Name: rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit candida albicans
Uploaded: 2022-03-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans at JoVE.com

Bu çalışma, Eğitim Bakanlığı (MOE) ve Tayvan Bilim ve Teknoloji Bakanlığı [MOST 109-2327-B-006-005] tarafından Yüksek Öğrenim Filiz Projesi çerçevesinde Öne Çıkan Alanlar Araştırma Merkezi Programı'ndan Ulusal Cheng Kung Üniversitesi Uygulamalı Nanotıp Merkezi'nden TW Wong'a fon almıştır. J.H. Hung, Tayvan Ulusal Cheng Kung Üniversite Hastanesi'nden [NCKUH-11006018] ve [MOST 110-2314-B-006-086-MY3] gelen fonları kabul ediyor.

1. aPDT sistem hazırlığı
<ol><li>Bir LED şeritten dört yeşil ışık yayan diyotu (LED'ler) kesin ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve bunları 96 delikli bir plakanın dört kuyucuğuyla hizalayın (Şekil 1). NOT: LED'ler 4 x 3'lük bir dizi halinde düzenlenmiştir. LED'in arkası, ışınlama sırasında ısıyı dağıtmak için bir ısı emiciye yapıştırıldı.</li>
	<li>LED'in akıcılık hızı11'i bir ışık güc...

<ol>
	<li>Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+secreted+aspartyl+proteinases+in+virulence+and+pathogenesis.">Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).</li><li>Pappas, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice+guideline+for+the+management+of+candidiasis:+2016+update+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).</li><li>Ricotta, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+candidiasis+species+distribution+and+trends,+United+States,+2009-2017.">Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017.</a> Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).</li><li>Koehler, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morbidity+and+mortality+of+candidaemia+in+Europe:+an+epidemiologic+meta-analysis.">Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis.</a> Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).</li><li>Toda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population-based+active+surveillance+for+culture-confirmed+candidemia+-+four+sites,+United+States,+2012-2016.">Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).</li><li>Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daylight+photodynamic+therapy:+an+update.">Daylight photodynamic therapy: an update.</a> Molecules. 25 (21), 5195 (2020).</li><li>Wainwright, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+(PACT).">Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT).</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).</li><li>Wong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indocyanine+green-mediated+photodynamic+therapy+reduces+methicillin-resistant+staphylococcus+aureus+drug+resistance.">Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).</li><li>Kim, M. M., Darafsheh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sources+and+dosimetry+techniques+for+photodynamic+therapy.">Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy.</a> Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).</li><li>Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+for+Bowen's+disease+(squamous+cell+carcinoma+in+situ)+of+the+digit.">Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit.</a> Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).</li><li>Wong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+inactivation+of+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+by+indocyanine+green+and+near+infrared+light.">Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light.</a> Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).</li><li>Stasko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visible+blue+light+inhibits+infection+and+replication+of+SARS-CoV-2+at+doses+that+are+well-tolerated+by+human+respiratory+tissue.">Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue.</a> Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).</li><li>Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+light+field+of+the+Waldmann+PDT+1200+lamp:+potential+for+wide-field+low+light+irradiance+aminolevulinic+acid+photodynamic+therapy.">Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy.</a> Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).</li><li>Feenstra, R. P., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fluorescein+and+rose+bengal+staining.">Comparison of fluorescein and rose bengal staining.</a> Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).</li><li>Demidova, T. N., Hamblin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cell-photosensitizer+binding+and+cell+density+on+microbial+photoinactivation.">Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).</li><li>Shahid, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duclauxin+derivatives+from+fungi+and+their+biological+activities.">Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities.</a> Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).</li><li>Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+CLSI+M44-A2+disk+diffusion+and+associated+breakpoint+testing+of+caspofungin+and+micafungin+using+a+well-characterized+panel+of+wild-type+and+fks+hot+spot+mutant+Candida+isolates.">Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).</li><li>Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+yeast,+pseudohyphal,+and+hyphal+morphogenesis+differentially+affects+immune+recognition.">Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition.</a> Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).</li><li>Hung, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+photodynamic+therapy+against+fungal+keratitis.">Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis.</a> Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).</li><li>Martinez, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rose+Bengal+photodynamic+antimicrobial+therapy:+a+pilot+safety+study.">Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study.</a> Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).</li></ol>

RB-PDT'nin fungal keratit için klinik uygulamalarının cesaret verici sonuçları son zamanlarda bildirilmiştir19. RB'nin absorpsiyon zirvesi 450-650 nm'dir. Başarılı bir aPDT için ışık kaynağının akıcılık oranını belirlemek esastır. Kanser hücrelerini tedavi etmek için yüksek bir fluans (genellikle >100 J /cm2) gerekirken, enfekte lezyonları tedavi etmek için daha düşük bir fluans beklenmektedir6. Yüksek akıcılık, klinik bir ortamd...

C. albicans , sağlıklı bireylerin gastrointestinal ve genitoüriner yollarında kolonize olur ve bireylerin yaklaşık yüzde 50'sinde normal mikrobiyota olarak tespit edilebilir1. Konakçı ve patojen arasında bir dengesizlik yaratılırsa, C. albicans istila edebilir ve hastalığa neden olabilir. Enfeksiyon lokal mukoza zarı enfeksiyonlarından çoklu organ yetmezliğine kadar değişebilir2. ABD'de yapılan çok merkezli bir sürveyans çalışmasında, 2009 ve 2017 yılları arasında invaziv kandidiyazisli hastalardan alınan izolatların yaklaşık yarısı C. albicans3'tür. Kandidemi yüksek morbidite oranları, mortalite, hastanede kalış süresinin uzaması ile ilişkili olabilir4. ABD Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri, test edilen tüm Candida kan örneklerinin yaklaşık% 7'sinin antifungal ilaç flukonazol5'e dirençli olduğunu bildirmiştir. İlaca dirençli Candida türlerinin ortaya çıkması, antimikotik ajanlara alternatif veya adjuvan bir tedavi geliştirme endişesini artırmaktadır.
Antimikrobiyal fotodinamik tedavi (aPDT), PS6'nın tepe absorpsiyon dalga boyunda ışıkla spesifik bir fotosensitizörün (PS) aktive edilmesini içerir. Uyarmadan sonra, uyarılmış PS enerjisini veya elektronlarını yakındaki oksijen moleküllerine aktarır ve zemin durumuna geri döner. Bu işlem sırasında reaktif oksijen türleri ve singlet oksijen oluşur ve hücre hasarına neden olur. aPDT, 1990'lardan beri mikroorganizmaları öldürmek için yaygın olarak kullanılmaktadır7. aPDT'nin faydalarından biri, ışınlama sırasında çoklu organellerin bir hücrede singlet oksijen ve / veya reaktif oksijen türleri (ROS) tarafından hasar görmesidir; bu nedenle aPDT'ye karşı direnç bugüne kadar bulunamamıştır. Ayrıca, yakın tarihli bir çalışma, aPDT'den sonra hayatta kalan bakterilerin antibiyotiklere karşı daha duyarlı hale geldiğini bildirmiştir8.
aPDT'de kullanılan ışık kaynakları arasında lazerler, filtreli metal halojen lambalar, yakın kızılötesi ışık ve ışık yayan diyot (LED)9,10,11,12 bulunur. Lazer, genellikle 0,5 W /cm2'den daha büyük olan ve çok kısa sürede yüksek ışık dozunun verilmesine izin veren yüksek ışık gücü sağlar. Oral enfeksiyonlar için aPDT gibi daha uzun bir tedavi süresinin sakıncalı olduğu durumlarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Bir lazerin dezavantajı, spot aydınlatma boyutunun birkaç yüz mikrometreden bir difüzörle 10 mm'ye kadar değişen küçük olmasıdır. Dahası, lazer ekipmanı pahalıdır ve çalışması için özel eğitime ihtiyaç duyar. Öte yandan, filtreli metal bir halojen lambanın ışınlama alanı nispeten daha büyüktür13. Ancak, lamba çok ağır ve pahalıdır. LED ışık kaynakları, dermatolojik alanda aPDT'nin ana akımı haline gelmiştir, çünkü küçük ve daha ucuzdur. Işınlama alanı, LED ampulün bir dizi düzenlemesi ile nispeten büyük olabilir. Tüm yüz aynı anda aydınlatılabilir9. Bununla birlikte, bugün mevcut olan LED ışık kaynaklarının hepsi olmasa da çoğu klinik kullanım için tasarlanmıştır. Bir laboratuvardaki deneyler için uygun olmayabilir, çünkü yer kaplayan ve pahalıdır. Çok küçük ve bir LED şeritten kesilip monte edilebilen ucuz bir LED dizisi geliştirdik. LED'ler farklı deneysel tasarımlar için farklı düzenlemelere takılabilir. Bir deneyde 96 delikli bir plakada veya hatta 384 delikli bir plakada farklı aPDT koşulları tamamlanabilir.
Gül bengal (RB), insan gözlerinde kornea hasarlarının görselleştirilmesini arttırmak için yaygın olarak kullanılan renkli bir boyadır14. RB aracılı aPDT, Staphylococcus aureus, Escherichia coli ve C. albicans üzerinde, Toluidin mavisi O15'inkiyle kabaca karşılaştırılabilir verimlilikte öldürücü etkiler göstermiştir. Bu çalışma, RB-aPDT'nin çoklu ilaca dirençli C. albicans üzerindeki etkisini doğrulamak için bir yöntem göstermektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microfuge tube</td>
			<td>Neptune, San Diego, USA</td>
			<td>#3745.x</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round-bottom tube with cell strainer cap</td>
			<td>Falcon, USA</td>
			<td>#352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan</td>
			<td>#16196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td>sunmei, Tainan, Taiwan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum heat sink</td>
			<td>Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>BK-T220-0051-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, UK</td>
			<td>5415R</td>
			<td>disperses heat from the LED array</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graph pad prism software</td>
			<td>GraphPad 8.0, San Diego, California, USA</td>
			<td></td>
			<td>graphing and statistics software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Green light emitting diode (LED) strip</td>
			<td>Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>2835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Yihder, Taipei, Taiwan</td>
			<td>LM-570D (R)</td>
			<td>Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150&#176;; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light power meter</td>
			<td>Ophir, Jerusalem, Israel</td>
			<td>PD300-3W-V1-SENSOR,</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex 0.22 &#956;m filter</td>
			<td>Merck, NJ, USA</td>
			<td>SLGVR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrug-resistant Candida albicans</td>
			<td>Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan</td>
			<td>BCRC 21538/ATCC 10231</td>
			<td>http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OD600 spectrophotometer</td>
			<td>Biochrom, London, UK</td>
			<td>Ultrospec 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>330000</td>
			<td>stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilized glass tube</td>
			<td>Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan</td>
			<td>AK45048-16100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract Peptone Dextrose Medium</td>
			<td>HIMEDIA, India</td>
			<td>M1363</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit candida albicans

İnvaziv Candida albicans enfeksiyonu, insanlarda önemli bir fırsatçı mantar enfeksiyonudur, çünkü bağırsak, ağız, vajina ve cildin en yaygın kolonizatörlerinden biridir. Antifungal ilaçların mevcudiyetine rağmen, invaziv kandidiyazisin mortalite oranı ~% 50 oranında kalmaktadır. Ne yazık ki, ilaca dirençli C. albicans insidansı küresel olarak artmaktadır. Antimikrobiyal fotodinamik tedavi (aPDT), C. albicans biyofilm oluşumunu inhibe etmek ve ilaç direncinin üstesinden gelmek için alternatif veya adjuvan bir tedavi sunabilir. Gül bengal (RB) aracılı aPDT, bakteri ve C. albicans'ın etkili hücre öldürmesini göstermiştir. Bu çalışmada, RB-aPDT'nin çoklu ilaca dirençli C. albicans üzerindeki etkinliği tanımlanmıştır. Ev yapımı yeşil ışık yayan diyot (LED) ışık kaynağı, 96 delikli bir plakanın kuyusunun ortasına hizalanacak şekilde tasarlanmıştır. Mayalar, farklı RB konsantrasyonlarına sahip kuyucuklarda inkübe edildi ve değişen yeşil ışık akıcılıkları ile aydınlatıldı. Öldürme etkileri plaka seyreltme yöntemi ile analiz edildi. Optimal bir ışık ve RB kombinasyonu ile 3 log büyüme inhibisyonu sağlandı. RB-aPDT'nin ilaca dirençli C. albicans'ı potansiyel olarak inhibe edebileceği sonucuna varılmıştır.

Şekil 1'de bu çalışmada kullanılan aPDT sistemi görülmektedir. Yüksek sıcaklıklar önemli hücre ölümüne neden olabileceğinden, LED dizisi bir elektrikli fan tarafından soğutulur ve ışınlama sırasında 25 ± 1 ° C'de sabit bir sıcaklığı korumak için bir ısı emici kullanılır. Isı etkisi azaltılabilir. Eşit bir ışık dağılımına sahip olmak da başarılı bir aPDT için önemli bir belirleyici faktördür; bu nedenle, aydınlatma sırasında LED ampulün ...

Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans at JoVE.com

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

İlaca dirençli Candida albicans'ın artan insidansı dünya çapında ciddi bir sağlık sorunudur. Antimikrobiyal fotodinamik tedavi (aPDT), ilaca dirençli mantar enfeksiyonlarına karşı savaşmak için bir strateji sunabilir. Bu protokol, in vitro olarak çoklu ilaca dirençli C. albicans suşu üzerinde Gül bengal aracılı aPDT etkinliğini tanımlamaktadır.

Candida albicans'ı İnhibe Etmek için Gül Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Bu çalışma, çeşitli mikroorganizmalar ve hücreler üzerindeki farklı fotodinamik etkileri incelemek için basit, çok yönlü ve kolay bir sistemdir. Bu sistemde, LED deney tasarımına bağlı olarak farklı düzenlemelere sığdırılabilir. PDT'nin farklı koşulları, bir deneyde 96 delikli bir plakada veya hatta 384 delikli bir plakada hesaplanabilir.Bu teknik, mantar keratitini tedavi etmek için kullanılabilir, çünkü küresel olarak, yoğun tedavilere rağmen yaklaşık 150.000 kişi gözlerini kaybeder. Başlamak için, bir LED şeridinden dört yeşil LED'i kesin ve bunları 96 delikli bir plakanın üç kuyucuğuyla hizalayın. LED'in akıcılık hızını bir ışık gücü ölçerle 540 nanometrede ölçün.Işınlama sırasında plakanın yanına monte edilen bir elektrikli fan ile sabit sıcaklığı 25 santigrat derecede koruyun. Steril bir döngü ile, bir agar plakasından tek bir Candida albicans kolonisi seçin ve üç mililitre YPD ortamı içeren sterilize edilmiş bir cam tüpe ekleyin. Maya kültürünü büyütmek için tüpü 14 ila 16 saat boyunca 155 RPM dönme hızında 25 santigrat derecede inkübe edin.Daha sonra geceleme kültürünü YPD ortamı ile 0,5 OD 600 değerine kadar seyreltin. Log büyüme aşamasına ulaşmak için dört saat boyunca 155 RPM'de rotasyonla 30 santigrat derecede inkübe edin. Log fazı kültürünün seyreltilmesini taze YPD ortamıyla 0,65 OD 600 değerine kadar tekrarlayın, böylece mililitre başına yedinci koloni oluşturan birimlere yaklaşık bir kez 10 kat elde edin.Aynı zamanda, 1X PBS'de% 4'lük bir gül bengal stok çözeltisi hazırlayın. Filtre 0.22 mikrometre filtre ile sterilize edin. Bir mililitre log fazı kültürüne 111 mikrolitre% 2 gül bengal çözeltisi ekleyin ve hücrelerdeki RB emilimini anlamak için oda sıcaklığında farklı zaman noktalarında ortak kültür ekleyin.Oda sıcaklığında 2 1/2 dakika boyunca 16, 100 kez G'de santrifüj yapın ve ko-kültürü bir mililitre 1X PBS ile üç kez yıkayın. Yıkadıktan sonra, Candida albicans kültürünü bir mililitre 1X PBS'de yeniden askıya alın. Her koşul için, kültürü 96 kuyucuklu bir plakada üç farklı kuyuya dağıtın.Kuyucukları LED dizisiyle hizalayın. Işığa maruz kalan gruplarda, elektrikli fanı ve ışığı açın. Işınlamadan sonra, bir kuyucuktan 20 mikrolitre ko-kültür çözeltisi alarak ve 180 mikrolitre 1X PBS içeren bir tüpe ekleyerek iki kez on kat seri seyreltme gerçekleştirin.Daha sonra, plaka üzerinde sayılabilir koloniler elde etmek için her seri seyreltmenin 20 mikrolitresini bir YPD agar plakasının bir çeyreğine bırakın. Floresan mikroskopi, Candida albicans'ın kırmızı floresan altında gül bengal ile anında boyandığını gösterdi. 15 dakikalık inkübasyondan sonra, hücrelerin çoğu gül bengal ile boyandı, bu da hücrelere zamana bağlı bir şekilde girdiğini gösteriyordu.Ayrıca, gül bengalinin ışıkla aktivasyonu, hücrelerde serbest radikaller ve singlet oksijen üreterek hücre ölümüyle sonuçlanır. Gül bengal veya ışınlama yokluğunda, hücre ölümü gözlenmedi. Candida albicans, yeşil ışık ışınlamasından sonra, hafif doza bağımlı bir şekilde% 0.2 gül bengal varlığında inhibe edildi.Öncelikle 96 delikli plakanın LED'in merkezi ile hizalanması önemlidir. İkincisi, ayrı kolonilerin karışmasını önlemek için kullanılan agar plakası iyice kurutulmalıdır. Plaka üzerinde yetişen Candida albicans, PDT'nin hücrelerin gen ekspresyonunu nasıl etkilediğini cevaplayabilen gen analizi için daha fazla gönderilebilir.Bu teknikler, PDT'nin kanser hücreleri, bakteriler, mantarlar veya virüsler gibi farklı hücre tipleri üzerinde kolay, ucuz ve çok yönlü bir platformla nasıl çalıştığını incelemenin yolunu açar.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

İzleme Oluşumu ve Antifungal Duyarlılık Testi için 96 Şey microtiter Levha tabanlı Yöntemi Candida albicans Biyofilmler

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Görselleştirme bir otomatik mikrosıvısal aygıtı kullanarak Candida albicans biyofilm oluşumu

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Derin Dermal enjeksiyon olarak bir Model Candida albicans deri enfeksiyonu histolojik analizler için

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Situ Hibridizasyonfloresan Kullanarak Murine Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Görselleştirilmesi

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

Aydınlatma ve Görüntüleme Candida albicans Biyofilmler

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Bir Memeli Konağında Aktif Enfeksiyon Sırasında Candida albicans Mutant Suşlarında Morfogenez Fenotiplerini Taramak için In Vivo Görüntülemenin Kullanımı

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...

Effective aPDT Using Curcuminoids for Oral Candidiasis in Mice

Curcuminoid-Mediated Antimicrobial Photodynamic Therapy on a Murine Model of Oral Candidiasis

Author Spotlight: Exploring Photodynamic Therapy with Curcumin in a Murine Model for Oral Candidiasis

Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) has been extensively investigated in vitro, and preclinical animal models of infections are suitable for ...

Establishing a Mouse Model for Candida albicans Biofilm-Related PJI

A Periprosthetic Joint Candida albicans Infection Model in Mouse

Advancing Research on Candida albicans Biofilm-Associated Prosthetic Joint Infections (Video) | JoVE

Farede Periprostetik Eklem Candida albicans Enfeksiyon Modeli

Periprosthetic joint infection (PJI) is one of the common infections caused by Candida albicans (C. albicans), which increasingly concerns surgeons and ...