Name: long-term continuous measurement of renal blood flow in conscious rats
Uploaded: 2022-02-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Continuous Measurement of Renal Blood Flow in Conscious Rats at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי מענקים למחקר מדעי (P01 HL116264, RO1 HL137748). המחברים רוצים להודות לתרזה קורט על עצתה ועזרתה בשמירה על סביבת הניסוי כמנהלת המעבדה.

הפרוטוקול מאושר על ידי המכללה הרפואית של ויסקונסין לטיפול ושימוש מוסדי בבעלי חיים. חולדות רגישות למלח דאהל (זכרים ונקבות), ~ 8 שבועות של גיל, 200-350 גרם, שימשו לניסויים.
1. הכנת בעלי חיים
<ol><li>התקינו מערכת להגבלת תגובת תנועה עבור החולדה, מודול זרימה פריווסקולרית, משאבת מ...

<ol>
	<li>Chonchol, M., Smogorzewski, M., Stubbs, J., Yu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Brenner &amp; Rector's The Kidney. 11, (2019).</li><li>Chen, J. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphatidylinositol+3-kinase+signaling+determines+kidney+size.">Phosphatidylinositol 3-kinase signaling determines kidney size.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (6), 2429-2444 (2015).</li><li>Sigmon, D. H., Gonzalez-Feldman, E., Cavasin, M. A., Potter, D. L., Beierwaltes, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nitric+oxide+in+the+renal+hemodynamic+response+to+unilateral+nephrectomy.">Role of nitric oxide in the renal hemodynamic response to unilateral nephrectomy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 15 (6), 1413-1420 (2004).</li><li>Romero, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+measurement+of+renal+blood+flow+by+magnetic+resonance+imaging+in+rats.">Noninvasive measurement of renal blood flow by magnetic resonance imaging in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 314 (1), 99-106 (2018).</li><li>Basile, D. P., Anderson, M. D., Sutton, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+acute+kidney+injury.">Pathophysiology of acute kidney injury.</a> Comprehensive Physiology. 2 (2), 1303-1353 (2012).</li><li>Regan, M. C., Young, L. S., Geraghty, J., Fitzpatrick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+renal+blood+flow+in+normal+and+disease+states.">Regional renal blood flow in normal and disease states.</a> Urological Research. 23 (1), 1-10 (1995).</li><li>Ter Wee, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+calcium+antagonists+on+renal+hemodynamics+and+progression+of+nondiabetic+chronic+renal+disease.">Effects of calcium antagonists on renal hemodynamics and progression of nondiabetic chronic renal disease.</a> Archives of Internal Medicine. 154 (11), 1185 (1994).</li><li>Mazze, R. I., Cousins, M. J., Barr, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+effects+and+metabolism+of+isoflurane+in+man.">Renal effects and metabolism of isoflurane in man.</a> Anesthesiology. 40 (6), 536-542 (1974).</li><li>Corrigan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PAH+extraction+and+estimation+of+plasma+flow+in+human+postischemic+acute+renal+failure.">PAH extraction and estimation of plasma flow in human postischemic acute renal failure.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 277 (2), 312-318 (1999).</li><li>Laroute, V., Lefebvre, H. P., Costes, G., Toutain, P. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+glomerular+filtration+rate+and+effective+renal+plasma+flow+in+the+conscious+beagle+dog+by+single+intravenous+bolus+of+iohexol+and+p-aminohippuric+acid.">Measurement of glomerular filtration rate and effective renal plasma flow in the conscious beagle dog by single intravenous bolus of iohexol and p-aminohippuric acid.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 41 (1), 17-25 (1999).</li><li>Wei, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+renal+blood+flow+with+contrast-enhanced+ultrasound.">Quantification of renal blood flow with contrast-enhanced ultrasound.</a> Journal of the American College of Cardiology. 37 (4), 1135-1140 (2001).</li><li>Cao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrast-enhanced+ultrasound+for+assessing+renal+perfusion+impairment+and+predicting+acute+kidney+injury+to+chronic+kidney+disease+progression.">Contrast-enhanced ultrasound for assessing renal perfusion impairment and predicting acute kidney injury to chronic kidney disease progression.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 27 (17), 1397-1411 (2017).</li><li>Markl, M., Frydrychowicz, A., Kozerke, S., Hope, M., Wieben, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4D+flow+MRI.">4D flow MRI.</a> Journal of Magnetic Resonance Imaging. 36 (5), 1015-1036 (2012).</li><li>Juillard, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+renal+blood+flow+measurement+by+positron+emission+tomography+in+patients+with+CRF.">Dynamic renal blood flow measurement by positron emission tomography in patients with CRF.</a> American Journal of Kidney Diseases. 40 (5), 947-954 (2002).</li><li>Ju&#225;rez-Orozco, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+cardiac+and+renal+perfusion+in+a+rat+model+with+13N-NH3+micro-PET.">Imaging of cardiac and renal perfusion in a rat model with 13N-NH3 micro-PET.</a> The International Journal of Cardiovascular Imaging. 31 (1), 213-219 (2015).</li><li>Mori, T., Cowley, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+pressure+in+angiotensin+II-induced+renal+injury.">Role of pressure in angiotensin II-induced renal injury.</a> Hypertension. 43 (4), 752-759 (2004).</li><li>Mori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+perfusion+pressure+accelerates+renal+injury+in+salt-sensitive+hypertension.">High perfusion pressure accelerates renal injury in salt-sensitive hypertension.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 19 (8), 1472-1482 (2008).</li><li>Polichnowski, A. J., Cowley, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+renal+injury+in+angiotensin+II+versus+norepinephrine-induced+hypertensive+rats.">Pressure-induced renal injury in angiotensin II versus norepinephrine-induced hypertensive rats.</a> Hypertension. 54 (6), 1269-1277 (2009).</li><li>Polichnowski, A. J., Jin, C., Yang, C., Cowley, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+renal+perfusion+pressure+versus+angiotensin+II+renal+oxidative+stress+in+angiotensin+II-induced+hypertensive+rats.">Role of renal perfusion pressure versus angiotensin II renal oxidative stress in angiotensin II-induced hypertensive rats.</a> Hypertension. 55 (6), 1425-1430 (2010).</li><li>Evans, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+perfusion+pressure+drives+renal+T-cell+infiltration+in+the+dahl+salt-sensitive+rat.">Increased perfusion pressure drives renal T-cell infiltration in the dahl salt-sensitive rat.</a> Hypertension. 70 (3), 543-551 (2017).</li><li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+perfusion+pressure+determines+infiltration+of+leukocytes+in+the+kidney+of+rats+with+angiotensin+II-induced+hypertension.">Renal perfusion pressure determines infiltration of leukocytes in the kidney of rats with angiotensin II-induced hypertension.</a> Hypertension. 76 (3), 849-858 (2020).</li><li>Cousins, M. J., Mazze, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthesia,+surgery+and+renal+function:+Immediate+and+delayed+effects.">Anaesthesia, surgery and renal function: Immediate and delayed effects.</a> Anaesthesia and Intensive Care. 1 (5), 355-373 (1973).</li><li>Cousins, M. J., Skowronski, G., Plummer, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthesia+and+the+kidney.">Anaesthesia and the kidney.</a> Anaesthesia and Intensive Care. 11 (4), 292-320 (1983).</li><li>Schiffer, T. A., Christensen, M., Gustafsson, H., Palm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+inactin+on+kidney+mitochondrial+function+and+production+of+reactive+oxygen+species.">The effect of inactin on kidney mitochondrial function and production of reactive oxygen species.</a> PLOS ONE. 13 (11), 0207728 (2018).</li><li>Evans, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+renal+blood+flow+measurement+in+dogs+by+transit-time+ultrasound+flowmetry.">Chronic renal blood flow measurement in dogs by transit-time ultrasound flowmetry.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 38 (1), 33-39 (1997).</li><li>Bell, T. D., DiBona, G. F., Biemiller, R., Brands, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuously+measured+renal+blood+flow+does+not+increase+in+diabetes+if+nitric+oxide+synthesis+is+blocked.">Continuously measured renal blood flow does not increase in diabetes if nitric oxide synthesis is blocked.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 295 (5), 1449-1456 (2008).</li></ol>

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה המשתמשת במכשור זמין מסחרית כדי להקליט RBF ולחץ עורקי ברציפות במשך שבועות רבים. בנוסף, ניתן לאסוף שתן באמצעות המכשיר המתואר בשלב 1.1. זה יכול לשמש גם כדי להעריך מטבוליטים בשתן, וכאשר קטטר עורקי מושתל, דגימת דם לניתוח.
באופן מסורתי, מדידות RBF התקבלו בא...

הכליות הן רק 0.5% ממשקל הגוף אך עשירות בזרימת הדם, ומקבלות 20%-25% מתפוקת הלב הכוללת1. ויסות זרימת הדם הכלייתי (RBF) הוא מרכזי בתפקוד הכליות, בנוזלי הגוף ובהומאוסטזיס של אלקטרוליטים. החשיבות של ויסות זרימת הדם לכליה מומחשת יפה על ידי העלייה המשמעותית של RBF בכליה הנותרת לאחר כריתת רחם חד צדדית 2,3,4 ועל ידי הפחתות של RBF המתרחשות באי ספיקת כליות 5,6,7. האם שינויים כאלה ב- RBF מתרחשים בתגובה לשינויים בתפקוד הכליות או ירידה בתפקוד עקב הפחתת RBF היה מאתגר לברר בבעלי חיים שהוכנו כירורגית מורדמים או נבדקים אנושיים. נדרשים מחקרים זמניים בהם ניתן לקבוע את האירועים לפני ואחרי שינוי מוגדר ולצפות באותה חיה במהלך התקדמות האירועים. במחקרים בבעלי חיים ובבני אדם, RBF הוערך בעקיפין על ידי סילוק של חומצה היפופורית פרה-אמינו (PAH)8,9,10 ובזמן האחרון על ידי טכניקות הדמיה כגון אולטרסאונד9,11,12, MRI 4,13 ו- PET-CT14,15 אשר נותנים תמונות תמונה מועילות של כל כליה ואשר יכול לעקוב אחר התקדמות המחלה. זה מאתגר להעריך RBF בבעלי חיים קטנים על ידי אולטרסאונד או MRI סריקות ללא הרדמה. אי אפשר היה למדוד באופן רציף RBF בתנאים מודעים באותה חולדה לאורך תקופות ממושכות.
הפרוטוקול הנוכחי, אם כן, פיתח טכניקות המאפשרות מדידות רציפות בו זמנית של RBF 24 שעות ביממה, אשר שולבו עם שיטות מדידת לחץ דם רציפות עבור חולדות הנעות בחופשיות כפי שתואר קודם לכן 16,17,18,19,20,21 . טכנולוגיה זו מאפשרת הערכה זמנית של RBF במודלים שונים של חולדות כדי לחקור יחסי סיבה ותוצאה בהפרעות כליות שונות בעתיד.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1RB probe</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>1RB</td>
			<td>ultrasonic flow probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Avrio Health</td>
			<td></td>
			<td>povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR-LAB</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>APOTEX</td>
			<td>NDC 60505</td>
			<td>Cefazolin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crile Hemostats</td>
			<td>Fine Surgical Instruments</td>
			<td>13004-14</td>
			<td>Hemostats for blunt dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium Clear PVC cement</td>
			<td>Oatey</td>
			<td></td>
			<td>PVC cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mersilene polyester fiber mesh</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>polyester fiber mesh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetriCide28</td>
			<td>Metrex</td>
			<td>SKU 10-2805</td>
			<td>2.5% glutaraldehyde</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Renathane 0.025 x 0.012</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>MRE 025</td>
			<td>use for catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MINI HYPE-WIPE</td>
			<td>Current Technologies</td>
			<td>#9803</td>
			<td>1% sodium hypochlorite</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oatey Medium Clear PVC Cement</td>
			<td>Oatey</td>
			<td>#31018</td>
			<td>PVC cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHD2000 syringe pump</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>71-2000</td>
			<td>syringe pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ponemah software</td>
			<td>DSI</td>
			<td></td>
			<td>recording software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision 3630 Tower</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td>Computer for recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1407</td>
			<td>a movement response caging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RenaPulse High Fidelity Pressure Tubing 0.040 x 0.025</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RPT 040</td>
			<td>use for catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone cuff</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>AAPC102</td>
			<td>skin button</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical lubricant sterile bacteriostatic</td>
			<td>Fougera</td>
			<td>0168-0205-36</td>
			<td>gell for flow probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tergazyme</td>
			<td>Alconox</td>
			<td></td>
			<td>protease contained anionic detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TS420 Perivascular Flow Module</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>TS420</td>
			<td>perivascular flow module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinDaq software</td>
			<td>DATAQ</td>
			<td></td>
			<td>recording software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term continuous measurement of renal blood flow in conscious rats

הכליות ממלאות תפקיד מכריע בשמירה על הומאוסטזיס של נוזלי הגוף. ויסות זרימת הדם הכלייתית (RBF) חיוני לתפקודים החיוניים של סינון וחילוף חומרים בתפקוד הכליות. מחקרים חריפים רבים בוצעו בבעלי חיים מורדמים כדי למדוד RBF בתנאים שונים כדי לקבוע מנגנונים האחראים על ויסות של זליגת כליות. עם זאת, מסיבות טכניות, לא ניתן היה למדוד RBF באופן רציף (24 שעות ביממה) בחולדות חסרות מעצורים לאורך תקופות ממושכות. שיטות אלה מאפשרות קביעה רציפה של RBF במשך שבועות רבים תוך רישום לחץ דם (BP) בו זמנית עם צנתרים מושתלים (מלאים בנוזל או בטלמטריה). ניטור RBF מתבצע עם חולדות הממוקמות בכלוב חולדות מעגלי מבוקר סרוו המאפשר תנועה בלתי מרוסנת של החולדה לאורך כל המחקר. במקביל, נמנעת הסתבכות של כבלים מבדיקת הזרימה וצנתרים עורקיים. חולדות עוברות תחילה בדיקת זרימה על-קולית הממוקמת בעורק הכליה השמאלי וצנתר עורקי המושתל בעורק הירך הימני. אלה מנותבים תת עורית לעורף הצוואר, ומחוברים למד הזרימה ומתמר הלחץ, בהתאמה, כדי למדוד RBF ו- BP. לאחר השתלה כירורגית, חולדות מוכנסות מיד לכלוב כדי להתאושש לפחות שבוע ולייצב את הקלטות הבדיקה העל-קוליות. איסוף שתן הוא גם אפשרי במערכת זו. ההליכים הכירורגיים והפוסט-כירורגיים לניטור רציף מודגמים בפרוטוקול זה.

מוצגים נתוני לחץ עורקי ממוצע (איור 1A) ונתוני זרימת דם (איור 1B) מחולדה רגישה למלח דאהל זכר מייצג. החולדות הרגישות למלח דאהל מתוחזקות במושבה ומגודלות במכללה הרפואית של ויסקונסין. הניתוח נעשה בגיל 8 שבועות, ומשקל הגוף היה 249 גרם בזמן הניתוח. החולדות הוזנו בדיאטת ...

Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Continuous Measurement of Renal Blood Flow in Conscious Rats at JoVE.com

Long-Term Continuous Measurement of Renal Blood Flow in Conscious Rats

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מדידה רציפה ארוכת טווח של זרימת הדם הכלייתית בחולדות מודעות ובמקביל רישום לחץ דם עם צנתרים מושתלים (מלאים בנוזלים או בטלמטריה).

מדידה מתמשכת ארוכת טווח של זרימת הדם הכלייתית בחולדות מודעות

The kidneys play a crucial role in maintaining the homeostasis of body fluids. The regulation of renal blood flow (RBF) is essential to the vital ...

הרישום הרציף של זרימת הדם הכלייתית בחולדות מכשירים מאפשר לנו לקבוע באופן זמני את רצף האירועים שמובילים לתהליך המחלה שאנו חוקרים. במקרה שלנו, מדובר ביתר לחץ דם ואנחנו מנסים לקבוע אם הפחתה של זרימת הדם הכלייתית, המתרחשת ביתר לחץ דם, מקדימה או היא תוצאה של לחץ הדם הגבוה. המערכת שנדגים היום וההכנה של בעל החיים באמת נועדה לאפשר קביעה רציפה של 24 שעות של זרימת הדם הכלייתית במשך שבועות רבים בכל פעם כדי לחקור אירועים כרוניים ולחקור את החולדה בסביבה הביתית שלה, בכלובים.כמו בכל טכניקות הניתוח, התרגול, הסבלנות ותשומת הלב לפרטים הקטנים, אנו נידרש לשלוט בהליכים אלה עד שניתן יהיה לבצע את היישום בזמן. כדי להתחיל לגלח את כל הבטן באזור על תנומה סביב החוליות הצוואריות השביעית של חולדה מורדמת עם קוצץ חשמלי. לאחר הגילוח, נגבו את האזור שלוש פעמים לסירוגין עם 10% פובידון יוד ו-70% אתנול.מניחים את החולדה במצב נוטה. לעשות חתך סנטימטר אחד עם האזמל על תנומה ואת האגף השמאלי. לאחר מכן לבצע דיסקציה קהה עם מלקחיים המוסטטיים בחלל תת עורי ברור מן החתך באגף לחלק האחורי של הצוואר.חברו את כפתור העור לבדיקת הזרימה והעבירו את גשושית הזרימה דרך מנהרה תת עורית זו מהצוואר לחתך האגף עם מלקחיים המוסטטיים. לאחר מכן מניחים את החולדה במצב שכיבה ומבצעים חתך בטן בקו האמצע של ארבעה עד חמישה סנטימטרים. נתחו את האזור סביב עורק הכליה השמאלי בעזרת מלקחיים מיקרו-דיסקטיים מעוקלים החושפים את החלל מספיק כדי למקם את בדיקת הזרימה.ואז בבוטות, לחדור את השריר המותני quadratus השמאלי עם מלקחיים hemostatic ולמשוך את הראש של בדיקה זרימה דרך עורק הכליה מתחת לרקמת השומן לתוך חלל הבטן. מניחים את רשת סיבי הפוליאסטר על דופן הבטן. חברו את קצה גשושית הזרימה לעורק הכליה השמאלי וחברו אותו למד הזרימה.הוסף מעט ג'ל סביב קצה הבדיקה וערך קצב הזרימה יופיע על מד הזרימה. מדביקים את רשת סיבי הפוליאסטר המחוברת לבדיקה לדופן הבטן באמצעות דבק רקמה ומחזיקים עד לייבוש והדבקה. לאחר שהבדיקה נמצאת במקומה, נתקו את גשושית הזרימה ממד הזרימה וכסו את הבטן בגזה ספוגה מלוחה.כדי לתפור את הבדיקה, סובבו את החולדה למצב נוטה. חברו את כפתור העור לבדיקת הזרימה וצרו לולאה מעגלית של גשושית הזרימה באופן תת עורי באגף. תפר את החתך בצוואר ואת הכפתור לעור.לאחר מכן תפר את האגף עם ארבעה תפרים כירורגיים. חבר שוב את בדיקת הזרימה למד הזרימה, וסובב את החולדה בחזרה למצב הגבי כדי לבדוק את זרימת הדם הכלייתית. בצע התאמות של בדיקת זרימה סופית כדי לייעל את מיקומה על עורק הכליה.לבסוף, תפר את השריר עם שלושה משי ott בעור עם ארבעה תפר כירורגי ott. כאשר החולדה מתאוששת לחלוטין מההרדמה מחזירים את החולדה למערכת כלוב של תגובת תנועה מחברת את גשושית הזרימה למד זרימת הדם ומאפשרת תקופת החלמה של כשבוע לייצוב הבדיקה ומדידת הזרימה. לחץ העורקים הממוצע וזרימת הדם נמדדו באופן רציף בחולדות רגישות למלח עמום, תוך מעבר מתזונה דלת מלח לתזונה עתירת מלח.נתונים מייצגים אלה מחולדה זכרית תועדו במשך תקופה של ארבעה שבועות ומוצגים בממוצע דקה. הבדל יומי ברור נצפה בלחץ העורקים הממוצע ובזרימת הדם. בעוד שלחץ הדם עולה עם תזונה עשירה במלח זרימת הדם נוטה לרדת ולא לעלות, מה שמרמז על עמידות מוגברת של כלי הדם הכלייתיים.היתרון הגדול של טכניקה זו הוא שהיא יכולה לחקור את זרימת הדם הכלייתית על פני תקופות זמן ארוכות, והכי חשוב בתנאים לא מרומזים. יש לכך חשיבות רבה כאשר חוקרים את התגובה לגירויים שונים, שם ניתן להשתמש באותה חיה בתנאים לא מרומזים ולעקוב אחר אותה חיה לאורך תקופות קצרות או ארוכות מאוד כדי לראות מהי התגובה לגירוי מסוים או למחלה פתולוגית מסוימת.

Research

JoVE Journal

Medicine

Automated Measurement of Microcirculatory Blood Flow Velocity in Pulmonary Metastases of Rats

אוטומטי מדידה של microcirculatory זרימת דם ריאתי במהירות גרורות של חולדות

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. ...

Early Detection of Drug-Induced Renal Hemodynamic Dysfunction Using Sonographic Technology in Rats

גילוי מוקדם של הפרעות בתפקוד הכליות המודינמי סמים באמצעות טכנולוגיה Sonographic בחולדות

The kidney normally functions to maintain hemodynamic homeostasis and is a major site of damage caused by drug toxicity. Drug-induced nephrotoxicity is ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

הערכת Transcutaneous של תפקוד כלייתי במכרסמי Conscious

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Surgical Placement of Catheters for Long-term Cardiovascular Exercise Testing in Swine

מיקום כירורגי של קטטרים לטווח ארוך בדיקת תרגיל לב וכלי דם ב חזירים

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

מדידת לחץ דם לטווח ארוך בעכברים לנוע בחופשיות באמצעות טלמטריה

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Novel Approach for Simultaneous Recording of Renal Sympathetic Nerve Activity and Blood Pressure with Intravenous Infusion in Conscious, Unrestrained Mice.

בגישה חדשנית עבור הקלטה בו זמנית של פעילות העצבים הסימפתטית כליות, לחץ דם עם עירוי תוך ורידי, בהכרה, עכברים ערככם.

Renal sympathetic nerves contribute significantly to both physiological and pathophysiological phenomena. Evaluating renal sympathetic nerve activity ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

ההקלטה סימולטני אלקטרוקרדיוגרם ודם פולשנית בלחץ מדידה בחולדות

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

Continuous Blood Sampling in Small Animal Positron Emission Tomography/Computed Tomography Enables the Measurement of the Arterial Input Function

דגימת דם רציפה בפליטת פוזיטרון של בעלי חיים קטנים טומוגרפיה ממוחשבת/טומוגרפיה ממוחשבת מאפשרת את המדידה של פונקציית הקלט העורקי

For quantitative analysis and bio-kinetic modeling of positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) data, the determination of the temporal ...