Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

De auteurs bedanken Alessandra Bergadano, DVM, PhD, voor de toegewijde supervisie op de gezondheid van dieren op de lange termijn. Dit werk werd ondersteund door de onderzoeksfondsen van de Research Council, Kantonsspital Aarau, Aarau, Zwitserland, en de Zwitserse nationale wetenschappelijke stichting SNF (310030_182450).

Veterinaire ondersteuning werd uitgevoerd volgens institutionele richtlijnen. De experimenten werden goedgekeurd door de Lokale Ethische Commissie, Zwitserland (BE 60/19). De ARRIVE-richtlijnen en 3R-principes zijn strikt gevolgd 6,7. Eenendertig mannelijke Lewis-ratten, 12 weken oud en met een gewicht van 492 ± 8 g, werden opgenomen. Huisvest alle ratten bij een kamertemperatuur van 23 °C en een licht/donkercyclus van 12 uur. Zorg voor gratis toegang tot water...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

Deze studie toont aan dat neo-intimavorming wordt gemedieerd via endotheelcellen afkomstig uit de bovenwortel van het aneurysmacomplex, maar wordt ondersteund door de rekrutering van cellen afgeleid van de aneurysmawand in vitale aneurysma's. Niettemin blijft de rol van circulerende voorlopercellen bij de genezing van aneurysma's controversieel12,13. In totaal werden 31 mannelijke Lewis-ratten in dit onderzoek opgenomen; slechts 4 stierven vroegtijdig (12,9% ster...

Subarachnoïdale bloeding veroorzaakt door de breuk van een intracranieel aneurysma (IA) is een verwoestende neurochirurgische aandoening geassocieerd met hoge morbiditeit en mortaliteit 1,2,3,4. Naast microchirurgisch knippen, dat direct endotheel-naar-endotheelcontact biedt, hebben endovasculaire apparaten de afgelopen decennia steeds belangrijker geworden voor de behandeling van gescheurde en incidenteel ontdekte IA's. De genezingsreactie bij endovasculair behandelde IA's hangt voornamelijk af van neointimavorming en trombusorganisatie. Beide zijn synergetische processen, afhankelijk van de celmigratie van het aangrenzende vat en de aneurysmawand. 5 Tot op heden blijft de oorsprong van endotheelcellen in neo-intimavorming van endovasculair behandelde aneurysma's onduidelijk. Er is een voortdurend debat in de literatuur over de bron waaruit neo-intima-vormende cellen worden gerekruteerd.
Door gebruik te maken van een cel-tracer injectie van CM-Dil kleurstof (zie de Tabel van Materialen) in de abdominale aorta van ratten, wilden we de rol van endotheelcellen, afkomstig uit de ouderslagader, in neointimavorming op twee verschillende FU-tijdstippen (dag 7 en dag 21) analyseren (figuur 1). Een voordeel van het model is de directe lokale cel-tracer incubatie in vivo in een bovenliggende slagader voorafgaand aan de aneurysma hechting, waardoor FU op latere tijdstippen mogelijk is. In vivo injectietechnieken, zoals cell-tracer incubatie, zijn niet beschreven in de literatuur. Een voordeel van deze techniek is de directe, éénpunts, intraoperatieve, in vivo injectie, die het model robuust en reproduceerbaar maakt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

Microchirurgisch knippen creëert een daaropvolgende barrière van bloedtoevoer naar intracraniale aneurysma's, terwijl endovasculaire behandeling afhankelijk is van neointima- en trombusvorming. De bron van endotheelcellen die de endoluminale laag van de neointima bedekken, blijft onduidelijk. Daarom was het doel van deze studie om de oorsprong van neo-intima-vormende cellen na celtracerinjectie te onderzoeken in het reeds gevestigde Helsinki rat microchirurgische zijwandaneurysmamodel.
Zijwandaneurysma's werden gemaakt door gedecellulariseerde of vitale arteriële zakjes end-to-side aan de aorta te hechten bij mannelijke Lewis-ratten. Vóór arteriotomie met aneurysma-hechting werd een cel-traceretinjectie met CM-Dil-kleurstof uitgevoerd in de geklemde aorta om endotheelcellen in het aangrenzende vat te labelen en hun proliferatie tijdens follow-up (FU) te volgen. Behandeling gevolgd door coiling (n = 16) of stenting (n = 15). Bij FU (7 dagen of 21 dagen) ondergingen alle ratten fluorescentieangiografie, gevolgd door aneurysma-oogst en macroscopische en histologische evaluatie met immunohistologische celtellingen voor specifieke interessegebieden. 
Geen van de 31 aneurysma's was gescheurd bij follow-up. Vier dieren stierven vroegtijdig. Macroscopisch residuele perfusie werd waargenomen bij 75,0% opgerold en 7,0% van de gestenteerde ratten. De hoeveelheid cel-tracer-positieve cellen was significant verhoogd in gedecellulariseerde stents in vergelijking met opgerolde aneurysma's met betrekking tot trombus op dag 7 (p = 0,01) en neointima op dag 21 (p = 0,04). Er werden geen significante verschillen gevonden in trombus of neointima in vitale aneurysma's. 
Deze bevindingen bevestigen slechtere genezingspatronen in opgerolde in vergelijking met gestenteerde aneurysma's. Neointima-vorming lijkt vooral afhankelijk van de bovenwortel in gedecellulariseerde aneurysma's, terwijl het wordt ondersteund door de rekrutering van aneurysmawandcellen in vitale celrijke wanden. In termen van vertaling kan stentbehandeling meer geschikt zijn voor sterk gedegenereerde aneurysma's, terwijl coiling alleen voldoende kan zijn voor aneurysma's met meestal gezonde vaatwanden.

In totaal werden 31 dieren opgenomen in de laboratoriumomgeving: 27 ratten werden opgenomen in de uiteindelijke statistische analyse; 4 ratten stierven vroegtijdig (12,9% sterftecijfer). Intraoperatief was de opgezette adem significant (p = 0,03) verminderd bij stent- (12,9 μm ± 0,7) in vergelijking met met spoel behandelde (13,5 μm ± 0,6) ratten. Fluorescentieangiografie werd uitgevoerd voor elke rat aan het einde van de laatste FU. Reperfusie was geïndiceerd bij alle 6 met spoel behandelde dieren, terwijl...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

We voerden een éénpunts, lipofiele cel-tracer-injectie uit om endotheelcellen te volgen, gevolgd door een arteriotomie en hechting van zijwandaneurysma's op de abdominale rataorta. Neointima-vorming leek afhankelijk van de bovenliggende slagader in gedecellulariseerde aneurysmata en werd bevorderd door de rekrutering uit aneurysmawandcellen in vitale celrijke wanden.

Een celtraceringsinjectie gebruiken om de oorsprong van neointimavormende cellen in een sacculair zijwandmodel van een rat te onderzoeken

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

Door gebruik te maken van een directe intra-aortale cel-tracer applicatie, kunnen we de rol van endotheelcellen afkomstig uit de bovenliggende slagader in neointimavorming op twee verschillende tijdstippen analyseren. Een groot voordeel van deze techniek is een directe, one-point, interpretatieve in-vivo injectie die dit model tot een robuuste en reproduceerbare techniek maakt. Incubeer vóór de operatie de arteriële zakjes van donorratten in 0,1% natriumdodecylodecylaat gedurende 10 uur bij 37 graden Celsius om gedecellulariseerde aneurysma's te verkrijgen.Verzamel deze zakjes van donordieren een paar dagen voor de operatie. Analyseer om te beginnen het gedrag van het dier en inspecteer de slijmvliezen en turgor als onderdeel van het preoperatieve klinische onderzoek. Noteer het gewicht van elk dier.Voor anesthesie-inductie plaatst u alle ratten in een schone doos die is voorzien van zuurstof totdat het bewustzijn na vijf tot 10 minuten wordt verloren. Controleer de diepte van de anesthesie door de afwezigheid van de pedaalontwenningsreflex. Plaats de ratten in rugligging en scheer het thoracoabdominale gebied met een elektrisch scheerapparaat.Fixeer met tape de poten van de rat op een bord dat is bedekt met een verwarmingskussen dat is aangesloten op een automatisch regulerende rectale sonde. Plaats de rectale sonde in de anus van de rat om de gewenste temperatuur van 37 graden Celsius te behouden met behulp van een verwarmingskussen. Installeer vervolgens een sensor op het rechterachterbeen dat is aangesloten op een geautomatiseerd systeem voor het intraoperatief controleren van vitale functies.Breng voor perianesthetische zorg een steriel oogheelkundig glijmiddel aan op de ogen en bedek ze met een ondoorzichtig foliemasker om uitdroging en schade door de chirurgische lamp te voorkomen. Desinfecteer het chirurgische veld met povidonjodium en drapeer het chirurgische veld op een steriele manier. Plaats een micro-uitstrijkje met paarse vulling onder de proximale en distale delen van de aorta om de slagader beter te visualiseren zodra deze is gescheiden van de ader van de caval.Bescherm vervolgens de buik met wit gaas. Los op de dag van gebruik twee microliter van de celtracer op door in één milliliter PBS te pipetteren. Breng het mengsel over in een spuit van één milliliter met een canule.Doe het licht in de operatiekamer uit. Voer met behulp van een microscoop de eenpuntsinjectie uit in het middelste ventrale deel van de aorta met microtang en injecteer zorgvuldig één milliliter heparinized 0,9% zoutoplossing. Injecteer de celtracer voorzichtig en schakel onmiddellijk ook de operatiemicroscoop uit.Bescherm de buik opnieuw met nat gaas. Laat de kleurstof minstens 15 minuten incuberen. Zet vervolgens de microscoop en de verlichting van de operatiekamer aan.Gebruik microtang en microschaar om de longitudinale arteriotomie uit te voeren, zodat de lengte het gemiddelde is van de diameter van het geoogste aneurysma. Plaats het aneurysma naast de aorta voordat u arteriotomie uitvoert om de juiste lengte te garanderen. Hecht het aneurysma met acht tot 10 enkele hechtingen met behulp van een niet-absorbeerbare 10-0 hechting.Lever voor de laatste steek de spoel af met een pakdichtheid van één centimeter. In dit model kan een spoel- of stentbehandeling worden uitgevoerd. Verwijder vervolgens voorzichtig de tijdelijke klemmen, beginnend distaal, onder continue irrigatie met heparinized zoutoplossing.Sluit de wond op een gelaagde manier. Aan het einde van de operatie, draai de anesthesie om met een subcutane injectie. Laat elk geopereerd dier herstellen in een schone kooi totdat het volledig wakker is en zo nodig opwarmt met een verwarmingslamp.Getrokken baseline aneurysmavolumes voor dag zeven en dag 21 verschilden niet significant voor gedecellulariseerde of vitale aneurysma's tussen de spoel- of stentbehandelingsgroepen. Getrokken FU-volumes voor gedecellulariseerde aneurysmata vertoonden een niet-significante aneurysmagroei in opgerolde in vergelijking met de gestenteerde aneurysma's. Het getrokken FU-volume was significant groter in de vitale opgerolde groep dan in de gestenteerde groep.Hoeveelheden cel-tracerpositieve cellen in de neointima van gedecellulariseerde aneurysma's verschilden niet significant tussen de stent- of opgerolde behandelde groepen op dag zeven FU, maar waren significant hoger bij gestenteerde ratten op dag 21 FU.No significante verschillen werden opgemerkt in vitaal-aneurysma gehechte ratten op zeven dagen of 21 dagen FU.In gedecellulariseerde aneurysma's na zeven dagen FU, significant meer cel-tracer positieve cellen bleven in de trombus van de met stent behandelde in vergelijking met de met spoel behandelde groep. Dit verschil werd niet waargenomen in vitale aneurysma's na zeven dagen FU. Vergeet niet om altijd de lichten in de operatiekamer uit te doen voordat u de celtracer injecteert om vervaging te voorkomen. Laat de kleurstof ook minstens 15 minuten incuberen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Gene Levering aan Postnatale Rat Brain door niet-ventriculaire Plasmide-injectie en elektroporatie

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Autoloog bloed injectie tot spontane intracerebrale bloeding in Muizen Model

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Met behulp van een vergelijkende Soorten aanpak van de neurobiologie van Paternal antwoorden Onderzoek

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Snel Micro-iontoforese van glutamaat en GABA: een nuttig instrument om Synaptic Integratie Onderzoek

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

Een methode van knobbelige ganglia Injectie in Sprague-Dawley rat

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Het gebruik van Trace Eyeblink klassieke conditionering te beoordelen Hippocampal dysfunctie in een Rat Model van Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Biologisch afbreekbaar Magnesium Stent behandelingvan Saccular aneurysma in een Rat Model - introductie van de chirurgische techniek

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

Een Rat Model van Centrale vermoeidheid met een gewijzigde methode met verscheidene Platform

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Directe inspuiting van een lentivirale Vector hoogtepunten meerdere Motor trajecten in het ruggenmerg Rat

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...