Name: layer microdissection of tricuspid valve leaflets for biaxial mechanical characterization and microstructural quantification
Uploaded: 2022-02-10T15:00:00
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Ce travail a été soutenu par l’American Heart Association Scientist Development Grant (16SDG27760143) et la Presbyterian Health Foundation. KMC a été soutenu en partie par le programme d’opportunités de recherche de premier cycle de l’Université de l’Oklahoma (OU) et le programme d’apprentissage en recherche spécialisé. DWL a été soutenu en partie par la National Science Foundation Graduate Research Fellowship (GRF 2019254233) et l’American Heart Association/Children’s Heart Foundation Predoctoral Fellowship (prix #821298). Tout ce soutien est reconnu avec gratitude.

Toutes les méthodes décrites dans le présent document ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université de l’Oklahoma. Les tissus animaux ont été acquis dans un abattoir approuvé par l’USDA.
1. Caractérisation mécanique biaxiale
<ol><li>Préparation des tissus<ol>
<li>Récupérez un dépliant TV du congélateur, des lames de rasoir, un stylo chirurgical, une pince, une pipette avec de l’eau désionis?...

<ol>
	<li>Vesely, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+elastin+in+aortic+valve+mechanics.">The role of elastin in aortic valve mechanics.</a> Journal of Biomechanics. 31 (2), 115-123 (1998).</li><li>Zhang, W., Ayoub, S., Liao, J., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+meso-scale+layer-specific+structural+constitutive+model+of+the+mitral+heart+valve+leaflets.">A meso-scale layer-specific structural constitutive model of the mitral heart valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 32, 238-255 (2016).</li><li>Stella, J. A., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biaxial+mechanical+properties+of+the+layers+of+the+aortic+valve+leaflet.">On the biaxial mechanical properties of the layers of the aortic valve leaflet.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 129 (5), 757-766 (2007).</li><li>Khoiy, K. A., Amini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biaxial+mechanical+response+of+porcine+tricuspid+valve+leaflets.">On the biaxial mechanical response of porcine tricuspid valve leaflets.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 138 (10), 104504 (2016).</li><li>Jett, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+anisotropic+mechanical+properties+and+anatomical+structure+of+porcine+atrioventricular+heart+valves.">An investigation of the anisotropic mechanical properties and anatomical structure of porcine atrioventricular heart valves.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 87, 155-171 (2018).</li><li>Meador, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+detailed+mechanical+and+microstructural+analysis+of+ovine+tricuspid+valve+leaflets.">A detailed mechanical and microstructural analysis of ovine tricuspid valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 102, 100-113 (2020).</li><li>Hudson, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+on+linking+tissue+mechanics+with+load-dependent+collagen+microstructures+in+porcine+tricuspid+valve+leaflets.">A pilot study on linking tissue mechanics with load-dependent collagen microstructures in porcine tricuspid valve leaflets.</a> Bioengineering. 7 (2), 60 (2020).</li><li>Pant, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+microstructural+changes+in+porcine+tricuspid+valve+leaflets.">Pressure-induced microstructural changes in porcine tricuspid valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 67, 248-258 (2018).</li><li>Kramer, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+layer-specific+tissue+biomechanics+of+porcine+atrioventricular+heart+valve+leaflets.">An investigation of layer-specific tissue biomechanics of porcine atrioventricular heart valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 96, 368-384 (2019).</li><li>Ross, C. J., Laurence, D. W., Wu, Y., Lee, C. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biaxial+mechanical+characterizations+of+atrioventricular+heart+valves.">Biaxial mechanical characterizations of atrioventricular heart valves.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (146), e59170 (2019).</li><li>Goth, W., Lesicko, J., Sacks, M. S., Tunnell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical-based+analysis+of+soft+tissue+structures.">Optical-based analysis of soft tissue structures.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 18, 357-385 (2016).</li><li>Jett, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+polarized+spatial+frequency+domain+imaging+(pSFDI)+with+a+biaxial+mechanical+testing+system+for+quantification+of+load-dependent+collagen+architecture+in+soft+collagenous+tissues.">Integration of polarized spatial frequency domain imaging (pSFDI) with a biaxial mechanical testing system for quantification of load-dependent collagen architecture in soft collagenous tissues.</a> Acta Biomaterialia. 102, 149-168 (2020).</li><li>Reddy, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> An Introduction to Continuum Mechanics. , (2013).</li><li>Duginski, G. A., Ross, C. J., Laurence, D. W., Johns, C. H., Lee, C. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+effect+of+freezing+storage+on+the+biaxial+mechanical+properties+of+excised+porcine+tricuspid+valve+anterior+leaflets.">An investigation of the effect of freezing storage on the biaxial mechanical properties of excised porcine tricuspid valve anterior leaflets.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 101, 103438 (2020).</li><li>Salinas, S. D., Clark, M. M., Amini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+response+changes+in+porcine+tricuspid+valve+anterior+leaflet+under+osmotic-induced+swelling.">Mechanical response changes in porcine tricuspid valve anterior leaflet under osmotic-induced swelling.</a> Bioengineering. 6 (3), 70 (2019).</li><li>Pokutta-Paskaleva, A., Sulejmani, F., DelRocini, M., Sun, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+mechanical,+morphological,+and+microstructural+characterization+of+porcine+mitral+and+tricuspid+leaflets+and+chordae+tendineae.">Comparative mechanical, morphological, and microstructural characterization of porcine mitral and tricuspid leaflets and chordae tendineae.</a> Acta Biomaterialia. 85, 241-252 (2019).</li><li>Ross, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+glycosaminoglycan+contribution+to+biaxial+mechanical+behaviors+of+porcine+atrioventricular+heart+valve+leaflets.">An investigation of the glycosaminoglycan contribution to biaxial mechanical behaviors of porcine atrioventricular heart valve leaflets.</a> Journal of the Royal Society Interface. 16 (156), 0069 (2019).</li><li>Sommer, G., Regitnig, P., Ko&#776;ltringer, L., Holzapfel, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biaxial+mechanical+properties+of+intact+and+layer-dissected+human+carotid+arteries+at+physiological+and+supraphysiological+loadings.">Biaxial mechanical properties of intact and layer-dissected human carotid arteries at physiological and supraphysiological loadings.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 298 (3), 898-912 (2009).</li><li>Holzapfel, G. A., Sommer, G., Gasser, C., Regitnig, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+layer-specific+mechanical+properties+ofhuman+coronary+arteries+with+intimal+thickening,+and+related+constitutive+modelling.">Determination of the layer-specific mechanical properties ofhuman coronary arteries with intimal thickening, and related constitutive modelling.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (5), 2048-2058 (2005).</li><li>Sommer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiaxial+mechanical+response+and+constitutive+modeling+of+esophageal+tissues:+Impact+on+esophageal+tissue+engineering.">Multiaxial mechanical response and constitutive modeling of esophageal tissues: Impact on esophageal tissue engineering.</a> Acta Biomaterialia. 9 (12), 9379-9391 (2013).</li></ol>

Les étapes critiques du protocole comprennent : (i) la microdissection de la couche, (ii) le montage tissulaire, (iii) le placement du marqueur fiducial et (iv) la configuration de l’IDSP. La microdissection de couche appropriée est l’aspect le plus important et le plus difficile de la méthode décrite ici. Avant de lancer une enquête utilisant cette technique, le ou les dissecteurs devraient avoir une pratique à long terme avec la technique de microdissection et les trois dépliants télévisés. Le dissecteur ...

Le téléviseur est situé entre l’oreillette droite et le ventricule droit du cœur. Tout au long du cycle cardiaque, le téléviseur régule le flux sanguin unidirectionnel par l’ouverture et la fermeture cycliques de la feuillet antérieure de la télévision (TVAL), de la feuillet postérieure de la télévision (TVPL) et de la feuillet septale de la télévision (TVSL). Ces folioles sont complexes et ont quatre couches anatomiques distinctes – l’atrialis (A), le spongiosa (S), le fibrosa (F) et le ventricularis (V) – avec des constituants microstructuraux uniques. Les fibres d’élastine dans l’atrialis et le ventriculaire aident à restaurer le tissu à sa géométrie non déformée après charge mécanique1. En revanche, la fibrose contient un réseau dense de fibres de collagène ondulées qui contribuent à la capacité portante des feuillets2. Principalement constitué de glycosaminoglycanes, le spongiosa a été supposé permettre le cisaillement entre les couches de la foliole pendant la fonction valvulaire cardiaque3. Bien que les trois types de feuillets aient les mêmes couches anatomiques, il existe des variations dans les épaisseurs des couches et les rapports constitutifs qui ont des implications pour les comportements mécaniques spécifiques aux feuillets.
Les chercheurs ont exploré les propriétés des feuillets de télévision à l’aide de caractérisations mécaniques planes, d’évaluations histomorphologiques et de caractérisations optiques de l’architecture des fibres de collagène. Par exemple, les caractérisations mécaniques biaxiales planes cherchent à imiter la charge physiologique en appliquant des déplacements perpendiculaires au tissu et en enregistrant les forces associées. Les observations de déplacement de force (ou d’étirement de contrainte) qui en ont résulté ont révélé que les trois feuillets de télévision présentent des comportements mécaniques non linéaires et spécifiques à la direction avec des réponses plus apparentes spécifiques à la feuillet dans la direction du tissu radial 4,5,6. On pense que ces comportements spécifiques aux feuillets proviennent de différences dans les propriétés microstructurelles observées à l’aide de techniques histologiques standard 6,7. En outre, l’imagerie de deuxième génération harmonique6, la diffusion de lumière à petit angle8 et l’imagerie du domaine de fréquence spatiale polarisée7 (pSFDI) visent à comprendre ces propriétés microstructurelles et ont montré des différences spécifiques à la feuillet dans l’orientation de la fibre de collagène et le sertissage de la fibre qui ont des implications pour les comportements mécaniques observés au niveau des tissus. Ces études ont considérablement fait progresser notre compréhension de la microstructure tissulaire et de son rôle dans les comportements au niveau des tissus. Cependant, il reste encore beaucoup à faire pour relier expérimentalement la mécanique tissulaire et la microstructure sous-jacente.
Récemment, ce laboratoire a réalisé des caractérisations mécaniques des couches de feuillet TV séparées en deux couches composites (A/S et F/V) à l’aide d’une technique de microdissection9. Ces travaux antérieurs ont mis en évidence les différences dans les propriétés mécaniques des couches et ont permis de mieux comprendre comment la microstructure en couches contribue aux comportements mécaniques des tissus. Bien que cette enquête ait amélioré notre compréhension de la microstructure des feuillets de télévision, la technique présentait plusieurs limites. Premièrement, les propriétés des couches composites n’ont pas été directement comparées au tissu intact, ce qui a conduit à un manque de compréhension complète de la relation mécanique-microstructure. Deuxièmement, l’architecture des fibres de collagène des couches composites n’a pas été examinée. Troisièmement, seules les couches du TVAL ont été étudiées en raison de difficultés à collecter les couches composites des deux autres dépliants télévisés. La méthode décrite ici fournit un cadre de caractérisation holistique qui surmonte ces limitations et fournit des caractérisations complètes des dépliants TV et de leurs couches composites.
Cet article décrit la technique de microdissection qui sépare les trois feuillets TV en leurs couches composites (A/S et F/V) pour les caractérisations mécaniques et microstructurelles biaxiales 10,11,12. Ce protocole itératif comprend (i) des essais mécaniques biaxiaux et la caractérisation pSFDI de la notice intacte, (ii) une technique de microdissection nouvelle et reproductible pour obtenir de manière fiable les couches TV composites, et (iii) des tests mécaniques biaxiaux et la caractérisation pSFDI des couches TV composites. Le tissu a été exposé à une charge de traction biaxiale avec différents rapports de force pour les essais mécaniques. Ensuite, pSFDI a été utilisé pour déterminer l’orientation et l’alignement des fibres de collagène dans diverses configurations chargées. pSFDI préserve l’architecture native des fibres de collagène, permet une analyse dépendante de la charge et contourne le besoin typique de fixer ou de nettoyer les tissus pour l’analyse de l’architecture des fibres de collagène, comme dans l’imagerie de deuxième génération harmonique ou la diffusion de la lumière à petit angle. Enfin, les tissus ont été préparés à l’aide de techniques d’histologie standard pour visualiser la microstructure tissulaire. Ce cadre itératif et holistique permet de comparer directement les propriétés mécaniques et microstructurelles de la feuille de télévision à ses couches composites.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Formalin Solution, Neutral Buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alconox Detergent</td>
			<td>Alconox</td>
			<td></td>
			<td>cleaning compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioTester - Biaxial Tester</td>
			<td>CellScale Biomaterials Testing</td>
			<td></td>
			<td>1.5 N Load Cell Capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting Mat</td>
			<td>Dahle</td>
			<td>B0027RS8DU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized Water</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-Tipped Tool</td>
			<td>HTI INSTRUMENTS</td>
			<td>NSPLS-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - Curved</td>
			<td>Scientific Labwares</td>
			<td>16122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - Thick</td>
			<td>Scientific Labwares</td>
			<td>161001078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - Thin</td>
			<td>Scientific Labwares</td>
			<td>16127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabJoy</td>
			<td>CellScale Biomaterials Testing</td>
			<td>Version 10.66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Displacement Sensor</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>IL-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Cyanoacrylate Glue</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>2436365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>Version 2020a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Scissors</td>
			<td>HTI Instruments</td>
			<td>CAS55C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Belmaks</td>
			<td>360758081051Y4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized Spatial Frequency Domain Imaging Device</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Made in-house using a digital light projector, linear polarizer, rotating polarizer mount, and charge-coupled device camera. 
			See doi.org/10.1016/j.actbio.2019.11.028 (PMCID: PMC8101699) for more details.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>THINKPRICE</td>
			<td>TP-SCALPEL-3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Edge Industrial Razor Blades (Surgical Carbon Steel)</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>H3515541105024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Pen</td>
			<td>LabAider</td>
			<td>LAB-Skin-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-Pins</td>
			<td>Business Source</td>
			<td>BSN32351</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax Board</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Made in-house using modeling wax and baking tray</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh Boat</td>
			<td>Pure Ponta</td>
			<td>mdo-azoc-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

layer microdissection of tricuspid valve leaflets for biaxial mechanical characterization and microstructural quantification

La valve tricuspide (TV) régule le flux unidirectionnel de sang non oxygéné de l’oreillette droite vers le ventricule droit. Le téléviseur se compose de trois dépliants, chacun avec des comportements mécaniques uniques. Ces variations entre les trois feuillets de télévision peuvent être mieux comprises en examinant leurs quatre couches anatomiques, qui sont l’atrialis (A), le spongiosa (S), la fibrose (F) et le ventriculaire (V). Bien que ces couches soient présentes dans les trois feuillets de télévision, il existe des différences dans leurs épaisseurs et leurs constituants microstructuraux qui influencent davantage leurs comportements mécaniques respectifs. 
Ce protocole comprend quatre étapes pour élucider les différences spécifiques à la couche: (i) caractériser les comportements architecturaux mécaniques et des fibres de collagène de la feuille de télévision intacte, (ii) séparer les couches composites (A / S et F / V) de la feuille de télévision, (iii) effectuer les mêmes caractérisations pour les couches composites et (iv) effectuer des couches post-hoc évaluation histologique. Ce cadre expérimental permet de manière unique la comparaison directe du tissu TV intact à chacune de ses couches composites. En conséquence, des informations détaillées concernant la microstructure et la fonction biomécanique des feuillets de télévision peuvent être collectées avec ce protocole. Ces informations peuvent potentiellement être utilisées pour développer des modèles informatiques de télévision qui cherchent à fournir des conseils pour le traitement clinique de la maladie de la télévision.

La microdissection produira des échantillons A/S et F/V d’épaisseurs relativement uniformes pouvant être montés sur un dispositif d’essai biaxial (commercial). L’analyse histologique de la feuillette intacte et des deux couches disséquées permettra de vérifier si le tissu a été correctement séparé le long de la frontière entre la spongiose et la fibrose (Figure 7). De plus, les micrographies histologiques peuvent être utilisées pour déterminer l’épaisseur de la couche...

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Layer Microdissection of Tricuspid Valve Leaflets for Biaxial Mechanical Characterization and Microstructural Quantification

Ce protocole décrit la caractérisation mécanique biaxiale, la quantification du collagène basée sur l’imagerie du domaine de fréquence spatiale polarisée et la microdissection des feuillets de valve tricuspide. La méthode fournie explique comment les couches de la foliole contribuent aux comportements holistiques de la feuille.

Microdissection en couche des feuillets de valve tricuspide pour la caractérisation mécanique biaxiale et la quantification microstructurale

The tricuspid valve (TV) regulates the unidirectional flow of unoxygenated blood from the right atrium to the right ventricle. The TV consists of three ...

Cette méthode peut isoler les contributions des couches tissulaires au comportement global des tissus, fournissant ainsi de nouvelles informations sur la microstructure tissulaire. Notre cadre de microdissection et de test nous permet de comparer directement les propriétés mécaniques et microstructurales des feuillets valvulaires cardiaques à leurs propres couches composites. La microdissection peut être difficile à maîtriser, il est donc fortement recommandé de pratiquer autant que possible avant de lancer votre étude.Tout d’abord, rassemblez les matériaux requis, planche de cire, eau DI, pipette, scalpel, micro ciseaux, pinces minces, pinces incurvées, pinces épaisses et épingles. Démontez le tissu du testeur biaxial et mesurez son épaisseur à l’aide du capteur de déplacement laser. Placez le tissu sur le panneau de cire.Examinez le côté ventriculaire du tissu pour les grandes insertions de chorda. Prenez une photo pour référence. Étalez le tissu à plat sur la planche de cire avec l’atriaalis vers le haut.Pour fixer le tissu à la planche, placez une broche inclinée loin du tissu dans chaque coin afin qu’il tire légèrement le tissu tendu. Assurez-vous que les broches sont à l’extérieur des trous créés par les tiges lors du montage du tissu et que le tissu est carré et ne se déplace pas pendant la microdissection de la couche. Si nécessaire, placez des épingles le long du côté du tissu pendant la dissection pour étirer davantage le tissu.Retirez les marqueurs fiduciaires des billes de verre. Placez l’eau DI sur la surface du tissu avec une pipette de sorte qu’elle recouvre complètement le tissu d’une manière semblable à une bulle. Pour faire le coin initial, sélectionnez un coin du spécimen épinglé, en évitant les grandes insertions de chorda dans les zones fragiles.Ensuite, coupez la couche A / S en faisant légèrement glisser le scalpel sur la surface du tissu le long des trous de montage pour les tests mécaniques. Les bords de la coupe commencent à se séparer, révélant la couche F/V en dessous. Avec des pinces minces et émoussées, frottez fermement le long de la coupe pour séparer davantage ses bords.Si la coupe dans la couche A / S ne commence pas à se séparer, tracez légèrement la même coupe à nouveau avec un scalpel. Faites une deuxième coupe perpendiculaire à la première coupe. Si les deux coupes ne sont pas connectées, passez la pince à épiler fine sous la petite zone de tissu séparant les deux coupes.Ensuite, utilisez soigneusement les ciseaux pour couper le tissu. Frottez le long des coupes du coin avec une pince mince jusqu’à ce que le tissu se sépare de la couche F / V. Dès qu’un petit morceau de tissu est séparé, saisissez-le avec la grande pince à épiler et tirez-le doucement pour séparer davantage les couches composites.Continuez à peler le tissu tout en le saisissant avec une pince à épiler plus grande pour éviter les déchirures et les déchirures indésirables de la couche composite A / S, et frottez la couture jusqu’à ce qu’elle atteigne la fin des deux coupes faites pour le coin. Si le premier virage présente des problèmes majeurs de séparation, essayez un autre coin comme point de départ. Ensuite, pour faire un deuxième coin, étendez les deux coupes faites pour le premier coin en plaçant la pointe du scalpel au bas de chaque coupe et en la faisant légèrement glisser le long de la surface du tissu afin que les extensions de coupe se connectent aux coupes d’origine et continuent à suivre les trous de tige ou de suture.Continuez à étendre les coupes et à décoller la couche supérieure composite A / S en arrière tout en frottant la couture jusqu’à ce qu’un côté soit terminé. Observez que le tissu sera entièrement séparé le long d’une coupe. Ensuite, créez un deuxième coin perpendiculaire à l’extrémité du côté entièrement pelé.Prolongez les coupes restantes tout en évitant les grandes insertions de chorda. Exclure les insertions de chorda de la zone de séparation A/S uniquement lorsque cette exclusion permettra d’obtenir un spécimen A/S suffisamment grand pour les caractérisations expérimentales. Continuez à séparer les couches A/S et F/V en utilisant les techniques de frottement et de traction utilisées pour le premier virage.Arrêtez immédiatement de séparer le tissu si une déchirure ou un trou se forme. Pour éviter que la pince à épiler ne se coince, placez les ciseaux dans n’importe quel trou qui se forme et coupez le tissu loin du centre. Si le défaut se forme le long de la couture de séparation, commencez à séparer le tissu le long d’un autre bord.Recherchez les connexions intercalaires qui peuvent apparaître lors de la séparation du tissu et empêchez toute séparation ultérieure des tissus. Observez que ce sont des brins minces mais solides qui doivent être soigneusement coupés à l’aide de ciseaux. Évitez de créer un trou dans la couche A/S ou de couper vers le bas dans la couche F/V.Poursuivez ce processus jusqu’à ce que le plus grand échantillon possible de la couche A/S ait été séparé. Marquez l’orientation de l’échantillon à l’aide du stylo chirurgical. Enfin, coupez le long de la couture de séparation pour le bord de tissu restant avec les ciseaux.Placez la couche composite A/S séparée à plat sur le tapis de coupe. Si nécessaire, utilisez le scalpel pour redresser les bords du tissu et créer une forme de tissu carrée adaptée aux tests mécaniques biaxiaux. Placez la couche A/S dans de l’eau DI jusqu’à ce qu’elle soit prête à être testée.Marquez l’orientation de la couche F/V qui reste sur le panneau de cire. Découpez le plus grand carré possible dans la zone où la couche A/S a été retirée. Ensuite, placez-le dans de l’eau DI.L’analyse histologique de la feuillette intacte et des deux couches disséquées a permis de vérifier si le tissu était correctement séparé le long de la frontière entre la spongiose et la fibrose. Les micrographies histologiques ont été utilisées pour déterminer l’épaisseur de la couche tissulaire et les fractions massiques constitutives à l’aide du logiciel ImageJ. Les essais mécaniques contrôlés par déplacement et le post-traitement ont produit des données de tension membranaire par rapport à l’étirement de la feuillet antérieur de la valve tricuspide, de la feuillet postérieure de la valve tricuspide et de la feuillet septale de la valve tricuspide, décrivant le comportement mécanique non linéaire du tissu.Les données d’imagerie du domaine de fréquence spatiale polarisée ont produit des cartes en couleur de l’orientation de la fibre de collagène et du degré d’anisotropie optique. Plus précisément, ces cartes de couleurs ont fourni une compréhension complète de l’architecture des fibres de collagène dans l’ensemble du spécimen de tissu. Il est important de noter que la couche composite rétrécit une fois qu’elle est séparée du tissu épinglé.Prélever le plus grand échantillon possible pour s’assurer qu’il y a suffisamment de tissu pour les tests ultérieurs.

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Conception d&#39;un bioréacteur de chargement mécanique biaxial pour l&#39;ingénierie tissulaire

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Fabrication and Characterization of a Conformal Skin-like Electronic System for Quantitative, Cutaneous Wound Management

Fabrication et caractérisation d&#39;un système électronique conforme de la peau comme pour la gestion quantitative, cutanée plaies

Recent advances in the development of electronic technologies and biomedical devices offer opportunities for non-invasive, quantitative assessment of ...

Layer-by-layer Collagen Deposition in Microfluidic Devices for Microtissue Stabilization

Couche par couche dépôt de collagène dans les dispositifs microfluidiques pour Microbroyeur stabilisation

Although microfluidics provides exquisite control of the cellular microenvironment, culturing cells within microfluidic devices can be challenging. 3D ...

Quantification of Strain in a Porcine Model of Skin Expansion Using Multi-View Stereo and Isogeometric Kinematics

Quantification de la souche dans un modèle d&#39;extension Porcine de la peau Utilisation du Multi-View stéréo et isogéométrique Cinématique

Tissue expansion is a popular technique in plastic and reconstructive surgery that grows skin in vivo for correction of large defects such as burns and ...

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

La morphologie de poils absorbants d’Arabidopsis semis dans une bicouche Microfluidic plateforme d’imagerie

Root hairs increase root surface area for better water uptake and nutrient absorption by the plant. Because they are small in size and often obscured by ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Détection d’endotoxines dans les Nano-formulations utilisant la Limulus Amébocytes Lysate (LAL)

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

Assembly and Characterization of Biomolecular Memristors Consisting of Ion Channel-doped Lipid Membranes

Assembly and Characterization of Biomolecular Memristors consistant en des Membranes lipidiques dopé au canal ionique

The ability to recreate synaptic functionalities in synthetic circuit elements is essential for neuromorphic computing systems that seek to emulate the ...

Biaxial Mechanical Characterizations of Atrioventricular Heart Valves

Biaxiales caractérisations mécaniques des valvules auriculo-ventriculaire

Extensive biaxial mechanical testing of the atrioventricular heart valve leaflets can be utilized to derive&#160;optimal parameters used in constitutive ...