Name: eye removal in living zebrafish larvae to examine innervation-dependent growth and development of the visual system
Uploaded: 2022-02-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System at JoVE.com

Finansiering för detta arbete stöddes främst av startfonder från Reed College till KLC, Helen Stafford Research Fellowship-medel till OLH och ett Reed College Science Research Fellowship till YK. Detta projekt började i Steve Wilsons labb som ett samarbete med HR, som stöddes av ett Wellcome Trust Studentship (2009-2014). Vi tackar Máté Varga, Steve Wilson och andra medlemmar av Wilson-laboratoriet för inledande diskussioner om detta projekt, och vi tackar särskilt Florencia Cavodeassi och Kate Edwards, som var de första som lärde KLC hur man monterar embryon i agaros och utför zebrafiskhjärndissektioner. Vi tackar också Greta Glover och Jay Ewing för hjälp med att montera vår volframnålslipningsenhet.

Metoderna i detta dokument genomfördes i enlighet med riktlinjer och godkännande av Institutional Animal Care and Use Committees of Reed College och University College London. Se materialförteckningen för detaljer om zebrafiskstammar som används i denna studie.
1. Förbered material och verktyg
<ol><li>Gör lösningar.<ol>
<li>Gör embryomedium (E314) genom att späda ut en 60x stam (300 mM NaCl, 10,2 mM KCl, 20 mM CaCl 2-dihydra...

<ol>
	<li>Butler, A. B., Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+tectum.">Optic tectum.</a> Comparative Vertebrate Neuroanatomy: Evolution and Adaptation. , 311-340 (2005).</li><li>Cang, J., Feldheim, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+mechanisms+of+topographic+map+formation+and+alignment.">Developmental mechanisms of topographic map formation and alignment.</a> Annual Review of Neuroscience. 36 (1), 51-77 (2013).</li><li>Basso, M. A., Bickford, M. E., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+circuits+of+visual+perception+and+cognition+through+the+superior+colliculus.">Unraveling circuits of visual perception and cognition through the superior colliculus.</a> Neuron. 109 (6), 918-937 (2021).</li><li>Burrill, J. D., Easter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+retinofugal+projections+in+the+embryonic+and+larval+zebrafish+(Brachydanio+rerio).">Development of the retinofugal projections in the embryonic and larval zebrafish (Brachydanio rerio).</a> The Journal of Comparative Neurology. 346 (4), 583-600 (1994).</li><li>Regeneration in the goldfish visual system. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System Available from: <a target="_blank" href="https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-goldfish-visual-system/">https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-goldfish-visual-system/</a> (2021)</li><li>Regeneration in the visual system of adult mammals. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System Available from: <a target="_blank" href="https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-visual-system-of-adult-mammals/">https://webvision.med.utah.edu/book/part-x-repair-and-regeneration-in-the-visual-system/regeneration-in-the-visual-system-of-adult-mammals/</a> (2021)</li><li>Cerveny, K. L., Varga, M., Wilson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continued+growth+and+circuit+building+in+the+anamniote+visual+system.">Continued growth and circuit building in the anamniote visual system.</a> Developmental Neurobiology. 72 (3), 328-345 (2012).</li><li>Lindsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midbrain+tectal+stem+cells+display+diverse+regenerative+capacities+in+zebrafish.">Midbrain tectal stem cells display diverse regenerative capacities in zebrafish.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4420 (2019).</li><li>Soares, D., Yamamoto, Y., Strickler, A. G., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lens+has+a+specific+influence+on+optic+nerve+and+tectum+development+in+the+blind+cavefish+Astyanax.">The lens has a specific influence on optic nerve and tectum development in the blind cavefish Astyanax.</a> Developmental Neuroscience. 26 (5-6), 308-317 (2004).</li><li>White, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+study+of+the+relationship+between+the+size+of+the+eye+and+the+size+of+the+optic+tectum+in+the+brain+of+the+developing+teleost,+Fundulus+heteroclitus.">An experimental study of the relationship between the size of the eye and the size of the optic tectum in the brain of the developing teleost, Fundulus heteroclitus.</a> Journal of Experimental Zoology. 108 (3), 439-469 (1948).</li><li>Raymond, P., Easter, S., Burnham, J., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postembryonic+growth+of+the+optic+tectum+in+goldfish.+II.+Modulation+of+cell+proliferation+by+retinal+fiber+input.">Postembryonic growth of the optic tectum in goldfish. II. Modulation of cell proliferation by retinal fiber input.</a> The Journal of Neuroscience. 3 (5), 1092-1099 (1983).</li><li>Sato, Y., Yano, H., Shimizu, Y., Tanaka, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+nerve+input-dependent+regulation+of+neural+stem+cell+proliferation+in+the+optic+tectum+of+adult+zebrafish.">Optic nerve input-dependent regulation of neural stem cell proliferation in the optic tectum of adult zebrafish.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 474-482 (2017).</li><li>Hall, Z. J., Tropepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+experience+facilitates+BDNF-dependent+adaptive+recruitment+of+new+neurons+in+the+postembryonic+optic+tectum.">Visual experience facilitates BDNF-dependent adaptive recruitment of new neurons in the postembryonic optic tectum.</a> The Journal of Neuroscience. 38 (8), 2000-2014 (2018).</li><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish. , (2002).</li><li>Cold Spring Harbor Protocols. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marc's+modified+Ringer's+(MMR)+(10X,+pH+7.4).">Marc's modified Ringer's (MMR) (10X, pH 7.4).</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).</li><li>Turner, K. J., Bracewell, T. G., Hawkins, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+dissection+of+zebrafish+brain+development.">Anatomical dissection of zebrafish brain development.</a> Brain Development. 1082, 197-214 (2014).</li><li>Brady, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+making+very+fine,+durable+dissecting+needles+by+sharpening+tungsten+wire+electrolytically.">A simple technique for making very fine, durable dissecting needles by sharpening tungsten wire electrolytically.</a> Bulletin of the World Health Organization. 32 (1), 143-144 (1965).</li><li>. ZFIN Tricaine recipe Available from: <a target="_blank" href="https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE">https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE</a> (2018)</li><li>Zhang, L., Leung, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+of+zebrafish+embryonic+eye+tissues.">Microdissection of zebrafish embryonic eye tissues.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (40), e2028 (2010).</li><li>. ZFIN protocols Available from: <a target="_blank" href="https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/overview">https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/overview</a> (2021)</li><li>Engerer, P., Plucinska, G., Thong, R., Trov&#242;, L., Paquet, D., Godinho, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+subcellular+structures+in+the+living+zebrafish+embryo.">Imaging subcellular structures in the living zebrafish embryo.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (110), e53456 (2016).</li><li>ImageJ with batteries included. Fiji Available from: <a target="_blank" href="https://figi.sc/">https://figi.sc/</a> (2021)</li><li>O'Brien, J., Hayder, H., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantification+and+analysis+of+cell+counting+procedures+using+ImageJ+plugins.">Automated quantification and analysis of cell counting procedures using ImageJ plugins.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54719 (2016).</li><li>Poggi, L., Vitorino, M., Masai, I., Harris, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+on+neural+lineage+and+mode+of+division+in+the+zebrafish+retina+in+vivo.">Influences on neural lineage and mode of division in the zebrafish retina in vivo.</a> The Journal of Cell Biology. 171 (6), 991-999 (2005).</li><li>Karlstrom, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutations+affecting+retinotectal+axon+pathfinding.">Zebrafish mutations affecting retinotectal axon pathfinding.</a> Development. 123 (1), 427-438 (1996).</li><li>Harvey, B. M., Baxter, M., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+nerve+regeneration+in+larval+zebrafish+exhibits+spontaneous+capacity+for+retinotopic+but+not+tectum+specific+axon+targeting.">Optic nerve regeneration in larval zebrafish exhibits spontaneous capacity for retinotopic but not tectum specific axon targeting.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218667 (2019).</li><li>Robles, E., Filosa, A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+lamination+of+retinal+axons+generates+multiple+parallel+input+pathways+in+the+tectum.">Precise lamination of retinal axons generates multiple parallel input pathways in the tectum.</a> Journal of Neuroscience. 33 (11), 5027-5039 (2013).</li><li>Vargas, M. E., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+Is+Wallerian+degeneration+in+the+CNS+so+slow.">Why Is Wallerian degeneration in the CNS so slow.</a> Annual Review of Neuroscience. 30 (1), 153-179 (2007).</li><li>Hughes, A. N., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+phagocytose+myelin+sheaths+to+modify+developmental+myelination.">Microglia phagocytose myelin sheaths to modify developmental myelination.</a> Nature Neuroscience. 23 (9), 1055-1066 (2020).</li><li>de Calbiac, H., Dabacan, A., Muresan, R., Kabashi, E., Ciura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+physiological+analysis+in+a+zebrafish+model+of+epilepsy.">Behavioral and physiological analysis in a zebrafish model of epilepsy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (176), e58837 (2021).</li><li>Adams, S. L., Zhang, T., Rawson, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+external+medium+composition+on+membrane+water+permeability+of+zebrafish+(Danio+rerio)+embryos.">The effect of external medium composition on membrane water permeability of zebrafish (Danio rerio) embryos.</a> Theriogenology. 64 (7), 1591-1602 (2005).</li><li>Fredj, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+and+activity-dependent+competition+regulates+axon+arbor+maturation,+growth+arrest,+and+territory+in+the+retinotectal+projection.">Synaptic activity and activity-dependent competition regulates axon arbor maturation, growth arrest, and territory in the retinotectal projection.</a> Journal of Neuroscience. 30 (32), 10939-10951 (2010).</li><li>Alberio, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+light-gated+potassium+channel+for+sustained+neuronal+inhibition.">A light-gated potassium channel for sustained neuronal inhibition.</a> Nature Methods. 15 (11), 969-976 (2018).</li><li>Kay, J. N., Finger-Baier, K. C., Roeser, T., Staub, W., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ganglion+cell+genesis+requires+lakritz,+a+zebrafish+atonal+homolog.">Retinal ganglion cell genesis requires lakritz, a zebrafish atonal homolog.</a> Neuron. 30 (3), 725-736 (2001).</li><li>Gnuegge, L., Schmid, S., Neuhauss, S. C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+activity-deprived+zebrafish+mutant+macho+reveals+an+essential+requirement+of+neuronal+activity+for+the+development+of+a+fine-grained+visuotopic+map.">Analysis of the activity-deprived zebrafish mutant macho reveals an essential requirement of neuronal activity for the development of a fine-grained visuotopic map.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (10), 3542-3548 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astyanax+surface+and+cave+fish+morphs.">Astyanax surface and cave fish morphs.</a> EvoDevo. 11 (1), 14 (2020).</li><li>Sieger, D., Peri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+microglia:+The+first,+the+popular,+and+the+new.">Animal models for studying microglia: The first, the popular, and the new.</a> Glia. 61 (1), 3-9 (2013).</li><li>Svahn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ramified+microglia+from+early+macrophages+in+the+zebrafish+optic+tectum.">Development of ramified microglia from early macrophages in the zebrafish optic tectum.</a> Developmental Neurobiology. 73 (1), 60-71 (2013).</li><li>Herzog, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+clearance+of+cellular+debris+by+microglia+limits+secondary+neuronal+cell+death+after+brain+injury+in+vivo.">Rapid clearance of cellular debris by microglia limits secondary neuronal cell death after brain injury in vivo.</a> Development. 146 (9), (2019).</li><li>Chen, J., Poskanzer, K. E., Freeman, M. R., Monk, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+astrocyte+morphogenesis+and+function+in+zebrafish+neural+circuits.">Live-imaging of astrocyte morphogenesis and function in zebrafish neural circuits.</a> Nature Neuroscience. 23 (10), 1297-1306 (2020).</li></ol>

De tekniker som beskrivs i denna uppsats illustrerar en av många metoder för att studera ryggradsdjurs visuella systemutveckling hos zebrafiskar. Andra forskare har publicerat metoder för att dissekera den embryonala näthinnan och utföra genuttrycksanalyser19 eller visualisera neuronal aktivitet i det optiska tectum30. Detta dokument ger ett tillvägagångssätt för att utforska hur differentiell retinal inmatning kan påverka cellbeteenden i det optiska tectumet....

Målet med denna metod är att undersöka hur retinal inmatning påverkar tillväxten och utvecklingen av det optiska tectumet, det visuella bearbetningscentret i zebrafiskhjärnan. Genom att ta bort ett öga och sedan jämföra de två sidorna av det optiska tectumet kan tektala förändringar inom samma prov observeras och normaliseras, vilket möjliggör jämförelse över flera prover. Moderna molekylära tillvägagångssätt i kombination med denna teknik kommer att ge insikter i mekanismerna bakom visuell systemtillväxt och utveckling, liksom axonal degeneration och regenerering.
Sensoriska system - visuella, auditiva och somatosensoriska - samlar in information från yttre organ och vidarebefordrar den informationen till centrala nervsystemet och genererar "kartor" över den yttre världen över mitthjärnen 1,2. Vision är den dominerande sensoriska modaliteten för nästan alla ryggradsdjur, inklusive många fiskar. Näthinnan, den neurala vävnaden i ögat, samlar information med en neuronal krets som huvudsakligen består av fotoreceptorer, bipolära celler och retinala ganglionceller (RGC), näthinnans projektionsneuroner. RGC har långa axoner som hittar sin väg över näthinnans inre yta till synnervshuvudet, där de fascikulaterar och reser tillsammans genom hjärnan och slutligen slutar i det visuella bearbetningscentret i dorsala mitthjärnan. Denna struktur kallas optisk tectum hos fisk och andra icke-däggdjursryggradsdjur och är homolog mot den överlägsna colliculus hos däggdjur3.
Det optiska tectumet är en bilateralt symmetrisk flerskiktad struktur i dorsala mitthjärna. Hos zebrafiskar och de flesta andra fiskar får varje lob i det optiska tektumet visuell inmatning enbart från det kontralaterala ögat, så att vänster synnerv slutar i höger tektallob och höger synnerv slutar i vänster tektallob4 (Figur 1). Liksom sin däggdjurs motsvarighet, den överlägsna colliculus, integrerar det optiska tectum visuell information med andra sensoriska ingångar, inklusive audition och somatosensation, som kontrollerar förändringar i visuell uppmärksamhet och ögonrörelser som saccades 1,5,6. Men till skillnad från däggdjurets överlägsna colliculus genererar det optiska tectum kontinuerligt nya neuroner och glia från en specialiserad stamcellsnisch nära de mediala och kaudala kanterna på tektalloberna som kallas tectal proliferationszon7. Upprätthållande av proliferativa förfäder i det optiska tectumet och andra regioner i centrala nervsystemet bidrar delvis till den anmärkningsvärda regenerativa kapacitet som dokumenteras i zebrafisk8.
Tidigare arbete som undersökte hjärnorna hos blinda eller enögda fiskar avslöjade att optisk tektumstorlek är direkt proportionell mot mängden retinal innervation den får 9,10,11. Hos vuxna grottfiskar, vars ögon degenererar i tidig embryogenes, är det optiska tektumet märkbart mindre än för närstående, synad ytfisk9. Grottfiskögondegeneration kan blockeras genom att ersätta den endogena linsen med en lins från en ytfisk under embryogenesen. När dessa enögda grottfiskar föds upp till vuxen ålder innehåller den innerverade tektalloben cirka 10% fler celler än den icke-innerverade tektalloben9. På samma sätt, i larvdödfisk som inkuberades med kemiska behandlingar för att generera ögon av olika storlekar inom samma individ, var sidan av tectum med mer innervation större och innehöll fler neuroner10. Bevis från optiska nervkrossexperiment hos vuxna guldfiskar indikerar att innervation främjar proliferation, med tektal cellproliferation som minskar när innervation stördes11.
Bekräftar och utvidgar dessa klassiska studier, flera nya rapporter ger data som tyder på att proliferation som svar på innervation moduleras, åtminstone delvis, av BDNF-TrkB-vägen12,13. Många öppna frågor om optisk tektumtillväxt och utveckling kvarstår, inklusive hur ett utvecklande sensoriskt system hanterar skada och axondegenerering, vilka cellulära och molekylära signaler möjliggör retinal ingång för att reglera optisk tektumtillväxt, när dessa mekanismer blir aktiva och om innervationskopplad proliferation och differentiering gör det möjligt för näthinnan och dess målvävnad att samordna tillväxthastigheter och säkerställa korrekt retinotopisk kartläggning. Dessutom finns det mycket större frågor om aktivitetsberoende utveckling som kan hanteras genom att förhöra zebrafiskens visuella system med kirurgiska tillvägagångssätt som den som beskrivs nedan.
För att undersöka de cellulära och molekylära mekanismer genom vilka neural aktivitet, specifikt från visuell inmatning, förändrar cellöverlevnad och proliferation, jämför det beskrivna tillvägagångssättet direkt innerverade och denerverade tektallober (Figur 1) inom enskilda zebrafisklarver. Denna metod möjliggör dokumentation av RGC-axondegenerering i det optiska tektumet och bekräftelse på att antalet mitotiska celler korrelerar med innervation.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63509/63509fig01.jpg"> Figur 1: Skisser av zebrafisklarver före och efter ensidig ögonborttagning. (A) Ritning av 5 dpf larver sett under ett dissekerande mikroskop. Varje larv är inbäddad i lågsmältpunkt agaros och orienterad i sidled innan en volframnål med en skarp, krokad spets används för att skopa ut ögat uppåt (vänster öga i detta exempel). (B) Ritning av den dorsala vyn av en 9 dpf larv som härrör från den operation som avbildas i A. Endast tre mycket schematiserade RGC-axoner från höger öga visas defascikulerande och anslutande med neuroner i vänster tektallob. Förkortningar: dpf = dagar efter befruktning; dps = dagar efter operationen; RGC = retinala ganglionceller. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63509/63509fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna figur.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment and supplies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breeding boxes</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZHCT100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dow Corning high vacuum grease</td>
			<td>Sigma or equivalent supplier</td>
			<td>Z273554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks (125 mL)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For making Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) with antibiotics for post-surgery incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps - Dumont #5</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>DWK Lifescience</td>
			<td>63A53 &#38; 63A53WT</td>
			<td>For pipetting embryos and larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides for microscopy</td>
			<td>VWR or equivalent supplier</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>Standard glass microscope slides can be ordered from many different laboratory suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glassware including graduated bottles and graduated cylinders</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For making and storing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-part epoxy resin</td>
			<td>ACE Hardware or other equivalent supplier of Gorilla Glue or equivalent</td>
			<td>0.85 oz syringe</td>
			<td>https://www.acehardware.com/departments/paint-and-supplies/tape-glues-and-adhesives/glues-and-epoxy/1590793</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube (1.7 mL)</td>
			<td>VWR or equivalent supplier</td>
			<td>22234-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel plated pin holder (17 cm length)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>26018-17</td>
			<td>To hold tungsten wire while sharpening and performing surgeries/dissections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh tea strainer or equivalent</td>
			<td>Ali Express or equivalent</td>
			<td></td>
			<td>For harvesting zebrafish eggs after spawning; https://www.aliexpress.com/item/1005002219569756.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 100 mm</td>
			<td>Fischer Scientific or equivalent supplier</td>
			<td>50-190-0267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 35 mm</td>
			<td>Fischer Scientific or equivalent supplier</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette pump</td>
			<td>SP Bel-Art or equivalent</td>
			<td>F37898-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>909122</td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device. Make a 10% w/v solution of KOH in the hood by adding pellets to deionized water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply (variable voltage)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device. Any power supply with variable voltage will work (even one used for gel electrophoresis).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Elastomer kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3097358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire (0.125 mm diameter)</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>TGW0515</td>
			<td>Sharpen to remove eye and dissect larvae.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable temperature heat block</td>
			<td>The Lab Depot or equivalent supplier</td>
			<td>BSH1001 or BSH1002</td>
			<td>Set to 40-42 &#176;C ahead of experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-mouth glass jar with lid (e.g., clean jam or salsa jar)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wires with alligator clip leads</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tungsten needle sharpening device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopes:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any type will work but having adjustable transmitted light on a mirrored base is preferred.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning confocal microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>High NA, 20-25x water dipping objective lens is recommended. 
			Microscope control and image capture software (Elements) is used here but any confocal microscope will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for surgeries and dissections:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7902</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7006</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520-050</td>
			<td>Make 1% in embryo medium (E3) or Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1374248</td>
			<td>For embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7506</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19210</td>
			<td>Dilute 8% (w/v) stock with 2x concentrated PBS (diluted from 10x PBS stock).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-20ML</td>
			<td>Dilute 1:100 in Marc&#39;s Modified Ringers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS) tablets</td>
			<td>Diagnostic BioSystems</td>
			<td>DMR E404-01</td>
			<td>Make 10x stock in deionized water, autoclave and store at room temperature. Dilute to 1x working concentration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3911</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9888</td>
			<td>For Marc&#39;s Modified Ringers (MMR) and embryo medium (E3).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5881</td>
			<td>Make 10 M and use to adjust pH of MMR to 7.4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine-S</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>100G #TRS1</td>
			<td>Recipe: https://zfin.atlassian.net/wiki/spaces/prot/pages/362220023/TRICAINE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for immunohistochemistry:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexafluor 568 tagged Secondary antibody to detect rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11011</td>
			<td>Use at 1:500 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI or ToPro3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1306 or T3605</td>
			<td>Make up 1 mg/mL solutions in DMSO; 1:5,000 dilution for counterstaining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418</td>
			<td>A component of immunoblock buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (MeOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>34860</td>
			<td>Mixing MeOH with aqueous solutions like PBST is exothermic. Make the MeOH/PBST solutions at least several hours ahead of time or cool them on ice before using.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-062Z</td>
			<td>A component of immunoblock buffer. Can be aliquoted in 1-10 mL volumes and stored at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody to detect phosphohistone H3</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>06-570</td>
			<td>Use at 1:300 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody to detect Red Fluorescent Protein (RFP; detects dsRed derivatives)</td>
			<td>MBL International</td>
			<td>PM005</td>
			<td>Use at 1:500 dilution for wholemount immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K (PK)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2308-10MG</td>
			<td>Make up 10 mg/mL stock solutions in PBS and use at 10 &#181;g/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Useful to make a 20% (v/v) stock solution in PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for data analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ (Fiji)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware for image analysis; https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware for statistical analysis and data visualization; https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop or GIMP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Proprietary image processing software (Adobe Photoshop and Illustrator) are often used to compose figures). A freeware alternative is Gnu Image Manipulation Program (GIMP; https://www.gimp.org/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>available from the&#160; Zebrafish International Resource Centers in the US (https://zebrafish.org/home/guide.php) or in Europe (https://www.ezrc.kit.edu/). Specialized transgenic strains that have not yet been deposited in either resource center can be requested from individual labs after publication.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eye removal in living zebrafish larvae to examine innervation-dependent growth and development of the visual system

Zebrafisk uppvisar anmärkningsvärd livslång tillväxt och regenerativa förmågor. Till exempel stöder specialiserade stamcellsnischer som etablerats under embryogenes kontinuerlig tillväxt av hela det visuella systemet, både i ögat och hjärnan. Koordinerad tillväxt mellan näthinnan och det optiska tectum säkerställer noggrann retinotopisk kartläggning när nya neuroner läggs till i ögonen och hjärnan. För att ta itu med huruvida retinala axoner ger avgörande information för att reglera tektala stam- och stamcellsbeteenden som överlevnad, proliferation och / eller differentiering, är det nödvändigt att kunna jämföra innerverade och denerverade tektallober inom samma djur och över djur. 
Kirurgiskt avlägsnande av ett öga från levande larvzebrafisk följt av observation av det optiska tectumet uppnår detta mål. Den medföljande videon visar hur man bedövar larver, elektrolytiskt skärper volframnålar och använder dem för att ta bort ett öga. Det visar sedan hur man dissekerar hjärnor från fasta zebrafisklarver. Slutligen ger videon en översikt över protokollet för immunohistokemi och en demonstration av hur man monterar färgade embryon i lågsmältpunktsagaros för mikroskopi.

För att bekräfta om ögonborttagningen var fullständig och bedöma hur det optiska tektumet förändras utfördes operationer i Tg [atoh7: RFP] -stammen, som märker alla RGC med en membranriktad RFP och därmed alla axoner som projicerar från näthinnan och bildar synnerven24. Även om det inte är absolut nödvändigt att använda denna stam, möjliggör den enkel observation och visualisering av synnervens termini i den optiska tectum neuropilen. Andra metoder för märkning av syn...

Watch this Scientific Journal Video about Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System at JoVE.com

Eye Removal in Living Zebrafish Larvae to Examine Innervation-dependent Growth and Development of the Visual System

Artikeln förklarar hur man kirurgiskt tar bort ögon från levande zebrafisklarver som det första steget mot att undersöka hur retinal inmatning påverkar optisk tektumtillväxt och utveckling. Dessutom ger artikeln information om larvbedövning, fixering och hjärndissektion, följt av immunohistokemi och konfokal avbildning.

Ögonborttagning i levande zebrafisklarver för att undersöka innervationsberoende tillväxt och utveckling av det visuella systemet

Zebrafish exhibit remarkable life-long growth and regenerative abilities. For example, specialized stem cell niches established during embryogenesis ...

Så mitt labb är intresserat av att förstå hur ögat och hjärnan växer ihop. Denna teknik gör det möjligt för oss att studera hur retinal input påverkar hjärnans tillväxt och utveckling. Kirurgiskt avlägsnande av ett öga från den levande larvzebrafisken, följt av observation av det optiska tectumet gör att vi kan jämföra innerverade och denerverade tektallober inom samma djur och över djur.Att kombinera denna teknik med moderna molekylära tillvägagångssätt kan ge ny inblick i mekanismer som ligger till grund för neural utveckling, regenerering och degenerering. För att börja, anslut katod- och anodkablarna till strömförsörjningen. Fäst alligatorklämman i slutet av katodtråden på ett delvis rakt gem och sätt in gemet i kaliumhydroxidlösningen och fäst det på sidan av burken.Fäst anodtrådens alligatorklämma på nålhållarens hals. Vrid strömmen till cirka 20 volt och doppa volframtråden i kaliumhydroxidlösningen och dra tråden ur lösningen i en vinkel för att elektrolytiskt skärpa tråden till en fin spets. Kontrollera nålens spets under dissekeringsmikroskopet för att säkerställa att den är tillräckligt skarp.Kurvnålspetsen resulterar när den vassa nålen böjs genom att försiktigt röra den mot petriskålen. På operationsdagen, använd en bredborrad glasbetespipett för att överföra 10 till 15 larver till en 35 millimeter petriskål fylld med färsk E3. Tillsätt tre till fem droppar bedövningsmedel till larven. För att avgöra om larverna är tillräckligt bedövade, leta efter brist på beröringsrespons.Tillsätt ytterligare två till tre droppar av bedövningsmedlet om larverna fortfarande svarar på beröring efter tre minuter och ompröva. För att immobilisera larven för operation, ta en larv upp i en smalborrad glasbetespipett med endast en liten mängd E3. Ta sedan upp cirka 200 mikroliter smält 1% låg smältpunkt eller LMP-agaros i pipetten som innehåller larven och blanda för att säkerställa att larven är suspenderad i LMP-agarosen. Placera locket på en 35 millimeter petriskål vänd upp under det dissekerande mikroskopet och spruta sedan larven och agarosen på det upp och ner petriskållocket.Sprid agarosen så att larven ligger i mitten av droppen. Använd en tråkig volframnål, manövrera snabbt men försiktigt larven så att den är lateral med ett öga uppåt. Vänta flera minuter tills agarosen har satt sig.Efter kanten av ögonbanan, använd spetsen på en fin elektrolytiskt skärpt volframnål för att genomborra huden runt ögat. Skjut sedan nålkanten under ögat från den temporala ventrala sidan av ögat. Använd kontrollerat tryck för att frigöra ögat från uttaget.Fortsätt att trycka ögat dorsalt och främre med sidan av nålen, så småningom skära genom synnerven och släppa ögat. Alternativt kan du använda mycket fina kirurgiska pincett för att ta bort ögat genom att klämma på synnerven och trycka ögat från medial till lateral. Efter framgångsrik ögonborttagning, täck agarosen med MMR-lösning, befria varje larv från agarosen genom att försiktigt borsta en volframnål runt huvudet och sedan runt kroppen, samtidigt som du stabiliserar petriskållocket med pincett.Efter operationerna, placera larven i MMR-lösning kompletterad med antibiotika fram till följande dag, sätt sedan tillbaka larven till E3 och baka dem till experimentets slutpunkt. Efter larven är terminalt bedövad, fixa dem med 4% paraformaldehyd. Häng upp de fasta larverna i PBS-droppar på en tätningsplatta under ett dissekerande mikroskop.Säkra dem i sidled genom att placera två volframstift genom notokordet med en stift bakom det pigmenterade området som täcker AGM-regionen och en annan i linje med slutet av äggulaförlängningen. Ta bort ögat med en skarp volframnål och fina pincett. Ibland är det möjligt att sticka nålen genom käken till motsatt sida och ta bort det andra ögat.Använd volframnålen för att repa från den temporala till den ventrala sidan av örat. I samma åtgärd i rörelse, ta nålen bakom käken och dra försiktigt framåt tills örat och käken tas bort. Ta bort det andra ögat och örat genom att sticka nålen genom käken.Använd pincett för att dra ut de ventrala organen och återstående äggula. Slutligen, gör ett grunt snitt i dorsalkranialhuden nära korsningen mellan bakhjärnan och ryggmärgen. Lyft huden med tången och dra den framåt och runt telencefalonen.Ta bort eventuell kvarvarande vävnad med pincett. Lossa larven och överför till PBS till 1,5 ml mikrocentrifugrör. Säkra en kammarrutschkana i locket på en 100 millimeter petriskål med vakuumfett.Överför den immunfärgade och bearbetade larven till en brunnsplatta eller depressionsglid för att se dem med ett dissekerande mikroskop. Montera larven på kammarbilden i 1%LMP agaroskolumner. Använd ett glas förbi din pipett och lägg en larv på den kammade bilden och deponera så lite PBS som möjligt.Täck larven med smält och varm 1% LMP agaros med samma pipett. Pipettera LMP agaros i en kolonn och placera sedan larven så symmetriskt som möjligt med ryggytan synlig. Efter ögonborttagning observerades progressiv degenerering av retinala axoner i den optiska tectumneuropilen.Vid två dagar efter operationen uppvisade RFP-märkta axoner kännetecken för snabb wallerisk degeneration, såsom blabbing och fragmentering. RFP-positiv puncta noterades både inom och utanför neuropilen på höger sida av tectum som indikeras av pilarna. Vid fyra dagar efter operationen reducerades fragmenterade axoner och RFP-märkta axonala skräp avsevärt i den högra tektalloben, vilket indikerar relativt snabb clearance av de döende och degenererande axonerna.Hjärnan exponerades genom att dissekera ögon, käke, öron och kalott på huden och bindväven. Helst förblir hjärnan intakt under denna procedur. Delar av den förhjärnan, särskilt luktlampan, skadades emellertid sannolikt eller avlägsnades helt när skalllocket på huden eller käken togs bort.Dessutom, ibland blir tektumets laterala avsats skivad när man genomborrar eller klämmer på huden för att dra den från hjärnan. Inga två prover är identiska. Så du måste kunna göra subtila anpassningar genom ögonborttagning och hjärndissektion efter behov.Patienter och vassa verktyg är avgörande för framgång. Denna teknik kan följas upp med cellulära och molekylära tillvägagångssätt, som in vivo levande cellavbildning eller RNA-sekvensering för att få nya insikter i de molekylära och cellulära mekanismerna för optisk tektumtillväxt och utveckling.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Mätning Protein Stabilitet i Living Zebrafish embryon Använda Fluorescens Decay Efter Photoconversion (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analys av Zebrafish Larver skelettmuskulatur Integrity med Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imaging subcellulära strukturer i vardagsZebraFish Embryo

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Använda ljus Sheet fluorescensmikroskopi till bild Zebrafish Eye utveckling

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Metoder för att undersöka lymfkörtel och hemocyter i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver

Many parallels exist between the Drosophila and mammalian hematopoietic systems, even though Drosophila lack the lymphoid lineage that characterize ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induktion av hypoxi i levande groda och zebrafiskembryon

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Flera Photon Time Lapse Imaging att visualisera utvecklingen i realtid: visualisering av migrera Neural Crest celler hos zebrafiskar embryon

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Single-cell Photoconversion i levande intakt zebrafiskar

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Helmonterad in situ-hybridisering i Zebrafish Embryon och Tube Formation Assay i iPSC-ECs att studera rollen av Endoglin i vaskulär utveckling

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...

Whole Mount Immunohistochemistry in Zebrafish Embryos and Larvae

Hela mount immunohistokemi i zebrafisk embryon och larver

Immunohistochemistry is a widely used technique to explore protein expression and localization during both normal developmental and disease states. ...