Name: real-time detection and capture of invasive cell subpopulations from co-cultures
Uploaded: 2022-03-30T14:00:00
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Vorremmo ringraziare la dott.ssa Alana Welms, Huntsman Cancer Institute, Università dello Utah, per averci fornito gli xenotrapianti derivati dal paziente (HCI-010). Questo lavoro è stato supportato dalle sovvenzioni NIH R01CA205632, R21CA226542 e, in parte, da una sovvenzione di Agilent Technologies.

Lo studio è stato esaminato e considerato "esente" dall'Institutional Review Board della Georgetown University (IRB # 2002-022). I tessuti del midollo osseo appena raccolti sono stati raccolti da filtri di raccolta del midollo osseo umano sano scartati che erano stati de-identificati.
1. Nuovo design della camera (Figura 2)
<ol><li>Aprire una nuova piastra di analisi cellulare a doppia camera. Mettere da parte la camera superio...

<ol>
	<li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+cell+migration+in+morphogenesis,+regeneration+and+cancer.">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10 (7), 445-457 (2009).</li><li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115 (3), 453-466 (1962).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+impedance+measurements+of+whole+cells.">A review of impedance measurements of whole cells.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 77, 824-836 (2016).</li><li>Stylianou, D. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF10DCIS.com+xenograft+model+of+human+comedo+ductal+carcinoma+in+situ.">MCF10DCIS.com xenograft model of human comedo ductal carcinoma in situ.</a> Journal of the National Cancer Institute. 92 (14), 1185-1186 (2000).</li><li>Winkler, J., Abisoye-Ogunniyan, A., Metcalf, K. J., zenaa, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concepts+of+extracellular+matrix+remodelling+in+tumour+progression+and+metastasis.">Concepts of extracellular matrix remodelling in tumour progression and metastasis.</a> Nature Communications. 11 (1), 1-19 (2020).</li><li>Nkosi, D., Sun, L., Duke, L. C., Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epstein-Barr+virus+LMP1+manipulates+the+content+and+functions+of+extracellular+vesicles+to+enhance+metastatic+potential+of+recipient+cells.">Epstein-Barr virus LMP1 manipulates the content and functions of extracellular vesicles to enhance metastatic potential of recipient cells.</a> PLoS Pathogens. 16 (12), 1009023 (2020).</li><li>Eisenberg, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+modeling+of+the+effects+of+myoferlin+on+tumor+cell+invasion.">Mechanistic modeling of the effects of myoferlin on tumor cell invasion.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (50), 20078-20083 (2011).</li></ol>

Abbiamo modificato il design di un array a doppia camera per includere una terza camera per il monitoraggio dell'invasione cellulare in tempo reale in presenza di cellule stromali. Abbiamo osservato effetti distinti dei fibroblasti co-coltivati su cellule tumorali invasive e non invasive, indicando che l'array può essere utilizzato per distinguere tra sottopopolazioni di cellule tumorali che rispondono in modo diverso ai fattori prodotti da cellule stromali co-coltivate. L'array è stato utilizzato anche per monitorare ...

L'invasione cellulare è un processo importante che consente alle cellule di attraversare le barriere della membrana basale in risposta ai segnali ambientali forniti dalle cellule stromali. È un passo cruciale durante diverse fasi di sviluppo per le risposte immunitarie, la guarigione delle ferite, la riparazione dei tessuti e le neoplasie maligne che possono progredire dalle lesioni locali ai tumori invasivi e metastatici1. I saggi sviluppati precocemente per misurare il potenziale invasivo delle popolazioni cellulari in genere generano una singola misurazione del punto finale o richiedono la pre-etichettatura delle cellule invasive2. L'integrazione di tecniche di microelettronica e microfluidica è ora sviluppata per rilevare diversi aspetti della biologia cellulare come la vitalità, il movimento e l'attaccamento utilizzando l'impedenza elettrica delle cellule vive sui microelettrodi 3,4. La misurazione dell'impedenza consente una valutazione senza etichette, non invasiva e quantitativa dello stato cellulare3. Qui descriviamo un array a tre camere basato sul progetto del sistema Real-Time Cellular Analysis (RTCA) sviluppato da Abassi et al.5. L'array a tre camere consente la valutazione di cellule co-coltivate sull'invasione cellulare e il recupero di cellule invasive per ulteriori analisi o espansioni.
Nel sistema di analisi cellulare, le cellule invadono attraverso una matrice extracellulare rivestita su una membrana porosa e raggiungono un array di elettrodi interdigitati posizionati sul lato opposto della barriera. Mentre le cellule invasive continuano ad attaccare e occupare questo array di elettrodi nel tempo, l'impedenza elettrica cambia in parallelo. Il sistema attuale comprende una piastra di invasione e migrazione cellulare (CIM) a 16 pozzetti con due camere. Lo strumento RTCA-DP (dual purpose) (chiamato d'ora in poi analizzatore di celle a doppio scopo) contiene sensori per la misurazione dell'impedenza e software integrato per analizzare ed elaborare i dati di impedenza. I valori di impedenza al basale dipendono dalla forza ionica dei mezzi nei pozzetti e vengono modificati quando le celle si attaccano agli elettrodi. I cambiamenti di impedenza dipendono dal numero di cellule, dalla loro morfologia e dalla misura in cui le cellule si attaccano agli elettrodi. Una misurazione dei pozzetti con i media prima che le celle vengano aggiunte è considerata come il segnale di fondo. Lo sfondo viene sottratto dalle misurazioni dell'impedenza dopo aver raggiunto l'equilibrio con le celle che si attaccano e si diffondono sugli elettrodi. Un parametro unitless dello stato delle celle su un elettrodo chiamato Cell Index (CI) è calcolato come segue: CI = (impedenza dopo l'equilibrio - impedenza in assenza di celle) / valore di impedenza nominale6. Quando vengono confrontati i tassi di migrazione di diverse linee cellulari, l'IC Delta può essere utilizzato per confrontare lo stato della cella indipendentemente dalla differenza di attaccamento rappresentata nelle prime misurazioni.
L'array a tre camere di nuova concezione si basa sul progetto esistente e utilizza la camera superiore del sistema di analisi delle celle a doppio scopo che contiene gli elettrodi. Le camere centrali e inferiori modificate sono adattate per adattare l'assemblaggio all'analizzatore di celle a doppio scopo per la misurazione e l'analisi dell'impedenza utilizzando il software integrato. I due principali progressi che il nuovo progetto fornisce rispetto alla piastra CIM a doppia camera esistente (chiamata piastra di analisi cellulare d'ora in poi) sono: i) la capacità di recuperare e quindi analizzare sottopopolazioni cellulari invasive presenti in miscele cellulari eterogenee e ii) l'opzione per valutare l'impatto dei fattori secreti da cellule stromali o immunitarie co-coltivate sull'invasione cellulare (Figura 1).
Questa tecnologia può essere utile nello studio delle sottopopolazioni di cellule con diverse capacità invasive. Ciò include (a) cellule tumorali invasive che invadono i tessuti circostanti o vasi sanguigni e linfatici o stravasano in siti di semina metastatica in organi distanti, (b) cellule del sistema immunitario che invadono i tessuti per affrontare agenti patogeni o cellule malate, (c) cellule endoteliali che invadono i tessuti per formare nuovi vasi sanguigni durante la riorganizzazione dei tessuti o la guarigione delle ferite, così come (d) le cellule stromali del microambiente tumorale che supportano e invadono insieme alle cellule tumorali. L'approccio consente l'inclusione di cross-talk stromali in grado di modulare la motilità e l'invasione cellulare. Gli studi di fattibilità mostrati qui utilizzano questo array modificato focalizzato sull'invasione delle cellule tumorali e sull'interazione con lo stroma come sistema modello, compresa l'invasione endoteliale in risposta a segnali differenziali dalle cellule tumorali. L'approccio può essere estrapolato per isolare le cellule tumorali e altri tipi di cellule come sottopopolazioni di cellule immunitarie, fibroblasti o cellule endoteliali. Abbiamo testato linee cellulari di cancro al seno stabilite invasive e non invasive come prova di principio. Abbiamo anche usato cellule dall'invasione di xenotrapianti derivati dal paziente (PDX) in risposta alle cellule immunitarie del midollo osseo umano per mostrare la fattibilità per un uso futuro anche in contesti diagnostici clinici. I PDX sono tessuti tumorali del paziente che vengono impiantati in un modello di topi immunocompromessi o umanizzati per consentire lo studio della crescita, della progressione e delle opzioni di trattamento per il paziente originale 7,8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive</td>
			<td>Norland Optical Adhesive</td>
			<td>NOA63</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lifter</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin from Vibrio cholerae</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>12585-014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIM-plate</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5665817001</td>
			<td>Cell analyzer plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>StemCell</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM-F12</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS), Heat Inactivated</td>
			<td>Omega Scientific</td>
			<td>FB-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>15630106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum (HS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human umbilical Vein endothelail cells (HUVEC)</td>
			<td>LONZA (RRID:CVCL_2959)</td>
			<td>C-2517A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HUVEC media</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Transferrin Selenium Ethanolamine (ITSX) (100x)</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>51500056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin, Human Recombinant, Zinc Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>J2 Fibroblasts</td>
			<td>Stemcell (RRID:CVCL_W667)</td>
			<td>100-0353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LymphoPrep</td>
			<td>Stemcell</td>
			<td>7851</td>
			<td>Density gradient medium for the isolation of mononuclear cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCFDCIS.com cells ( DCIS)</td>
			<td>RRID:CVCL_5552</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 cells</td>
			<td>RRID:CVCL_0062</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milling machine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Bridgeport Series 1 Vertical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (1x)</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10010049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethersulfone (PES) membrane</td>
			<td>Sterlitech</td>
			<td>PCTF029030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC lysis solution</td>
			<td>Stemcell</td>
			<td>7800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Micro Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RTCA DP analyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>3X16</td>
			<td>Dual purpose cell analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4799</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time detection and capture of invasive cell subpopulations from co-cultures

L'invasione e la diffusione metastatica delle cellule tumorali sono la principale causa di morte per cancro. I saggi sviluppati precocemente per misurare il potenziale invasivo delle popolazioni di cellule tumorali in genere generano una singola misurazione dell'endpoint che non distingue tra sottopopolazioni di cellule tumorali con diverso potenziale invasivo. Inoltre, il microambiente tumorale è costituito da diverse cellule stromali e immunitarie residenti che alterano e partecipano al comportamento invasivo delle cellule tumorali. L'invasione nei tessuti svolge anche un ruolo nelle sottopopolazioni di cellule immunitarie respingendo i microrganismi o eliminando le cellule malate dal parenchima e dalle cellule endoteliali durante il rimodellamento dei tessuti e l'angiogenesi. L'analisi cellulare in tempo reale (RTCA) che utilizza biosensori di impedenza per monitorare l'invasione cellulare è stato un importante passo avanti oltre la misurazione dell'invasione degli endpoint: fornisce misurazioni continue nel tempo e quindi può rivelare differenze nei tassi di invasione che vengono persi nel test dell'endpoint. Utilizzando l'attuale tecnologia RTCA, abbiamo ampliato gli array a doppia camera aggiungendo un'ulteriore camera che può contenere cellule stromali e / o immunitarie e consente di misurare il tasso di invasione sotto l'influenza di fattori secreti da cellule stromali o immunitarie co-coltivate nel tempo. Oltre a questo, il design unico consente di staccare le camere in qualsiasi momento e isolare la cellula tumorale più invasiva o altre sottopopolazioni cellulari presenti in miscele eterogenee di isolati tumorali testati. Queste cellule tumorali più invasive e altre sottopopolazioni cellulari guidano la progressione maligna verso la malattia metastatica e le loro caratteristiche molecolari sono importanti per studi meccanicistici approfonditi, lo sviluppo di sonde diagnostiche per la loro individuazione e la valutazione delle vulnerabilità. Pertanto, l'inclusione di farmaci a piccole o grandi molecole può essere utilizzata per testare il potenziale delle terapie che colpiscono il cancro e / o le sottopopolazioni di cellule stromali con l'obiettivo di inibire (ad esempio, le cellule tumorali) o migliorare (ad esempio, le cellule immunitarie) il comportamento invasivo.

Utilizzando l'array a tre camere di nuova concezione, l'invasione delle cellule è stata testata in presenza o assenza di cellule stromali come i fibroblasti. L'invasione cellulare MDA-MB-231 è stata potenziata quando i fibroblasti svizzeri 3T3 irradiati (ceppo J2) sono stati seminati nella camera inferiore, consentendo lo scambio di fattori tra le due linee cellulari. È interessante notare che l'invasione MDA-MB-231 è aumentata quando le cellule 3T3-J2 sono state raddoppiate in numero (Figura 3A<...

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Real-Time Detection and Capture of Invasive Cell Subpopulations from Co-Cultures

Descriviamo un approccio per rilevare e catturare sottopopolazioni cellulari invasive in tempo reale. Il progetto sperimentale utilizza l'analisi cellulare in tempo reale monitorando i cambiamenti nell'impedenza elettrica delle cellule. Il cancro invasivo, le cellule immunitarie, endoteliali o stromali nei tessuti complessi possono essere catturati e l'impatto delle co-colture può essere valutato.

Rilevamento e acquisizione in tempo reale di sottopopolazioni cellulari invasive da co-colture

Invasion and metastatic spread of cancer cells are the major cause of death from cancer. Assays developed early on to measure the invasive potential of ...

Questa tecnica consente l'identificazione delle cellule con diverse capacità invasive sotto l'influenza di fattori secreti da cellule stromali co-coltivate. La tecnica valuta l'impatto dei fattori secreti da cellule stromali o immunitarie co-coltivate sull'invasione cellulare. Permette inoltre il recupero e l'analisi di sottopopolazioni cellulari invasive presenti in miscele cellulari eterogenee.La tecnica può determinare quali tumori ospitano sottopopolazioni cellulari invasive che portano a metastasi. La cattura e l'analisi delle cellule tumorali invasive possono informare le decisioni terapeutiche. Per iniziare la coltura cellulare, lavare le colture cellulari aderenza con una confluenza di circa il 70% con soluzione salina tamponata con fosfato 1X.Quindi aggiungere 0,05% di tripsina e soluzione di EDTA per sollevare le cellule. Neutralizzare la soluzione di tripsina con terreni di coltura cellulare contenenti siero e contare le cellule usando un'aliquota della sospensione cellulare. Posizionare tutte e tre le camere sterili nella cappa di coltura del tessuto.Posizionare la manopola sul lato corto della camera inferiore e orientare la camera inferiore in modo che la manopola sia rivolta verso lo sperimentatore. Aggiungere da 30.000 a 50.000 celle in 90 microlitri di media a ciascun pozzetto dalla camera inferiore senza formare bolle. Utilizzare il 5% dei media integrati con siero bovino fetale in due camere inferiori come controllo positivo per la motilità cellulare e utilizzare i mezzi integrati con siero allo 0% come controllo negativo.Ruotare la camera inferiore a 90 gradi dopo averla lasciata riposare per 10-15 minuti nel cofano. Quindi posizionare la camera centrale in alto in modo che la manopola sulla camera inferiore scivoli nella tacca sulla camera centrale. Spingete la camera verticalmente verso il basso fino a quando non si sente un clic da ciascuno dei lati lunghi dell'assieme.Aggiungere 160 microlitri di supporti privi di siero a tutti i pozzetti della camera centrale. Assicurarsi che un menisco a forma di cupola sia visibile dopo che i pozzetti sono stati riempiti e posizionare la camera superiore con elettrodi rivolti verso il basso sulla camera centrale per allineare i punti blu sulle camere centrale e superiore. Spingere la camera verticalmente verso il basso fino a quando non si sente un suono di clic da ciascuno dei lati lunghi dell'assieme.Aggiungere da 20 a 50 microlitri di supporti privi di siero alla camera superiore. Montare il gruppo sull'analizzatore cellulare a doppio scopo nell'incubatore di colture tissutali e attendere 30 minuti prima di misurare lo sfondo. Aprire il software dell'analizzatore di celle, quindi selezionare la base da utilizzare, seguita da un clic sulla scheda del messaggio, e assicurarsi che sia indicato Connessioni ok "per assicurarsi che l'array sia ben posizionato nella culla e che gli elettrodi siano ben allineati con i sensori.Fai clic sulla scheda note dell'esperimento e inserisci tutte le possibili informazioni sull'esperimento. Quindi fare clic sulla scheda layout e compilare la descrizione del layout dell'array. Quindi fare clic sulla scheda Pianificazione e aggiungere due passaggi dal menu dei passaggi, un passaggio di sfondo con una sweep e un passaggio di test con 100 sweep.Una volta che l'array è rimasto nell'incubatore di analizzatori di celle a doppio scopo per 30 minuti, fare clic sul pulsante di riproduzione per avviare la misurazione in background. Al termine della misurazione in background, rimuovere l'array dalla culla e riposizionarlo nella cappa di coltura cellulare. Quindi aggiungere da 30.000 a 50.000 cellule in 100 microlitri di mezzi privi di siero a ciascun pozzetto della camera superiore.Queste sono le cellule che l'elettrodo rileverà una volta che migrano con successo attraverso la membrana. Lasciare riposare il gruppo nella cappa per 30 minuti prima di montarlo sull'analizzatore di celle a doppio scopo per la misurazione dell'impedenza. Riposizionare l'array nell'analizzatore di celle a doppio scopo e controllare la scheda del messaggio per il messaggio Connessioni ok.Fare clic sul pulsante di riproduzione per avviare la misurazione dell'impedenza e quindi fare clic sulla scheda della trama per monitorare l'avanzamento del segnale. Se l'endpoint viene raggiunto prima di 25 ore, fare clic sul passaggio di interruzione dal menu a discesa Esegui. Per esportare i dati, fare clic con il pulsante destro del mouse sul grafico, scegliere Copia nel formato elenco, quindi incollare i dati in un foglio di calcolo.Monitora il tasso di migrazione in tempo reale sull'analizzatore di celle a doppio scopo per determinare il punto di interesse di arresto. Una volta raggiunto, smontare l'assemblaggio dall'analizzatore cellulare a doppio scopo e posizionarlo nella cappa di coltura del tessuto. Preparare un numero appropriato di 1,5 millilitri di tubi di microcentrifuga per raccogliere le cellule dai pozzetti di interesse.Posizionare l'assemblaggio in un piatto di 10 centimetri per contenere liquidi quando le camere si staccano. Spingere le estremità di scatto flessibili sul lato lungo della camera centrale verso l'interno fino a quando non si sente un suono di clic, seguito dallo smantellamento della camera superiore e invertendolo in un nuovo piatto di 10 centimetri. Utilizzare un sollevatore di celle con una lama da 13 millimetri per raccogliere le cellule da tutti i pozzi che ospitano la stessa condizione sperimentale.Risciacquare o immergere la lama in 1X soluzione salina tamponata con fosfato per raccogliere le cellule in tubi microcentrifuga da 1,5 millilitri. Quindi ruotare le cellule a 500 volte G per cinque minuti e propagare queste cellule raccolte o eseguire analisi degli endpoint come il sequenziamento dell'RNA a singola cellula. La valutazione dell'invasione delle cellule in presenza o assenza di cellule stromali ha mostrato che l'invasione cellulare MDA-MB-231 è stata migliorata quando i fibroblasti J2 di Swiss-3T3 irradiati sono stati collocati nella camera inferiore per lo scambio di fattori tra le due linee cellulari.È interessante notare che l'invasione MDA-MB-231 è aumentata quando le celle 3T3 J2 sono state raddoppiate in numero. D'altra parte, il tasso di invasione di un clone invasivo di cellule MCFDCIS, DCIS-Delta Four, sembra essere inibito dalla diafonia con cellule 3T3 J2, suggerendo la preziosa applicazione dell'array a tre camere per misurare i vari effetti dello stroma. In questo caso, fibroblasti sull'invasione cellulare.Le cellule endoteliali della vena ombelicale umana erano più invasive in risposta ai fattori secreti dalle cellule MDA-MB-231, a differenza di quelle secrete dalle cellule DCIS, che è coerente con la capacità dei tumori invasivi di reclutare cellule endoteliali per la formazione dei vasi sanguigni e la successiva diffusione nella circolazione. L'invasione delle cellule di xenotrapianto derivate dal paziente dalla camera superiore è aumentata in risposta alle cellule immunitarie del midollo osseo umano co-coltivate. È interessante notare che la presenza del 2% di siero nella camera inferiore con le cellule immunitarie del midollo osseo umano era essenziale per l'invasione di xenotrapianti derivati dal paziente.I pozzetti possono essere rivestiti con una matrice extracellulare per imitare la barriera della membrana basale. Gli agenti terapeutici possono essere aggiunti ai media nei pozzi per monitorare il loro effetto sull'invasione.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Capture and Release of Viable Circulating Tumor Cells from Blood

Cattura e rilascio di vitali circolanti cellule tumorali del sangue

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasiva comportamento delle cellule cancro al seno umano in Zebrafish embrionali

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

Immunohistochemia di fluorescenza a quattro colori delle sottopopolazioni delle cellule T in campioni di carcinoma a cellule squamose orofaringe umane incorporate in paraffina

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Preparation and Metabolic Assay of 3-dimensional Spheroid Co-cultures of Pancreatic Cancer Cells and Fibroblasts

Preparazione e dosaggio metabolica della sferoide 3-dimensionale co-colture di cellule di cancro del pancreas e dei fibroblasti

Many cancer types, including pancreatic cancer, have a dense fibrotic stroma that plays an important role in tumor progression and invasion. Activated ...

Serum and Plasma Copy Number Detection Using Real-time PCR

Siero e Plasma copia numero rilevazione mediante PCR in tempo reale

Serum and plasma cell free DNA (cfDNA) has been shown as an informative, non-invasive source of biomarkers for cancer diagnosis, prognosis, monitoring, ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Rilevazione in tempo reale nell'apoptosi delle cellule tumorali in Vitro indotta da CD8+ T cellule per studiare funzioni immuni soppressive di tumore-infiltrazione di cellule mieloidi

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

Monitoraggio in tempo reale della migrazione delle cellule del Glioma umano sulle coculture di Asse-Olgon-Oligodendroce

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

Time-Lapse 2D Imaging dell'attività fagocitica in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

Tumor-associated macrophages (TAMs) have been identified as an important component for tumor growth, invasion, metastasis, and resistance to cancer ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Uso combinato dei saggi di metastasi della vena della coda e dell'imaging in vivo in tempo reale per quantificare la colonizzazione metastatica del cancro al seno e il carico nei polmoni

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Misurazione in tempo reale dell'invasione e dell'invasione delle cellule tumorali basata sull'impedimento

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...