Name: routine collection of high-resolution cryo-em datasets using 200 kv transmission electron microscope
Uploaded: 2022-03-16T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope at JoVE.com

<ol>
	<li>Wang, J., Hua, T., Liu, Z. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+features+of+activated+GPCR+signaling+complexes.">Structural features of activated GPCR signaling complexes.</a> Current Opinions in Structural Biology. 63, 82-89 (2020).</li><li>Chen, S., Gouaux, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+AMPA+receptor+-+auxiliary+protein+complexes.">Structure and mechanism of AMPA receptor - auxiliary protein complexes.</a> Current Opinions in Structural Biology. 54, 104-111 (2019).</li><li>K&#252;hlbrandt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanisms+of+F-Type+ATP+synthases.">Structure and mechanisms of F-Type ATP synthases.</a> Annual Review of Biochemistry. 88, 515-549 (2019).</li><li>Laverty, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-EM+structure+of+the+human+&#945;1&#946;3&#947;2+GABA+A+receptor+in+a+lipid+bilayer.">Cryo-EM structure of the human &#945;1&#946;3&#947;2 GABA A receptor in a lipid bilayer.</a> Nature. 565 (7740), 516-520 (2019).</li><li>Liu, F., Zhang, Z., Csan&#225;dy, L., Gadsby, D. C., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+structure+of+the+Human+CFTR+ion+channel.">Molecular structure of the Human CFTR ion channel.</a> Cell. 169 (1), 85-95 (2017).</li><li>Wrapp, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-EM+structure+of+the+2019-nCoV+spike+in+the+prefusion+conformation.">Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation.</a> Science. 367 (6483), 1260-1263 (2020).</li><li>Ke, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+and+distributions+of+SARS-CoV-2+spike+proteins+on+intact+virions.">Structures and distributions of SARS-CoV-2 spike proteins on intact virions.</a> Nature. 588, 498-502 (2020).</li><li>Yan, R., Zhang, Y., Li, Y., Xia, L., Guo, Y., Zhou, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+the+recognition+of+SARS-CoV-2+by+full-length+human+ACE2.">Structural basis for the recognition of SARS-CoV-2 by full-length human ACE2.</a> Science. 367 (6485), 1444-1448 (2020).</li><li>Walls, A. C., Park, Y. -. J., Tortorici, M. A., Wall, A., McGuire, A. T., Veesler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure,+function,+and+antigenicity+of+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein.">Structure, function, and antigenicity of the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> Cell. 180, 281-292 (2020).</li><li>Chiba, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+nanoparticle-based+vaccines+protect+hamsters+against+SARS-CoV-2+after+a+single+immunization.">Multivalent nanoparticle-based vaccines protect hamsters against SARS-CoV-2 after a single immunization.</a> Communications Biology. 4 (1), 597 (2021).</li><li>Nakane, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+cryo-EM+at+atomic+resolution.">Single-particle cryo-EM at atomic resolution.</a> Nature. 587, 152-156 (2020).</li><li>Bai, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+atoms+by+single-particle+Cryo-EM.">Seeing atoms by single-particle Cryo-EM.</a> Trends in Biochemical Sciences. 46 (4), 253-254 (2021).</li><li>Koh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+cryo-EM+at+200kV+enabled+by+Selectris-X+and+Falcon+4.">High-resolution cryo-EM at 200kV enabled by Selectris-X and Falcon 4.</a> Microscience Microscopy Congress 2021. , (2021).</li><li>Herzik, M. A., Wu, M., Lander, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Achieving+better-than-3-&#197;+resolution+by+single-particle+cryo-EM+at+200+keV.">Achieving better-than-3-&#197; resolution by single-particle cryo-EM at 200 keV.</a> Nature Methods. 14 (11), 1075-1078 (2017).</li><li>Herzik, M. A., Wu, M., Lander, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+structure+determination+of+sub-100+kDa+complexes+using+conventional+cryo-EM.">High-resolution structure determination of sub-100 kDa complexes using conventional cryo-EM.</a> Nature Communications. 10 (1), 1032 (2019).</li><li>Wu, M., Lander, G. C., Herzik, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-2+Angstrom+resolution+structure+determination+using+single-particle+cryo-EM+at+200+keV.">Sub-2 Angstrom resolution structure determination using single-particle cryo-EM at 200 keV.</a> Journal of Structural Biology X. 4, 100020-100029 (2020).</li><li>Mori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-Glycoside+metabolism+in+the+gut+and+in+nature:+Identification,+characterization,+structural+analyses+and+distribution+of+C-C+bond-cleaving+enzymes.">C-Glycoside metabolism in the gut and in nature: Identification, characterization, structural analyses and distribution of C-C bond-cleaving enzymes.</a> Nature Communications. 12 (1), 6294 (2021).</li><li>Hamdi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2.7+&#197;+cryo-EM+structure+of+vitrified+M.+musculus+H-chain+apoferritin+from+a+compact+200+keV+cryo-microscope.">2.7 &#197; cryo-EM structure of vitrified M. musculus H-chain apoferritin from a compact 200 keV cryo-microscope.</a> PLoS One. 15 (5), 0232540 (2020).</li><li>Abbott, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMDB+web+resources.">EMDB web resources.</a> Current Protocols in Bioinformatics. 61 (1), 1-12 (2018).</li><li>Punjani, A., Rubinstein, J. L., Fleet, D. J., Brubaker, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CryoSPARC:+algorithms+for+rapid+unsupervised+cryo-EM+structure+determination.">CryoSPARC: algorithms for rapid unsupervised cryo-EM structure determination.</a> Nature Methods. 14 (3), 290-296 (2017).</li><li>Scheres, S. H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RELION:+Implementation+of+a+Bayesian+approach+to+cryo-EM+structure+determination.">RELION: Implementation of a Bayesian approach to cryo-EM structure determination.</a> Journal of Structural Biology. 180 (3), 519-530 (2012).</li><li>G&#243;mez-Blanco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Scipion+for+stream+image+processing+at+Cryo-EM+facilities.">Using Scipion for stream image processing at Cryo-EM facilities.</a> Journal of Structural Biology. 204 (3), 457-463 (2018).</li><li>Tegunov, D., Cramer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+cryo-electron+microscopy+data+preprocessing+with+Warp.">Real-time cryo-electron microscopy data preprocessing with Warp.</a> Nature Methods. 16 (11), 1146-1152 (2019).</li><li>Lander, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appion:+an+integrated,+database-driven+pipeline+to+facilitate+EM+image+processing.">Appion: an integrated, database-driven pipeline to facilitate EM image processing.</a> Journal of Structural Biology. 166 (1), 95-102 (2009).</li><li>Carragher, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+outcomes+when+optimizing+'standard'+sample+preparation+for+single-particle+cryo-EM.">Current outcomes when optimizing 'standard' sample preparation for single-particle cryo-EM.</a> Journal of Microscopy. 276 (1), 39-45 (2019).</li><li>Drulyte, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+altering+particle+distributions+in+cryo-electron+microscopy+sample+preparation.">Approaches to altering particle distributions in cryo-electron microscopy sample preparation.</a> Acta Crystallographica. Section D, Structural Biology. 74 (6), 560-571 (2018).</li><li>Bloch, M., Santiveri, M., Taylor, N. M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+protein+Cryo-EM:+Cryo-grid+optimization+and+data+collection+with+protein+in+detergent.">Membrane protein Cryo-EM: Cryo-grid optimization and data collection with protein in detergent.</a> Methods in Molecular Biology. 2127, 227-244 (2020).</li><li>Cheng, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leginon:+New+features+and+applications.">Leginon: New features and applications.</a> Protein Science. 30 (1), 136-150 (2021).</li><li>Schorb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Software+tools+for+automated+transmission+electron+microscopy.">Software tools for automated transmission electron microscopy.</a> Nature Methods. 16 (6), 471-477 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+counting+and+beam-induced+motion+correction+enable+near-atomic-resolution+single-particle+cryo-EM.">Electron counting and beam-induced motion correction enable near-atomic-resolution single-particle cryo-EM.</a> Nature Methods. 10 (6), 584-590 (2013).</li><li>Alewijnse, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+managing+large+CryoEM+facilities.">Best practices for managing large CryoEM facilities.</a> Journal of Structural Biology. 199, 225-236 (2017).</li><li>Baldwin, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Big+data+in+cryoEM:+automated+collection,+processing+and+accessibility+of+EM+data.">Big data in cryoEM: automated collection, processing and accessibility of EM data.</a> Current Opinion in Microbiology. 43, 1-8 (2018).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron-event+representation+data+enable+efficient+cryoEM+file+storage+with+full+preservation+of+spatial+and+temporal+resolution.">Electron-event representation data enable efficient cryoEM file storage with full preservation of spatial and temporal resolution.</a> International Union of Crystallography Journal. 7, 860-869 (2020).</li><li>Weis, F., Hagen, W. J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+high+throughput+and+high+quality+for+cryo-electron+microscopy+data+collection.">Combining high throughput and high quality for cryo-electron microscopy data collection.</a> Acta Crystallographica. Section D, Structural Biology. 76 (8), 724-728 (2020).</li><li>Zhou, H., Chiu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+icosahedral+virus+structures+by+electron+cryomicroscopy+at+subnanometer+resolution.">Determination of icosahedral virus structures by electron cryomicroscopy at subnanometer resolution.</a> Advances in Protein Chemistry. 64, 93-124 (2005).</li><li>DeRosier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+high-resolution+data+for+curvature+of+the+Ewald+sphere.">Correction of high-resolution data for curvature of the Ewald sphere.</a> Ultramicroscopy. 81 (2), 83-98 (2000).</li><li>Wolf, M., DeRosier, D. J., Grigorieff, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ewald+sphere+correction+for+single-particle+electron+microscopy.">Ewald sphere correction for single-particle electron microscopy.</a> Ultramicroscopy. 106 (4-5), 376-382 (2006).</li><li>Leong, P. A., Yu, X., Hong Zhou, Z., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+for+the+ewald+sphere+in+high-resolution+single-particle+reconstructions.">Correcting for the ewald sphere in high-resolution single-particle reconstructions.</a> Methods in Enzymology. 482, 369-380 (2010).</li><li>Zivanov, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+tools+for+automated+high-resolution+cryo-EM+structure+determination+in+RELION-3.">New tools for automated high-resolution cryo-EM structure determination in RELION-3.</a> eLife. 7, 42166 (2018).</li></ol>

סאגר חבנקר אינו מדווח על ניגודי עניינים. המחברים האחרים הם עובדים של תרמו פישר סיינטיפיק, חטיבת MSD-EM.

קביעת מבנה החלבון היא קריטית להבנת הארכיטקטורה המולקולרית, התפקוד והוויסות של קומפלקסים של חלבונים המעורבים בתהליכים תאיים מרכזיים, כגון חילוף חומרים של תאים, התמרת אותות או אינטראקציות בין פונדקאי לפתוגן. מיקרוסקופיית קריו-אלקטרונים (cryo-EM) התגלתה כטכניקה רבת עוצמה המסוגלת לפתור את המבנה התלת-ממדי של חלבונים רבים ואת הקומפלקסים שלהם שהיו מאתגרים מדי עבור הטכניקות המבניות המסורתיות, כגון עקיפת קרני רנטגן וספקטרוסקופיה של NMR. במיוחד, cryo-EM הוכחה כשיטת הבחירה עבור חלבוני ממברנה, אשר לא ניתן לגבש בקלות או להכין בכמויות מספיקות עבור הטכניקות המבניות המסורתיות, וסיפקה תובנות חדשות על המבנה והתפקוד של קולטנים תאיים חשובים ותעלות יונים 1,2,3,4,5 . לאחרונה, cryo-EM מילא תפקיד חשוב במאבק במגפת Covid-19 על ידי קביעת המנגנון של זיהום SARS-CoV-2 ברמה המולקולרית, אשר הבהיר את מקורות מחלת Covid-19 וסיפק את הבסיס לפיתוח מהיר של חיסונים וטיפולים יעילים 6,7,8,9,10.
בדרך כלל, מיקרוסקופי אלקטרונים מתקדמים של 300 קילו-וולט (TEM) משמשים לקביעת מבנה ברזולוציה גבוהה של ביו-מולקולות על-ידי ניתוח חלקיקים יחידים של cryo-EM (SPA) כדי לחשוף את הקונפורמציה והאינטראקציות שלהם. לאחרונה, טכניקת ה-SPA הגיעה לגבול חדש כאשר דגימת ה-cryo-EM הנפוצה של אמת המידה אפו-פריטין שוחזרה ברזולוציה אטומית (1.2 Å)11,12 באמצעות TEM של 300 קילו-וולט המצויד באקדח פליטת השדה הקר (E-CFEG), גלאי אלקטרונים ישיר ומסנן אנרגיה. בהחלטה זו, ניתן היה לפתור באופן חד משמעי עמדות של אטומים בודדים במבנה, קונפורמציה של שרשראות צד של חומצות אמינו בודדות, כמו גם קשרי מימן ואינטראקציות אחרות, הפותחות אפשרויות חדשות לגילוי תרופות מבוססות מבנה של מטרות חדשות ואופטימיזציה של מועמדים קיימים לתרופות.
מיקרוסקופי TEM לטווח בינוני של 200 קילו-וולט משמשים לעתים קרובות לסינון דגימות ואופטימיזציה של דגימות לפני איסוף נתונים סופי ברזולוציה גבוהה באמצעות מיקרוסקופי TEM מתקדמים, במיוחד במתקני cryo-EM גדולים יותר. בדרך כלל, ניתן לפתור דגימות בתמונה בטווח הרזולוציה של 3-4 Å שמספיק למעבר ל-TEM מתקדם של 300-kV לאיסוף נתונים סופי. כתוצאה מכך, איסוף נתונים באמצעות 200-kV TEM הוא לעתים קרובות לא ממוטב עוד יותר עבור התוצאות ברזולוציה הגבוהה ביותר האפשרית. יתר על כן, ניתן כבר לענות על שאלות ביולוגיות מעניינות רבות ולפרסם אותן ברזולוציות אלה, שכן כל שרשראות הצד של חומצות האמינו כבר נפתרו, וניתן לקבוע באופן מהימן גם את תפוסת אתרי קשירתהליגנד 13. כבר הוכח כי TEMs של 200-kV יכולים להגיע לרזולוציות מעבר ל-3 Å עבור דגימות רבות 14,15,16,17,18. תמונות שצולמו ב-200 קילו-וולט מציגות ניגודיות גבוהה יותר מטבעה של חלקיקים שהוצפו, מה שעשוי אפילו לאפשר יישור ראשוני מדויק יותר של החלקיקים למרות אות מוחלש יותר ברזולוציה גבוהה בהשוואה לתמונות TEM של 300 קילו-וולט. חשוב לציין כי הרזולוציה שהושגה של מפות cryo-EM משוחזרות מוגבלת גם על ידי גמישות מבנית והטרוגניות קונפורמית של דגימות מדומות, המשפיעה הן על שחזורים של 200 kV והן על שחזורים של 300-kV. למעשה, הרבה יותר שחזורי cryo-EM שהושגו באמצעות מערכות 300-kV נפתרו בטווח הרזולוציה של 3-4 Å מאשר ברזולוציות גבוהות יותר19. מכיוון שמיקרוסקופים של 200 kV TEM הם פחות מורכבים ומתאימים לחדרים קטנים יותר, מיקרוסקופים אלה מייצגים אפשרות טובה ובעלות נמוכה יותר לקביעת מבנה של מקרומולקולות ביולוגיות על ידי cryo-EM תוך שמירה על אוטומציה של אוספי נתונים ארוכים מדגימות מרובות המאוחסנות במערכת המיקרוסקופ Autoloader.
איסוף מערכי נתונים של cryo-EM לקביעת מבנה ברזולוציה גבוהה דורש יישור מדויק של האופטיקה של המיקרוסקופ. יישור העמודים מתקדם באופן שיטתי ממקור האלקטרונים עד למערכת עדשות המעבה, העדשה האובייקטיבית ומסנן האנרגיה עם גלאי אלקטרונים. רצף היישורים המלא אינו נדרש בדרך כלל. בעת הצורך, המשתמש מונחה באמצעות הליכים אוטומטיים למחצה עם תיאור נכון של כל שלב בחלון עזרה מודע להקשר לאורך כל הליך היישור בממשק המשתמש של המיקרוסקופ (לוח הבקרה של יישור ישיר). ברגע שהמיקרוסקופ מיושר במלואו, אופטיקת האלקטרונים נשארת יציבה, ואין צורך לשנות את היישורים במשך כמה חודשים לפחות. רק את היישורים הרגישים ביותר, כגון תאורה מקבילה של מישור הדגימה, אסטיגמציה אובייקטיבית ויישור ללא תרדמת, יש לחדד רגע לפני שמתחילים באיסוף של כל מערך נתונים. לאחר מכן ניתן לנטר את איכות הנתונים שנאספו במהלך איסוף הנתונים באמצעות חבילות תוכנה שונות, כגון EPU Quality Monitor, cryoSPARC Live20, Relion21, Scipion22, WARP23 או Appion24.
מלבד יישורים מדויקים של המיקרוסקופ, האיכות הגבוהה של דגימות מטוהרות היטב עם הטרוגניות קונפורמיות והרכבית מינימלית היא גם תנאי מוקדם לאיסוף מערכי נתונים ברזולוציה גבוהה ופתרון מבנים ברזולוציה גבוהה. פרטים נוספים על פרוטוקולים טיפוסיים, אתגרים תכופים ותרופות אפשריות ניתן למצוא בסקירות אחרות המוקדשות לנושא זה 25,26,27. בעיקרו של דבר, זה קריטי למצוא אזורים ברשת cryo-EM נתונה שיש להם קרח דק מספיק כדי לשמר מידע ברזולוציה גבוהה, וחלקיקים בודדים מפוזרים בצפיפות בכיוונים אקראיים ללא חפיפה. עם זאת, לרשתות cryo-EM טיפוסיות יש עובי קרח לא אחיד, ולכן חשוב למצוא ולבחור את האזורים האופטימליים להדמיה. אמצעים שונים להערכת עובי הקרח ברשת זמינים בחבילות תוכנה המוקדשות לאיסוף אוטומטי של מערכי נתונים של cryo-EM, כגון EPU 2, Leginon28 או SerialEM29.
הופעתם של גלאי אלקטרונים ישירים מהירים ורגישים אפשרה איסוף של תמונות בשברים רבים כסרטים שאפשרו פיצוי של תנועות המושרות על ידי אלומות והביאו לעלייה משמעותית באיכות ובכמות הנתונים המשמשים בעיבוד תמונה ובשחזור תלת-ממדי סופי30. במקביל, אוטומציה ואיסוף נתונים בתפוקה גבוהה מספקים מערכי נתונים ענקיים עם אלפי תמונות/סרטים המייצגים אתגרים לאחסון נתונים וגישה אליהם. המודל שאומץ עם מתקני cryo-EM גדולים המשרתים עשרות עד מאות משתמשים במיוחד קורא לניהול נתונים מאורגן עם מעקב נכון ושיתוף נתונים בצינורות cryo-EM מבוססים31,32.
מחקר זה מתאר פרוטוקול לאיסוף שגרתי של מערכי נתונים cryo-EM ברזולוציה גבוהה באמצעות מיקרוסקופ TEM Glacios 200 kV. היישורים הדרושים של האופטיקה של המיקרוסקופ מתוארים יחד עם נהלים להערכת דגימות cryo-EM ובחירת אזורים מתאימים לאיסוף נתונים ברזולוציה גבוהה. ארגון הנתונים שנאספו ומטא-נתונים קשורים עם מידע לדוגמה מודגם ב- Athena - פלטפורמת ניהול נתונים המאפשרת סקירה של מידע לדוגמה ונתונים שנאספו. באמצעות דגימת אפו-פריטין של העכבר, ניתן היה להשיג שחזור תלת-ממדי ברזולוציה 1.6 Å13. באמצעות הפרוטוקול המתואר, שחזרנו גם את מפת הצפיפות התלת-ממדית של הפרוטאזום 20S מתרמופלזמה אצידופילום ברזולוציה של 2.1 Å.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AutoGrid rings</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1036173</td>
			<td>Package of 100x AutoGrid rings for the standard EM grids.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C-Clip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1036171</td>
			<td>Package of 100 clips that secure 
			the standard EM grids inside the AutoGrid rings.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Management Platform</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1160939</td>
			<td>Part of the Glacios base configuraiton; includes Athena Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPU Quality Monitor</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1179770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPU Software</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1025080</td>
			<td>Part of the Glacios base configuration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane 3.5</td>
			<td>Westfalen</td>
			<td>A06010110</td>
			<td>Ethane gas used for making liquid ethane (puritiy at least N35, i.e. 99.95% vol)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 4 200kV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1166936</td>
			<td>Direct electron detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacios</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1149551</td>
			<td>200 kV TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloQube Plus Glow Discharge System for TEM Grids and surface modification</td>
			<td>Quorum</td>
			<td>N/A</td>
			<td>also available via Thermo Fisher Scientific (PN 1160602)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantiFoil grids</td>
			<td>Quantifoil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>R-2/1, 300 mesh; carbon foil grid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relion</td>
			<td>MRC Laboratory of Molecular Biology</td>
			<td>N/A</td>
			<td>open source software: 
			https://relion.readthedocs.io/en/release-3.1/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selectris with Falcon 
			4 for 200 kV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1191753</td>
			<td>Energy filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selectris X with Falcon 
			4 for 200 kV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1191755</td>
			<td>Energy filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltrAuFoil grids</td>
			<td>Quantifoil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>R-1.2/1.2, 300 mesh; gold foil grids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrobot Mk. IV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1086439</td>
			<td>Automated vitrification system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman 595 filter paper</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AA00420S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

routine collection of high-resolution cryo-em datasets using 200 kv transmission electron microscope

מיקרוסקופיית קריו-אלקטרונים (cryo-EM) הוקמה כשיטה שגרתית לקביעת מבנה חלבונים במהלך העשור האחרון, תוך לקיחת נתח הולך וגדל של נתונים מבניים שפורסמו. ההתקדמות האחרונה בטכנולוגיית TEM ובאוטומציה הגבירה הן את מהירות איסוף הנתונים והן את איכות התמונות שנרכשו, ובמקביל הפחיתה את רמת המומחיות הנדרשת להשגת מפות cryo-EM ברזולוציות תת-3 Å. בעוד שרוב המבנים ברזולוציה גבוהה כאלה הושגו באמצעות מערכות cryo-TEM חדישות של 300 kV, ניתן להשיג מבנים ברזולוציה גבוהה גם עם מערכות cryo-TEM של 200 קילו-וולט, במיוחד כאשר הם מצוידים במסנן אנרגיה. בנוסף, אוטומציה של יישור מיקרוסקופים ואיסוף נתונים עם הערכת איכות תמונה בזמן אמת מפחיתה את מורכבות המערכת ומבטיחה הגדרות מיקרוסקופ אופטימליות, וכתוצאה מכך תפוקה מוגברת של תמונות באיכות גבוהה ותפוקה כוללת של איסוף נתונים. פרוטוקול זה מדגים את היישום של ההתקדמות הטכנולוגית האחרונה ותכונות האוטומציה על מיקרוסקופ אלקטרונים של 200 kV קריו-שידור ומראה כיצד לאסוף נתונים לשחזור מפות תלת-ממדיות המספיקות לבניית מודל אטומי דה נובו . אנו מתמקדים בשיטות עבודה מומלצות, משתנים קריטיים ובעיות נפוצות שיש לקחת בחשבון כדי לאפשר איסוף שגרתי של מערכי נתונים קריו-EM ברזולוציה גבוהה כאלה. במיוחד הנושאים החיוניים הבאים נסקרים בפירוט: א) אוטומציה של יישור מיקרוסקופים, ב) בחירת אזורים מתאימים לרכישת נתונים, iii) פרמטרים אופטיים אופטימליים לאיסוף נתונים באיכות גבוהה ובתפוקה גבוהה, iv) כוונון מסנן אנרגיה להדמיה ללא הפסד, ו- v) ניהול נתונים והערכת איכות. יישום שיטות העבודה המומלצות ושיפור הרזולוציה הניתנת להשגה באמצעות מסנן אנרגיה יודגמו בדוגמה של אפו-פריטין ששוחזר ל-1.6 Å, ותרמופלסמה אצידופילום 20S פרוטאזום ששוחזר לרזולוציה של 2.1-Å באמצעות TEM של 200 קילו-וולט המצויד במסנן אנרגיה ובגלאי אלקטרונים ישיר.

Watch this Scientific Journal Video about Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope at JoVE.com

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

מפות cryo-EM ברזולוציה גבוהה של מקרומולקולות יכולות להיות מושגות גם על ידי שימוש במיקרוסקופי TEM של 200 קילו-וולט. פרוטוקול זה מציג את שיטות העבודה המומלצות לקביעת יישור אופטיקה מדויק, סכימות איסוף נתונים ובחירת אזורי הדמיה החיוניים כולם לאיסוף מוצלח של מערכי נתונים ברזולוציה גבוהה באמצעות TEM של 200 kV.

איסוף שגרתי של מערכי נתונים cryo-EM ברזולוציה גבוהה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים של 200 KV

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

Cryo-EM הפכה לטכניקה סטנדרטית לקביעת מבנה של חלבונים והקומפלקסים שלהם. פרוטוקול זה מתאר את שיטות העבודה המומלצות כיצד להשיג מערכי נתונים של Cryo-EM ברזולוציה גבוהה מהמיקרוסקופים הבינוניים של 200 kV TEM. Cryo-EM יכול לקבוע מבנה חלבון בתנאים כמעט מקומיים בתמיסה למצבים קונפורמיים מרובים ומצבים פונקציונליים בו זמנית, וזה חמקמק עבור טכניקות מבניות אחרות.מידע מבני שהתקבל יכול לשמש להבהרת מנגנונים מולקולריים של תפקוד החלבון, כמו גם לתכנון תרופות מבוססות מבנה. לדוגמה, פרסום שפורסם לאחרונה במבנה של סיבי עמילואיד חשף מספר אתרי קשירה של ליגנד חיוני. עם זאת, בפרוטוקול זה, אנו משתמשים בדוגמאות הסטנדרטיות של אפופריטין ופרוטאזום כדי להדגים את השלבים הקריטיים בהשגת נתוני Cryo-EM ברזולוציה גבוהה.הפעלת Cryo-TEM הפכה לקלה יותר בשנים האחרונות, במיוחד בשל הכנסת תכונות אוטומציה מתקדמות. עם זאת, עבור הפגישה הראשונה, אנו ממליצים לך לקבל הדרכה עם משתמשים מנוסים יותר. משם, ההתקדמות בטכניקה מהירה יחסית.מי שידגים את ההליך יהיה אדריאן קו, שהוא מדען יישומים בכיר בתרמו פישר סיינטיפיק. הכנס רשתות אוטומטיות לתוך קלטת המעמיס האוטומטי בתנאי חנקן נוזלי. הכנס את הקלטת עם רשתות אוטומטיות לתוך קפסולת העברה מקוררת חנקן נוזלי.בהמשך הכנס את הקפסולה למיקרוסקופ ולחץ על כפתור ה- Dock בממשק המשתמש של המיקרוסקופ כדי לטעון את הקלטת מהקפסולה לתוך המעמיס האוטומטי של המיקרוסקופ. לחץ על הלחצן מלאי כדי לבדוק את הנוכחות של רשתות אוטומטיות בקלטת הטעונה. לאחר מכן לחץ על הלחצנים טען ופרק כדי להוסיף את הרשתות האוטומטיות לעמודה עבור הדמיית TEM.בחר בכרטיסייה אטלס ולחץ על לחצן הפעלה חדשה כדי לפתוח הפעלה חדשה. מלא פרטים כגון שם ההפעלה ומיקום אחסון הנתונים ולחץ על הלחצן החל. בחר את הרשתות המעניינות על-ידי בחירת תיבת סימון לצד מספר הרשת המתאים.לחץ על לחצן התחל כדי להתחיל אוסף אוטומטי לחלוטין של אטלסים של כל הרשתות שנבחרו. לאחר השלמת האוסף, לחץ על תוויות רשת כדי לסקור את האטלסים שנרכשו. בחר בכרטיסייה EPU ועבור אל הפעלה חדשה כדי ליצור הפעלה חדשה בחלונית הימנית.בחר באפשרות הפעלה חדשה כדי להשתמש בקביעות האופטיות המוגדרות מראש הנוכחיות שהוגדרו. מלא את שם ההפעלה. בחר את הסוג הידני של ההפעלה כדי לקבל שליטה על בחירת חורים וריבועי רשת בודדים שנבחרו לאיסוף נתונים בהמשך הפרוטוקול.בחר את מצב הרכישה המהיר יותר כדי להשתמש בהסטת תמונות ללא סטייה לאיסוף נתונים. לאחר מכן הזן את המיקום כדי לשמור את המטה-נתונים. לחץ על הלחצן החל כדי ליצור הפעלה חדשה.בחר את משימת בחירת הריבוע בחלונית השמאלית כדי להציג את האטלס שנאסף של הרשת. זהה את ריבועי הרשת עם רדיד תומך שלם ללא נזק, חורי קרח ונייר כסף דקיקים, זיהום קרח גבישי זניח בריבוע הרשת ושיפוע בהירות מינימלי על פני ריבוע הרשת ובתוך חורי רדיד אלומיניום בודדים. בחר את ריבועי הרשת לאיסוף נתונים, באטלס המלא או בתמונות אריחים באיכות גבוהה.לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על ריבוע רשת מעניין ובחר את כל משימת הבחירה. לחץ על הלחצן Auto Eucentric כדי לעבור באופן אוטומטי לריבוע הרשת הראשון שנבחר. התאם את הגובה האוצנטרי ורכוש תמונה מרובעת רשת למציאת חורי רדיד.לחץ על כפתור מצא חורים כדי למצוא חורי רדיד בתמונה. לחץ על לחצן הסר חורים כדי לסגור את לחצן סרגל הרשת כדי לבטל את הבחירה בחורים ליד פסי רשת. התאימו את הגבולות בהיסטוגרמה של הבהירות של מסנן הקרח כדי להסיר את כל החורים עם קרח סמיך מדי ואת כל החורים הריקים.לחץ לחיצה ימנית על חור בתמונה המרובעת של הרשת ובחר הזזת שלב לשלב הזזת מיקום כאן. בחר את משימת הגדרת התבנית בחלונית השמאלית. לחץ על כפתור רכישה כדי להשיג תמונה שלמה.הגדר ערכים לעיכוב לאחר הזזת התמונה ל- 0.5 שניות והשהה לאחר העברת שלב לחמש שניות. לחץ על הלחצן חיפוש וחור מרכזי כדי למרכז חור בתמונה. בחר בלחצן הוסף אזור רכישה ולחץ על התמונה כדי לבחור את המיקום בחור הממורכז שבו תצולם רכישת תמונה בהגדלה גבוהה.בחר בלחצן הוסף אזור מיקוד אוטומטי ולחץ על התמונה כדי לבחור את המיקום בנייר הכסף של התמיכה לצד החור הממורכז שבו יבוצע המיקוד האוטומטי של התמונה. לחץ על אזור הרכישה הירוק כדי להגדיר רצף של ערכי defocus ברשימת defocus בחלק העליון של חלון התוכנה. לאחר הגדרת ההגדרות הספציפיות למיקוד אוטומטי, בחר באפשרות לאחר מרכוז למיקוד אוטומטי בתחילת כל אשכול AFIS.בחר באפשרות עדשה אובייקטיבית למיקוד אוטומטי מהיר יותר ולהפחתת סחף שלבים. לחץ על הלחצן הכן את כל הריבועים במשימת בחירת החורים כדי להגדיר באופן אוטומטי את איסוף הנתונים ואת כל ריבועי הרשת האחרים שנבחרו בהתאם להגדרות המשמשות בריבוע הרשת הראשון הזה. בחר את משימת הגדרת התבנית, רכש תמונה חדשה, העבר את הבמה לאזור נקי בנייר כסף פחמן בלחיצה ימנית ובחר את שלב הזזת אפשרות התפריט כאן.בחר בכרטיסייה פונקציות אוטומטיות. לאחר הגדרת ה-defocus והאיטרציה הרצויים, עבור אל ההגדרה המוגדרת מראש של המיקוד האוטומטי ולחץ על לחצן ההפעלה כדי להפעיל את פונקציית המיקוד האוטומטי. בחר את המשימה Autostigmate, עבור להגדרה מראש של Thon Ring ולחץ על לחצן התחל.בחר את המשימה Autocoma ולחץ על לחצן התחל. הזזת שלב לאזור עם ריבוע רשת שבור. אשר את שקיפות האזור על-ידי צילום תמונת מיקוד אוטומטי אחת.פתח את ממשק המשתמש של Sherpa ובחר את יישום מסנן האנרגיה. לחץ על לחצן מרכז ועל האפשרות אפס אובדן כדי למרכז את חריץ מסנן האנרגיה של אפס אובדן. לחץ על לחצן כוונון באפשרות איזוכרומטיות.לחץ על האפשרות הגדלה של Tune ועיוותי Tune בעיוותים בעיוותים הגיאומטריים והכרומטיים. עבור אל הכרטיסיה EPU, בחר את משימת הרכש האוטומטי ולחץ על לחצן התחל הפעלה כדי להתחיל באיסוף נתונים אוטומטי לחלוטין. האיור מציג רשתות Cryo-EM המציגות שיפוע של עובי קרח על פני השטח של הרשת.הרשתות שאינן נכללות בחקירה הנוספת הן רשת גרועה עם קרח עבה ורשת מכופפת עם קרח רע וזיהום, בעוד שרשתות מקובלות הן אלה עם שיפוע קרח טוב ורשת טיפוסית עם קרח דק טוב ושיפוע קרח קטן. האיור מציג את העיבוד התלת-ממדי הסופי של מפת האפופריטין Cryo-EM המשוחזרת. היציבות והסימטריה הגבוהות הופכות אותו לדוגמת אמת מידה אופטימלית להדמיית Cryo-EM ועיבוד תמונה ברזולוציה גבוהה.ליטוש בייסיאני, חידוד CTF ותיקון כדור אוואלד הובילו למפת רזולוציה של 1.63 אנגסטרום. האיור מציג תצוגה מפורטת של מפת האפופריטין Cryo-EM המשוחזרת ברמת שרשרת הצד של חומצות האמינו הבודדות. הצפיפות של שרשראות צד של חומצות אמינו נפתרת היטב וניתן לבנות את המודל האטומי באופן חד משמעי בתוך המפה.התמונה כאן מציגה שני מערכי נתונים שונים בערכי defocus שונים שנאספו מאותה רשת Cryo-EM עם ריבועי רשת דומים עם חריץ פתוח לחלוטין וחריץ וולט של 10 אלקטרונים אשר מצביע על כך שחריץ 10 אלקטרון וולט משפר באופן משמעותי את ניגודיות התמונה. האיור כאן מציג סקירה כללית של מפת Cryo-EM הפרוטאזומית של 20S עם יחידות משנה מפולחות המשמשות כמדגם Cryo-EM סטנדרטי. והתצוגה המוגדלת שלו עם מודל אטומי מותאם מייצגת את הליבה הקטליטית היציבה של קומפלקס הפרוטאזומים עם הסימטריה D7.הפרוטוקול מכיל שני שלבים קריטיים. האחת, מחפשת אזורים עם קרח זגוגי דק המכיל חלקיקים הומוגניים. ושתיים, הגדרת תאורה מקבילה לרכישת נתונים.עם שחזורים ברזולוציה גבוהה של חלבונים שמשיגים שניים עד שלושה אנגסטרומים ברזולוציה, אתה מסוגל להבין טוב יותר את המנגנונים המולקולריים של מחלות ולשפר את מובילי התרופות. בעבר, התגבשות הייתה הכרחית אם אתה רוצה לחקור את הבסיס המבני של תופעות ביולוגיות. היום עם Cryo-EM, זה כבר לא הכרחי.וכך, עם Cryo-EM, אנו מאפשרים למדענים לחקור מגוון רחב יותר של תופעות ביולוגיות ברמה המבנית.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method to Visualize and Analyze Membrane Interacting Proteins by Transmission Electron Microscopy

השיטה לחזות ולנתח חלבוני אינטראקצית ממברנה ידי הילוכים מיקרוסקופים אלקטרונים

Monotopic proteins exert their function when attached to a membrane surface, and such interactions depend on the specific lipid composition and on the ...

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

ברזולוציה גבוהה ניתוח החלקיקים יחיד מאת אלקטרונים Cryo-microscopy תמונות באמצעות SPHIRE

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Cryo-EM and Single-Particle Analysis with Scipion

ניתוח קריו-EM וחלקיקים בודדים עם Scipion

Cryo-electron microscopy has become one of the most important tools in biological research to reveal the structural information of macromolecules at ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

הכנת סרטי תמיכה לדוגמה במיקרוסקופיית אלקטרונים שידור באמצעות בלוק הצפה תומך

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Preparing Lamellae from Vitreous Biological Samples Using a Dual-Beam Scanning Electron Microscope for Cryo-Electron Tomography

הכנת Lamellae מדגימות ביולוגיות זגוגית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק קרן כפולה עבור טומוגרפיה קריו-אלקטרונים

Presented here is a protocol for preparing cryo-lamellae from plunge-frozen grids of Plasmodium falciparum-infected&#160;human erythrocytes, which could ...

Preparation of High-Temperature Sample Grids for Cryo-EM

הכנת רשתות דגימה בטמפרטורה גבוהה עבור Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, ...

Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows

רשתות מיקרוסקופיות אלקטרוניות של שידור מיקרו-מפזרנינג למיקום תאים ישירים בתהליכי עבודה של טומוגרפיה קריו-אלקטרונים של תאים שלמים

Whole-cell cryo-electron tomography (cryo-ET) is a powerful technology that is used to produce nanometer-level resolution structures of macromolecules ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

כימות של התפלגות גליקוגן תת-תאית בסיבי שריר השלד באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים שידור

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy (cryo-EM) Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy cryo-EM Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

תהליך עבודה חזק של עיבוד קריו-אלקטרון (cryo-EM) עם cryoSPARC, RELION ו- Scipion

Recent advances in both instrumentation and image processing software have made single-particle cryo-electron microscopy (cryo-EM) the preferred method ...

Advancing High-Resolution Imaging of Virus Assemblies in Liquid and Ice

קידום הדמיה ברזולוציה גבוהה של מכלולי וירוסים בנוזלים ובקרח

Interest in liquid-electron microscopy (liquid-EM) has skyrocketed in recent years as scientists can now observe real-time processes at the nanoscale. It ...