Name: rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit candida albicans
Uploaded: 2022-03-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans at JoVE.com

Dette arbeidet har fått støtte fra Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University fra Featured Areas Research Center Program innenfor rammen av Higher Education Sprout Project av Ministry of Education (MOE), og Ministry of Science and Technology, Taiwan [MOST 109-2327-B-006-005] til TW Wong. J.H. Hung anerkjenner finansiering fra National Cheng Kung University Hospital, Taiwan [NCKUH-11006018], og [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].

1. forberedelse av aPDT-systemet
<ol><li>Klipp fire grønne lysdioder (lysdioder) fra en LED-stripe (se Materialtabell) og juster dem etter fire brønner på en 96-brønnsplate (figur 1). MERK: Lysdiodene ble ordnet i en 4 x 3 array. Baksiden av LED-lampen ble festet til en kjøleribbe for å spre varme under bestråling.</li>
	<li>Mål influensahastigheten11 på LED-lampen ved 540 nm med en lyseffektmåler (se Materialta...

<ol>
	<li>Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+secreted+aspartyl+proteinases+in+virulence+and+pathogenesis.">Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).</li><li>Pappas, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice+guideline+for+the+management+of+candidiasis:+2016+update+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).</li><li>Ricotta, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+candidiasis+species+distribution+and+trends,+United+States,+2009-2017.">Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017.</a> Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).</li><li>Koehler, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morbidity+and+mortality+of+candidaemia+in+Europe:+an+epidemiologic+meta-analysis.">Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis.</a> Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).</li><li>Toda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population-based+active+surveillance+for+culture-confirmed+candidemia+-+four+sites,+United+States,+2012-2016.">Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).</li><li>Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daylight+photodynamic+therapy:+an+update.">Daylight photodynamic therapy: an update.</a> Molecules. 25 (21), 5195 (2020).</li><li>Wainwright, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+(PACT).">Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT).</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).</li><li>Wong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green-mediated+photodynamic+therapy+reduces+methicillin-resistant+staphylococcus+aureus+drug+resistance.">Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).</li><li>Kim, M. M., Darafsheh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sources+and+dosimetry+techniques+for+photodynamic+therapy.">Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy.</a> Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).</li><li>Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+for+Bowen's+disease+(squamous+cell+carcinoma+in+situ)+of+the+digit.">Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit.</a> Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).</li><li>Wong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+inactivation+of+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+by+indocyanine+green+and+near+infrared+light.">Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light.</a> Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).</li><li>Stasko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visible+blue+light+inhibits+infection+and+replication+of+SARS-CoV-2+at+doses+that+are+well-tolerated+by+human+respiratory+tissue.">Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue.</a> Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).</li><li>Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+light+field+of+the+Waldmann+PDT+1200+lamp:+potential+for+wide-field+low+light+irradiance+aminolevulinic+acid+photodynamic+therapy.">Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy.</a> Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).</li><li>Feenstra, R. P., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fluorescein+and+rose+bengal+staining.">Comparison of fluorescein and rose bengal staining.</a> Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).</li><li>Demidova, T. N., Hamblin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cell-photosensitizer+binding+and+cell+density+on+microbial+photoinactivation.">Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).</li><li>Shahid, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duclauxin+derivatives+from+fungi+and+their+biological+activities.">Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities.</a> Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).</li><li>Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+CLSI+M44-A2+disk+diffusion+and+associated+breakpoint+testing+of+caspofungin+and+micafungin+using+a+well-characterized+panel+of+wild-type+and+fks+hot+spot+mutant+Candida+isolates.">Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).</li><li>Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+yeast,+pseudohyphal,+and+hyphal+morphogenesis+differentially+affects+immune+recognition.">Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition.</a> Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).</li><li>Hung, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+photodynamic+therapy+against+fungal+keratitis.">Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis.</a> Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).</li><li>Martinez, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rose+Bengal+photodynamic+antimicrobial+therapy:+a+pilot+safety+study.">Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study.</a> Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).</li></ol>

Oppmuntrende resultater av kliniske anvendelser av RB-PDT for sopp keratitt har blitt rapportert nylig19. Absorpsjonstoppen til RB er på 450-650 nm. Det er viktig å bestemme lyskildens flythastighet for en vellykket aPDT. Høy influensa (vanligvis >100 J/cm2) er nødvendig for å behandle kreftceller, mens en lavere influensa forventes å behandle infiserte lesjoner6. Høy influensa betyr lang eksponeringstid som kanskje ikke er praktisk i kliniske omgivelser. ...

C. albicans koloniserer i mage-tarm- og genitourinary trakter av friske individer og kan påvisnes som normal mikrobiota hos ca 50 prosent av individer1. Hvis en ubalanse er opprettet mellom verten og patogenet, er C. albicans i stand til å invadere og forårsake sykdom. Infeksjonen kan variere fra lokale slimhinneinfeksjoner til multippel organsvikt2. I en multisenterovervåkningsstudie i USA er rundt halvparten av isolasjonene fra pasienter med invasiv candidiasis mellom 2009 og 2017 C. albicans3. Candidemia kan være forbundet med høy sykelighet, dødelighet, langvarig sykehusopphold4. Us Centers of Disease Control and Prevention rapporterte at omtrent 7% av alle Candida blodprøver testet er resistente mot antifungal narkotika flukonazol5. Fremveksten av legemiddelresistente Candida-arter øker bekymringen for å utvikle en alternativ eller adjuvant terapi til antimykotiske midler.
Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) innebærer å aktivere en bestemt fotosensibilisator (PS) med lys ved toppen absorpsjon bølgelengde av PS6. Etter eksitasjon overfører den begeistrede PS sin energi eller elektroner til de nærliggende oksygenmolekylene og går tilbake til bakken. Under denne prosessen dannes reaktive oksygenarter og singlet oksygen og forårsaker celleskade. aPDT har vært mye brukt til å drepe mikroorganismer siden 1990-tallet7. En av fordelene med aPDT er at flere organeller er skadet i en celle ved singlet oksygen og / eller reaktive oksygenarter (ROS) under bestråling; Dermed har motstand mot aPDT ikke blitt funnet før i dag. Videre rapporterte en nylig studie at bakteriene som overlevde etter aPDT ble mer følsomme for antibiotika8.
Lyskildene som brukes i aPDT inkluderer lasere, metall halogenlamper med filtre, nær-infrarødt lys og lysdiode (LED) 9,10,11,12. Laseren gir en høy lyseffekt, vanligvis større enn 0,5 W / cm2, som gjør det mulig å levere en høy lysdose på svært kort tid. Det har vært mye brukt i tilfeller der lengre behandlingstid er ubeleilig som aPDT for orale infeksjoner. Ulempen med en laser er at spotstørrelsen på belysningen er liten, alt fra noen få hundre mikrometer til 10 mm med en diffusor. Dessuten er laserutstyr dyrt og trenger spesifikk opplæring for å fungere. På den annen side er bestrålingsområdet til en metallhalogenlampe med filtre relativt større13. Lampen er imidlertid for heftig og dyr. LED-lyskilder har blitt mainstream av aPDT i dermatologisk felt fordi det er lite og billigere. Bestrålingsområdet kan være relativt stort med et utvalg av LED-lyspæren. Hele ansiktet kan belyses samtidig9. Likevel er de fleste, om ikke alle, LED-lyskilder som er tilgjengelige i dag, designet for klinisk bruk. Det er kanskje ikke egnet for eksperimenter i et laboratorium fordi det er plass-okkupasjon og dyrt. Vi utviklet en billig LED-matrise som er veldig liten og kan kuttes og monteres fra en LED-stripe. Lysdiodene kan monteres i forskjellige ordninger for ulike eksperimentelle design. Ulike betingelser for aPDT kan fullføres i en 96-brønns plate eller til og med en 384-brønns plate i ett eksperiment.
Rose bengal (RB) er et farget fargestoff som er mye brukt til å forbedre visualiseringen av hornhinnen skader i menneskelige øyne14. RB-mediert aPDT har vist drapseffekter på Staphylococcus aureus, Escherichia coli og C. albicans med omtrent sammenlignbar effektivitet som Toluidine blå O15. Denne studien viser en metode for å validere effekten av RB-aPDT på multidrug-resistente C. albicans.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microfuge tube</td>
			<td>Neptune, San Diego, USA</td>
			<td>#3745.x</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round-bottom tube with cell strainer cap</td>
			<td>Falcon, USA</td>
			<td>#352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan</td>
			<td>#16196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td>sunmei, Tainan, Taiwan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum heat sink</td>
			<td>Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>BK-T220-0051-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, UK</td>
			<td>5415R</td>
			<td>disperses heat from the LED array</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graph pad prism software</td>
			<td>GraphPad 8.0, San Diego, California, USA</td>
			<td></td>
			<td>graphing and statistics software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Green light emitting diode (LED) strip</td>
			<td>Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>2835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Yihder, Taipei, Taiwan</td>
			<td>LM-570D (R)</td>
			<td>Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150&#176;; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light power meter</td>
			<td>Ophir, Jerusalem, Israel</td>
			<td>PD300-3W-V1-SENSOR,</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex 0.22 &#956;m filter</td>
			<td>Merck, NJ, USA</td>
			<td>SLGVR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrug-resistant Candida albicans</td>
			<td>Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan</td>
			<td>BCRC 21538/ATCC 10231</td>
			<td>http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OD600 spectrophotometer</td>
			<td>Biochrom, London, UK</td>
			<td>Ultrospec 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>330000</td>
			<td>stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilized glass tube</td>
			<td>Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>AK45048-16100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract Peptone Dextrose Medium</td>
			<td>HIMEDIA, India</td>
			<td>M1363</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit candida albicans

Invasiv Candida albicans infeksjon er en betydelig opportunistisk soppinfeksjon hos mennesker fordi det er en av de vanligste kolonisatorene i tarmen, munnen, skjeden og huden. Til tross for tilgjengeligheten av antifungal medisinering forblir dødeligheten av invasiv candidiasis ~ 50%. Dessverre øker forekomsten av legemiddelresistente C. albicans globalt. Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) kan tilby en alternativ eller adjuvant behandling for å hemme C. albicans biofilmdannelse og overvinne narkotikaresistens. Rose bengal (RB)-mediert aPDT har vist effektiv celledrap av bakterier og C. albicans. I denne studien er effekten av RB-aPDT på multidrug-resistent C. albicans beskrevet. En hjemmelaget grønn lysdiode (LED) lyskilde er designet for å justere seg etter midten av en brønn på en 96-brønns plate. Gjærene ble inkubert i brønnene med forskjellige konsentrasjoner av RB og opplyst med varierende svingninger i grønt lys. Drapseffektene ble analysert ved platefortynningsmetoden. Med en optimal kombinasjon av lys og RB ble det oppnådd 3-logg veksthemming. Det ble konkludert med at RB-aPDT potensielt kan hemme legemiddelresistente C. albicans.

Figur 1 viser aPDT-systemet som brukes i denne studien. Siden høye temperaturer kan forårsake betydelig celledød, avkjøles LED-matrisen av en elektrisk vifte, og en kjøleribbe brukes under bestråling for å opprettholde en konstant temperatur ved 25 ± 1 °C. Varmeeffekten kan diskonteres. Å ha en jevn lysfordeling er også en viktig avgjørende faktor for en vellykket aPDT; Derfor er det viktig å justere LED-lyspæren til brønnen nøyaktig under belysning. På grunn av lysstyrken ...

Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans at JoVE.com

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Den økende forekomsten av legemiddelresistente Candida albicans er et alvorlig helseproblem over hele verden. Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) kan tilby en strategi for å bekjempe legemiddelresistente soppinfeksjoner. Den nåværende protokollen beskriver Rose bengal-mediert aPDT-effekt på en multidrug-resistent C. albicans stamme in vitro.

Rose Bengal-mediert fotodynamisk terapi for å hemme Candida albicans

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Denne studien er et enkelt, allsidig og enkelt system for å undersøke ulike fotodynamiske effekter på ulike mikroorganismer og celler. I dette systemet kan LED-lampen passe inn i forskjellige ordninger avhengig av eksperimentdesign. Forskjellig tilstand av PDT kan komprimeres i en 96-brønns plate eller til og med en 384-brønns plate i ett eksperiment.Denne teknikken kan brukes til å behandle sopp keratitt på grunn av hvilken globalt, rundt 150.000 mennesker mister øynene til tross for intensive behandlinger. Til å begynne med, kutt fire grønne lysdioder fra en LED-stripe og juster dem etter tre brønner på en 96-brønnsplate. Mål flythastigheten til LED-lampen ved 540 nanometer med en lyseffektmåler.Opprettholde konstant temperatur ved 25 grader Celsius med en elektrisk vifte som ble montert ved siden av platen under bestråling. Med en steril sløyfe, velg en enkelt koloni av Candida albicans fra en agarplate og legg den til et sterilisert glassrør som inneholder tre milliliter YPD-medium. Inkuber røret ved 25 grader Celsius med en rotasjonshastighet på 155 RPM i 14 til 16 timer for å dyrke gjærkulturen.Deretter fortynner du nattkulturen med YPD medium til en OD 600-verdi på 0,5. Inkuber ved 30 grader Celsius med rotasjon ved 155 RPM i fire timer for å oppnå loggvekstfasen. Gjenta fortynning av loggfasekulturen med friskt YPD-medium til en OD 600-verdi på 0,65, for å få omtrent en gang 10 til den syvende kolonidannende enheter per milliliter.Lag samtidig en 4% lagerløsning av rose bengal i 1X PBS. Filtrer steriliser med et 0,22 mikrometer filter. Tilsett 111 mikroliter 2% rose bengal løsning til en milliliter loggfasekultur, og samkultur på forskjellige tidspunkter ved romtemperatur for å forstå absorpsjonen av RB i cellene.Sentrifuge ved 16,100 ganger G i 2 1/2 minutter ved romtemperatur, og vask samkulturen tre ganger med en milliliter 1X PBS. Etter vask, resuspend Candida albicans kultur i en milliliter av 1X PBS. For hver betingelse fordeler du kulturen i tre forskjellige brønner i en 96-brønnsplate.Juster brønnene etter LED-matrisen. Slå på den elektriske viften og lyset i de lysutsatte gruppene. Etter bestråling, utfør tifoldige serielle fortynninger to ganger ved å ta 20 mikroliter av samkulturløsningen fra en brønn, og legg den til et rør som inneholder 180 mikroliter 1X PBS.Slipp deretter 20 mikroliter av hver seriell fortynning i en kvadrant av en YPD agarplate for å oppnå tellbare kolonier på platen. Fluorescerende mikroskopi viste umiddelbar farging av Candida albicans med rose bengal under rød fluorescens. Etter 15 minutter med inkubasjon ble de fleste cellene farget med rose bengal, noe som indikerer at den kommer inn i cellene på en tidsavhengig måte.Videre genererer aktivering av rose bengal med lys frie radikaler og singlet oksygen i cellene, noe som resulterer i celledød. I fravær av rose bengal eller bestråling ble det ikke observert celledød. Candida albicans ble hemmet etter grønn lysbestråling i nærvær av 0,2% rose bengal på en lysdoseavhengig måte.Det er viktig at først må 96-brønnsplaten være på linje med midten av LED-lampen. For det andre må agarplaten som brukes tørkes grundig for å forhindre blanding av separate kolonier. Candida albicans som vokste på tallerkenen kan sendes videre til genanalyse, som kan svare på hvordan PDT påvirker genuttrykket til cellene.Disse teknikkene baner vei for å undersøke hvordan PDT fungerer på forskjellige celletyper, enten kreftceller, bakterier, sopp eller virus med en enkel, billig og allsidig plattform.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualisering av Biofilm formasjon i Candida albicans bruker en automatisert Microfluidic enhet

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Dyp Dermal injeksjon som en modell av Candida albicans hudinfeksjon for histologiske analyser

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Daglig fototerapi med rødt lys Regulate Candida albicans Biofilm vekst

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualisering av Candida albicans i murine mage-tarmkanalen ved hjelp av fluorescerende in situ hybridisering

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Avklare og imaging Candida albicans Biofilms

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

En Ex vivo analyse for å studere Candida albicans bindestrek morfogenese i mage-tarmkanalen

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Bruk av in vivo imaging for å skjerme for morfogenese fenotyper i Candida albicans mutante stammer under aktiv infeksjon i en pattedyrvert

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...