Name: layer microdissection of tricuspid valve leaflets for biaxial mechanical characterization and microstructural quantification
Uploaded: 2022-02-10T15:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela American Heart Association Scientist Development Grant (16SDG27760143) e pela Presbyterian Health Foundation. O KMC foi apoiado em parte pelo Programa de Oportunidade de Pesquisa de Graduação da Universidade de Oklahoma (OU) e pelo Programa de Aprendizagem de Pesquisa de Honras da Universidade de Oklahoma (OU). A DWL foi apoiada em parte pela National Science Foundation Graduate Research Fellowship (GRF 2019254233) e pela American Heart Association/Children's Heart Foundation Predoctoral Fellowship (Prêmio #821298). Todo esse apoio é reconhecido com gratidão.

Todos os métodos aqui descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Oklahoma. Os tecidos animais foram adquiridos de um matadouro aprovado pelo USDA.
1. Caracterização mecânica biaxial
<ol><li>Preparação tecidual<ol>
<li>Recupere um folheto de TV do congelador, lâminas de barbear, uma caneta cirúrgica, fórceps, uma pipeta com água deionizada (DI) e um tapete de corte. Descongele o folheto de TV usando 2-3 gotas...

<ol>
	<li>Vesely, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+elastin+in+aortic+valve+mechanics.">The role of elastin in aortic valve mechanics.</a> Journal of Biomechanics. 31 (2), 115-123 (1998).</li><li>Zhang, W., Ayoub, S., Liao, J., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+meso-scale+layer-specific+structural+constitutive+model+of+the+mitral+heart+valve+leaflets.">A meso-scale layer-specific structural constitutive model of the mitral heart valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 32, 238-255 (2016).</li><li>Stella, J. A., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biaxial+mechanical+properties+of+the+layers+of+the+aortic+valve+leaflet.">On the biaxial mechanical properties of the layers of the aortic valve leaflet.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 129 (5), 757-766 (2007).</li><li>Khoiy, K. A., Amini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biaxial+mechanical+response+of+porcine+tricuspid+valve+leaflets.">On the biaxial mechanical response of porcine tricuspid valve leaflets.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 138 (10), 104504 (2016).</li><li>Jett, S. 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T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+on+linking+tissue+mechanics+with+load-dependent+collagen+microstructures+in+porcine+tricuspid+valve+leaflets.">A pilot study on linking tissue mechanics with load-dependent collagen microstructures in porcine tricuspid valve leaflets.</a> Bioengineering. 7 (2), 60 (2020).</li><li>Pant, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+microstructural+changes+in+porcine+tricuspid+valve+leaflets.">Pressure-induced microstructural changes in porcine tricuspid valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 67, 248-258 (2018).</li><li>Kramer, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+layer-specific+tissue+biomechanics+of+porcine+atrioventricular+heart+valve+leaflets.">An investigation of layer-specific tissue biomechanics of porcine atrioventricular heart valve leaflets.</a> Acta Biomaterialia. 96, 368-384 (2019).</li><li>Ross, C. J., Laurence, D. W., Wu, Y., Lee, C. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biaxial+mechanical+characterizations+of+atrioventricular+heart+valves.">Biaxial mechanical characterizations of atrioventricular heart valves.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (146), e59170 (2019).</li><li>Goth, W., Lesicko, J., Sacks, M. S., Tunnell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical-based+analysis+of+soft+tissue+structures.">Optical-based analysis of soft tissue structures.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 18, 357-385 (2016).</li><li>Jett, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+polarized+spatial+frequency+domain+imaging+(pSFDI)+with+a+biaxial+mechanical+testing+system+for+quantification+of+load-dependent+collagen+architecture+in+soft+collagenous+tissues.">Integration of polarized spatial frequency domain imaging (pSFDI) with a biaxial mechanical testing system for quantification of load-dependent collagen architecture in soft collagenous tissues.</a> Acta Biomaterialia. 102, 149-168 (2020).</li><li>Reddy, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> An Introduction to Continuum Mechanics. , (2013).</li><li>Duginski, G. A., Ross, C. J., Laurence, D. W., Johns, C. H., Lee, C. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+effect+of+freezing+storage+on+the+biaxial+mechanical+properties+of+excised+porcine+tricuspid+valve+anterior+leaflets.">An investigation of the effect of freezing storage on the biaxial mechanical properties of excised porcine tricuspid valve anterior leaflets.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 101, 103438 (2020).</li><li>Salinas, S. D., Clark, M. M., Amini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+response+changes+in+porcine+tricuspid+valve+anterior+leaflet+under+osmotic-induced+swelling.">Mechanical response changes in porcine tricuspid valve anterior leaflet under osmotic-induced swelling.</a> Bioengineering. 6 (3), 70 (2019).</li><li>Pokutta-Paskaleva, A., Sulejmani, F., DelRocini, M., Sun, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+mechanical,+morphological,+and+microstructural+characterization+of+porcine+mitral+and+tricuspid+leaflets+and+chordae+tendineae.">Comparative mechanical, morphological, and microstructural characterization of porcine mitral and tricuspid leaflets and chordae tendineae.</a> Acta Biomaterialia. 85, 241-252 (2019).</li><li>Ross, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+glycosaminoglycan+contribution+to+biaxial+mechanical+behaviors+of+porcine+atrioventricular+heart+valve+leaflets.">An investigation of the glycosaminoglycan contribution to biaxial mechanical behaviors of porcine atrioventricular heart valve leaflets.</a> Journal of the Royal Society Interface. 16 (156), 0069 (2019).</li><li>Sommer, G., Regitnig, P., Ko&#776;ltringer, L., Holzapfel, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biaxial+mechanical+properties+of+intact+and+layer-dissected+human+carotid+arteries+at+physiological+and+supraphysiological+loadings.">Biaxial mechanical properties of intact and layer-dissected human carotid arteries at physiological and supraphysiological loadings.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 298 (3), 898-912 (2009).</li><li>Holzapfel, G. A., Sommer, G., Gasser, C., Regitnig, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+layer-specific+mechanical+properties+ofhuman+coronary+arteries+with+intimal+thickening,+and+related+constitutive+modelling.">Determination of the layer-specific mechanical properties ofhuman coronary arteries with intimal thickening, and related constitutive modelling.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (5), 2048-2058 (2005).</li><li>Sommer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiaxial+mechanical+response+and+constitutive+modeling+of+esophageal+tissues:+Impact+on+esophageal+tissue+engineering.">Multiaxial mechanical response and constitutive modeling of esophageal tissues: Impact on esophageal tissue engineering.</a> Acta Biomaterialia. 9 (12), 9379-9391 (2013).</li></ol>

As etapas críticas para o protocolo incluem: (i) a microdisseção da camada, (ii) a montagem do tecido, (iii) a colocação do marcador fiducial e (iv) a configuração pSFDI. A microdisseção de camada apropriada é o aspecto mais importante e difícil do método aqui descrito. Antes de iniciar uma investigação utilizando essa técnica, o dissector(s) deve ter prática de longo prazo com a técnica de microdisseção e todos os três folhetos de TV. O dissetor deve garantir que as amostras de camada composta sejam ...

A TV está localizada entre o átrio direito e o ventrículo direito do coração. Ao longo do ciclo cardíaco, a TV regula o fluxo sanguíneo unidirecional através da abertura cíclica e fechamento do folheto anterior da TV (TVAL), do folheto posterior da TV (TVPL) e do folheto septal da TV (TVSL). Esses folhetos são complexos e têm quatro camadas anatômicas distintas — as atrialis (A), a esponjosa (S), a fibrosa (F) e a ventricular (V)— com constituintes microestruturais únicos. As fibras de elastina nos atrialis e ventricularis ajudam a restaurar o tecido à sua geometria não deformada após o carregamento mecânico1. Em contraste, a fibrosa contém uma densa rede de fibras de colágeno onduladas que contribuem para a capacidade de carga dos folhetos2. Consistindo principalmente de gllicosaminoglicanos, a esponngue foi hipótese para permitir a tesoura entre camadas de folheto durante a função da válvula cardíaca3. Embora todos os três tipos de folhetos tenham as mesmas camadas anatômicas, há variações nas espessuras das camadas e proporções constituintes que têm implicações para comportamentos mecânicos específicos de folhetos.
Pesquisadores têm explorado as propriedades dos folhetos de TV usando caracterizações mecânicas planar, avaliações histomorfológicas e caracterizações ópticas da arquitetura de fibra de colágeno. Por exemplo, caracterizações mecânicas biaxiais planar buscam emular o carregamento fisiológico aplicando deslocamentos perpendiculares ao tecido e registrando as forças associadas. As observações resultantes de deslocamento de força (ou estiramento de estresse) revelaram que todos os três folhetos de TV apresentam comportamentos mecânicos não lineares e específicos da direção com respostas mais aparentes específicas do folheto na direçãodo tecido radial 4,5,6. Acredita-se que esses comportamentos específicos de folhetos decorrem de diferenças nas propriedades microestruturais observadas utilizando técnicas histológicas padrão 6,7. Além disso, a imagem de segunda geração harmônica6, a dispersão de luz de pequeno ângulo8 e a imagem de domínio de frequência espacial polarizada7 (pSFDI) visam entender essas propriedades microestruturais e têm mostrado diferenças específicas de folhetos na orientação da fibra de colágeno e no crimp de fibras que têm implicações para os comportamentos mecânicos observados no nível do tecido. Esses estudos avançaram significativamente nossa compreensão da microestrutura tecidual e seu papel em comportamentos de nível tecidual. No entanto, ainda há muito a ser abordado na conexão experimental da mecânica tecidual e da microestrutura subjacente.
Recentemente, este laboratório realizou caracterizações mecânicas das camadas de folhetos de TV separadas em duas camadas compostas (A/S e F/V) utilizando uma técnica de microdisseção9. Esse trabalho anterior destacou diferenças nas propriedades mecânicas das camadas e ajudou a fornecer insights sobre como a microestrutura em camadas contribui para os comportamentos mecânicos do tecido. Embora essa investigação tenha melhorado nossa compreensão da microestrutura do folheto de TV, a técnica tinha várias limitações. Em primeiro lugar, as propriedades das camadas compostas não foram diretamente comparadas com o tecido intacto, levando à falta de compreensão completa da relação mecânica-microestrutura. Em segundo lugar, a arquitetura de fibra de colágeno das camadas compostas não foi examinada. Em terceiro lugar, apenas as camadas da TVAL foram investigadas devido a dificuldades na coleta das camadas compostas dos outros dois folhetos de TV. O método descrito aqui fornece um quadro de caracterização holística que supera essas limitações e fornece caracterizações completas dos folhetos de TV e suas camadas compostas.
Este artigo descreve a técnica de microdisseção que separa os três folhetos de TV em suas camadas compostas (A/S e F/V) para caracterizações mecânicas e microestruturais biaxiais 10,11,12. Este protocolo iterativo inclui (i) testes mecânicos biaxiais e caracterização pSFDI do folheto intacto, (ii) uma técnica de microdissecção nova e reprodutível para obter de forma confiável as camadas de TV composta, e (iii) testes mecânicos biaxial e caracterização pSFDI das camadas de TV compostas. O tecido foi exposto ao carregamento de tração biaxial com várias razões de força para testes mecânicos. Em seguida, o pSFDI foi usado para determinar a orientação e alinhamento da fibra de colágeno em várias configurações carregadas. o pSFDI preserva a arquitetura nativa da fibra de colágeno, permite análises dependentes de carga e contorna a necessidade típica de fixar ou limpar tecido para análise de arquitetura de fibra de colágeno, como em imagens de segunda geração harmônica ou dispersão de luz de pequeno ângulo. Finalmente, os tecidos foram preparados utilizando técnicas padrão de histologia para visualizar a microestrutura tecidual. Esta estrutura iterativa e holística permite a comparação direta das propriedades mecânicas e microestruturais do folheto de TV com suas camadas compostas.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Formalin Solution, Neutral Buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alconox Detergent</td>
			<td>Alconox</td>
			<td></td>
			<td>cleaning compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioTester - Biaxial Tester</td>
			<td>CellScale Biomaterials Testing</td>
			<td></td>
			<td>1.5 N Load Cell Capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting Mat</td>
			<td>Dahle</td>
			<td>B0027RS8DU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized Water</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-Tipped Tool</td>
			<td>HTI INSTRUMENTS</td>
			<td>NSPLS-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - Curved</td>
			<td>Scientific Labwares</td>
			<td>16122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - Thick</td>
			<td>Scientific Labwares</td>
			<td>161001078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - Thin</td>
			<td>Scientific Labwares</td>
			<td>16127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabJoy</td>
			<td>CellScale Biomaterials Testing</td>
			<td>Version 10.66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Displacement Sensor</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>IL-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Cyanoacrylate Glue</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>2436365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>Version 2020a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Scissors</td>
			<td>HTI Instruments</td>
			<td>CAS55C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Belmaks</td>
			<td>360758081051Y4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized Spatial Frequency Domain Imaging Device</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Made in-house using a digital light projector, linear polarizer, rotating polarizer mount, and charge-coupled device camera. 
			See doi.org/10.1016/j.actbio.2019.11.028 (PMCID: PMC8101699) for more details.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>THINKPRICE</td>
			<td>TP-SCALPEL-3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Edge Industrial Razor Blades (Surgical Carbon Steel)</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>H3515541105024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Pen</td>
			<td>LabAider</td>
			<td>LAB-Skin-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-Pins</td>
			<td>Business Source</td>
			<td>BSN32351</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax Board</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Made in-house using modeling wax and baking tray</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh Boat</td>
			<td>Pure Ponta</td>
			<td>mdo-azoc-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

layer microdissection of tricuspid valve leaflets for biaxial mechanical characterization and microstructural quantification

A válvula tricúspide (TV) regula o fluxo unidirecional de sangue não desoxorado do átrio direito ao ventrículo direito. A TV é composta por três folhetos, cada um com comportamentos mecânicos únicos. Essas variações entre os três folhetos de TV podem ser ainda mais compreendidas examinando suas quatro camadas anatômicas, que são as atrialis (A), esponjosa (S), fibrosa (F) e ventricularis (V). Embora essas camadas estejam presentes nos três folhetos de TV, há diferenças em suas espessuras e constituintes microestruturais que influenciam ainda mais seus respectivos comportamentos mecânicos. 
Este protocolo inclui quatro etapas para elucidar as diferenças específicas da camada: (i) caracterizar os comportamentos arquitetônicos de fibra mecânica e colágeno do folheto de TV intacto, (ii) separar as camadas compostas (A/S e F/V) do folheto de TV, (iii) realizar as mesmas caracterizações para as camadas compostas, e (iv) realizar pós-hoc avaliação histologia. Esta estrutura experimental permite exclusivamente a comparação direta do tecido de TV intacto com cada uma de suas camadas compostas. Como resultado, informações detalhadas sobre a microestrutura e a função biomecânica dos folhetos de TV podem ser coletadas com este protocolo. Essas informações podem potencialmente ser usadas para desenvolver modelos computacionais de TV que buscam fornecer orientação para o tratamento clínico da doença da TV.

A microdisseção produzirá amostras de A/S e F/V com espessuras relativamente uniformes que podem ser montadas em um dispositivo de teste biaxial (comercial). A análise histologia do folheto intacto e das duas camadas dissecadas verificará se o tecido foi corretamente separado ao longo da borda entre a esponjosa e a fibrosa (Figura 7). Além disso, os micrografos de histologia podem ser usados para determinar as espessuras da camada tecidual e frações de massa constituintes usando o so...

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Layer Microdissection of Tricuspid Valve Leaflets for Biaxial Mechanical Characterization and Microstructural Quantification

Este protocolo descreve a caracterização mecânica biaxial, quantificação de colágeno baseada em imagens de frequência espacial polarizada e microdisseção de folhetos de válvula tricúspide. O método fornecido elucida como as camadas de folhetos contribuem para os comportamentos holísticos do folheto.

Microdisseção de camada de folhetos de válvulas tricúsplicas para caracterização mecânica biaxial e quantificação microestrutural

The tricuspid valve (TV) regulates the unidirectional flow of unoxygenated blood from the right atrium to the right ventricle. The TV consists of three ...

Este método pode isolar as contribuições das camadas teciduais para o comportamento geral do tecido, fornecendo uma nova visão sobre a microestrutura tecidual. Nossa estrutura de microdisseção e teste nos permite comparar diretamente as propriedades mecânicas e microestruturais dos folhetos de válvulas cardíacas com suas próprias camadas compostas. A microdisseção pode ser difícil de dominar, portanto, é altamente recomendável praticar o máximo possível antes de iniciar seu estudo.Primeiro, reúna os materiais necessários, placa de cera, água DI, pipeta, bisturi, micro tesoura, fórceps finos, fórceps curvos, fórceps espessos e pinos. Desmonte o tecido do testador biaxial e meça sua espessura usando o sensor de deslocamento laser. Coloque o tecido na tábua de cera.Examine o lado ventricular do tecido para inserções de chorda grandes. Tire uma foto para referência. Espalhe o tecido plano na placa de cera com os atrialis voltados para cima.Para fixar o tecido à placa, coloque um pino inclinado para longe do tecido em cada canto para que ele puxe ligeiramente o tecido esticado. Certifique-se de que os pinos estão fora dos orifícios criados pelas latas ao montar o tecido e o tecido é quadrado e não muda durante a microdisseção da camada. Se necessário, coloque pinos ao longo da lateral do tecido durante a dissecação para esticar mais o tecido.Remova os marcadores fiduciais de contas de vidro. Coloque água DI na superfície do tecido com uma pipeta para que cubra completamente o tecido de forma semelhante a uma bolha. Para fazer o canto inicial, selecione um canto do espécime fixado, evitando grandes inserções de chorda em áreas frágeis.Em seguida, corte a camada A/S arrastando levemente o bisturi sobre a superfície do tecido ao longo dos orifícios de montagem para testes mecânicos. As bordas do corte começam a se separar, revelando a camada F/V por baixo. Com fórceps finos e contundentes, esfregue firmemente ao longo do corte para separar ainda mais suas bordas.Se o corte na camada A/S não começar a se separar, rastreie levemente o mesmo corte novamente com um bisturi. Faça um segundo corte perpendicular ao primeiro corte. Se os dois cortes não estiverem conectados, execute as pinças finas sob a pequena área de tecido que separa os dois cortes.Em seguida, use cuidadosamente a tesoura para cortar o tecido. Esfregue ao longo dos cortes do canto com um fórceps fino até que o tecido se separe da camada F/V. Assim que um pequeno pedaço de tecido for separado, segure-o com a pinça grande e puxe-o suavemente para separar ainda mais as camadas compostas.Continue descascando o tecido enquanto o agarra com pinças maiores para evitar rasgos e rasgos indesejados da camada composta A/S, e esfregue a costura até chegar ao final dos dois cortes feitos para o canto. Se a primeira curva tiver grandes problemas com a separação, tente um canto diferente como ponto de partida. Em seguida, para fazer uma segunda curva, estenda os dois cortes feitos para o primeiro canto colocando a ponta do bisturi na parte inferior de cada corte e arrastando-a levemente ao longo da superfície do tecido para que as extensões de corte se conectem aos cortes originais e continuem a seguir os orifícios de tine ou sutura.Continue estendendo os cortes e descascando a camada superior composta A/S para trás enquanto esfrega a costura até que um lado esteja terminado. Observe que o tecido será totalmente separado ao longo de um corte. Em seguida, crie um segundo canto perpendicular até o final do lado totalmente descascado.Estenda os cortes restantes, evitando grandes inserções de chorda. Exclua as inserções de chorda da área de separação A/S somente quando essa exclusão permitir um espécime A/S grande o suficiente para caracterizações experimentais. Continue separando as camadas A/S e F/V usando as técnicas de esfregação e puxar empregadas para a primeira curva.Pare de separar o tecido imediatamente se uma lágrima ou buraco se formar. Para evitar que a pinça seja pega, coloque a tesoura em qualquer orifício que se forme e corte o tecido do centro. Se o defeito se formar ao longo da costura da separação, então comece a separar o tecido ao longo de outra borda.Procure por conexões entrecamadas que possam aparecer ao separar o tecido e evitar a separação de tecidos. Observe que estes são fios finos, mas fortes, que devem ser cuidadosamente cortados usando uma tesoura. Evite criar um orifício na camada A/S ou cortar para baixo na camada F/V.Continue este processo até que a maior amostra possível da camada A/S tenha sido separada. Marque a orientação da amostra usando a caneta cirúrgica. Por fim, corte ao longo da costura de separação para a borda restante do tecido com a tesoura.Coloque a camada composta A/S separada plana no tapete de corte. Se necessário, use o bisturi para endireitar as bordas do tecido e criar uma forma de tecido quadrado adequada para testes mecânicos biaxiais. Coloque a camada A/S em água DI até que esteja pronta para ser testada.Marque a orientação da camada F/V que permanece na placa de cera. Corte a maior praça possível para fora da área onde a camada A/S foi removida. Em seguida, coloque-o em água DI.A análise histológica do folheto intacto e das duas camadas dissecadas verificaram se o tecido foi corretamente separado ao longo da borda entre a esponjosa e a fibrosa. Os micrografos de histologia foram usados para determinar a espessura da camada tecidual e frações de massa constituintes usando o software ImageJ. O teste mecânico controlado por deslocamento e pós-processamento produziram tensão de membrana versus dados de estiramento do folheto anterior da válvula tricúspide, folheto posterior da válvula tricúspide e folheto septo da válvula tricúspide, descrevendo o comportamento mecânico não linear do tecido.Os dados polarizados de imagem de domínio de frequência espacial produziram mapas coloridos da orientação da fibra de colágeno e grau de anisotropia óptica. Especificamente, esses mapas de cores forneceram uma compreensão abrangente da arquitetura da fibra de colágeno em todo o espécime de tecido. É importante notar que a camada composta encolhe uma vez que são separadas do tecido fixado.Colete a maior amostra possível para garantir que haja tecido suficiente para os testes subsequentes.

Research

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Quantificação de Strain em um modelo suíno de expansão de pele Usando Multi-View Aparelho de som e Isogeometric Cinemática

Tissue expansion is a popular technique in plastic and reconstructive surgery that grows skin in vivo for correction of large defects such as burns and ...

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

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A raiz do cabelo morfologia de plântulas de Arabidopsis em uma plataforma Microfluidic de duas camadas de imagem

Root hairs increase root surface area for better water uptake and nutrient absorption by the plant. Because they are small in size and often obscured by ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

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Deteção da endotoxina em Nano-formulações usando Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) ensaios

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

Assembly and Characterization of Biomolecular Memristors Consisting of Ion Channel-doped Lipid Membranes

Montagem e caracterização de Biomolecular Memristors consiste em membranas de lipídios dopado com canal iônico

The ability to recreate synaptic functionalities in synthetic circuit elements is essential for neuromorphic computing systems that seek to emulate the ...

Biaxial Mechanical Characterizations of Atrioventricular Heart Valves

Biaxial caracterizações mecânicas das válvulas cardíacas Atrioventricular

Extensive biaxial mechanical testing of the atrioventricular heart valve leaflets can be utilized to derive&#160;optimal parameters used in constitutive ...