Name: tension gauge tether probes for quantifying growth factor mediated integrin mechanics and adhesion
Uploaded: 2022-02-11T14:30:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tension Gauge Tether Probes for Quantifying Growth Factor Mediated Integrin Mechanics and Adhesion at JoVE.com

يود المؤلفون أن يعربوا عن تقديرهم لأعضاء مختبر Mattheyses للمناقشات والانتقادات المثمرة. نحن نقر بتمويل A.L.M. من NSF CAREER 1832100 و NIH R01GM131099.

<ol>
	<li>Lim, C. -. G., Jang, J., Kim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+machinery+for+sensing+mechanical+force.">Cellular machinery for sensing mechanical force.</a> BMB Reports. 51 (12), 623-629 (2018).</li><li>Moraes, C., Sun, Y., Simmons, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=(Micro)managing+the+mechanical+microenvironment.">(Micro)managing the mechanical microenvironment.</a> Integrative Biology. 3 (10), 959-971 (2011).</li><li>Vogel, V., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+forces+matter+in+health+and+disease.+From+Cancer+to+Tissue+Engineering.">Mechanical forces matter in health and disease. From Cancer to Tissue Engineering.</a> Nanotechnology. , 233-303 (2010).</li><li>Wang, J. H. C., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+rules+cell+biology.">Mechanics rules cell biology.</a> BMC Sports Science, Medicine and Rehabilitation. 2 (1), 16 (2010).</li><li>Moeendarbary, E., Harris, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+mechanics:+principles,+practices,+and+prospects.">Cell mechanics: principles, practices, and prospects.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 6 (5), 371-388 (2014).</li><li>Streuli, C. H., Akhtar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+co-operation+between+integrins+and+other+receptor+systems.">Signal co-operation between integrins and other receptor systems.</a> Biochemical Journal. 418 (3), 491-506 (2009).</li><li>Chiasson-MacKenzie, C., McClatchey, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR-induced+cytoskeletal+changes+drive+complex+cell+behaviors:+The+tip+of+the+iceberg.">EGFR-induced cytoskeletal changes drive complex cell behaviors: The tip of the iceberg.</a> Science Signaling. 11 (515), (2018).</li><li>Kechagia, J. Z., Ivaska, J., Roca-Cusachs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrins+as+biomechanical+sensors+of+the+microenvironment.">Integrins as biomechanical sensors of the microenvironment.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (8), 457-473 (2019).</li><li>De Luca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+EGFR+signaling+in+tumor+microenvironment.">The role of the EGFR signaling in tumor microenvironment.</a> Journal of Cellular Physiology. 214 (3), 559-567 (2008).</li><li>Javadi, S., Zhiani, M., Mousavi, M. A., Fathi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crosstalk+between+Epidermal+Growth+Factor+Receptors+(EGFR)+and+integrins+in+resistance+to+EGFR+tyrosine+kinase+inhibitors+(TKIs)+in+solid+tumors.">Crosstalk between Epidermal Growth Factor Receptors (EGFR) and integrins in resistance to EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in solid tumors.</a> European Journal of Cell Biology. 99 (4), 151083 (2020).</li><li>Eliceiri, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin+and+growth+factor+receptor+crosstalk.">Integrin and growth factor receptor crosstalk.</a> Circulation Research. 89 (12), 1104-1110 (2001).</li><li>Dan, L., Jian, D., Na, L., Xiaozhong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crosstalk+between+EGFR+and+integrin+affects+invasion+and+proliferation+of+gastric+cancer+cell+line,+SGC7901.">Crosstalk between EGFR and integrin affects invasion and proliferation of gastric cancer cell line, SGC7901.</a> OncoTargets and Therapy. 5, 271-277 (2012).</li><li>Giancotti, F. G., Tarone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positional+control+of+cell+fate+through+joint+integrin/receptor+protein+kinase+signaling.">Positional control of cell fate through joint integrin/receptor protein kinase signaling.</a> Annual Reviews: Cell and Developmental Biology. 19, 173-206 (2003).</li><li>Ricono, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+cross-talk+between+epidermal+growth+factor+receptor+and+integrin+alphavbeta5+promotes+carcinoma+cell+invasion+and+metastasis.">Specific cross-talk between epidermal growth factor receptor and integrin alphavbeta5 promotes carcinoma cell invasion and metastasis.</a> Cancer Research. 69 (4), 1383-1391 (2009).</li><li>Polacheck, W. J., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+cell-generated+forces:+a+guide+to+the+available+tools.">Measuring cell-generated forces: a guide to the available tools.</a> Nature Methods. 13 (5), 415-423 (2016).</li><li>Hang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanosensors+for+single+cell+mechanical+interrogation.">Nanosensors for single cell mechanical interrogation.</a> Biosensors and Bioelectronics. 179, 113086 (2021).</li><li>Style, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traction+force+microscopy+in+physics+and+biology.">Traction force microscopy in physics and biology.</a> Soft Matter. 10 (23), 4047-4055 (2014).</li><li>Schoen, I., Hu, W., Klotzsch, E., Vogel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+cellular+traction+forces+by+micropillar+arrays:+contribution+of+substrate+warping+to+pillar+deflection.">Probing cellular traction forces by micropillar arrays: contribution of substrate warping to pillar deflection.</a> Nano Letters. 10 (5), 1823-1830 (2010).</li><li>Ma, V. P. -. Y., Salaita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+Nanotechnology+as+an+Emerging+Tool+to+Study+Mechanotransduction+in+Living+Systems.">DNA Nanotechnology as an Emerging Tool to Study Mechanotransduction in Living Systems.</a> Small. 15 (26), 1900961 (2019).</li><li>Kim, Y., Kim, K. A., Kim, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double-stranded+DNA+force+sensors+to+study+the+molecular+level+forces+required+to+activate+signaling+pathways.">Double-stranded DNA force sensors to study the molecular level forces required to activate signaling pathways.</a> Journal of the Korean Physical Society. 78 (5), 386-392 (2021).</li><li>Rao, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+activation+attenuates+the+mechanical+threshold+for+integrin+tension+and+focal+adhesion+formation.">EGFR activation attenuates the mechanical threshold for integrin tension and focal adhesion formation.</a> Journal of Cell Sciences. 133 (13), (2020).</li><li>Zhang, Y., Ge, C., Zhu, C., Salaita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-based+digital+tension+probes+reveal+integrin+forces+during+early+cell+adhesion.">DNA-based digital tension probes reveal integrin forces during early cell adhesion.</a> Nature Communications. 5, 5167 (2014).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-based+nanoparticle+tension+sensors+reveal+that+T-cell+receptors+transmit+defined+pN+forces+to+their+antigens+for+enhanced+fidelity.">DNA-based nanoparticle tension sensors reveal that T-cell receptors transmit defined pN forces to their antigens for enhanced fidelity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (20), 5610-5615 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+integrins+exhibit+anisotropic+mechanosensing+and+harness+piconewton+forces+to+mediate+platelet+aggregation.">Platelet integrins exhibit anisotropic mechanosensing and harness piconewton forces to mediate platelet aggregation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (2), 325-330 (2018).</li><li>Ma, V. P. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+induced+catalytic+amplification+reaction+for+readout+of+receptor-mediated+cellular+forces.">Mechanically induced catalytic amplification reaction for readout of receptor-mediated cellular forces.</a> Angewandte Chemie International Edition. 55 (18), 5488-5492 (2016).</li><li>Wang, X., Ha, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+single+molecular+forces+required+to+activate+integrin+and+notch+signaling.">Defining single molecular forces required to activate integrin and notch signaling.</a> Science. 340 (6135), 991-994 (2013).</li><li>Chen, Y., Lee, H., Tong, H., Schwartz, M., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+regulated+conformational+change+of+integrin+&#945;V&#946;3.">Force regulated conformational change of integrin &#945;V&#946;3.</a> Matrix Biology. 60-61, 70-85 (2017).</li><li>Kantlehner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+coating+with+cyclic+RGD+peptides+stimulates+osteoblast+adhesion+and+proliferation+as+well+as+bone+formation.">Surface coating with cyclic RGD peptides stimulates osteoblast adhesion and proliferation as well as bone formation.</a> ChemBioChem. 1 (2), 107-114 (2000).</li><li>Kapp, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+evaluation+of+the+activity+and+selectivity+profile+of+ligands+for+RGD-binding+integrins.">A comprehensive evaluation of the activity and selectivity profile of ligands for RGD-binding integrins.</a> Scientific Reports. 7, 39805 (2017).</li><li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+alpha(v)beta(3)+integrin+directed+therapeutics.">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as alpha(v)beta(3) integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (3), 128-135 (2002).</li><li>Li, I. T. S., Ha, T., Chemla, Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+cell+surface+adhesion+by+rotation+tracking+and+adhesion+footprinting.">Mapping cell surface adhesion by rotation tracking and adhesion footprinting.</a> Scientific Reports. 7 (1), 44502 (2017).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force-activatable+biosensor+enables+single+platelet+force+mapping+directly+by+fluorescence+imaging.">Force-activatable biosensor enables single platelet force mapping directly by fluorescence imaging.</a> Biosensors and Bioelectronics. 100, 192-200 (2018).</li><li>Murad, Y., Li, I. T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+molecular+forces+with+serially+connected+force+sensors.">Quantifying molecular forces with serially connected force sensors.</a> Biophysical Journal. 116 (7), 1282-1291 (2019).</li><li>Yasunaga, A., Murad, Y., Li, I. T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+molecular+tension-classifications,+interpretations+and+limitations+of+force+sensors.">Quantifying molecular tension-classifications, interpretations and limitations of force sensors.</a> Physical Biology. 17 (1), 011001 (2019).</li><li>Luca, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch-Jagged+complex+structure+implicates+a+catch+bond+in+tuning+ligand+sensitivity.">Notch-Jagged complex structure implicates a catch bond in tuning ligand sensitivity.</a> Science. 355 (6331), 1320-1324 (2017).</li><li>Spillane, K. M., Tolar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cell+antigen+extraction+is+regulated+by+physical+properties+of+antigen-presenting+cells.">B cell antigen extraction is regulated by physical properties of antigen-presenting cells.</a> The Journal of Cell Biology. 216 (1), 217-230 (2017).</li><li>Brockman, J. M., Salaita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+proofreading:+a+general+mechanism+to+enhance+the+fidelity+of+information+transfer+between+cells.">Mechanical proofreading: a general mechanism to enhance the fidelity of information transfer between cells.</a> Frontiers in Physics. 7, 14 (2019).</li></ol>

ويعلن صاحبا البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

من خلال الإجراء التفصيلي خطوة بخطوة الموضح أعلاه ، يمكن للمرء إعداد أسطح TGT لقياس مورفولوجيا الخلية وتوتر الإنتينجين الناتج عن الخلايا الملتصقة أثناء تعلق الخلية وانتشارها بعد العلاج باستخدام EGF. وفر تصميم المسبار المباشر وتوليفه وإعداده السطحي إلى جانب الإعداد التجريبي البسيط منصة مستقرة لدراسة تفاعل EGFR و integrins. بشكل عام ، تؤكد النتائج أن التنشيط المعتمد على الرباط ل EGFR يعزز انتشار الخلايا ، ويضبط الخصائص الحاملة للقوة لمستقبلات الإنتينجين ، ويعزز تنظيم الالتصاق البؤري والنضج. تدعم النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام مجسات TGT الفرضية الشاملة القائلة بأن عوامل النمو ، مثل EGFR ، تعمل ك "منظمي ميكانيكي" ، مما يزيد من كمية توتر الإنتينجين وتنظيمه المكاني وينظم اتجاه وميكانيكا الالتصاقات البؤرية.
عند التطبيق على سطح TGT ، تهبط الخلايا وتعلق وتنتشر مع استشعار مستقبلات الإنتينجين (αVβ3) وارتباطها برباط cRGDfK. وبذلك يمكن تمزيق مجسات TGT ميكانيكيا، مما يولد تألقا في موقع اشتباك الليغاند. القراءة هي "تاريخ القوة" التراكمي للخلية المتفاعلة مع السطح. هناك بعض المشكلات الشائعة في أسطح TGT التي يمكن أن تكون موجودة أثناء هذه التجارب. قد يكون التألق العالي في الخلفية السطحية (الشكل 6A ، B) ، والمظهر السطحي غير المكتمل ، وفشل الخلايا في توليد إشارة التوتر (الشكل 6C ، D) ، وفشل الخلايا في الانتشار (الشكل 6E ، F) بسبب أوجه القصور التقنية في مسبار TGT أو التوليف السطحي. وترد في الجدول 1 حلول لهذه المسائل المشتركة.
يوفر التصميم المباشر لمجسات TGT لعلماء الأحياء الخلوية أداة قوية لدراسة نتائج إشارات محددة لعامل النمو بمعزل عن غيرها دون تدخل من مستقبلات سطح الخلية الأخرى من خلال توفير روابط ومحفزات محددة فقط. بالإضافة إلى ذلك ، تسمح تحقيقات TGT بالتحقيق في عتبة التوتر التي تؤكد على مستقبلات الإنتغرين الفردية أثناء التصاق الخلايا عند حساسية pN. تفشل النهج البديلة في الإبلاغ عن القوى التي تمارسها المستقبلات الفردية ذات الدقة المكانية العالية في العينات الثابتة31. الفحص المجهري لقوة الجر حساس فقط لقوى nN ، وهو ترتيب من حيث الحجم أعلى من القوى التي تطبقها مستقبلات integrin الفردية15 ، وتقوم مجسات التوتر الجزيئي بقياس قوى pN ، ولكن لأنها قابلة للانعكاس ، فإنها لا تتحمل التثبيت بقوة. لهذه الأسباب ، تعد مجسات TGT أداة جذابة لدراسة آليات تفاعلات عامل النمو و integrin.
هناك العديد من الفروق الدقيقة التقنية المرتبطة بتحقيقات TGT التي يجب مراعاتها قبل تصميم التجربة. صورة التوتر هي لقطة في الوقت المناسب ، تمثل تاريخ القوة وليست مؤشرا على اشتباكات مستقبلات الرباط في أي وقت من الأوقات. نظرا لأن توليد الإشارة يعتمد على فصل المسبار ، فإن التألق TGT ينتج عن مجسات مفتوحة لا تتعرض للتوتر النشط من تفاعل مستقبلات الرباط. وهذا يعني أن قراءة توتر الإنتينجين الذي تم الحصول عليه على سطح TGT تاريخية وتراكمية بطبيعتها تمثل المكان الذي كانت فيه قوى أكبر من Ttol. لم يتم الإبلاغ عن مواقع قوى رباط المستقبلات الحالية الأقل من Ttol 19,32. نظرا لأن تمزق TGT يؤدي إلى إنهاء ارتباط رباط المستقبلات ، فإن انتشار الخلايا يرجع إلى تفاعلات integrin-ligand التي تواجه قوى أقل من Ttol. لذلك يجب على المستخدم توخي الحذر عند تحديد وقت ما بعد الطلاء لتقدير النتائج الميكانيكية المرتبطة بالالتصاقات القائمة على التكامل. أخيرا ، يجب النظر في معنى Ttol. تحتوي مجسات TGT المستخدمة هنا على T tol من 56 pN ، حيث Ttol هي القوة الثابتة اللازمة لتمزيق 50٪ من المجسات عند تطبيقها على 2 s. عند النظر في الأنظمة البيولوجية المعقدة ، من المحتمل أن تواجه TGTs تدرجا غير متجانس ومتنوع للقوة مع تبعيات زمنية متفاوتة. إذا تم تمزيق TGTs بواسطة قوى أكبر من Ttol ، فإن التألق سيكون أقل من شأن التوتر الكلي. بدلا من ذلك ، يمكن للقوى الأقل من Ttol المطبقة لفترات أطول أن تمزق عددا مشابها من المسابير مثل قوى العتبة العالية المطبقة لأوقات أقصر. قد يؤدي كلا السيناريوهين إلى نفس قراءة شدة التألق ، مما يجعل من الصعب حل حجم التوتر الدقيق أو الديناميكيات باستخدام تحقيقات TGT33,34.
بشكل عام ، يجب إجراء تقييمات لتوتر الإنتينجين مع تحفيز عامل النمو بعناية من خلال تصميم تجارب مع الضوابط الداخلية ، ومقارنة ملامح الانتشار على الأسطح الأخرى المغلفة بالمصفوفة ، وإجراء تقييمات متوازية لتألق TGT في الخلايا في وجود أو عدم وجود تحفيز عامل النمو ، واستخدام TGTs مع مختلف Ttol . تسمح TGTs بتحديد حجم دور إشارات عامل النمو في تنظيم ميكانيكا مستقبلات الإنتغرين ، وديناميكيات الالتصاق البؤري ، وانتشار الخلايا. يمكن استخدام هذا البروتوكول كقالب للعديد من التجارب المستندة إلى TGT باستخدام مجساتذات تول T مختلفة أو روابط مختلفة أو أنواع خلايا مختلفة أو ظروف تحفيز مختلفة. يمكن تصنيف أي بروتينات ذات أهمية بعد التثبيت ، ويمكن تنفيذ أي نوع من التحليل الكمي للصور. على هذا النحو ، نقدم نموذجا للعديد من تجارب TGT.
لا يقتصر استخدام مجسات TGT على دراسة الإنتيجينز ولكن يمكن توسيعه إلى مجموعة متنوعة من مستقبلات غشاء الخلايا عبر أنواع مختلفة من الخلايا عن طريق تعديل الليكاند. تم استخدام مجسات TGT للتحقيق في دور القوى في تنظيم سلاسل إشارات المستقبلات المختلفة ، بما في ذلك تحديد الدور الميكانيكي لميكانيكا مستقبلات Notch في التطور الجنيني وتكوين الخلايا العصبية35 ، والقوى التي تتوسط في تحديد واستيعاب المستضدات بواسطة مستقبلات الخلايا البائية 36 ، والقدرة الميكانيكية على التدقيق اللغوي لمستقبلات سطح الخلايا التائية للكشف عن التغيرات في القوى لتعزيز قوة وخصوصية نقل الإشارة37 . معا ، تسلط هذه النتائج الضوء على الإمكانات الهائلة لتحقيقات TGT في مجموعة متنوعة من الإعدادات التجريبية.

تتمتع الخلايا بالقدرة الجوهرية على استشعار القوى الميكانيكية وتوليدها والاستجابة لها ، مما يؤدي إلى تغييرات في النمط الظاهري الخلوي وإعادة تشكيل البيئة الدقيقة المحلية 1,2. تلعب القوى دورا حاسما في تنظيم العديد من جوانب سلوك الخلايا ، بما في ذلك الالتصاق والهجرة والانتشار والتمايز والتئام الجروح 3,4. يمكن أن تؤدي الانحرافات في التبادل الميكانيكي ثنائي الاتجاه بين الخلية والبيئة الدقيقة إلى حالات مرضية ، بما في ذلك السرطان5. تشارك العديد من مستقبلات الغشاء في الحفاظ على توازن مصفوفة الخلايا. من هذه ، فإن الإنتينجينات ومستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR) لها تآزر قوي 6,7. تقليديا ، تنشئ integrins الرابط الميكانيكي بين البيئة الدقيقة والهيكل الخلوي داخل الخلايا بينما ينظم EGFR نمو الخلايا وانتشارها وبقائها على قيد الحياة 8,9. EGFR هو هدف علاجي مدروس للغاية ، يركز على التنظيم الخارجي لتسهيل الإشارات داخل الخلايا. تم إنشاء EGFR-integrin crosstalk وراثيا وكيميائيا حيويا لتنظيم تطور أمراض متعددة ، بما في ذلك السرطان10,11. في حين تشير الدراسات إلى وجود تفاعل EGFR-integrin ، تعزى النتائج إلى مسارات الإشارات بعيدا عن غشاء البلازما7،12،13،14. لا يزال تأثير EGFR ، أو عوامل النمو الأخرى ، على ميكانيكا الخلايا غير مستكشف إلى حد كبير ويرجع ذلك جزئيا إلى نقص الأدوات اللازمة لقياس القوى الخلوية ونتائج الإشارات. يكمن التحدي في تحديد الأدوات المناسبة لدراسة الاتصال بين نماذج الإشارات المتوازية هذه وتحديد مساهماتها المحددة في ميكانيكا الخلايا.
تم تطوير العديد من الأساليب لقياس القوى الناتجة عن مستقبلات التصاق الخلايا ، ويتم توجيه القارئ إلى مراجعات متعمقة لهذه التقنيات15,16. باختصار ، يعتمد الفحص المجهري لقوة الجر والكشف عن صفيف الأعمدة الدقيقة على تشوه الركيزة الأساسية لاستنتاج قوى نانونيوتن (nN) ، وهو ترتيب من حيث الحجم أكثر من قوى المستقبلات الفردية17,18. تقنيات الجزيء الواحد ، بما في ذلك AFM والملقط البصري ، حساسة لقوى البيكونوتون البروتين الواحد (pN) ولكنها تقيس مستقبلا واحدا فقط في كل مرة ولا تقدم دقة مكانية جيدة (أو أي). توفر مجسات التوتر الجزيئي القائمة على الحمض النووي ومجسات حبل مقياس التوتر (TGT) دقة قوة pN بدقة مكانية محدودة الحيود (أو أفضل) ، مما يمنحها دورا فريدا في دراسة قوى الخلية الواحدة19,20 من أنواع الخلايا المتنوعة ، بما في ذلك الخلايا الليفية والخلايا السرطانية والصفائح الدموية والخلايا المناعية21,22,23,24 . في حين أن مجسات التوتر الجزيئي تحتوي على عنصر "نابض" قابل للتمديد ، وهو مثالي للتصوير في الوقت الفعلي ، فإن تحقيقات TGT تتمزق بشكل لا رجعة فيه ، تاركة وراءها "تاريخ قوة" الفلورسنت. بالإضافة إلى ذلك ، تقوم TGTs بتعديل عتبة التوتر للركيزة الأساسية ؛ يمكن استخدام سلسلة من المجسات ذات التركيبات الكيميائية المماثلة ولكن قوى تمزق مختلفة ، أو تحمل التوتر (Ttol) ، لتحديد الحد الأدنى من التوتر المطلوب لتشكيل الالتصاق البؤري وانتشار الخلايا. تتكون مجسات TGT من شريطين متكاملين للحمض النووي ، أحدهما مثبت على السطح والآخر يقدم رابطا للخلية. إذا ربط مستقبل الرباط ومارس قوة أكبر من Ttol للمسبار ، فصل الخيوط. يتم تعريف Ttol على أنه القوة الثابتة اللازمة لتمزيق 50٪ من المجسات في فترة 2 ثانية في ظل ظروف مثالية. في تحقيقات TGT "الدورانية" ، يمكن فصل المبرد الموجود على الشريط العلوي عن الفلوروفور الموجود على الخيط السفلي. فقط عندما تمزق مسبار TGT ، على الأرجح بواسطة قوى أكبر من أو تساوي Ttol ، سيتم إنشاء إشارة فلورسنت. يمكن أيضا إصلاح مجسات TGT ، مما يسمح بسهولة التلاعب بالأنظمة البيولوجية واختبار ظروف متعددة. لهذه الأسباب ، تم استخدام تحقيقات TGT في هذا العمل.
تم استخدام مجسات TGT لدراسة كيفية تعديل التصاق الخلايا المعتمدة على التكامل والقوى الميكانيكية بواسطة EGFR21 المنشط. أسس هذا العمل EGFR ك "منظم ميكانيكي" ، وضبط منظمة الالتصاق البؤري وتوليد التوتر. بالإضافة إلى ذلك ، وجد أن تحفيز EGF أثر على توزيع ونضج الالتصاقات البؤرية وتعزيز انتشار الخلايا. يمكن استخدام هذا النهج في الدراسات المستقبلية للتحقيق في كيفية تأثير عوامل النمو على القوى الميكانيكية في تطور الورم وديناميكياته. في حين تم تأسيس دور EGFR-integrin crosstalk في تنظيم الانتقال الظهاري إلى الوسيط ، فإن دور القوى الميكانيكية في هذه العملية لا يزال غير مستكشف10.
هنا ، يتم تقديم بروتوكول مفصل لهذه التجارب يغطي توليف وتجميع 56 مسبارا من pN TGT ، وتوليد أسطح TGT على أغطية زجاجية ، وتطبيق خلايا Cos-7 على سطح TGT والتحفيز باستخدام EGF ، والتثبيت ، وتلطيخ الخلايا بالفيلويدين ، والجسم المضاد المضاد للباكسيلين ، وتألق الانعكاس الداخلي الكلي عالي الدقة (TIRF) والتصوير المجهري لتباين تداخل الانعكاس (RICM) ، وقياس كمية الصورة. هذا البروتوكول ، على الرغم من أنه مكتوب للتحقيق في تحفيز EGF لخلايا Cos-7 ، إلا أنه قابل للتكيف بسهولة مع العديد من التجارب القائمة على TGT. يمكن استبدال الأربطة المختلفة ، و Ttol ، وأنواع الخلايا ، ومعلمات التحفيز ، والبروتينات التي تحمل علامة التثبيت التالية ، والتحليل الكمي بسهولة ، مما يجعل هذا البروتوكول قويا ومفيدا على نطاق واسع.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-Aminopropyl)triethoxysilane</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>440140</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-hydroxypicolinic acid (3-HPA)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>56197</td>
			<td>Maldi-TOF-MS matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid, Glacial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A38S</td>
			<td>Diluting EGF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile (HPLC)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A998SK</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>8878S</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A687</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Paxillin antibody [Y113]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab32084</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Syringes only with Luer-Lok</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>309657</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Gel P-2</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1504118</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) Protease-free Powder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9703100</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cos-7 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1651</td>
			<td>Cell Culture, Passage numbers 11-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip Mini-Rack, for 8 coverslips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C14784</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c(RGDfK(PEG-PEG)), PEG=8-amino-3,6-dioxaoctanoic acid</td>
			<td>Vivitide</td>
			<td>PCI-3696-PI</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3B NHS ester</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>PA63101</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>PHR1553</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM with L-Glutamine, 4.5g/L Glucose and Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT10013C</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal Growth Factor human EGF</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>E9644</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22032601</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Standard Tissue Culture Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772E</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-438-026</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flurobrite DMEM</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A1896701</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21244</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-210-064</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salts (HBSS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-170-161</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16050130</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H325-500</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosep MF centrifugal devices</td>
			<td>Pall laboratory</td>
			<td>ODM02C35</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NHS-azide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>88902</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen Gas Cylinder</td>
			<td>Airgas</td>
			<td></td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 2 round glass coverslips - 25 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48382-085</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Laboratory Film</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-980-487</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21-030-CV</td>
			<td>Surface Preparation/Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-070-063</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX Low Form Griffin Beakers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-540G</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Ascorbate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>18-606-310</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S233</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP358</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>434301</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS-LC-Biotin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21335</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A300-500</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEAA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0322726</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethylamine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>471283</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trifluoroacetic Acid (TFA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PI28901</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>THPTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1296293</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X 100 Detergent Surfact Ams Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>85111</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, DNA Grade, DNASE, Protease free</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP24701</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent AdvanceBio Oligonucleotide C18 column, 4.6 x 150 mm, 2.7 &#956;m</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>653950-702</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1100</td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Speed Orbital Shaker</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-320-813</td>
			<td>Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometer (MALDI-TOF-MS)</td>
			<td>Voyager STR</td>
			<td></td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Probes Attofluor Cell Chamber</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A7816</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td>Oligonucleotide Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ti inverted microscope</td>
			<td>pe Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Perfect Focus System</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements software</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash4.0 V3 Digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quad band TIRF 405/488/561/647 cube</td>
			<td>CHROMA</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RICM Cube</td>
			<td>CHROMA</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOLA v-nIR Light Engine</td>
			<td>Lumencor</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Forma Steri Cycle 370 CO2 Incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR 75D Ultrasonic Cleaner</td>
			<td>VWR</td>
			<td>13710</td>
			<td>Surface Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (Image J)</td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td>
			<td>Quantitative Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graph Pad Prism</td>
			<td>Graph Pad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligo name</td>
			<td>5&#39;modification/ 3&#39; modification</td>
			<td>Sequence (5&#39; to 3&#39;)</td>
			<td>Use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkyne-21-BHQ2</td>
			<td>5&#39; Hexynyl/ 3&#39; BHQ_2</td>
			<td>GTGAAATACCGCACAGATGCG</td>
			<td>Top strand TGT probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56 pN TGT</td>
			<td>5&#39; Biosg/TTTTTT/iUniAmM</td>
			<td>CGCATCTGTGCGGTATTTCACTTT</td>
			<td>Bottom strand TGT probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 pN TGT</td>
			<td>5&#39; AmMC6/ 3&#39; BioTEG</td>
			<td>CGCATCTGTGCGGTATTTCACTTT</td>
			<td>Bottom strand TGT probe</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tension gauge tether probes for quantifying growth factor mediated integrin mechanics and adhesion

تعتمد الكائنات الحية متعددة الخلايا على التفاعلات بين مستقبلات الغشاء والأربطة المتشابهة في المصفوفة خارج الخلية المحيطة (ECM) لتنسيق وظائف متعددة ، بما في ذلك الالتصاق والانتشار والهجرة والتمايز. يمكن أن تنتقل القوى الميكانيكية من الخلية عبر مستقبل الالتصاق integrin إلى الأربطة في ECM. يمكن تعديل كمية هذه القوى المتولدة عن الخلايا وتنظيمها المكاني بواسطة مستقبلات عامل النمو ، بما في ذلك مستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR). الأدوات المتاحة حاليا لقياس التغيرات بوساطة المحادثة المتقاطعة في ميكانيكا الخلايا وربطها بالالتصاقات البؤرية والمورفولوجيا الخلوية والإشارات محدودة. تم استخدام مستشعرات القوة الجزيئية القائمة على الحمض النووي والمعروفة باسم حبال مقياس التوتر (TGTs) لتحديد هذه التغييرات. تعتبر مجسات TGT فريدة من نوعها في قدرتها على تعديل عتبة القوة الأساسية والإبلاغ عن قوى مستقبلات مقياس بيكونوتون عبر سطح الخلية الملتصقة بالكامل بدقة مكانية محدودة الحيود . تعتمد مجسات TGT المستخدمة هنا على التفكك الذي لا رجعة فيه لدوبلكس الحمض النووي بواسطة قوى مستقبلات الروابط التي تولد إشارة فلورسنت. هذا يسمح بالقياس الكمي لتوتر الإنتغرين التراكمي (تاريخ القوة) للخلية. توضح هذه المقالة بروتوكولا يستخدم TGTs لدراسة تأثير EGFR على ميكانيكا الإنتغرين وتشكيل الالتصاق. يتم تفصيل تجميع منصة الاستشعار الميكانيكية TGT بشكل منهجي ويتم تحديد الإجراء الخاص بقوى الصورة والالتصاقات البؤرية وانتشار الخلايا. بشكل عام ، فإن القدرة على تعديل عتبة القوة الأساسية للمسبار ، ورباط الالتصاق ، ونوع وتركيز عامل النمو المستخدم في التحفيز تجعل من هذا منصة قوية لدراسة تفاعل مستقبلات الغشاء المتنوعة في تنظيم القوى بوساطة التكامل.

تم استخدام مجسات TGT الدوارة للتحقيق في تأثير مستقبلات عامل نمو البشرة المنشطة بالليغاند (EGFR) على ميكانيكا الخلايا بوساطة التكاملين وتكوين الالتصاق في خلايا Cos-721. تقدم المجسات الدورية Arg-Gly-Asp-Phe-Lys (cRGDfK)21,23,25,26 ، وهي انتقائية ل integrin heterodimer αVβ3 مع تقارب صغير فقط ل α5β1 integrins27,28,29,30. يتكون مسبار TGT من حمض نووي مزدوج يعمل على سطح زجاجي عبر الشريط السفلي باستخدام ربط البيوتين-ستربتافيدين. يعرض الشريط العلوي رباط الإنتغرين وهو متاح للارتباط بمستقبل إنتغرين المتماثل على غشاء الخلية (الشكل 5A). يتم وضع علامة على الشريط السفلي بفلوروفور والخيط العلوي بكوينشر ، مما يؤدي إلى الحد الأدنى من التألق في الخلفية عندما يكون TGT المزدوج سليما. إذا ربط الإنتينجين الرباط وطبق قوة ذات حجم أكبر من Ttol للمسبار ، فسوف ينفصل الحمض النووي المزدوج مما يؤدي إلى التألق (الشكل 5A). أي مسبار TGT لم يتم تمزيقه بواسطة قوة ميكانيكية سيبقى غير فلورسنت. يسمح هذا التألق الانتقائي للدوران برسم خرائط منهجية وكمية للقوى المتولدة عن التكامل على نطاق pN بدقة محدودة الحيود . بالإضافة إلى ذلك ، تقوم تحقيقات TGT بتعديل عتبة التوتر للركيزة.
يظهر هنا مثال تمثيلي لسطح TGTمع تول T من 56 pN. تم طلاء خلايا Cos-7 على سطح TGT هذا مع أو بدون تحفيز EGF لدراسة تأثير تنشيط EGFR مع تحفيز الليغاند على التصاق الخلايا وميكانيكا الإنتغرين (الشكل 5A ، B). تم احتضان الخلايا مع أو بدون EGF على أسطح TGT لمدة 60 دقيقة ، ثابتة ، وملطخة بالمناعة لعرض توزيع الالتصاق البؤري (paxillin) وتنظيم الهيكل الخلوي (F-actin) (الشكل 5B). ثم تم تصوير الخلايا باستخدام المجهر RICM و TIRF. كما رأينا بوضوح في صورة RICM ، تم تعزيز خلية Cos-7 المنتشرة على سطح 56 pN TGT بشكل كبير مع تحفيز EGF مقارنة بدون تحفيز. وقد تم تحديد ذلك كميا ل 50 خلية في كل حالة عن طريق قياس حجم منطقة ملامسة الركيزة الخلوية من صورة RICM (الشكل 5C). أدى التحفيز باستخدام EGF إلى مورفولوجيا أكثر دائرية ، تمثل خلايا Cos-7 تنتشر وتنمو في بيئتها الفسيولوجية الطبيعية (الشكل 5D). التألق من المجسات المفتوحة أعلى أيضا مع تحفيز EGF كما لوحظ في صورة التألق التوتر. كانت الكثافة المتكاملة للمجسات المفتوحة ، والتي تتناسب مع عدد المجسات المفتوحة ، أعلى بكثير مع تحفيز EGF مقارنة بدونها (الشكل 5B ، E). هذا هو تمثيل لجميع ارتباطات المستقبلات والروابط حيث تطبق التكاملات قوة أكبر من Ttol (56 pN).
أظهر التلطيخ بالباكسيلين أن توزيع وعدد ونضج (حجم) وتنظيم الالتصاقات البؤرية قد تأثرت أيضا بتحفيز EGF. بدت الالتصاقات البؤرية في الخلايا المحفزة EGF أكثر نضجا وموجهة شعاعيا مقارنة بعدم وجود ضوابط EGF. كما تم تعزيز تنظيم الهيكل الخلوي F-actin بتحفيز EGF ، كما تم تقييمه بواسطة تلطيخ الفيلويدين (الشكل 5B). تم إجراء هذه التقييمات النوعية من خلال المقارنة البصرية للصور من كلتا المجموعتين العلاجيتين. يمكن إجراء التحليل الكمي للالتصاق البؤري ولكنه خارج نطاق هذا البروتوكول. في هذه التجربة ، وفر سطح TGT منصة لتفصيل تأثير تنشيط EGFR بشكل منهجي على انتشار الخلايا ، وميكانيكا الإنتغرين ، وتكوين الالتصاق البؤري.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63529/63529fig01.jpg"> الشكل 1: مخطط لليوم 1 من إعداد سطح TGT. (أ) تنظيف الأغطية. (ب) حفر سطح الغطاء. (ج) تحييد حل البيرانا. (د) تسييل السطح لصنع مجموعات أمين تفاعلية. (ه) موازنة الأغطية مع المرحلة العضوية. (و) تجفيف الأغطية بغاز خامل. (ز) بيوتاينيلات مجموعات الأمين السطحية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63529/63529fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63529/63529fig02.jpg"> الشكل 2: مخطط لليوم 2 من إعداد سطح TGT. (أ) تنظيف وتجفيف الأغطية لإزالة أي بيوتين متبقي من اليوم السابق. (ب) التخميل مع BSA لمنع الربط غير المحدد للكاشف في الخطوات اللاحقة. (ج) تشغيل الأغطية باستخدام الستربتافيدين. (د) تهجين المجسات في دورة حرارية. (ه) تطبيق المجسات المركبة على الأغطية (F) تجميع الغطاء في غرفة تصوير الخلية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63529/63529fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63529/63529fig03.jpg"> الشكل 3: سير عمل عام يسلط الضوء على الخطوات الواسعة عبر الإعداد التجريبي بأكمله . (أ) عملية انفصال الخلايا والطلاء على سطح TGT في الوسائط القاعدية (DMEM) مع أو بدون تحفيز EGF. (ب) مخطط انسيابي للخطوات التي ينطوي عليها التثبيت والتلطيخ المناعي بعد التعلق والانتشار على سطح TGT. (ج) بعد التلطيخ ، يتم تصوير الخلايا على مجهر فلوري مقلوب باستخدام مجهر RICM و TIRF. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63529/63529fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63529/63529fig04.jpg"> الشكل 4: مثال على معالجة البيانات والتحليل الكمي . (أ) التقسيم التدريجي لخط أنابيب التحليل المستخدم في فيجي (ImageJ) لقياس كمية صور التوتر و RICM. (ب) مثال تمثيلي للنتائج المورفومترية الخلوية التي تم تحليلها باستخدام خط الأنابيب أعلاه. (ج) أمثلة تمثيلية للنتائج الميكانيكية للخلايا التي تم تحليلها باستخدام خط الأنابيب المذكور أعلاه. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63529/63529fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63529/63529fig05.jpg"> الشكل 5: مثال على البيانات من تجربة TGT. (A) رسم بياني يسلط الضوء على منطقة التلامس في واجهة سطح غشاء الخلية - TGT. تتكامل المشاريع الداخلية مع الدمج مع cRGDfK المرتبط ب cognate مع تحفيز EGF (يمين) أو بدون (يسار). (ب) صور RICM و TIRF لخلايا Cos-7 المنتشرة على سطح 56 pN TGT. يتم الحصول على الصور بعد 60 دقيقة من الطلاء مع أو بدون تحفيز EGF. يتم عرض صور RICM الفردية (كما تم الحصول عليها) ، وتوتر integrin (تدرج رمادي) ، و paxillin (برتقالي ساخن) ، و F-actin (أزرق-أخضر) مع تراكبات لكلا الحالتين التحفيزيتين. شريط المقياس: 10 ميكرومتر. يسلط الجزء الداخلي الضوء على عائد استثمار مكبر (منطقة الاهتمام) يوضح بالتفصيل التوطين المشترك لتوتر الإنتيغرين المتولد في مواقع تكوين الالتصاق التي تتميز بالباكسيلين ، والتنظيم الخلوي الهيكلي تحت الخلوي الأساسي الذي يتميز بالأكتين. شريط المقياس: 5 ميكرومتر. (ج-هاء) مخططات مبعثرة لمنطقة الانتشار (بصمة خلية RICM) (C) ، والدورة الدموية (D) ، والتوتر المتكامل (E) لخلايا Cos-7 مع أو بدون تحفيز EGF. تشير الأشرطة إلى متوسط ± s.d. تم تقييم الاختلافات بين المجموعات إحصائيا باستخدام اختبار t للطالب. P < 0.0001. n = 50 خلية عبر ثلاث تجارب مستقلة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63529/63529fig05large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63529/63529fig06.jpg"> الشكل 6: مثال على أسطح TGT ذات المشاكل المحتملة المختلفة. (أ) صور التوتر و RICM لسطح TGT مثالي مع مسبار مجمع يتم إخماده قبل التصاق الخلية. (ب) صور التوتر و RICM لسطح TGT حيث يفتقر مسبار TGT إلى الشريط العلوي (quencher). تظهر صورة التوتر تألقا موحدا من الفلوروفور المفتوح في الشريط السفلي. (ج) صور التوتر و RICM للخلايا المنتشرة على سطح TGT مثالي. (د) صور التوتر و RICM للخلايا المنتشرة على سطح TGT ضعيف الصنع مع تخميل محدود أو مسبار متدهور. (ه) تعد صور التوتر و RICM و brightfield للخلايا المطلية على سطح مثالي مع رباط cRGDfK الذي يشير إلى تفاعلات cRGDfK-integrin أمرا حيويا لربط الخلايا وتوليد التوتر. (F) صور التوتر و RICM و brightfield للخلايا المطلية على سطح بدون رباط cRGDfK على TGT. في حين أن الخلايا مرئية في الصورة الساطعة ، لا يلاحظ أي مرفق خلية أو توتر integrin المتولد. شريط المقياس: 10 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63529/63529fig06large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Tension Gauge Tether Probes for Quantifying Growth Factor Mediated Integrin Mechanics and Adhesion at JoVE.com

Tension Gauge Tether Probes for Quantifying Growth Factor Mediated Integrin Mechanics and Adhesion

سطح TGT هو منصة مبتكرة لدراسة عامل النمو - integrin عبر الحديث. يسمح تصميم المسبار المرن وخصوصية رباط الالتصاق والتشكيل الدقيق لظروف التحفيز بإجراء تقييمات كمية قوية للتفاعل بين EGFR-integrin. تسلط النتائج الضوء على EGFR باعتباره "منظما ميكانيكيا" لضبط ميكانيكا الإنجرين ، مما يؤثر على تجميع الالتصاق البؤري وانتشار الخلايا.

مجسات حبل مقياس التوتر لقياس ميكانيكا إنجرين بوساطة عامل النمو والتصاق

Multicellular organisms rely on interactions between membrane receptors and cognate ligands in the surrounding extracellular matrix (ECM) to orchestrate ...

هذا البروتوكول مهم بسبب بساطة منصة استشعار TGT المستخدمة لدراسة المحادثة المتقاطعة EGFR-integrin وتأثيرها على القوى الميكانيكية للخلايا. حدد راو الخطوط العريضة للتحقيق في التنظيم المعتمد على EGF لميكانيكا الخلايا. البروتوكول قابل للتكيف مع مختلف الأربطة ، وأنواع الخلايا ، ونماذج التحفيز ، ويمكن أن يقترن ب TGTs ذات عتبات التوتر المختلفة.قد يبدو التوليف السطحي مخيفا في البداية. المفتاح هو أن تكون مستعدا ومنظما لتنفيذ الخطوات المعقدة بدقة من خلال استخدام قائمة مرجعية لإعداد الكاشف والحسابات. في اليوم الأول ، ضع ما يصل إلى ثمانية أغطية زجاجية مقاس 25 ملم في رف متعدد التترافلورو إيثيلين.ضع الرف في كوب بورسليكات سعة 50 ملليلتر يحتوي على 40 ملليلتر من الإيثانول المقاوم ل 200 ملليلتر. سونيك عند تردد تشغيل 35 كيلو هرتز لمدة 10 إلى 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. املأ دورقا سعة 50 ملليلتر ب 40 ملليلتر من محلول البيرانا المحضر حديثا عن طريق خلط حمض الكبريتيك وبيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3: 1 في كوب Pyrex وتحريكه باستخدام ماصة زجاجية.انقل رف انزلاق الغطاء إلى الكأس واحتضنه لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في غطاء الدخان لحفر سطح انزلاق الغطاء. بعد الحفر ، انقل رف انزلاق الغطاء إلى كوب بماء فائق النقاء مع ملاقط. افحص انزلاقات الغطاء بصريا للتأكد من أن الأسطح تبدو نظيفة بدون أنماط أو جزيئات غبار على السطح الزجاجي.انقل رف انزلاق الغطاء إلى كوب به إيثانول مقاوم ل 200 وغسله مرتين لمدة 15 ثانية لموازنة الأسطح مع المذيبات العضوية. انقل رف انزلاق الغطاء إلى محلول إيثانول مقاوم ل 200 مع 3٪ APTES لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة لإضفاء الطابع على انزلاقات الغطاء. اغمر الرف في كوب نظيف بمحلول إيثانول مقاوم ل 200 شخص.جفف انزلاقات الغطاء باستخدام غاز النيتروجين مع انخفاض ضغط الخروج. ضع الغطاء في طبق بوليسترين بطول 10 سنتيمترات مع قطعة من فيلم البارافين موضوعة بشكل مسطح بداخله. أضف 100 ميكرولتر من ملليغرام لكل ملليلتر من محلول NHS-biotin في DMSO إلى أربع شرائح غطاء موضوعة على فيلم البارافين.ضع شطيرة مع زلات الغطاء الأربعة الأخرى في الأعلى ، مع وجود زلتين للغطاء متجهتين نحو بعضهما البعض مع حل التشغيل الوظيفي بينهما. في اليوم الثاني ، قم بإزالة الطبق من أربع درجات مئوية وافصل زلات الغطاء المحصورة. تجنب خدش أو إتلاف السطح الوظيفي أثناء فصل الشطيرة.ثم ، قم بتوجيه الغطاء في الحامل بحيث يواجه السطح المطلي بعضه البعض. يجف بغاز النيتروجين. ضع الغطاء في طبق جديد مع فيلم بارافين بداخله.أضف 800 ميكرولتر من ألبومين مصل البقر بنسبة 0.1٪ في 1X PBS إلى كل شريحة غطاء. احتضن الغطاء في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة لتخميل السطح ومنع الربط غير المحدد لكواشف التشغيل اللاحقة. لتشغيل انزلاقات الغطاء ، أضف 800 ميكرولتر من ميكروغرام واحد لكل ملليلتر من الستربتافيدين في 1X PBS في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 إلى 60 دقيقة.قم بتجميع مجسات TGT في أنبوب PCR باستخدام جهاز تدوير حراري. بعد الحضانة ، اغسل الغطاء ثلاث مرات باستخدام 1X PBS. أضف 100 ميكرولتر من مجسات TGT المجمعة مسبقا إلى أربع زلات تغطية واصنع السندويشات باستخدام زلات الغطاء الأربعة المتبقية مع الجانب الوظيفي المواجه للمجسات.تغطية مع رقائق الألومنيوم. بعد الحضانة ، افصل السندويشات واغسل زلات الغطاء باستخدام 1X PBS ثلاث مرات. قم بتجميع الغطاء بعناية في غرف تصوير تم تنظيفها مسبقا.للتحقيق في تأثير تحفيز عامل نمو البشرة على ميكانيكا Cos-7 ، والالتصاق ، وانتشار الخلايا ، التربسين خلايا Cos-7 مع 0.05 ٪ من التربسين-EDTA لمدة دقيقتين. قم بتحييد التربسين عن طريق الغسيل باستخدام HBSS والطرد المركزي عند 800 جم لمدة خمس دقائق. خلايا صفيحية بكثافة 40،000 خلية على أسطح TGT المجمعة في DMEM تستكمل ب 50 نانوغرام لكل ملليلتر EGF أو DMEM بدون EGF.بعد الحضانة ، اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام 1X PBS. إصلاح مع اثنين ملليلتر من 4 ٪ بارافورمالديهايد لمدة 12 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل الغطاء خمس مرات باستخدام 1X PBS على فترات زمنية مدتها خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.اختياريا ، احتضن الغطاء مع كلوريد الأمونيوم 50 ملليمولار في 1X PBS لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. أضف المخزن المؤقت A وضع غرف التصوير مع انزلاقات الغطاء في حاوية الرطوبة. احتضان لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية لمنع وتخلل الخلايا.تمييع الجسم المضاد الأساسي المضاد للباكسيلين عند 1:250 تخفيف في المخزن المؤقت المانع. احتضان مع 200 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة الأولية لكل زلة غطاء لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية. قم بتسمية الخلايا في وقت واحد مع مزيج من الماعز ثنائي الاقتران / الأجسام المضادة الثانوية المضادة للأرانب عند 1:800 تخفيف و phalloidin ثنائي الاقتران في 1:400 تخفيف في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت المانع لكل زلة غطاء.اغسل الأسطح خمس مرات باستخدام 1X PBS على فترات زمنية مدتها خمس دقائق. للبدء ، أضف الزيت إلى الهدف ، ونظف الجزء السفلي من غرفة العينة ، وضع العينة على المسرح. ركز على الخلية وشارك في التركيز المثالي.قم بمحاذاة RICM عن طريق إغلاق وتوسيط الحجاب الحاجز لفتحة الإضاءة الفوقية. ركز الليزر الذي يبلغ قطره 488 نانومتر على بقعة صغيرة على سقف الغرفة وقم بزيادة زاوية الحدوث حتى تجاوز الزاوية الحرجة ، مع مراقبة التألق على الكاميرا في وضع مباشر. لاحظ انخفاضا حادا في التألق في الخلفية ومستوى تركيز بؤري واحد عند تجاوز الزاوية الحرجة.حدد الخلايا للتصوير باستخدام الوضع المباشر للكاميرا باستخدام RICM. احصل على صور RICM و TIRF للأكتين عند إثارة 488 نانومتر ، وتوتر الإنتيغرين عند إثارة 561 نانومتر ، والباكسيلين عند إثارة 647 نانومتر. احصل على الصور بالتتابع باستخدام وقت تعريض ضوئي يبلغ 200 مللي ثانية.تغيير زلات الغطاء والتركيز البؤري والتكرار. تم طلاء خلايا Cos-7 على سطح TGT هذا مع أو بدون تحفيز EGF لدراسة تأثير تنشيط EGFR مع تحفيز الليجند على ميكانيكا الإنتغرين. إذا ربط الإنتيغرين الرباط وطبق قوة أكبر من إجمالي عتبة التوتر للمسبار ، فسوف ينفصل الحمض النووي المزدوج ، مما يؤدي إلى التألق.أي مسبار TGT لم تتمزق فيه قوة ميكانيكية سيبقى غير فلورسنت. تم احتضان الخلايا مع أو بدون EGF على أسطح TGT لمدة 60 دقيقة ، ثابتة ، وملطخة بالمناعة لعرض توزيع الالتصاق البؤري وتنظيم الهيكل الخلوي. في صورة RICM ، تم تعزيز خلية Cos-7 المنتشرة على سطح TGT 56-piconewton بشكل كبير مع تحفيز EGF مقارنة بدون تحفيز.أدى التحفيز باستخدام EGF إلى مورفولوجيا أكثر دائرية ، تمثل خلايا Cos-7 تنتشر وتنمو. التألق من المجسات المفتوحة أعلى أيضا مع تحفيز EGF ، كما لوحظ في صورة التألق التوتر. كانت الكثافة المتكاملة للمجسات المفتوحة المتناسبة مع عدد المجسات المفتوحة أعلى بكثير مع تحفيز EGF من دون تحفيز.تذكر دائما اتجاه انزلاقات الغطاء ، مع الحفاظ على السطح الوظيفي متجها لأعلى. عند فصل الساندويتش ، كن لطيفا حتى لا يخدش السطح أو يتلف. بعد التوليف السطحي ، يمكن للمرء أن يسبر بحثا عن البروتينات السيتوبلازمية التي تنظم التصاق الخلايا أو النقل الميكانيكي.وهذا يسمح بتحديد جزيئات الإشارات النهائية المشاركة في تنسيق ميكانيكا الخلايا في غشاء البلازما.

Research

JoVE Journal

Biology

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

مقايسة للالتصاق وغزو آجار في البيرة س.

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

عامل النمو المغلفه الموضع الخرزة على Explants الدماغ المقدم الظهرية

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

وضع عامل النمو المغلفه الخرز على أجنة الدجاج المرحلة المبكرة

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

إعداد عامل نمو الخلايا T من Splenocytes الجرذ

Maintenance of antigen-specific T cell lines or clones in culture requires rounds of antigen-induced activation separated by phases of cell expansion 1,2. ...

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

: نظام الحبل المغناطيسي بالتحقيق البصرية والشمية التحكم الطيران توسط في ذبابة الفاكهة

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

تعديل الخميرة اثنين والهجين نظام لتحديد البروتينات التفاعل مع عامل النمو Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Robust 3D DNA FISH Using Directly Labeled Probes

قوية FISH DNA 3D استخدام مجسات إعتبر مباشرة

3D DNA FISH has become a major tool for  analyzing three-dimensional organization of the nucleus, and several variations  of the technique have been ...

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

تحليل الحركية من انقسام الخلايا والتوسع: تحديد مقدار الأساس الخلوي للمناطق التنموية النمو وأخذ العينات في<em&gt; ذرة شامية</em&gt; أوراق

Growth analyses are often used in plant science to investigate contrasting genotypes and the effect of environmental conditions. The cellular aspect of ...

Analyzing Cell Surface Adhesion Remodeling in Response to Mechanical Tension Using Magnetic Beads

تحليل الخلايا السطحية التصاق إعادة عرض في الاستجابة للتوتر الميكانيكية باستخدام الخرز المغناطيسي

Mechanosensitive cell surface adhesion complexes allow cells to sense the mechanical properties of their surroundings. Recent studies have identified both ...

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-&#946; Signaling

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Signaling

التحليل الجزيئي غشائي الوسيطة الانتقالية الناجمة عن تحويل الإشارات عامل النمو-β

Phenotypic plasticity of endothelial cells underlies cardiovascular system development, cardiovascular diseases, and various conditions associated with ...