidopløsningen, fastgør den til siden af krukken.Fastgør alligatorklemmen på anodetråden til nåleholderens hals. Drej strømmen til ca. 20 volt og dypp wolframtråden i kaliumhydroxidopløsningen, træk ledningen ud af opløsningen i en vinkel for elektrolytisk at skærpe ledningen til en fin spids. Kontroller spidsen af nålen under dissekeringsmikroskopet for at sikre, at den er skarp nok.Kurvenålens spids opstår, når den skarpe nål bøjes ved forsigtigt at røre den til petriskålen. På operationsdagen skal du bruge en bredboret glasgræspipette til at overføre 10 til 15 larver til en 35 millimeter petriskål fyldt med frisk E3. Tilsæt tre til fem dråber bedøvelsesmiddel til larven. For at afgøre, om larverne er tilstrækkeligt anæstesi, skal du kigge efter manglende berøringsrespons.Tilsæt yderligere to til tre dråber af bedøvelsessedet, hvis larverne stadig reagerer på berøring efter tre minutter og revurderes. For at immobilisere larven til kirurgi skal du tage en larve op i en smalboret glasgræspipette med kun en lille mængde E3. Dernæst fyldes ca. 200 mikroliter smeltet 1% lavt smeltepunkt eller LMP-agarose op i pipetten, der indeholder larven, og blandes for at sikre, at larven suspenderes i LMP-agarose. Placer låget på en 35 millimeter petriskål med ansigtet opad under dissekeringsmikroskopet, og sprøjt derefter larven og agarose på det omvendte petriskålslåg.Spred agarose, så larven er i midten af dråben. Brug en kedelig wolframnål til hurtigt, men forsigtigt at manøvrere larven, så den er lateral med det ene øje opad. Vent flere minutter på, at agarose sætter sig.Efter kanten af øjets kredsløb skal du bruge spidsen af en fin elektrolytisk skærpet wolframnål til at gennembore huden omkring øjet. Skub derefter kanten af nålen under øjet fra den tidsmæssige-ventrale side af øjet. Brug kontrolleret tryk til at frigøre øjet fra stikkontakten.Fortsæt med at trykke på øjet dorsalt og anteriorly med siden af nålen, til sidst skære gennem den optiske nerve og frigive øjet. Alternativt kan du bruge meget fine kirurgiske tang til at fjerne øjet ved at klemme synsnerven og skubbe øjet fra mediale til laterale. Efter vellykket øjenfjernelse skal du dække agarose med MFR-opløsning, frigøre hver larve fra agarose ved forsigtigt at børste en wolframnål rundt om hovedet og derefter rundt om deres krop, mens du stabiliserer petriskålslåget med tang.Efter operationerne skal larven placeres i MFR-opløsning suppleret med antibiotika indtil den følgende dag, derefter returnere larven til E3 og bage dem indtil eksperimentets endepunkt. Når larven er terminalt bedømtet, skal du rette dem med 4% paraformaldehyd. Suspender de faste larver i PBS-dråber på en tætningsplade under et dissekerende mikroskop.Fastgør dem sideværts ved at placere to wolframstifter gennem notochordet med en stift bagud til det pigmenterede område, der dækker generalforsamlingsområdet og en anden i overensstemmelse med enden af æggeblommeforlængelsen. Fjern øjet med en skarp wolframnål og fine tang. Nogle gange er det muligt at stikke nålen gennem kæben til den modsatte side og fjerne det andet øje.Brug wolframnålen til at ridse fra den tidsmæssige til den ventrale side af øret. I samme handling i bevægelse skal du bringe nålen bagud til kæben og forsigtigt trække anteriorly, indtil øret og kæben er fjernet. Fjern det andet øje og øre ved at stikke nålen gennem kæben.Brug tang til at trække de ventrale organer ud og resterende æggeblomme. Endelig lav et lavt snit i den dorsale kraniale hud nær krydset mellem baghjernen og rygmarven. Løft huden med tangen og træk den anteriorly og omkring telencephalon.Fjern eventuelt resterende væv med tang. Udpin larven og overfør til PBS til 1,5 ml mikrocentrifugerør. Fastgør et kammerskred i låget på en 100 millimeter petriskål med vakuumfedt.Overfør den immunholdte og forarbejdede larve til en brøndplade eller depressionsdias for at se dem med et dissekerende mikroskop. Monter larven på kammerrutsjebanen i 1%LMP agarosesøjler. Brug et glas forbi din pipette til at sætte en larve på kammerdiaset og deponere så lidt PBS som muligt.Dæk larven med smeltet og varm 1%LMP agarose ved hjælp af den samme pipette. Pipette LMP-agarose i en søjle og derefter placere larven så symmetrisk som muligt med den dorsale overflade synlig. Efter øjenfjernelse blev progressiv degeneration af retinale axoner observeret i den optiske tectum neuropil.To dage efter operationen udviste RFP-mærkede axoner kendetegn ved hurtig wallerisk degeneration, såsom blabbing og fragmentering. RFP-positive puncta blev noteret både inden for og uden for neuropil på højre side af tectum som angivet af pilene. Fire dage efter operationen blev fragmenterede axoner og RFP-mærkede aksonrester reduceret betydeligt i den højre tektale lap, hvilket indikerer relativt hurtig clearance af de døende og degenererende axoner.Hjernen blev udsat ved at dissekere øjne, kæbe, ører og kraniet på huden og bindevævet. Ideelt set forbliver hjernen intakt under denne procedure. Imidlertid blev dele af forhjernen, især den olfaktoriske pære, sandsynligvis beskadiget eller helt fjernet, da kraniet på huden eller kæben blev fjernet.Desuden bliver tektumets laterale afsats undertiden skåret, når den gennemborer eller klemmer huden for at trække den ud af hjernen. Ikke to prøver er identiske. Så du skal være i stand til at foretage subtile tilpasninger gennem øjenfjernelse og hjernedissektion efter behov.Patienter og skarpe værktøjer er afgørende for succes. Denne teknik kan følges op med cellulære og molekylære tilgange, som in vivo levende cellebilleddannelse eller RNA-sekventering for at få ny indsigt i de molekylære og cellulære mekanismer for optisk tektumvækst og udvikling.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Måling Protein Stabilitet i Living zebrafisk embryoner anvendelse af fluorescens Decay Efter fotoomdannelse (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse af zebrafisk Larver Skeletmuskel Integritet med Evans blå farvestof

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imaging Subcellulære Strukturer i Living Zebrafisk Embryo

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Brug Light Sheet Fluorescens mikroskopi til billede zebrafisk Eye Development

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Metoder til at undersøge lymfeknuder kirtel og hæmocytter i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver

Many parallels exist between the Drosophila and mammalian hematopoietic systems, even though Drosophila lack the lymphoid lineage that characterize ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induktion af hypoxi i levende frø og zebrafiskembryoner

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Multi Photon tid bortfalder Imaging til at visualisere udvikling i realtid: visualisering af overflytning neurale Crest celler i zebrafisk embryoner

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Encellede Photoconversion i levende intakt zebrafisk

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Whole-Mount In Situ Hybridization i Zebrafish Embryoner og Tube Formation Assay i iPSC-ECs at studere den rolle, Endoglin i vaskulær udvikling

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...

Whole Mount Immunohistochemistry in Zebrafish Embryos and Larvae

Hele Mount Immunhistokemi i Zebrafish Embryoner og Larver

Immunohistochemistry is a widely used technique to explore protein expression and localization during both normal developmental and disease states. ...