Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Forfatterne takker Alessandra Bergadano, DVM, ph.d., for det dedikerede tilsyn med langsigtet dyresundhed. Dette arbejde blev støttet af forskningsmidlerne fra Forskningsrådet, Kantonsspital Aarau, Aarau, Schweiz og den schweiziske nationale videnskabsfond SNF (310030_182450).

Veterinær støtte blev udført i henhold til institutionelle retningslinjer. Eksperimenterne blev godkendt af den lokale etiske komité, Schweiz (BE 60/19). ARRIVE-retningslinjerne og 3R-principperne er blevet nøje fulgt 6,7. 31 mandlige Lewis-rotter, 12 uger gamle og vejer 492 ± 8 g, blev inkluderet. Hus alle rotter ved en stuetemperatur på 23 °C og en 12 timers lys/mørk cyklus. Giv fri adgang til vand og pellets. Statistiske analyser er blevet udført ved...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

Denne undersøgelse viser, at neointimadannelse medieres via endotelceller med oprindelse i aneurismekompleksets moderarterie, men understøttes af rekruttering af celler afledt af aneurismevæggen i vitale aneurismer. Ikke desto mindre er rollen som cirkulerende stamceller i aneurismeheling fortsat kontroversiel12,13. Samlet set blev 31 mandlige Lewis-rotter inkluderet i denne undersøgelse; kun 4 døde for tidligt (12,9% dødelighed).
<p class="jove_content...

Subarachnoid blødning forårsaget af brud på en intrakraniel aneurisme (IA) er en ødelæggende neurokirurgisk tilstand forbundet med høj sygelighed og dødelighed 1,2,3,4. Ud over mikrokirurgisk klipning, som giver direkte endotel-til-endotelkontakt, har endovaskulære enheder fået stigende betydning i løbet af de sidste årtier til behandling af bristede og tilfældigt opdagede IA'er. Det helbredende respons i endovaskulært behandlede IA'er afhænger hovedsageligt af neointimadannelse og tromboseorganisation. Begge er synergiske processer, afhængigt af cellemigration fra det tilstødende kar og aneurismevæggen. 5 Hidtil er oprindelsen af endotelceller i neointimadannelse af endovaskulære behandlede aneurismer fortsat uklar. Der er en løbende debat i litteraturen om den kilde, hvorfra neointima-dannende celler rekrutteres.
Ved at anvende en cellesporingsinjektion af CM-Dil-farvestof (se materialetabellen) i rotternes abdominale aorta havde vi til formål at analysere endotelcellernes rolle med oprindelse i moderarterien i neointimadannelse på to forskellige FU-tidspunkter (dag 7 og dag 21) (figur 1). En fordel ved modellen er den direkte lokale cellesporingsinkubation in vivo i en moderarterie før aneurismesutur, hvilket tillader FU på senere tidspunkter. In vivo-injektionsteknikker , såsom cellesporingsinkubation, er ikke beskrevet i litteraturen. En fordel ved denne teknik er den direkte, etpunkts, intraoperative, in vivo-injektion , som gør modellen robust og reproducerbar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

Mikrokirurgisk klipning skaber en efterfølgende barriere for blodgennemstrømning i intraknale aneurismer, mens endovaskulær behandling er afhængig af neointima og trombosedannelse. Kilden til endotelceller, der dækker det endoluminale lag af neointima, forbliver uklar. Formålet med dette studie var derfor at undersøge oprindelsen af neointimadannende celler efter cellesporingsinjektion i den allerede veletablerede Helsinki-rottemikrokirurgiske sidevægsaneurismemodel.
Sidevægsaneurismer blev skabt ved at suturere decellulariserede eller vitale arterielle poser ende-til-side til aorta hos mandlige Lewis-rotter. Før arteriotomi med aneurismesutur blev der udført en cellesporingsinjektion indeholdende CM-Dil-farvestof i det fastspændte aorta for at mærke endotelceller i det tilstødende kar og spore deres spredning under opfølgning (FU). Behandling efterfulgt af coiling (n = 16) eller stenting (n = 15). Ved FU (7 dage eller 21 dage) gennemgik alle rotter fluorescensangiografi efterfulgt af aneurismehøst og makroskopisk og histologisk evaluering med immunohistologiske celletal for specifikke regioner af interesse. 
Ingen af de 31 aneurismer var brudt ved opfølgningen. Fire dyr døde for tidligt. Makroskopisk resterende perfusion blev observeret hos 75,0% oprullede og 7,0% af stented rotter. Mængden af celle-sporstof-positive celler var signifikant forhøjet i decellulariseret stented sammenlignet med oprullede aneurismer med hensyn til trombose på dag 7 (p = 0,01) og neointima på dag 21 (p = 0,04). Der blev ikke fundet signifikante forskelle i trombose eller neointima i vitale aneurismer. 
Disse resultater bekræfter værre helbredende mønstre i coiled sammenlignet med stented aneurismer. Neointima dannelse synes særligt afhængig af moderarterien i decellulariserede aneurismer, mens den understøttes af rekruttering fra aneurismevægceller i vitale cellerrige vægge. Med hensyn til oversættelse kan stentbehandling være mere hensigtsmæssig for stærkt degenererede aneurismer, mens coiling alene kan være tilstrækkelig til aneurismer med for det meste sunde karvægge.

I alt 31 dyr blev inkluderet i laboratorieindstillingen: 27 rotter blev inkluderet i den endelige statistiske analyse; 4 rotter døde for tidligt (12,9% dødelighed). Intraoperativt blev åndedrætsudtømmelse signifikant (p = 0,03) reduceret i stent- (12,9 μm ± 0,7) sammenlignet med spolebehandlede (13,5 μm ± 0,6) rotter. Fluorescensangiografi blev udført for hver rotte i slutningen af den endelige FU. Reperfusion var indiceret hos alle 6 spolebehandlede dyr, mens reperfusion kun blev observeret hos 12,5 %...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

Vi udførte en en-punkts, lipofil celle-sporstofinjektion for at spore endotelceller, efterfulgt af en arteriotomi og suturering af sidevægsaneurismer på abdominal rotte aorta. Neointima dannelse syntes afhængig af moderarterien i decellulariserede aneurismer og blev fremmet ved rekruttering fra aneurismevægceller i vitale cellerrige vægge.

Brug af en cellesporingsinjektion til at undersøge oprindelsen af neointima-dannende celler i en rottesakkulære sidevægsmodel

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

Ved at bruge en direkte intra-aortal celle-sporstofapplikation kan vi analysere endotelcellernes rolle, der stammer fra moderarterien i neointimadannelse på to forskellige tidspunkter. En stor fordel ved denne teknik er en direkte, et-punkts, fortolkende in vivo-injektion, hvilket gør denne model til en robust og reproducerbar teknik. Før operationen inkuberes arterielle poser fra donorrotter i 0,1% natriumdodecylsulfat i 10 timer ved 37 grader Celsius for at opnå decellulariserede aneurismer.Saml disse poser fra donordyr et par dage før operationen. Til at begynde med skal du analysere dyrets adfærd og inspicere slimhinderne og turgor som en del af den præoperative kliniske undersøgelse. Optag vægten af hvert dyr.Til anæstesiinduktion skal du placere alle rotter i en ren kasse forsynet med ilt indtil bevidsthedstab efter fem til 10 minutter. Kontroller dybden af anæstesi ved fraværet af pedaludtagningsrefleksen. Placer rotterne i liggende stilling og barber det thoracoabdominale område med en elektrisk barbermaskine.Brug tape til at fiksere rottens poter på et bord dækket af en varmepude, der er forbundet til en automatisk regulerende rektal sonde. Indsæt den rektale sonde i rottens anus for at opretholde den ønskede temperatur på 37 grader Celsius ved hjælp af en varmepude. Installer derefter en sensor på højre bagben, der er tilsluttet et computersystem til kontrol af vitale tegn intraoperativt.Til perianesthetisk pleje skal du anvende et sterilt oftalmisk smøremiddel på øjnene og dække dem med en uigennemsigtig foliemaske for at forhindre tørring og beskadigelse fra den kirurgiske lampe. Desinficere det kirurgiske felt med povidon jod, og drapere det kirurgiske felt på en steril måde. Sæt en mikropind med lilla polstring under de proksimale og distale dele af aorta for bedre at visualisere arterien, så snart den er adskilt fra kavalvenen.Beskyt derefter maven med hvidt gasbind. På driftsdagen opløses to mikroliter af cellesporstoffet ved pipettering i en milliliter PBS. Blandingen overføres til en sprøjte på 1 milliliter forsynet med en kanyle.Sluk lyset på operationsstuen. Brug et mikroskop til at udføre etpunktsinjektionen i den midterste ventrale del af aorta med mikropatsenkel og forsigtigt injicere en milliliter hepariniseret 0,9% saltopløsning. Injicer cellesporstoffet omhyggeligt, og sluk straks også for betjeningsmikroskopet.Beskyt maven med våd gasbind igen. Lad farvestoffet inkubere i mindst 15 minutter. Tænd derefter mikroskopet og operationsstuens lys.Brug mikro tang og mikro saks til at udføre den langsgående arteriotomi, så dens længde i gennemsnit diameteren af den høstede aneurisme. Placer aneurismet ved siden af aorta, før du udfører arteriotomi for at sikre den korrekte længde. Suturer aneurismet med otte til 10 enkeltsting ved hjælp af en ikke-absorberbar 10-0 sutur.Før den sidste søm skal du levere spolen med en pakningstæthed på en centimeter. Enten spole- eller stentbehandling kan udføres i denne model. Fjern derefter forsigtigt de midlertidige klemmer, der starter distally, under kontinuerlig vanding med hepariniseret saltvand.Luk såret på en lagdelt måde. Ved afslutningen af operationen skal du vende anæstesien med en subkutan injektion. Lad hvert betjent dyr komme sig i et rent bur, indtil det er helt vågent og varmt efter behov med en varmelampe.Trak baseline aneurismevolumener for dag syv og dag 21 afveg ikke signifikant for decellulariserede eller vitale aneurismer mellem spole- eller stentbehandlingsgrupperne. Trak FU-volumener for decellulariserede aneurismer viste en ikke-signifikant aneurismevækst i oprullet sammenlignet med de stentede aneurismer. Trukket FU-volumen var signifikant større i den vitale oprullede end i den stentede gruppe.Mængder af cellesporerpositive celler i neointima af decellulariserede aneurismer afveg ikke signifikant mellem stent- eller coiled-treated-grupperne på dag syv FU, men var signifikant højere hos stenterede rotter på dag 21 FU.No signifikante forskelle blev noteret i vital-aneurisme suturerede rotter på enten syv dage eller 21 dage FU.In decellulariserede aneurismer efter syv dage FU, signifikant flere cellesporstofpositive celler forblev i trombosen i den stentbehandlede sammenlignet med den spolebehandlede gruppe. Denne forskel blev ikke observeret i vitale aneurismer ved syv dages FU. Husk altid at slukke lyset på operationsstuen, inden du injicerer cellesporstoffet for at forhindre falmning. Lad også inkubere farvestoffet i mindst 15 minutter.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Hurtig Mikro-iontophoresis af glutamat og GABA: et nyttigt redskab til Undersøge Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

En Metode til knudrede Ganglier Injection i Sprague-Dawley Rat

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Brugen af Trace Eyeblink klassisk konditionering at vurdere hippocampus dysfunktion i en rotte Model af føtale alkohol spektrum forstyrrelser

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Bionedbrydeligt Magnesium Stent behandling af Saccular aneurismer i en rotte Model - introduktion af den kirurgiske teknik

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

En rotte Model af Central træthed ved hjælp af en modificeret flere Platform metode

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Direkte indsprøjtning af en Lentiviral vektor fremhæver flere Motor veje i rygmarven rotte

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Facial Nerve Kirurgi i rat model til undersøgelse axonal hæmning og regenerering

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...