Name: eye removal in living zebrafish larvae to examine innervation-dependent growth and development of the visual system
Uploaded: 2022-02-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System at JoVE.com

Støtten til dette arbeidet ble først og fremst støttet av oppstartsmidler fra Reed College til KLC, Helen Stafford Research Fellowship-midler til OLH, og et Reed College Science Research Fellowship til YK. Dette prosjektet begynte i Steve Wilsons laboratorium som et samarbeid med HR, som ble støttet av et Wellcome Trust Studentship (2009-2014). Vi takker Máté Varga, Steve Wilson og andre medlemmer av Wilson-laboratoriet for innledende diskusjoner om dette prosjektet, og vi takker spesielt Florencia Cavodeassi og Kate Edwards, som var de første til å lære KLC hvordan man monterer embryoer i agarose og utfører sebrafisk hjerne disseksjoner. Vi takker også Greta Glover og Jay Ewing for hjelp med montering av vår wolfram nål-slipeenhet.

Metodene i denne artikkelen ble utført i samsvar med retningslinjer og godkjenning av Institutional Animal Care and Use Committees of Reed College og University College London. Se materialtabellen for detaljer om sebrafiskstammer som brukes i denne studien.
1. Forbered materialer og verktøy
<ol><li>Lag løsninger.<ol>
<li>Lag embryomedium (E314) ved å fortynne en 60x lager (300 mM NaCl, 10,2 mM KCl, 20 mM CaCl2-dihydrat ...

<ol>
	<li>Butler, A. B., Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+tectum.">Optic tectum.</a> Comparative Vertebrate Neuroanatomy: Evolution and Adaptation. , 311-340 (2005).</li><li>Cang, J., Feldheim, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+mechanisms+of+topographic+map+formation+and+alignment.">Developmental mechanisms of topographic map formation and alignment.</a> Annual Review of Neuroscience. 36 (1), 51-77 (2013).</li><li>Basso, M. A., Bickford, M. E., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+circuits+of+visual+perception+and+cognition+through+the+superior+colliculus.">Unraveling circuits of visual perception and cognition through the superior colliculus.</a> Neuron. 109 (6), 918-937 (2021).</li><li>Burrill, J. D., Easter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+retinofugal+projections+in+the+embryonic+and+larval+zebrafish+(Brachydanio+rerio).">Development of the retinofugal projections in the embryonic and larval zebrafish (Brachydanio rerio).</a> The Journal of Comparative Neurology. 346 (4), 583-600 (1994).</li><li>Regeneration in the goldfish visual system. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System Available from: <a target="_blank" href="https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-goldfish-visual-system/">https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-goldfish-visual-system/</a> (2021)</li><li>Regeneration in the visual system of adult mammals. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System Available from: <a target="_blank" href="https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-visual-system-of-adult-mammals/">https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-visual-system-of-adult-mammals/</a> (2021)</li><li>Cerveny, K. L., Varga, M., Wilson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continued+growth+and+circuit+building+in+the+anamniote+visual+system.">Continued growth and circuit building in the anamniote visual system.</a> Developmental Neurobiology. 72 (3), 328-345 (2012).</li><li>Lindsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midbrain+tectal+stem+cells+display+diverse+regenerative+capacities+in+zebrafish.">Midbrain tectal stem cells display diverse regenerative capacities in zebrafish.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4420 (2019).</li><li>Soares, D., Yamamoto, Y., Strickler, A. G., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lens+has+a+specific+influence+on+optic+nerve+and+tectum+development+in+the+blind+cavefish+Astyanax.">The lens has a specific influence on optic nerve and tectum development in the blind cavefish Astyanax.</a> Developmental Neuroscience. 26 (5-6), 308-317 (2004).</li><li>White, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+study+of+the+relationship+between+the+size+of+the+eye+and+the+size+of+the+optic+tectum+in+the+brain+of+the+developing+teleost,+Fundulus+heteroclitus.">An experimental study of the relationship between the size of the eye and the size of the optic tectum in the brain of the developing teleost, Fundulus heteroclitus.</a> Journal of Experimental Zoology. 108 (3), 439-469 (1948).</li><li>Raymond, P., Easter, S., Burnham, J., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postembryonic+growth+of+the+optic+tectum+in+goldfish.+II.+Modulation+of+cell+proliferation+by+retinal+fiber+input.">Postembryonic growth of the optic tectum in goldfish. II. Modulation of cell proliferation by retinal fiber input.</a> The Journal of Neuroscience. 3 (5), 1092-1099 (1983).</li><li>Sato, Y., Yano, H., Shimizu, Y., Tanaka, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+nerve+input-dependent+regulation+of+neural+stem+cell+proliferation+in+the+optic+tectum+of+adult+zebrafish.">Optic nerve input-dependent regulation of neural stem cell proliferation in the optic tectum of adult zebrafish.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 474-482 (2017).</li><li>Hall, Z. J., Tropepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+experience+facilitates+BDNF-dependent+adaptive+recruitment+of+new+neurons+in+the+postembryonic+optic+tectum.">Visual experience facilitates BDNF-dependent adaptive recruitment of new neurons in the postembryonic optic tectum.</a> The Journal of Neuroscience. 38 (8), 2000-2014 (2018).</li><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish. , (2002).</li><li>Cold Spring Harbor Protocols. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marc's+modified+Ringer's+(MMR)+(10X,+pH+7.4).">Marc's modified Ringer's (MMR) (10X, pH 7.4).</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).</li><li>Turner, K. J., Bracewell, T. G., Hawkins, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+dissection+of+zebrafish+brain+development.">Anatomical dissection of zebrafish brain development.</a> Brain Development. 1082, 197-214 (2014).</li><li>Brady, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+making+very+fine,+durable+dissecting+needles+by+sharpening+tungsten+wire+electrolytically.">A simple technique for making very fine, durable dissecting needles by sharpening tungsten wire electrolytically.</a> Bulletin of the World Health Organization. 32 (1), 143-144 (1965).</li><li>. ZFIN Tricaine recipe Available from: <a target="_blank" href="https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE">https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE</a> (2018)</li><li>Zhang, L., Leung, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+of+zebrafish+embryonic+eye+tissues.">Microdissection of zebrafish embryonic eye tissues.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (40), e2028 (2010).</li><li>. ZFIN protocols Available from: <a target="_blank" href="https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/overview">https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/overview</a> (2021)</li><li>Engerer, P., Plucinska, G., Thong, R., Trov&#242;, L., Paquet, D., Godinho, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+subcellular+structures+in+the+living+zebrafish+embryo.">Imaging subcellular structures in the living zebrafish embryo.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (110), e53456 (2016).</li><li>ImageJ with batteries included. Fiji Available from: <a target="_blank" href="https://figi.sc/">https://figi.sc/</a> (2021)</li><li>O'Brien, J., Hayder, H., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantification+and+analysis+of+cell+counting+procedures+using+ImageJ+plugins.">Automated quantification and analysis of cell counting procedures using ImageJ plugins.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54719 (2016).</li><li>Poggi, L., Vitorino, M., Masai, I., Harris, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+on+neural+lineage+and+mode+of+division+in+the+zebrafish+retina+in+vivo.">Influences on neural lineage and mode of division in the zebrafish retina in vivo.</a> The Journal of Cell Biology. 171 (6), 991-999 (2005).</li><li>Karlstrom, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutations+affecting+retinotectal+axon+pathfinding.">Zebrafish mutations affecting retinotectal axon pathfinding.</a> Development. 123 (1), 427-438 (1996).</li><li>Harvey, B. M., Baxter, M., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+nerve+regeneration+in+larval+zebrafish+exhibits+spontaneous+capacity+for+retinotopic+but+not+tectum+specific+axon+targeting.">Optic nerve regeneration in larval zebrafish exhibits spontaneous capacity for retinotopic but not tectum specific axon targeting.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218667 (2019).</li><li>Robles, E., Filosa, A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+lamination+of+retinal+axons+generates+multiple+parallel+input+pathways+in+the+tectum.">Precise lamination of retinal axons generates multiple parallel input pathways in the tectum.</a> Journal of Neuroscience. 33 (11), 5027-5039 (2013).</li><li>Vargas, M. E., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+Is+Wallerian+degeneration+in+the+CNS+so+slow.">Why Is Wallerian degeneration in the CNS so slow.</a> Annual Review of Neuroscience. 30 (1), 153-179 (2007).</li><li>Hughes, A. N., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+phagocytose+myelin+sheaths+to+modify+developmental+myelination.">Microglia phagocytose myelin sheaths to modify developmental myelination.</a> Nature Neuroscience. 23 (9), 1055-1066 (2020).</li><li>de Calbiac, H., Dabacan, A., Muresan, R., Kabashi, E., Ciura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+physiological+analysis+in+a+zebrafish+model+of+epilepsy.">Behavioral and physiological analysis in a zebrafish model of epilepsy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (176), e58837 (2021).</li><li>Adams, S. L., Zhang, T., Rawson, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+external+medium+composition+on+membrane+water+permeability+of+zebrafish+(Danio+rerio)+embryos.">The effect of external medium composition on membrane water permeability of zebrafish (Danio rerio) embryos.</a> Theriogenology. 64 (7), 1591-1602 (2005).</li><li>Fredj, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+and+activity-dependent+competition+regulates+axon+arbor+maturation,+growth+arrest,+and+territory+in+the+retinotectal+projection.">Synaptic activity and activity-dependent competition regulates axon arbor maturation, growth arrest, and territory in the retinotectal projection.</a> Journal of Neuroscience. 30 (32), 10939-10951 (2010).</li><li>Alberio, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+light-gated+potassium+channel+for+sustained+neuronal+inhibition.">A light-gated potassium channel for sustained neuronal inhibition.</a> Nature Methods. 15 (11), 969-976 (2018).</li><li>Kay, J. N., Finger-Baier, K. C., Roeser, T., Staub, W., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ganglion+cell+genesis+requires+lakritz,+a+zebrafish+atonal+homolog.">Retinal ganglion cell genesis requires lakritz, a zebrafish atonal homolog.</a> Neuron. 30 (3), 725-736 (2001).</li><li>Gnuegge, L., Schmid, S., Neuhauss, S. C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+activity-deprived+zebrafish+mutant+macho+reveals+an+essential+requirement+of+neuronal+activity+for+the+development+of+a+fine-grained+visuotopic+map.">Analysis of the activity-deprived zebrafish mutant macho reveals an essential requirement of neuronal activity for the development of a fine-grained visuotopic map.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (10), 3542-3548 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astyanax+surface+and+cave+fish+morphs.">Astyanax surface and cave fish morphs.</a> EvoDevo. 11 (1), 14 (2020).</li><li>Sieger, D., Peri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+microglia:+The+first,+the+popular,+and+the+new.">Animal models for studying microglia: The first, the popular, and the new.</a> Glia. 61 (1), 3-9 (2013).</li><li>Svahn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ramified+microglia+from+early+macrophages+in+the+zebrafish+optic+tectum.">Development of ramified microglia from early macrophages in the zebrafish optic tectum.</a> Developmental Neurobiology. 73 (1), 60-71 (2013).</li><li>Herzog, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+clearance+of+cellular+debris+by+microglia+limits+secondary+neuronal+cell+death+after+brain+injury+in+vivo.">Rapid clearance of cellular debris by microglia limits secondary neuronal cell death after brain injury in vivo.</a> Development. 146 (9), (2019).</li><li>Chen, J., Poskanzer, K. E., Freeman, M. R., Monk, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+astrocyte+morphogenesis+and+function+in+zebrafish+neural+circuits.">Live-imaging of astrocyte morphogenesis and function in zebrafish neural circuits.</a> Nature Neuroscience. 23 (10), 1297-1306 (2020).</li></ol>

Teknikkene beskrevet i denne artikkelen illustrerer en av mange tilnærminger for å studere virveldyr visuell systemutvikling i sebrafisk. Andre forskere har publisert metoder for å dissekere den embryonale netthinnen og utføre genuttrykksanalyser19 eller visualisere nevronaktivitet i det optiske tectum30. Dette dokumentet gir en tilnærming for å utforske hvordan differensial retinal input kan påvirke celleatferd i det optiske tectum.
For ?...

Målet med denne metoden er å undersøke hvordan retinal input påvirker veksten og utviklingen av det optiske tectum, det visuelle prosesseringssenteret i sebrafiskhjernen. Ved å fjerne ett øye og deretter sammenligne de to sidene av det optiske tectumet, kan tektalendringer i samme prøve observeres og normaliseres, noe som muliggjør sammenligning på tvers av flere prøver. Moderne molekylære tilnærminger kombinert med denne teknikken vil gi innsikt i mekanismene som ligger til grunn for visuell systemvekst og utvikling, samt axonal degenerasjon og regenerering.
Sensoriske systemer - visuelle, auditive og somatosensoriske - samler informasjon fra eksterne organer og videresender den informasjonen til sentralnervesystemet, og genererer "kart" over den ytre verden over midbrain 1,2. Visjon er den dominerende sensoriske modaliteten for nesten alle vertebrater, inkludert mange fisk. Netthinnen, nevralt vev i øyet, samler informasjon med en nevronal krets som hovedsakelig består av fotoreseptorer, bipolare celler og netthinne ganglion celler (RGCs), projeksjon nevroner av netthinnen. RGCer har lange axoner som finner veien over den indre overflaten av netthinnen til synsnerven hodet, hvor de fasciculate og reise sammen gjennom hjernen, til slutt avslutte i visuell behandling senter i dorsal midbrain. Denne strukturen kalles det optiske tectum i fisk og andre ikke-pattedyr vertebrater og er homolog til den overlegne colliculus hos pattedyr3.
Det optiske tectum er en bilateralt symmetrisk flerlagsstruktur i dorsal midbrain. I sebrafisk og de fleste andre fisk mottar hver lobe av det optiske tectum visuelle innspill utelukkende fra det kontralaterale øyet, slik at venstre optisk nerve slutter i høyre tectal lobe og høyre optisk nerve slutter i venstre tectal lobe4 (figur 1). Som sin pattedyr motpart, den overlegne colliculus, integrerer det optiske tectum visuell informasjon med andre sensoriske innganger, inkludert audition og somatosensasjon, kontrollerende skift i visuell oppmerksomhet og øyebevegelser som saccades 1,5,6. Men i motsetning til pattedyrets overlegne colliculus, genererer det optiske tectum kontinuerlig nye nevroner og glia fra en spesialisert stamcellenisje nær de mediale og kaudale kantene på tektal lobes kalt tectal proliferation zone7. Vedlikehold av proliferative forfedre i det optiske tectum og andre regioner i sentralnervesystemet bidrar delvis til den bemerkelsesverdige regenerative kapasiteten dokumentert i sebrafisk8.
Tidligere arbeid med å undersøke hjernen til blinde eller enøyde fisk avslørte at optisk tectumstørrelse er direkte proporsjonal med mengden retinal innervering den mottar 9,10,11. I voksenhulefisk, hvis øyne degener i tidlig embryogenese, er det optiske tectum merkbart mindre enn for nært beslektet, observert overflatefisk9. Cave fish eye degenerasjon kan blokkeres ved å erstatte den endogene linsen med en linse fra en overflatefisk under embryogenese. Når disse enøyde hulefiskene blir oppdrettet til voksen alder, inneholder den innerverte tectal lobe omtrent 10% flere celler enn den ikke-innerverte tectal lobe9. På samme måte, i larval killifish som ble inkubert med kjemiske behandlinger for å generere øyne av forskjellige størrelser i samme individ, var siden av tectum med mer innervasjon større og inneholdt flere nevroner10. Bevis fra optisk nerveknusing eksperimenter i voksen gullfisk indikerer at innervasjon fremmer spredning, med tectal celleproliferasjon avtagende når innervasjon ble forstyrret11.
Ved å bekrefte og utvide disse klassiske studiene, gir flere nylige rapporter data som tyder på at spredning som svar på innervering er modulert, i hvert fall delvis, av BDNF-TrkB-banen12,13. Mange åpne spørsmål om optisk tectum vekst og utvikling gjenstår, inkludert hvordan et utviklende sensorisk system håndterer skade og axon degenerasjon, hvilke cellulære og molekylære signaler som muliggjør retinal input for å regulere optisk tectum vekst, når disse mekanismene blir aktive, og om innervasjon-koblet spredning og differensiering gjør det mulig for netthinnen og målvevet å koordinere vekstrater og sikre nøyaktig retinotopisk kartlegging. I tillegg er det mye større spørsmål om aktivitetsavhengig utvikling som kan løses ved å forhøre sebrafiskens visuelle system med kirurgiske tilnærminger som den som er beskrevet nedenfor.
For å undersøke de cellulære og molekylære mekanismene som nevral aktivitet, spesielt fra visuell inngang, endrer celleoverlevelse og spredning, sammenligner den beskrevne tilnærmingen direkte innerverte og denerverte tektallober (figur 1) innenfor individuelle sebrafisk larver. Denne metoden tillater dokumentasjon av RGC axon degenerasjon i det optiske tectum og bekreftelse på at antall mititotiske celler korrelerer med innervasjon.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63509/63509fig01.jpg"> Figur 1: Skisser av sebrafisk larver før og etter ensidig øyefjerning. (A) Tegning av 5 dpf larver sett under et dissekerende mikroskop. Hver larve er innebygd i lavsmeltende punkt agarose og orientert lateralt før en wolfram nål med en skarp, hektet spiss brukes til å øse ut øyet vendt opp (venstre øye i dette eksemplet). (B) Tegning av dorsal utsikt over en 9 dpf larve som følge av operasjonen avbildet i A. Bare tre høyt skjemaerte RGC-axoner fra høyre øye vises defasciculating og tilkobling med nevroner i venstre tectal lobe. Forkortelser: dpf = dager etter befruktning; dps = dager etter operasjonen; RGC = retinal ganglion celler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63509/63509fig01large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment and supplies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breeding boxes</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZHCT100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dow Corning high vacuum grease</td>
			<td>Sigma or equivalent supplier</td>
			<td>Z273554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks (125 mL)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For making Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) with antibiotics for post-surgery incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps - Dumont #5</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>DWK Lifescience</td>
			<td>63A53 &#38; 63A53WT</td>
			<td>For pipetting embryos and larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides for microscopy</td>
			<td>VWR or equivalent supplier</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>Standard glass microscope slides can be ordered from many different laboratory suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glassware including graduated bottles and graduated cylinders</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For making and storing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-part epoxy resin</td>
			<td>ACE Hardware or other equivalent supplier of Gorilla Glue or equivalent</td>
			<td>0.85 oz syringe</td>
			<td>https://www.acehardware.com/departments/paint-and-supplies/tape-glues-and-adhesives/glues-and-epoxy/1590793</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube (1.7 mL)</td>
			<td>VWR or equivalent supplier</td>
			<td>22234-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel plated pin holder (17 cm length)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>26018-17</td>
			<td>To hold tungsten wire while sharpening and performing surgeries/dissections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh tea strainer or equivalent</td>
			<td>Ali Express or equivalent</td>
			<td></td>
			<td>For harvesting zebrafish eggs after spawning; https://www.aliexpress.com/item/1005002219569756.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 100 mm</td>
			<td>Fischer Scientific or equivalent supplier</td>
			<td>50-190-0267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 35 mm</td>
			<td>Fischer Scientific or equivalent supplier</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette pump</td>
			<td>SP Bel-Art or equivalent</td>
			<td>F37898-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>909122</td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device. Make a 10% w/v solution of KOH in the hood by adding pellets to deionized water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply (variable voltage)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device. Any power supply with variable voltage will work (even one used for gel electrophoresis).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Elastomer kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3097358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire (0.125 mm diameter)</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>TGW0515</td>
			<td>Sharpen to remove eye and dissect larvae.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable temperature heat block</td>
			<td>The Lab Depot or equivalent supplier</td>
			<td>BSH1001 or BSH1002</td>
			<td>Set to 40-42 &#176;C ahead of experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-mouth glass jar with lid (e.g., clean jam or salsa jar)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wires with alligator clip leads</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopes:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any type will work but having adjustable transmitted light on a mirrored base is preferred.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning confocal microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>High NA, 20-25x water dipping objective lens is recommended. 
			Microscope control and image capture software (Elements) is used here but any confocal microscope will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for surgeries and dissections:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7902</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7006</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520-050</td>
			<td>Make 1% in embryo medium (E3) or Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1374248</td>
			<td>For embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7506</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19210</td>
			<td>Dilute 8% (w/v) stock with 2x concentrated PBS (diluted from 10x PBS stock).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-20ML</td>
			<td>Dilute 1:100 in Marc&#39;s Modified Ringers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS) tablets</td>
			<td>Diagnostic BioSystems</td>
			<td>DMR E404-01</td>
			<td>Make 10x stock in deionized water, autoclave and store at room temperature. Dilute to 1x working concentration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3911</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9888</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5881</td>
			<td>Make 10 M and use to adjust pH of MMR to 7.4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine-S</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>100G #TRS1</td>
			<td>Recipe: https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for immunohistochemistry:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexafluor 568 tagged Secondary antibody to detect rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11011</td>
			<td>Use at 1:500 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI or ToPro3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1306 or T3605</td>
			<td>Make up 1 mg/mL solutions in DMSO; 1:5,000 dilution for counterstaining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418</td>
			<td>A component of immunoblock buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (MeOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>34860</td>
			<td>Mixing MeOH with aqueous solutions like PBST is exothermic. Make the MeOH/PBST solutions at least several hours ahead of time or cool them on ice before using.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-062Z</td>
			<td>A component of immunoblock buffer. Can be aliquoted in 1-10 mL volumes and stored at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody to detect phosphohistone H3</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>06-570</td>
			<td>Use at 1:300 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody to detect Red Fluorescent Protein (RFP; detects dsRed derivatives)</td>
			<td>MBL International</td>
			<td>PM005</td>
			<td>Use at 1:500 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K (PK)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2308-10MG</td>
			<td>Make up 10 mg/mL stock solutions in PBS and use at 10 &#181;g/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Useful to make a 20% (v/v) stock solution in PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for data analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ (Fiji)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware for image analysis; https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware for statistical analysis and data visualization; https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop or GIMP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Proprietary image processing software (Adobe Photoshop and Illustrator) are often used to compose figures). A freeware alternative is Gnu Image Manipulation Program (GIMP; https://www.gimp.org/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>available from the&#160; Zebrafish International Resource Centers in the US (https://zebrafish.org/home/guide.php) or in Europe (https://www.ezrc.kit.edu/). Specialized transgenic strains that have not yet been deposited in either resource center can be requested from individual labs after publication.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eye removal in living zebrafish larvae to examine innervation-dependent growth and development of the visual system

Sebrafisk viser bemerkelsesverdig livslang vekst og regenerative evner. For eksempel støtter spesialiserte stamcellenisjer etablert under embryogenese kontinuerlig vekst av hele det visuelle systemet, både i øyet og hjernen. Koordinert vekst mellom netthinnen og det optiske tectum sikrer nøyaktig retinotopisk kartlegging etter hvert som nye nevroner tilsettes i øyne og hjerne. For å adressere om retinal aksoner gir avgjørende informasjon for regulering av tectal stamme og stamcelleoppførsel som overlevelse, spredning og / eller differensiering, er det nødvendig å kunne sammenligne innervated og denervated tectal lobes i samme dyr og på tvers av dyr. 
Kirurgisk fjerning av ett øye fra levende larval sebrafisk etterfulgt av observasjon av det optiske tectum oppnår dette målet. Den medfølgende videoen demonstrerer hvordan man bedøver larver, elektrolytisk skjerper wolfram nåler, og bruker dem til å fjerne ett øye. Det neste viser hvordan å dissekere hjerner fra faste sebrafisk larver. Til slutt gir videoen en oversikt over protokollen for immunhistokjemi og en demonstrasjon av hvordan man monterer fargede embryoer i lavsmeltingspunkt agarose for mikroskopi.

For å bekrefte om øyefjerning var fullført og vurdere hvordan det optiske tectumet endres, ble det utført operasjoner i Tg[atoh7:RFP]-stammen, som merker alle RGCer med en membran-målrettet RFP og dermed alle aksoner som projiserer fra netthinnen og danner synsnerven24. Selv om det ikke er absolutt nødvendig å bruke denne stammen, muliggjør det enkel observasjon og visualisering av synsnerven termini i den optiske tectum neuropilen. Andre tilnærminger for merking av synsnerven, f...

Watch this Scientific Journal Video about Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System at JoVE.com

Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System

Artikkelen forklarer hvordan man kirurgisk fjerner øyne fra levende sebrafisk larver som det første skrittet mot å undersøke hvordan retinal input påvirker optisk tectum vekst og utvikling. I tillegg gir artikkelen informasjon om larvalbedøvelse, fiksering og hjernespredning, etterfulgt av immunhiistokjemi og konføderasjonsavbildning.

Øyefjerning i levende sebrafisk larver for å undersøke innervasjonsavhengig vekst og utvikling av det visuelle systemet

Zebrafish exhibit remarkable life-long growth and regenerative abilities. For example, specialized stem cell niches established during embryogenesis ...

Så laboratoriet mitt er interessert i å forstå hvordan øyet og hjernen vokser sammen. Denne teknikken lar oss studere hvordan retinal input påvirker hjernens vekst og utvikling. Kirurgisk fjerning av ett øye fra levende larval sebrafisk, etterfulgt av observasjon av det optiske tectum tillater oss å sammenligne innervated og denervated tectal lobes i samme dyr og over dyr.Kombinere denne teknikken med moderne molekylære tilnærminger kan gi ny innsikt i mekanismer som ligger til grunn for nevral utvikling, regenerering og degenerasjon. For å begynne med, koble katode- og anodledningene til strømforsyningen. Fest alligatorklemmen på enden av katodetråden til en delvis rettet binders og sett bindersen inn i kaliumhydroksidoppløsningen og fest den til siden av krukken.Fest alligatorklemmen på anodledningen til halsen på nåleholderen. Vri strømmen til ca. 20 volt og dypp wolframledningen inn i kaliumhydroksidoppløsningen, trekk ledningen ut av løsningen i en vinkel for å elektrolytisk skjerpe ledningen til en fin spiss. Kontroller spissen på nålen under dissekeringsmikroskopet for å sikre at den er skarp nok.Den buede nålespissen resulterer når den skarpe nålen bøyes ved å berøre den forsiktig til Petri-parabolen. På operasjonsdagen, bruk en bredboret glassbeitepipette for å overføre 10 til 15 larver til en 35 millimeter Petri-tallerken fylt med fersk E3. Tilsett tre til fem dråper bedøvelse til larven. For å avgjøre om larvene er tilstrekkelig bedøvet, se etter mangel på berøringsrespons.Tilsett to til tre dråper bedøvelse hvis larvene fortsatt reagerer på berøring etter tre minutter og revurderer. For å immobilisere larven til kirurgi, ta en larve opp i en smalboret glassbeitepipette med bare en liten mengde E3. Deretter tar du opp ca 200 mikroliter smeltet 1% lavt smeltepunkt eller LMP agarose inn i pipetten som inneholder larven og blandes for å sikre at larven er suspendert i LMP-agarose. Legg lokket på en 35 millimeter Petri-tallerken vendt opp under dissekeringsmikroskopet, og sprute deretter larven og agarose på opp ned Petri parabolen lokket.Spred agarose slik at larven er i midten av dråpen. Ved hjelp av en kjedelig wolfram nål, manøvrerer du larven raskt, men forsiktig slik at den er lateral med ett øye vendt oppover. Vent noen minutter til agaroseen er satt.Etter kanten av øyets bane, bruk spissen av en fin elektrolytisk skjerpet wolfram nål for å pierce huden rundt øyet. Skyv deretter kanten av nålen under øyet fra den tidsmessige ventrale siden av øyet. Bruk kontrollert trykk for å frigjøre øyet fra stikkontakten.Fortsett å trykke øyet dorsalt og fremre med siden av nålen, til slutt kutte gjennom synsnerven og slippe øyet. Alternativt kan du bruke veldig fine kirurgiske tang for å fjerne øyet ved å klemme synsnerven og skyve øyet fra medial til lateral. Etter vellykket øyefjerning, dekk agarose med MMR-løsning, frigjør hver larve fra agarose ved forsiktig å pusse en wolfram nål rundt hodet og deretter rundt kroppen, mens du stabiliserer Petri parabolen lokket med tang.Etter operasjonene, plasser larven i MMR-løsning supplert med antibiotika til neste dag, returner deretter larven til E3 og bak dem til eksperimentets endepunkt. Etter at larven er terminalt bedøvet, fest dem med 4% paraformaldehyd. Suspender de faste larver i PBS-dråper på en tetningsbeskyttelsesplate under et dissekeringsmikroskop.Fest dem sidelengs ved å plassere to wolframpinner gjennom hakkeordet med en pinne bakre til pigmentert område som dekker generalforsamlingen og en annen i tråd med slutten av eggeplommeforlengelsen. Fjern øyet med en skarp wolfram nål og fine tang. Noen ganger er det mulig å stikke nålen gjennom kjeven til motsatt side og fjerne det andre øyet.Bruk wolframnålen til å klø fra den tidsmessige til ventrale siden av øret. I samme handling i bevegelse, ta nålen bakre til kjeven og trekk forsiktig fremre til øret og kjeven er fjernet. Fjern det andre øyet og øret ved å stikke nålen gjennom kjeven.Bruk tang til å trekke ut ventrale organer og gjenværende eggeplomme. Til slutt, gjør et grunt snitt i dorsal kranialhud nær krysset mellom bakhjernen og ryggmargen. Løft huden med tang og trekk den fremre og rundt telencephalon.Fjern eventuelt gjenværende vev med tang. Løsne larven og overfør til PBS til 1,5 milliliter mikrosenterrør. Fest en kamret sklie inn i lokket på en 100 millimeter Petri-tallerken med vakuumfett.Overfør den immunosterte og bearbeidede larven til en brønnplate eller depresjonssklie for å se dem med et dissekerende mikroskop. Monter larven på det kamede lysbildet i 1% LMP agarose kolonner. Bruk et glass forbi pipetten din, legg en larve på den kamrede lysbildet, og deponer så lite PBS som mulig.Dekk larven med smeltet og varm 1% LMP agarose ved hjelp av samme pipette. Pipette LMP agarose inn i en kolonne og plasser deretter larven så symmetrisk som mulig med den dorsale overflaten synlig. Etter øyefjerning ble progressiv degenerasjon av retinal aksoner observert i det optiske tectum neuropil.Ved to dagers postsurgery viste RFP-merkede axoner kjennetegn på rask walleriansk degenerasjon, for eksempel blabbing og fragmentering. RFP positiv puncta ble notert både innenfor og utenfor neuropilen på høyre side av tectum som angitt av pilene. Ved fire dager etter operasjonen ble fragmenterte axoner og RFP-merket axonal rusk betydelig redusert i høyre tectal lobe, noe som indikerer relativt rask klaring av døende og degenererende axoner.Hjernen ble utsatt ved å dissekere øynene, kjeven, ørene og hodeskallen i huden og bindevevet. Ideelt sett forblir hjernen intakt under denne prosedyren. Imidlertid ble deler av forhjernen, spesielt den olfaktoriske pæren, sannsynligvis skadet eller helt fjernet når hodeskallehetten i huden eller kjeven ble fjernet.Videre blir noen ganger sidekanten av tectum skiver når piercing eller klemmer huden for å trekke den av hjernen. Ingen prøver er identiske. Så du må kunne gjøre subtile tilpasninger gjennom øyefjerning og hjerne disseksjon etter behov.Pasienter og skarpe verktøy er avgjørende for å lykkes. Denne teknikken kan følges opp med cellulære og molekylære tilnærminger, som in vivo live celleavbildning eller RNA-sekvensering for å få ny innsikt i molekylære og cellulære mekanismer for optisk tectumvekst og utvikling.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Måling Protein Stabilitet på Living Sebrafisk embryo med fluoresens Decay Etter Photoconversion (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse av Sebrafisk Larver Skeletal Muscle Integrity med Evans blå Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imaging subcellulære strukturer i Living Sebrafisk Embryo

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Ved hjelp av lys Sheet Fluorescensmikroskopi til bilde Sebrafisk Eye Development

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Metoder for å undersøke lymfekjertel og Hemocytes i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver

Many parallels exist between the Drosophila and mammalian hematopoietic systems, even though Drosophila lack the lymphoid lineage that characterize ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induksjon av hypoksi i levende frosk og sebrafiskembryoer

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Flere Foton tid forfalle Imaging se utvikling i sanntid: visualisering av migrere Neural Crest celler i sebrafisk embryo

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Encellede Photoconversion i levende intakt sebrafisk

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Helmontering i Situ Hybridisering i sebrafisk embryoer og tube formasjonsanalyse i iPSC-ECs å studere rollen som Endoglin i vaskulær utvikling

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...

Whole Mount Immunohistochemistry in Zebrafish Embryos and Larvae

Hele Immunohistokjemi i sebrafiskembryoer og larver

Immunohistochemistry is a widely used technique to explore protein expression and localization during both normal developmental and disease states. ...