Name: rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit candida albicans
Uploaded: 2022-03-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans at JoVE.com

تلقى هذا العمل تمويلا من مركز الطب النانوي التطبيقي بجامعة تشنغ كونغ الوطنية من برنامج مركز أبحاث المناطق المميزة في إطار مشروع براعم التعليم العالي من قبل وزارة التربية والتعليم (MOE) ، ووزارة العلوم والتكنولوجيا ، تايوان [MOST 109-2327-B-006-005] إلى TW Wong. يعترف J.H. Hung بالتمويل المقدم من مستشفى جامعة تشنغ كونغ الوطني ، تايوان [NCKUH-11006018] ، و [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].

1. إعداد نظام aPDT
<ol><li>قم بقطع أربعة صمامات ثنائية باعثة للضوء الأخضر (LEDs) من شريط LED (انظر جدول المواد) ومحاذاتها مع أربعة آبار من صفيحة 96 بئرا (الشكل 1). ملاحظة: تم ترتيب مصابيح LED في صفيف 4 × 3. تم لصق الجزء الخلفي من LED بالمشتت حراري لتفريق الحرارة أثناء التشع...

<ol>
	<li>Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+secreted+aspartyl+proteinases+in+virulence+and+pathogenesis.">Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).</li><li>Pappas, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice+guideline+for+the+management+of+candidiasis:+2016+update+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).</li><li>Ricotta, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+candidiasis+species+distribution+and+trends,+United+States,+2009-2017.">Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017.</a> Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).</li><li>Koehler, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morbidity+and+mortality+of+candidaemia+in+Europe:+an+epidemiologic+meta-analysis.">Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis.</a> Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).</li><li>Toda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population-based+active+surveillance+for+culture-confirmed+candidemia+-+four+sites,+United+States,+2012-2016.">Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).</li><li>Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daylight+photodynamic+therapy:+an+update.">Daylight photodynamic therapy: an update.</a> Molecules. 25 (21), 5195 (2020).</li><li>Wainwright, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+(PACT).">Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT).</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).</li><li>Wong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green-mediated+photodynamic+therapy+reduces+methicillin-resistant+staphylococcus+aureus+drug+resistance.">Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).</li><li>Kim, M. M., Darafsheh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sources+and+dosimetry+techniques+for+photodynamic+therapy.">Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy.</a> Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).</li><li>Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+for+Bowen's+disease+(squamous+cell+carcinoma+in+situ)+of+the+digit.">Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit.</a> Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).</li><li>Wong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+inactivation+of+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+by+indocyanine+green+and+near+infrared+light.">Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light.</a> Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).</li><li>Stasko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visible+blue+light+inhibits+infection+and+replication+of+SARS-CoV-2+at+doses+that+are+well-tolerated+by+human+respiratory+tissue.">Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue.</a> Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).</li><li>Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+light+field+of+the+Waldmann+PDT+1200+lamp:+potential+for+wide-field+low+light+irradiance+aminolevulinic+acid+photodynamic+therapy.">Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy.</a> Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).</li><li>Feenstra, R. P., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fluorescein+and+rose+bengal+staining.">Comparison of fluorescein and rose bengal staining.</a> Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).</li><li>Demidova, T. N., Hamblin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cell-photosensitizer+binding+and+cell+density+on+microbial+photoinactivation.">Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).</li><li>Shahid, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duclauxin+derivatives+from+fungi+and+their+biological+activities.">Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities.</a> Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).</li><li>Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+CLSI+M44-A2+disk+diffusion+and+associated+breakpoint+testing+of+caspofungin+and+micafungin+using+a+well-characterized+panel+of+wild-type+and+fks+hot+spot+mutant+Candida+isolates.">Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).</li><li>Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+yeast,+pseudohyphal,+and+hyphal+morphogenesis+differentially+affects+immune+recognition.">Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition.</a> Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).</li><li>Hung, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+photodynamic+therapy+against+fungal+keratitis.">Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis.</a> Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).</li><li>Martinez, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rose+Bengal+photodynamic+antimicrobial+therapy:+a+pilot+safety+study.">Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study.</a> Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).</li></ol>

تم الإبلاغ عن نتائج مشجعة للتطبيقات السريرية ل RB-PDT لالتهاب القرنية الفطري مؤخرا19. ذروة امتصاص RB هي 450-650 نانومتر. من الضروري تحديد معدل طلاقة مصدر الضوء لنجاح aPDT. مطلوب طلاقة عالية (عادة >100 J / cm2) لعلاج الخلايا السرطانية ، في حين من المتوقع أن يعالج طلاقة أقل الآفات المصابة<...

C. يستعمر البيض في الجهاز الهضمي والجهاز البولي التناسلي للأفراد الأصحاء ويمكن اكتشافه كميكروبات طبيعية في حوالي 50 في المائة من الأفراد1. إذا تم إنشاء خلل بين المضيف والممرض ، فإن C. albicans قادر على غزو المرض والتسبب فيه. يمكن أن تتراوح العدوى من التهابات الأغشية المخاطية المحلية إلى فشل الأعضاء المتعددة2. في دراسة مراقبة متعددة المراكز في الولايات المتحدة ، حوالي نصف العزلات من المرضى الذين يعانون من داء المبيضات الغازية بين عامي 2009 و 2017 هي C. albicans3. يمكن أن يرتبط المبيضات بارتفاع معدلات المراضة والوفيات والإقامة المطولة في المستشفى4. ذكرت المراكز الأمريكية لمكافحة الأمراض والوقاية منها أن حوالي 7٪ من جميع عينات دم المبيضات التي تم اختبارها مقاومة للدواء المضاد للفطريات فلوكونازول5. يثير ظهور أنواع المبيضات المقاومة للأدوية القلق من تطوير علاج بديل أو مساعد للعوامل المضادة للفطريات.
يتضمن العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) تنشيط محسس ضوئي معين (PS) بالضوء عند ذروة الامتصاص للطول الموجي ل PS6. بعد الإثارة ، ينقل PS المثير طاقته أو إلكتروناته إلى جزيئات الأكسجين القريبة ويعود إلى الحالة الأرضية. خلال هذه العملية ، يتم تشكيل أنواع الأكسجين التفاعلية والأكسجين الفردي وتسبب تلف الخلايا. وقد استخدمت aPDT على نطاق واسع لقتل الكائنات الحية الدقيقة منذ 1990s7. واحدة من فوائد aPDT هي أن عضيات متعددة تتلف في الخلية بسبب الأكسجين الفردي و / أو أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) أثناء التشعيع. وبالتالي ، لم يتم العثور على مقاومة ل aPDT حتى اليوم. علاوة على ذلك ، ذكرت دراسة حديثة أن البكتيريا التي نجت بعد aPDT أصبحت أكثر حساسية للمضادات الحيوية8.
تشمل مصادر الضوء المستخدمة في aPDT أشعة الليزر ومصابيح الهالوجين المعدنية مع المرشحات والضوء القريب من الأشعة تحت الحمراء والصمام الثنائي الباعث للضوء (LED) 9،10،11،12. يوفر الليزر طاقة ضوئية عالية ، عادة ما تكون أكبر من 0.5 واط / سم2 ، مما يسمح بتوصيل جرعة خفيفة عالية في وقت قصير جدا. وقد تم استخدامه على نطاق واسع في الحالات التي يكون فيها وقت العلاج الأطول غير مريح مثل aPDT لالتهابات الفم. عيب الليزر هو أن حجم الإضاءة الموضعية صغير ، يتراوح من بضع مئات من الميكرومترات إلى 10 مم مع ناشر. علاوة على ذلك ، فإن معدات الليزر باهظة الثمن وتحتاج إلى تدريب محدد للعمل. من ناحية أخرى ، فإن منطقة التشعيع لمصباح الهالوجين المعدني مع المرشحات أكبر نسبيا13. ومع ذلك ، فإن المصباح ضخم جدا ومكلف. أصبحت مصادر ضوء LED سائدة في aPDT في مجال الأمراض الجلدية لأنها صغيرة وأقل تكلفة. يمكن أن تكون منطقة التشعيع كبيرة نسبيا مع ترتيب مصفوفة من مصباح LED الكهربائي. يمكن إضاءة الوجه بأكمله في نفس الوقت9. ومع ذلك ، فإن معظم ، إن لم يكن كل ، مصادر ضوء LED المتاحة اليوم مصممة للاستخدام السريري. قد لا تكون مناسبة للتجارب في المختبر لأنها تشغل مساحة ومكلفة. قمنا بتطوير مجموعة LED غير مكلفة صغيرة جدا ويمكن قطعها وتجميعها من شريط LED. يمكن تركيب مصابيح LED في ترتيبات مختلفة لتصميمات تجريبية مختلفة. يمكن إكمال ظروف مختلفة من aPDT في لوحة 96 بئر أو حتى لوحة 384 بئر في تجربة واحدة.
روز البنغال (RB) هي صبغة ملونة تستخدم على نطاق واسع لتعزيز تصور أضرار القرنية في عيون الإنسان14. أظهر aPDT بوساطة RB تأثيرات قاتلة على المكورات العنقودية الذهبية والإشريكية القولونية و C. albicans بكفاءة مماثلة تقريبا لتلك الموجودة في Toluidine Blue O15. توضح هذه الدراسة طريقة للتحقق من صحة تأثير RB-aPDT على C. albicans المقاومة للأدوية المتعددة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microfuge tube</td>
			<td>Neptune, San Diego, USA</td>
			<td>#3745.x</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round-bottom tube with cell strainer cap</td>
			<td>Falcon, USA</td>
			<td>#352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan</td>
			<td>#16196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td>sunmei, Tainan, Taiwan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum heat sink</td>
			<td>Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>BK-T220-0051-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, UK</td>
			<td>5415R</td>
			<td>disperses heat from the LED array</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graph pad prism software</td>
			<td>GraphPad 8.0, San Diego, California, USA</td>
			<td></td>
			<td>graphing and statistics software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Green light emitting diode (LED) strip</td>
			<td>Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>2835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Yihder, Taipei, Taiwan</td>
			<td>LM-570D (R)</td>
			<td>Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150&#176;; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light power meter</td>
			<td>Ophir, Jerusalem, Israel</td>
			<td>PD300-3W-V1-SENSOR,</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex 0.22 &#956;m filter</td>
			<td>Merck, NJ, USA</td>
			<td>SLGVR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrug-resistant Candida albicans</td>
			<td>Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan</td>
			<td>BCRC 21538/ATCC 10231</td>
			<td>http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OD600 spectrophotometer</td>
			<td>Biochrom, London, UK</td>
			<td>Ultrospec 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>330000</td>
			<td>stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilized glass tube</td>
			<td>Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>AK45048-16100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract Peptone Dextrose Medium</td>
			<td>HIMEDIA, India</td>
			<td>M1363</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit candida albicans

عدوى المبيضات البيضاء الغازية هي عدوى فطرية انتهازية كبيرة في البشر لأنها واحدة من أكثر المستعمرين شيوعا للأمعاء والفم والمهبل والجلد. على الرغم من توافر الأدوية المضادة للفطريات ، إلا أن معدل وفيات داء المبيضات الغازي لا يزال ~ 50٪. لسوء الحظ ، فإن حدوث C. albicans المقاوم للأدوية يتزايد على مستوى العالم. قد يوفر العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) علاجا بديلا أو مساعدا لمنع تكوين الأغشية الحيوية C. albicans والتغلب على مقاومة الأدوية. أظهرت الورود البنغالية (RB) بوساطة aPDT قتل الخلايا الفعالة للبكتيريا و C. albicans. في هذه الدراسة ، يتم وصف فعالية RB-aPDT على C. albicans المقاومة للأدوية المتعددة. تم تصميم مصدر ضوء الصمام الثنائي الباعث للضوء الأخضر (LED) محلي الصنع ليتماشى مع مركز بئر صفيحة 96 بئرا. تم احتضان الخمائر في الآبار بتركيزات مختلفة من RB وأضاءت بتدفقات متفاوتة من الضوء الأخضر. تم تحليل آثار القتل بواسطة طريقة تخفيف اللوحة. مع مزيج مثالي من الضوء و RB ، تم تحقيق تثبيط النمو 3-log. وخلص إلى أن RB-aPDT قد يثبط بكتيريا C. albicans المقاومة للأدوية.

ويبين الشكل 1 نظام aPDT المستخدم في هذه الدراسة. نظرا لأن درجات الحرارة المرتفعة قد تسبب موتا كبيرا للخلايا ، يتم تبريد مصفوفة LED بواسطة مروحة كهربائية ، ويتم استخدام مشتت حراري أثناء التشعيع للحفاظ على درجة حرارة ثابتة عند 25 ± 1 درجة مئوية. يمكن خصم تأثير الحرارة. وجود توزيع م...

Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans at JoVE.com

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

تزايد حدوث المبيضات البيضاء المقاومة للأدوية هو قضية صحية خطيرة في جميع أنحاء العالم. قد يوفر العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) استراتيجية لمكافحة الالتهابات الفطرية المقاومة للأدوية. يصف هذا البروتوكول فعالية aPDT بوساطة البنغال الوردية على سلالة C. albicans المقاومة للأدوية المتعددة في المختبر.

روز البنغال العلاج الضوئي الديناميكي بوساطة لمنع المبيضات البيضاء

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

هذه الدراسة هي نظام بسيط ومتعدد الاستخدامات وسهل لفحص التأثيرات الضوئية الديناميكية المختلفة على الكائنات الحية الدقيقة والخلايا المختلفة. في هذا النظام ، يمكن وضع مؤشر LED في ترتيب مختلف اعتمادا على تصميم التجربة. يمكن حساب حالة مختلفة من PDT في لوحة 96 بئرا أو حتى لوحة 384 بئرا في تجربة واحدة.يمكن استخدام هذه التقنية لعلاج التهاب القرنية الفطري الذي بسببه على مستوى العالم ، يفقد حوالي 150،000 شخص أعينهم على الرغم من العلاجات المكثفة. للبدء ، قم بقطع أربعة مصابيح LED خضراء من شريط LED ومحاذاتها مع ثلاثة آبار من لوحة 96 بئرا. قم بقياس معدل طلاقة LED عند 540 نانومتر باستخدام مقياس طاقة الضوء.حافظ على درجة حرارة ثابتة عند 25 درجة مئوية باستخدام مروحة كهربائية تم تجميعها بجانب اللوحة أثناء التشعيع. باستخدام حلقة معقمة ، اختر مستعمرة واحدة من المبيضات البيضاء من صفيحة أجار وأضفها إلى أنبوب زجاجي معقم يحتوي على ثلاثة ملليلتر من وسط YPD. احتضن الأنبوب عند 25 درجة مئوية بسرعة دوران تبلغ 155 دورة في الدقيقة لمدة 14 إلى 16 ساعة لزراعة ثقافة الخميرة.بعد ذلك ، قم بتخفيف الثقافة بين عشية وضحاها باستخدام وسيط YPD إلى قيمة OD 600 البالغة 0.5. احتضان عند 30 درجة مئوية مع دوران عند 155 دورة في الدقيقة لمدة أربع ساعات لتحقيق مرحلة نمو السجل. كرر تخفيف ثقافة الطور الخشبي مع وسيط YPD الطازج إلى قيمة OD 600 البالغة 0.65 ، للحصول على ما يقرب من 10 مرات إلى وحدات تشكيل المستعمرة السابعة لكل ملليلتر.في وقت واحد إعداد محلول الأسهم 4 ٪ من البنغال الوردي في 1X PBS. تصفية تعقيم مع مرشح 0.22 ميكرومتر. أضف 111 ميكرولتر من محلول البنغال الوردي بنسبة 2٪ إلى ملليلتر واحد من ثقافة الطور اللوغاريت، وشارك في الزراعة في نقاط زمنية مختلفة في درجة حرارة الغرفة لفهم امتصاص RB في الخلايا.جهاز طرد مركزي في 16 ، 100 مرة G لمدة 2 1/2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، وغسل الثقافة المشتركة ثلاث مرات مع ملليلتر واحد من 1X PBS. بعد الغسيل ، أعد تعليق ثقافة المبيضات البيضاء في ملليلتر واحد من 1X PBS. لكل حالة ، قم بتوزيع الثقافة في ثلاثة آبار مختلفة في لوحة من 96 بئرا.قم بمحاذاة الآبار مع صفيف LED. في المجموعات المكشوفة للضوء، قم بتشغيل المروحة الكهربائية والضوء. بعد التشعيع ، قم بإجراء تخفيفات تسلسلية عشرة أضعاف مرتين عن طريق أخذ 20 ميكرولتر من محلول الزراعة المشتركة من بئر واحد ، وإضافته إلى أنبوب يحتوي على 180 ميكرولتر من 1X PBS.ثم قم بإسقاط 20 ميكرولتر من كل تخفيف تسلسلي في ربع واحد من صفيحة أجار YPD للحصول على مستعمرات قابلة للعد على اللوحة. أظهر الفحص المجهري الفلوري تلطيخا فوريا لالمبيضات البيضاء مع البنغال الوردي تحت التألق الأحمر. بعد 15 دقيقة من الحضانة ، كانت معظم الخلايا ملطخة بالبنغال الوردي ، مما يشير إلى أنها تدخل الخلايا بطريقة تعتمد على الوقت.علاوة على ذلك ، فإن تنشيط البنغال الوردي بالضوء يولد الجذور الحرة والأكسجين الفردي في الخلايا ، مما يؤدي إلى موت الخلايا. في غياب البنغال الوردي أو التشعيع ، لم يلاحظ أي موت للخلايا. تم تثبيط المبيضات البيضاء بعد تشعيع الضوء الأخضر في وجود 0.2 ٪ من البنغال الوردي بطريقة تعتمد على الجرعة الخفيفة.من المهم أولا محاذاة لوحة 96 بئرا مع مركز LED. ثانيا ، يجب تجفيف لوحة الأجار المستخدمة جيدا لمنع اختلاط مستعمرات منفصلة. يمكن إرسال المبيضات البيضاء التي نمت على اللوحة لتحليل الجينات ، والتي يمكن أن تجيب على كيفية تأثير PDT على التعبير الجيني للخلايا.تمهد هذه التقنيات الطريق لدراسة كيفية عمل PDT على أنواع الخلايا المختلفة ، إما الخلايا السرطانية أو البكتيريا أو الفطريات أو الفيروسات باستخدام منصة سهلة وغير مكلفة ومتعددة الاستخدامات.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

96 ألف لوحة حسنا Microtiter القائم على أسلوب تشكيل لمراقبة واختبار قابلية مضاد المبيضات البيض الأغشية الحيوية

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

التصور "تشكيل بيوفيلم" في المبيضات البيض باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

العميق "الجلد حقن كنموذج" "عدوى الجلد" المبيضات البيض "التحليل النسيجي"

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

المعالجة الضوئية اليومية مع الضوء الأحمر لتنظيم "النمو بيوفيلم" المبيضات البيض

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

التصور من المبيضات الbicans في الجهاز الهضمي Murine باستخدام التهجين في الموقع الفلورسنت

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

توضيح والتصوير المبيضات ألبيكانس بيوفيم

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

مُسَاَنّة مُعَدِيّة سابقة لدراسة المبيضات المبيضات البَيكانسِيّة الواصلة Morphogenesi في الجهاز الهضمي

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

استخدام التصوير في الجسم الحي للكشف عن الأنماط الظاهرية للتشكل في سلالات المبيضات البيض الطافرة أثناء العدوى النشطة في مضيف الثدييات

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...

Effective aPDT Using Curcuminoids for Oral Candidiasis in Mice

Curcuminoid-Mediated Antimicrobial Photodynamic Therapy on a Murine Model of Oral Candidiasis

Author Spotlight: Exploring Photodynamic Therapy with Curcumin in a Murine Model for Oral Candidiasis

Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) has been extensively investigated in vitro, and preclinical animal models of infections are suitable for ...

Establishing a Mouse Model for Candida albicans Biofilm-Related PJI

A Periprosthetic Joint Candida albicans Infection Model in Mouse

Advancing Research on Candida albicans Biofilm-Associated Prosthetic Joint Infections (Video) | JoVE

نموذج عدوى المبيضات البيضاء للمفصل حول الأطراف الاصطناعية في الفأر

Periprosthetic joint infection (PJI) is one of the common infections caused by Candida albicans (C. albicans), which increasingly concerns surgeons and ...