Name: routine collection of high-resolution cryo-em datasets using 200 kv transmission electron microscope
Uploaded: 2022-03-16T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope at JoVE.com

<ol>
	<li>Wang, J., Hua, T., Liu, Z. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+features+of+activated+GPCR+signaling+complexes.">Structural features of activated GPCR signaling complexes.</a> Current Opinions in Structural Biology. 63, 82-89 (2020).</li><li>Chen, S., Gouaux, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+AMPA+receptor+-+auxiliary+protein+complexes.">Structure and mechanism of AMPA receptor - auxiliary protein complexes.</a> Current Opinions in Structural Biology. 54, 104-111 (2019).</li><li>K&#252;hlbrandt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanisms+of+F-Type+ATP+synthases.">Structure and mechanisms of F-Type ATP synthases.</a> Annual Review of Biochemistry. 88, 515-549 (2019).</li><li>Laverty, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-EM+structure+of+the+human+&#945;1&#946;3&#947;2+GABA+A+receptor+in+a+lipid+bilayer.">Cryo-EM structure of the human &#945;1&#946;3&#947;2 GABA A receptor in a lipid bilayer.</a> Nature. 565 (7740), 516-520 (2019).</li><li>Liu, F., Zhang, Z., Csan&#225;dy, L., Gadsby, D. C., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+structure+of+the+Human+CFTR+ion+channel.">Molecular structure of the Human CFTR ion channel.</a> Cell. 169 (1), 85-95 (2017).</li><li>Wrapp, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-EM+structure+of+the+2019-nCoV+spike+in+the+prefusion+conformation.">Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation.</a> Science. 367 (6483), 1260-1263 (2020).</li><li>Ke, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+and+distributions+of+SARS-CoV-2+spike+proteins+on+intact+virions.">Structures and distributions of SARS-CoV-2 spike proteins on intact virions.</a> Nature. 588, 498-502 (2020).</li><li>Yan, R., Zhang, Y., Li, Y., Xia, L., Guo, Y., Zhou, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+the+recognition+of+SARS-CoV-2+by+full-length+human+ACE2.">Structural basis for the recognition of SARS-CoV-2 by full-length human ACE2.</a> Science. 367 (6485), 1444-1448 (2020).</li><li>Walls, A. C., Park, Y. -. J., Tortorici, M. A., Wall, A., McGuire, A. T., Veesler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure,+function,+and+antigenicity+of+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein.">Structure, function, and antigenicity of the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> Cell. 180, 281-292 (2020).</li><li>Chiba, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+nanoparticle-based+vaccines+protect+hamsters+against+SARS-CoV-2+after+a+single+immunization.">Multivalent nanoparticle-based vaccines protect hamsters against SARS-CoV-2 after a single immunization.</a> Communications Biology. 4 (1), 597 (2021).</li><li>Nakane, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+cryo-EM+at+atomic+resolution.">Single-particle cryo-EM at atomic resolution.</a> Nature. 587, 152-156 (2020).</li><li>Bai, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+atoms+by+single-particle+Cryo-EM.">Seeing atoms by single-particle Cryo-EM.</a> Trends in Biochemical Sciences. 46 (4), 253-254 (2021).</li><li>Koh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+cryo-EM+at+200kV+enabled+by+Selectris-X+and+Falcon+4.">High-resolution cryo-EM at 200kV enabled by Selectris-X and Falcon 4.</a> Microscience Microscopy Congress 2021. , (2021).</li><li>Herzik, M. A., Wu, M., Lander, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Achieving+better-than-3-&#197;+resolution+by+single-particle+cryo-EM+at+200+keV.">Achieving better-than-3-&#197; resolution by single-particle cryo-EM at 200 keV.</a> Nature Methods. 14 (11), 1075-1078 (2017).</li><li>Herzik, M. A., Wu, M., Lander, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+structure+determination+of+sub-100+kDa+complexes+using+conventional+cryo-EM.">High-resolution structure determination of sub-100 kDa complexes using conventional cryo-EM.</a> Nature Communications. 10 (1), 1032 (2019).</li><li>Wu, M., Lander, G. C., Herzik, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-2+Angstrom+resolution+structure+determination+using+single-particle+cryo-EM+at+200+keV.">Sub-2 Angstrom resolution structure determination using single-particle cryo-EM at 200 keV.</a> Journal of Structural Biology X. 4, 100020-100029 (2020).</li><li>Mori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-Glycoside+metabolism+in+the+gut+and+in+nature:+Identification,+characterization,+structural+analyses+and+distribution+of+C-C+bond-cleaving+enzymes.">C-Glycoside metabolism in the gut and in nature: Identification, characterization, structural analyses and distribution of C-C bond-cleaving enzymes.</a> Nature Communications. 12 (1), 6294 (2021).</li><li>Hamdi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2.7+&#197;+cryo-EM+structure+of+vitrified+M.+musculus+H-chain+apoferritin+from+a+compact+200+keV+cryo-microscope.">2.7 &#197; cryo-EM structure of vitrified M. musculus H-chain apoferritin from a compact 200 keV cryo-microscope.</a> PLoS One. 15 (5), 0232540 (2020).</li><li>Abbott, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMDB+web+resources.">EMDB web resources.</a> Current Protocols in Bioinformatics. 61 (1), 1-12 (2018).</li><li>Punjani, A., Rubinstein, J. L., Fleet, D. J., Brubaker, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CryoSPARC:+algorithms+for+rapid+unsupervised+cryo-EM+structure+determination.">CryoSPARC: algorithms for rapid unsupervised cryo-EM structure determination.</a> Nature Methods. 14 (3), 290-296 (2017).</li><li>Scheres, S. H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RELION:+Implementation+of+a+Bayesian+approach+to+cryo-EM+structure+determination.">RELION: Implementation of a Bayesian approach to cryo-EM structure determination.</a> Journal of Structural Biology. 180 (3), 519-530 (2012).</li><li>G&#243;mez-Blanco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Scipion+for+stream+image+processing+at+Cryo-EM+facilities.">Using Scipion for stream image processing at Cryo-EM facilities.</a> Journal of Structural Biology. 204 (3), 457-463 (2018).</li><li>Tegunov, D., Cramer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+cryo-electron+microscopy+data+preprocessing+with+Warp.">Real-time cryo-electron microscopy data preprocessing with Warp.</a> Nature Methods. 16 (11), 1146-1152 (2019).</li><li>Lander, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appion:+an+integrated,+database-driven+pipeline+to+facilitate+EM+image+processing.">Appion: an integrated, database-driven pipeline to facilitate EM image processing.</a> Journal of Structural Biology. 166 (1), 95-102 (2009).</li><li>Carragher, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+outcomes+when+optimizing+'standard'+sample+preparation+for+single-particle+cryo-EM.">Current outcomes when optimizing 'standard' sample preparation for single-particle cryo-EM.</a> Journal of Microscopy. 276 (1), 39-45 (2019).</li><li>Drulyte, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+altering+particle+distributions+in+cryo-electron+microscopy+sample+preparation.">Approaches to altering particle distributions in cryo-electron microscopy sample preparation.</a> Acta Crystallographica. Section D, Structural Biology. 74 (6), 560-571 (2018).</li><li>Bloch, M., Santiveri, M., Taylor, N. M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+protein+Cryo-EM:+Cryo-grid+optimization+and+data+collection+with+protein+in+detergent.">Membrane protein Cryo-EM: Cryo-grid optimization and data collection with protein in detergent.</a> Methods in Molecular Biology. 2127, 227-244 (2020).</li><li>Cheng, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leginon:+New+features+and+applications.">Leginon: New features and applications.</a> Protein Science. 30 (1), 136-150 (2021).</li><li>Schorb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Software+tools+for+automated+transmission+electron+microscopy.">Software tools for automated transmission electron microscopy.</a> Nature Methods. 16 (6), 471-477 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+counting+and+beam-induced+motion+correction+enable+near-atomic-resolution+single-particle+cryo-EM.">Electron counting and beam-induced motion correction enable near-atomic-resolution single-particle cryo-EM.</a> Nature Methods. 10 (6), 584-590 (2013).</li><li>Alewijnse, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+managing+large+CryoEM+facilities.">Best practices for managing large CryoEM facilities.</a> Journal of Structural Biology. 199, 225-236 (2017).</li><li>Baldwin, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Big+data+in+cryoEM:+automated+collection,+processing+and+accessibility+of+EM+data.">Big data in cryoEM: automated collection, processing and accessibility of EM data.</a> Current Opinion in Microbiology. 43, 1-8 (2018).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron-event+representation+data+enable+efficient+cryoEM+file+storage+with+full+preservation+of+spatial+and+temporal+resolution.">Electron-event representation data enable efficient cryoEM file storage with full preservation of spatial and temporal resolution.</a> International Union of Crystallography Journal. 7, 860-869 (2020).</li><li>Weis, F., Hagen, W. J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+high+throughput+and+high+quality+for+cryo-electron+microscopy+data+collection.">Combining high throughput and high quality for cryo-electron microscopy data collection.</a> Acta Crystallographica. Section D, Structural Biology. 76 (8), 724-728 (2020).</li><li>Zhou, H., Chiu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+icosahedral+virus+structures+by+electron+cryomicroscopy+at+subnanometer+resolution.">Determination of icosahedral virus structures by electron cryomicroscopy at subnanometer resolution.</a> Advances in Protein Chemistry. 64, 93-124 (2005).</li><li>DeRosier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+high-resolution+data+for+curvature+of+the+Ewald+sphere.">Correction of high-resolution data for curvature of the Ewald sphere.</a> Ultramicroscopy. 81 (2), 83-98 (2000).</li><li>Wolf, M., DeRosier, D. J., Grigorieff, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ewald+sphere+correction+for+single-particle+electron+microscopy.">Ewald sphere correction for single-particle electron microscopy.</a> Ultramicroscopy. 106 (4-5), 376-382 (2006).</li><li>Leong, P. A., Yu, X., Hong Zhou, Z., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+for+the+ewald+sphere+in+high-resolution+single-particle+reconstructions.">Correcting for the ewald sphere in high-resolution single-particle reconstructions.</a> Methods in Enzymology. 482, 369-380 (2010).</li><li>Zivanov, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+tools+for+automated+high-resolution+cryo-EM+structure+determination+in+RELION-3.">New tools for automated high-resolution cryo-EM structure determination in RELION-3.</a> eLife. 7, 42166 (2018).</li></ol>

ولا يفيد ساجار خافنكار بأي تضارب في المصالح. المؤلفون الآخرون هم موظفون في Thermo Fisher Scientific ، قسم MSD-EM.

يعد تحديد بنية البروتين أمرا بالغ الأهمية لفهم البنية الجزيئية والوظيفة وتنظيم مجمعات البروتين المشاركة في العمليات الخلوية الرئيسية ، مثل استقلاب الخلايا أو نقل الإشارة أو التفاعلات بين المضيف والممرض. برز المجهر الإلكتروني المبرد (cryo-EM) كتقنية قوية قادرة على حل بنية 3D للعديد من البروتينات ومجمعاتها التي كانت صعبة للغاية بالنسبة للتقنيات الهيكلية التقليدية ، مثل حيود الأشعة السينية والتحليل الطيفي للرنين المغناطيسي النووي. على وجه الخصوص ، تم إثبات cryo-EM كطريقة مفضلة لبروتينات الغشاء ، والتي لا يمكن تبلورها بسهولة أو إعدادها بكميات كافية للتقنيات الهيكلية التقليدية ، وقدمت رؤى جديدة في بنية ووظيفة المستقبلات الخلوية الهامة والقنوات الأيونية1،2،3،4،5 . وفي الآونة الأخيرة، لعب نظام cryo-EM دورا مهما في مكافحة جائحة كوفيد-19 من خلال تحديد آلية عدوى SARS-CoV-2 على المستوى الجزيئي، والتي أوضحت أصول مرض كوفيد-19 ووفرت الأساس للتطوير السريع للقاحات والعلاجات الفعالة6،7،8،9،10.
عادة ما يتم استخدام المجاهر الإلكترونية الناقلة المتطورة 300 كيلو فولت (TEM) لتحديد بنية عالية الدقة للجزيئات الحيوية عن طريق تحليل الجسيمات المفردة بالتبريد EM (SPA) للكشف عن تشكيلها وتفاعلاتها. في الآونة الأخيرة ، وصلت تقنية SPA إلى حدود جديدة عندما أعيد بناء عينة التبريد EM القياسية الشائعة apo-ferritin بدقة ذرية (1.2 Å) 11,12 باستخدام TEM 300-kV المجهز بمسدس انبعاث المجال البارد (E-CFEG) ، وكاشف إلكترون مباشر ، ومرشح طاقة. في هذا القرار ، كان من الممكن حل مواقع الذرات الفردية في الهيكل بشكل لا لبس فيه ، وتشكيل سلاسل جانبية فردية من الأحماض الأمينية ، وكذلك الترابط الهيدروجيني والتفاعلات الأخرى ، والتي تفتح إمكانيات جديدة لاكتشاف الأدوية القائمة على الهيكل لأهداف جديدة وتحسين الأدوية المرشحة الحالية.
غالبا ما تستخدم مجاهر TEM متوسطة المدى 200 كيلو فولت لفحص العينات وتحسين العينات قبل جمع البيانات النهائية عالية الدقة باستخدام مجاهر TEM المتطورة ، خاصة في مرافق التبريد EM الأكبر. عادة ، يمكن حل العينات المصورة في نطاق الدقة 3-4 Å الكافي للانتقال إلى TEM متطور 300 كيلو فولت لجمع البيانات النهائية. وبالتالي ، فإن جمع البيانات باستخدام TEM 200 كيلو فولت غالبا ما لا يتم تحسينه بشكل أكبر للحصول على أعلى نتائج دقة ممكنة. علاوة على ذلك ، يمكن بالفعل الإجابة على العديد من الأسئلة البيولوجية المثيرة للاهتمام ونشرها في هذه القرارات حيث تم بالفعل حل جميع سلاسل الأحماض الأمينية الجانبية ، ويمكن أيضا تحديد شغل مواقع ربط الليغاند بشكل موثوق13. وقد تبين بالفعل أن TEMs 200-kV يمكن أن تصل إلى دقة تتجاوز 3 Å للعديد من العينات14،15،16،17،18. تظهر الصور الملتقطة عند 200 كيلو فولت تباينا أعلى بطبيعته للجسيمات المصورة، مما قد يسهل حتى المحاذاة الأولية الأكثر دقة للجسيمات على الرغم من الإشارة الأكثر ضعفا بدقة عالية مقارنة بصور TEM 300 كيلو فولت. ومن المهم ملاحظة أن الدقة المحققة لخرائط التبريد EM المعاد بناؤها محدودة أيضا بالمرونة الهيكلية وعدم التجانس التوافقي للعينات المصورة، مما يؤثر على كل من عمليات إعادة الإعمار بجهد 200 كيلوفولت و300 كيلوفولت. في الواقع ، تم حل المزيد من عمليات إعادة بناء cryo-EM التي تم الحصول عليها باستخدام أنظمة 300-kV في نطاق الدقة 3-4 Å مقارنة بالدقة الأعلى19. نظرا لأن مجاهر TEM 200 kV أقل تعقيدا وتتناسب مع غرف أصغر ، فإن هذه المجاهر تمثل خيارا جيدا وأقل تكلفة لتحديد بنية الجزيئات البيولوجية الكبيرة بواسطة cryo-EM مع الحفاظ على أتمتة مجموعات البيانات الطويلة من عينات متعددة مخزنة داخل نظام Autoloader المجهري.
يتطلب جمع مجموعات بيانات cryo-EM لتحديد البنية عالية الدقة محاذاة دقيقة لبصريات المجهر. تنتقل محاذاة الأعمدة بشكل منهجي من مصدر الإلكترون وصولا إلى نظام عدسة المكثف والعدسة الموضوعية ومرشح الطاقة باستخدام كاشف الإلكترون. التسلسل الكامل للمحاذاة ليس مطلوبا عادة. عند الحاجة، يتم توجيه المستخدم عبر إجراءات شبه آلية مع وصف مناسب لكل خطوة في نافذة مساعدة واعية بالسياق طوال إجراء المحاذاة في واجهة مستخدم المجهر (لوحة تحكم المحاذاة المباشرة). بمجرد محاذاة المجهر بالكامل ، تظل البصريات الإلكترونية مستقرة ، ولا تحتاج المحاذاة إلى تغيير لبضعة أشهر على الأقل. يجب فقط تنقيح المحاذاة الأكثر حساسية، مثل الإضاءة المتوازية لمستوى العينة، والاستجماتيزم الموضوعي، والمحاذاة الخالية من الغيبوبة، قبل البدء في جمع كل مجموعة بيانات. يمكن بعد ذلك مراقبة جودة البيانات التي تم جمعها أثناء جمع البيانات باستخدام حزم برامج مختلفة ، مثل EPU Quality Monitor أو cryoSPARC Live 20 أو Relion 21 أو Scipion 22 أو WARP 23 أو Appion 24.
إلى جانب المحاذاة الدقيقة للمجهر ، فإن الجودة العالية للعينات النقية جيدا مع الحد الأدنى من عدم التجانس التوافقي والتركيبي هي أيضا شرط أساسي لجمع مجموعات البيانات عالية الدقة وحل الهياكل عالية الدقة. يمكن العثور على مزيد من التفاصيل حول البروتوكولات النموذجية والتحديات المتكررة والعلاجات المحتملة في مراجعات أخرى مخصصة لهذا الموضوع 25،26،27. في الأساس ، من الأهمية بمكان العثور على مناطق على شبكة cryo-EM معينة تحتوي على جليد رقيق بما فيه الكفاية للحفاظ على معلومات عالية الدقة ، ويتم توزيع الجسيمات الفردية بكثافة في اتجاهات عشوائية دون تداخلات. ومع ذلك ، فإن شبكات cryo-EM النموذجية لها سمك جليد غير موحد ، وبالتالي من المهم العثور على المناطق المثلى للتصوير واختيارها. تتوفر وسائل مختلفة لتقدير سمك الجليد على الشبكة في حزم البرامج المخصصة للجمع الآلي لمجموعات بيانات cryo-EM ، مثل EPU 2 أو Leginon28 أو SerialEM29.
مكن ظهور كاشفات الإلكترونات المباشرة السريعة والحساسة من جمع الصور في العديد من الكسور كأفلام مكنت من تعويض الحركات التي يسببها الحزم وأدت إلى زيادة كبيرة في جودة وكمية البيانات المستخدمة في معالجة الصور وإعادة الإعمار النهائي ثلاثي الأبعاد30. وفي الوقت نفسه، توفر الأتمتة وجمع البيانات عالية الإنتاجية مجموعات بيانات ضخمة مع آلاف الصور/الأفلام التي تمثل تحديات لتخزين البيانات والوصول إليها. النموذج المعتمد مع مرافق cryo-EM الكبيرة التي تخدم عشرات إلى مئات المستخدمين يدعو بشكل خاص إلى إدارة البيانات المنظمة مع التتبع السليم ومشاركة البيانات في خطوط أنابيب cryo-EM المنشأة31,32.
تصف هذه الدراسة بروتوكولا للجمع الروتيني لمجموعات بيانات cryo-EM عالية الدقة باستخدام مجهر Glacios TEM 200 كيلو فولت. يتم وصف المحاذاة اللازمة لبصريات المجهر جنبا إلى جنب مع إجراءات تقييم عينات cryo-EM واختيار المناطق المناسبة لجمع البيانات عالية الدقة. يتم عرض تنظيم البيانات التي تم جمعها والبيانات الوصفية ذات الصلة مع معلومات العينة في أثينا - وهي منصة لإدارة البيانات تسهل مراجعة معلومات العينة والبيانات التي تم جمعها. باستخدام عينة الماوس apo-ferritin ، كان من الممكن تحقيق إعادة بناء ثلاثية الأبعاد بدقة 1.6 Å13. باستخدام البروتوكول الموصوف ، قمنا أيضا بإعادة بناء خريطة الكثافة ثلاثية الأبعاد للبروتيازوم 20S من Thermoplasma acidophilum بدقة 2.1 Å.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AutoGrid rings</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1036173</td>
			<td>Package of 100x AutoGrid rings for the standard EM grids.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C-Clip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1036171</td>
			<td>Package of 100 clips that secure 
			the standard EM grids inside the AutoGrid rings.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Management Platform</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1160939</td>
			<td>Part of the Glacios base configuraiton; includes Athena Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPU Quality Monitor</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1179770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPU Software</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1025080</td>
			<td>Part of the Glacios base configuration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane 3.5</td>
			<td>Westfalen</td>
			<td>A06010110</td>
			<td>Ethane gas used for making liquid ethane (puritiy at least N35, i.e. 99.95% vol)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 4 200kV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1166936</td>
			<td>Direct electron detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacios</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1149551</td>
			<td>200 kV TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloQube Plus Glow Discharge System for TEM Grids and surface modification</td>
			<td>Quorum</td>
			<td>N/A</td>
			<td>also available via Thermo Fisher Scientific (PN 1160602)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantiFoil grids</td>
			<td>Quantifoil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>R-2/1, 300 mesh; carbon foil grid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relion</td>
			<td>MRC Laboratory of Molecular Biology</td>
			<td>N/A</td>
			<td>open source software: 
			https://relion.readthedocs.io/en/release-3.1/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selectris with Falcon 
			4 for 200 kV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1191753</td>
			<td>Energy filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selectris X with Falcon 
			4 for 200 kV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1191755</td>
			<td>Energy filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltrAuFoil grids</td>
			<td>Quantifoil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>R-1.2/1.2, 300 mesh; gold foil grids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrobot Mk. IV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1086439</td>
			<td>Automated vitrification system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman 595 filter paper</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AA00420S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

routine collection of high-resolution cryo-em datasets using 200 kv transmission electron microscope

تم إنشاء المجهر الإلكتروني المبرد (cryo-EM) كطريقة روتينية لتحديد بنية البروتين خلال العقد الماضي ، مع أخذ حصة متزايدة باستمرار من البيانات الهيكلية المنشورة. أدت التطورات الحديثة في تكنولوجيا TEM والأتمتة إلى تعزيز كل من سرعة جمع البيانات وجودة الصور التي تم الحصول عليها مع تقليل المستوى المطلوب من الخبرة للحصول على خرائط cryo-EM بدقة sub-3 Å. في حين تم الحصول على معظم هذه الهياكل عالية الدقة باستخدام أحدث أنظمة التبريد 300 كيلو فولت ، يمكن أيضا الحصول على هياكل عالية الدقة باستخدام أنظمة التبريد TEM 200 كيلو فولت ، خاصة عندما تكون مجهزة بمرشح طاقة. بالإضافة إلى ذلك، فإن أتمتة محاذاة المجهر وجمع البيانات مع تقييم جودة الصورة في الوقت الفعلي تقلل من تعقيد النظام وتضمن إعدادات المجهر المثلى، مما يؤدي إلى زيادة إنتاجية الصور عالية الجودة والإنتاجية الإجمالية لجمع البيانات. يوضح هذا البروتوكول تنفيذ التطورات التكنولوجية الحديثة وميزات الأتمتة على مجهر إلكتروني لنقل التبريد بجهد 200 كيلو فولت ويوضح كيفية جمع البيانات لإعادة بناء الخرائط ثلاثية الأبعاد التي تكفي لبناء نموذج ذري جديد . نحن نركز على أفضل الممارسات والمتغيرات الحرجة والقضايا الشائعة التي يجب مراعاتها لتمكين الجمع الروتيني لمجموعات بيانات cryo-EM عالية الدقة. يتم استعراض الموضوعات الأساسية التالية بالتفصيل على وجه الخصوص: i) أتمتة محاذاة المجهر ، ii) اختيار المناطق المناسبة للحصول على البيانات ، iii) المعلمات البصرية المثلى لجمع البيانات عالية الجودة وعالية الإنتاجية ، iv) ضبط مرشح الطاقة للتصوير بدون خسارة ، و v) إدارة البيانات وتقييم الجودة. سيتم عرض تطبيق أفضل الممارسات وتحسين الدقة القابلة للتحقيق باستخدام مرشح الطاقة على مثال apo-ferritin الذي أعيد بناؤه إلى 1.6 Å ، و Thermoplasma acidophilum 20S proteasome المعاد بناؤه إلى دقة 2.1-Å باستخدام TEM 200 kV المجهز بمرشح طاقة وكاشف إلكترون مباشر.

Watch this Scientific Journal Video about Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope at JoVE.com

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

يمكن أيضا تحقيق خرائط cryo-EM عالية الدقة للجزيئات الكبيرة باستخدام مجاهر TEM 200 kV. يعرض هذا البروتوكول أفضل الممارسات لوضع محاذاة بصريات دقيقة ، ومخططات الحصول على البيانات ، واختيار مناطق التصوير التي تعد جميعها ضرورية للجمع الناجح لمجموعات البيانات عالية الدقة باستخدام TEM 200 كيلو فولت.

الجمع الروتيني لمجموعات بيانات التبريد EM عالية الدقة باستخدام المجهر الإلكتروني الناقل 200 كيلو فولت

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

أصبح Cryo-EM تقنية قياسية لتحديد بنية البروتينات ومجمعاتها. يصف هذا البروتوكول أفضل الممارسات المتعلقة بكيفية الحصول على مجموعات بيانات Cryo-EM عالية الدقة من مجاهر TEM متوسطة المدى 200 كيلو فولت. يمكن ل Cryo-EM تحديد بنية البروتين في ظروف قريبة من الأصل في محلول لحالات توافقية متعددة وحالات وظيفية في وقت واحد ، وهو أمر بعيد المنال بالنسبة للتقنيات الهيكلية الأخرى.يمكن استخدام المعلومات الهيكلية التي تم الحصول عليها لتوضيح الآليات الجزيئية لوظيفة البروتين ، وكذلك لتصميم الأدوية القائمة على الهيكل. على سبيل المثال ، كشف منشور حديث في بنية ألياف الأميلويد عن مواقع ربط متعددة للرباط الحيوي. ومع ذلك ، في هذا البروتوكول ، نستخدم العينات القياسية من الأبوفيريتين والبروتيازوم لإظهار الخطوات الحاسمة في الحصول على بيانات Cryo-EM عالية الدقة.أصبح تشغيل Cryo-TEM أكثر سهولة على مدار السنوات الماضية ، خاصة بسبب إدخال ميزات الأتمتة المتقدمة. ومع ذلك ، بالنسبة للجلسة الأولى ، ننصحك بالحصول على تدريب مع مستخدمين أكثر خبرة. من هناك ، فإن التقدم في هذه التقنية سريع نسبيا.سيوضح الإجراء أدريان كوه ، وهو عالم تطبيقات كبير في Thermo Fisher Scientific. أدخل شبكات تلقائية في علبة اللودر التلقائي تحت ظروف النيتروجين السائل. أدخل الكاسيت مع شبكات السيارات في كبسولة نقل مبردة بالنيتروجين السائل.أدخل الكبسولة في المجهر وانقر على زر Dock في واجهة مستخدم المجهر لتحميل الكاسيت من الكبسولة إلى اللودر التلقائي للمجهر. انقر فوق الزر "المخزون" للتحقق من وجود شبكات تلقائية في الكاسيت المحمل. ثم انقر فوق أزرار التحميل وإلغاء التحميل لإدراج الشبكات التلقائية في العمود لتصوير TEM.حدد علامة التبويب أطلس وانقر على زر جلسة جديدة لفتح جلسة جديدة. املأ التفاصيل مثل اسم الجلسة وموقع تخزين البيانات وانقر فوق الزر تطبيق. حدد الشبكات ذات الأهمية عن طريق تحديد خانة اختيار بجوار رقم الشبكة المقابل.انقر فوق الزر ابدأ لبدء مجموعة مؤتمتة بالكامل من أطالس جميع الشبكات المحددة. عند اكتمال المجموعة ، انقر فوق ملصقات الشبكة لمراجعة الأطالس المكتسبة. حدد علامة التبويب EPU وانتقل إلى جلسة جديدة لإنشاء جلسة جديدة في اللوحة اليمنى.حدد خيار جلسة عمل جديدة لاستخدام الإعدادات البصرية المسبقة الحالية المحددة. املأ اسم الجلسة. حدد النوع اليدوي للجلسة للتحكم في تحديد الثقوب الفردية ومربعات الشبكة المحددة لجمع البيانات لاحقا في البروتوكول.حدد وضع الاكتساب الأسرع لاستخدام تحويل الصور الخالي من الانحراف لجمع البيانات. ثم أدخل الموقع لحفظ البيانات الوصفية. انقر فوق الزر "تطبيق" لإنشاء جلسة جديدة.حدد مهمة تحديد المربع في اللوحة اليمنى لإظهار الأطلس الذي تم جمعه للشبكة. حدد مربعات الشبكة باستخدام رقائق دعم سليمة دون تلف ، وثقوب رقيقة من الجليد الزجاجي والرقائق ، وتلوث الجليد البلوري الضئيل في مربع الشبكة والحد الأدنى من تدرج السطوع عبر مربع الشبكة وداخل ثقوب الرقائق الفردية. حدد مربعات الشبكة لجمع البيانات، إما في الأطلس الكامل أو صور التجانب عالية الجودة.انقر بزر الماوس الأيمن فوق مربع شبكة ذي أهمية واختر مهمة التحديد بأكملها. انقر فوق الزر Auto Eucentric للانتقال تلقائيا إلى مربع الشبكة المحدد الأول. اضبط الارتفاع المتمركز والحصول على صورة مربعة للشبكة للعثور على ثقوب الرقائق.انقر فوق الزر "البحث عن ثقوب" للعثور على ثقوب الرقائق في الصورة. انقر فوق الزر إزالة الثقوب لإغلاق زر شريط الشبكة لإلغاء تحديد الثقوب بالقرب من أشرطة الشبكة. اضبط الحدود في الرسم البياني للسطوع لمرشح الجليد لإزالة جميع الثقوب ذات الجليد السميك جدا وجميع الثقوب الفارغة.انقر بزر الماوس الأيمن فوق ثقب في صورة مربع الشبكة وحدد مرحلة نقل إلى مرحلة نقل الموقع هنا. حدد مهمة تعريف القالب في اللوحة اليمنى. انقر فوق الزر "اكتساب" للحصول على صورة كاملة.اضبط قيم التأخير بعد إزاحة الصورة على 0.5 ثانية والتأخير بعد إزاحة المرحلة على خمس ثوان. انقر فوق الزر "البحث عن ثقب وتوسيطه" لتوسيط ثقب في الصورة. حدد الزر "إضافة منطقة استحواذ" وانقر على الصورة لتحديد الموقع في الحفرة المركزية حيث سيتم التقاط صورة عالية التكبير.حدد الزر إضافة منطقة تركيز تلقائي وانقر على الصورة لتحديد الموقع على رقاقة الدعم بجوار الفتحة المركزية حيث سيتم تنفيذ التركيز التلقائي للصورة. انقر فوق منطقة الاستحواذ الخضراء لتعيين سلسلة من قيم إلغاء التركيز البؤري في قائمة إلغاء التركيز البؤري في القسم العلوي من نافذة البرنامج. بعد تعيين الإعدادات الخاصة بالتركيز البؤري التلقائي، حدد الخيار بعد التوسيط للتركيز البؤري التلقائي في بداية كل مجموعة AFIS.اختر الخيار Objective Lens للحصول على تركيز بؤري تلقائي أسرع وتقليل انحراف المرحلة. انقر فوق الزر إعداد جميع المربعات في مهمة تحديد الثقب لتعيين جمع البيانات وجميع مربعات الشبكة المحددة الأخرى تلقائيا وفقا للإعدادات المستخدمة في مربع الشبكة الأول هذا. حدد مهمة تعريف القالب ، واحصل على صورة جديدة ، وانقل المرحلة إلى منطقة نظيفة على رقائق الكربون بالنقر بزر الماوس الأيمن وحدد خيار القائمة نقل المرحلة هنا.حدد علامة التبويب الوظائف التلقائية. بعد تعيين إلغاء التركيز البؤري والتكرار المطلوبين ، قم بالتبديل إلى الإعداد المسبق للتركيز البؤري التلقائي وانقر فوق زر البدء لتشغيل وظيفة التركيز البؤري التلقائي. حدد مهمة Autostigmate ، وقم بالتبديل إلى الإعداد المسبق ل Thon Ring واضغط على زر البدء .حدد مهمة Autocoma واضغط على زر البدء ( Start) . نقل المرحلة إلى منطقة بها مربع شبكة مكسور. تأكد من شفافية المساحة من خلال التقاط صورة تركيز بؤري تلقائي واحدة.افتح واجهة مستخدم Sherpa وحدد تطبيق فلتر الطاقة. انقر فوق الزر "مركز" وخيار "صفر فقدان" لتوسيط شق مرشح الطاقة صفر الخسارة. انقر فوق الزر Tune في خيار isoochmaticity.انقر على خيار تكبير اللحن وتشوهات اللحن في التشوهات الهندسية واللونية. انتقل إلى علامة التبويب EPU ، وحدد مهمة الاستحواذ التلقائي وانقر فوق الزر "بدء التشغيل" لبدء جمع البيانات المؤتمتة بالكامل. يوضح الشكل شبكات Cryo-EM التي تعرض تدرجا من سمك الجليد على سطح الشبكة.الشبكات المستبعدة من التحقيق الإضافي هي شبكة سيئة ذات جليد سميك وشبكة منحنية ذات جليد سيئ وتلوث ، في حين أن الشبكات المقبولة هي تلك ذات التدرج الجليدي الجيد والشبكة النموذجية ذات الجليد الرقيق الجيد والتدرج الجليدي الصغير. يوضح الشكل العرض النهائي 3D لخريطة apoferritin Cryo-EM المعاد بناؤها. إن الثبات والتماثل العاليين يجعلانها عينة معيارية مثالية لتصوير Cryo-EM عالي الدقة ومعالجة الصور.أدى تلميع بايزي ، وتحسين CTF ، وتصحيح كرة Ewald إلى خريطة دقة 1.63 angstrom. يوضح الشكل عرضا مفصلا لخريطة apoferritin Cryo-EM المعاد بناؤها على مستوى السلسلة الجانبية الفردية للأحماض الأمينية. يتم حل كثافة سلاسل جانب الأحماض الأمينية بشكل جيد ويمكن بناء النموذج الذري بشكل لا لبس فيه داخل الخريطة.تظهر الصورة هنا مجموعتين مختلفتين من البيانات بقيم مختلفة لإلغاء التركيز البؤري تم جمعها من نفس شبكة Cryo-EM مع مربعات شبكة مماثلة مع شق مفتوح بالكامل وشق 10 إلكترون فولت مما يشير إلى أن شق 10 إلكترون فولت يحسن بشكل كبير من تباين الصورة. يوضح الشكل الوارد هنا نظرة عامة على خريطة Cryo-EM البروتيازوم 20S مع وحدات فرعية مجزأة تستخدم كعينة Cryo-EM قياسية. وتمثل طريقة العرض المكبرة مع نموذج ذري مجهز النواة الحفازة المستقرة لمجمع البروتيازوم مع تناظر D7.يحتوي البروتوكول على خطوتين حاسمتين. الأول ، البحث عن مناطق ذات جليد زجاجي رقيق يحتوي على جزيئات متجانسة. وثانيا، إعداد إضاءة متوازية للحصول على البيانات.مع إعادة بناء البروتينات عالية الدقة التي تحقق اثنين إلى ثلاثة أنغستروم في الدقة ، فأنت أكثر قدرة على فهم الآليات الجزيئية للمرض وتحسين خيوط الدواء. في السابق ، كان التبلور ضروريا إذا كنت ترغب في دراسة الأساس الهيكلي للظواهر البيولوجية. اليوم مع Cryo-EM ، لم يعد ذلك ضروريا.وهكذا مع Cryo-EM ، نمكن العلماء من دراسة مجموعة واسعة من الظواهر البيولوجية على المستوى الهيكلي.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method to Visualize and Analyze Membrane Interacting Proteins by Transmission Electron Microscopy

طريقة لتصور وتحليل غشاء متبادلة البروتينات التي نقل المجهر

Monotopic proteins exert their function when attached to a membrane surface, and such interactions depend on the specific lipid composition and on the ...

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

عالية الدقة تحليل الجسيمات واحد من البريد الإلكتروني المجهر الصور باستخدام سفير

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Cryo-EM and Single-Particle Analysis with Scipion

Cryo-EM وتحليل الجسيمات المفردة مع Scipion

Cryo-electron microscopy has become one of the most important tools in biological research to reveal the structural information of macromolecules at ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

إعداد عينات من أفلام الدعم في المجهر الإلكترون الإرسال باستخدام كتلة دعم التعويم

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Preparing Lamellae from Vitreous Biological Samples Using a Dual-Beam Scanning Electron Microscope for Cryo-Electron Tomography

تحضير الصفائح من العينات البيولوجية الزجاجية باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح ثنائي الحزمة للتصوير المقطعي الإلكتروني بالتبريد

Presented here is a protocol for preparing cryo-lamellae from plunge-frozen grids of Plasmodium falciparum-infected&#160;human erythrocytes, which could ...

Preparation of High-Temperature Sample Grids for Cryo-EM

إعداد شبكات عينات ذات درجة حرارة عالية ل Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, ...

Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows

شبكات المجهر الإلكتروني للإرسال بالنمط المجهري لتحديد مواقع الخلايا مباشرة ضمن سير عمل التصوير المقطعي بالتبريد والإلكترون للخلية الكاملة

Whole-cell cryo-electron tomography (cryo-ET) is a powerful technology that is used to produce nanometer-level resolution structures of macromolecules ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

القياس الكمي لتوزيع الجليكوجين تحت الخلوي في ألياف العضلات الهيكلية باستخدام المجهر الإلكتروني الناقل

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy (cryo-EM) Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy cryo-EM Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

سير عمل قوي لمعالجة المجهر الإلكتروني المبرد أحادي الجسيمات (cryo-EM) باستخدام cryoSPARC و RELION و Scipion

Recent advances in both instrumentation and image processing software have made single-particle cryo-electron microscopy (cryo-EM) the preferred method ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

تطوير التصوير عالي الدقة لتجميعات الفيروسات في السائل والجليد

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...