Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

המחברים מודים לאלסנדרה ברגאדנו, DVM, PhD, על הפיקוח המסור על בריאות בעלי חיים לטווח ארוך. עבודה זו נתמכה על ידי קרנות המחקר של מועצת המחקר, Kantonsspital Aarau, Aarau, שוויץ, וקרן המדע הלאומית השוויצרית SNF (310030_182450).

התמיכה הווטרינרית בוצעה על פי הנחיות המוסד. הניסויים אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית, שוויץ (BE 60/19). הנחיות ה-ARRIVE ועקרונות ה-3R נשמרו בקפדנותעל 6,7. 31 חולדות לואיס זכרים, בני 12 שבועות ומשקלם 492 ± 8 גרם, נכללו. ביתו את כל החולדות בטמפרטורת חדר של 23 מעלות צלזיוס ומחז?...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

מחקר זה מדגים כי היווצרות ניאו-אנטימה מתווכת באמצעות תאי אנדותל שמקורם בעורק האב של קומפלקס המפרצת, אך נתמכת על ידי גיוס תאים שמקורם בדופן המפרצת במפרצות חיוניות. עם זאת, תפקידם של תאי אב במחזור הדם בריפוי מפרצת נותר שנוי במחלוקת12,13. בסך הכל, 31 חולדות לואיס ז?...

דימום תת-עכבישי הנגרם על ידי קרע של מפרצת תוך גולגולתית (IA) הוא מצב נוירוכירורגי הרסני הקשור לתחלואה גבוהה ותמותה 1,2,3,4. בנוסף לחיתוך מיקרו-כירורגי, המספק מגע ישיר בין אנדותל לאנדותל, התקנים אנדווסקולריים זכו לחשיבות גוברת בעשורים האחרונים לטיפול ב-IAs שנקרעו והתגלו כבדרך אגב. תגובת הריפוי ב- IAs המטופלים באנדווסקולרית תלויה בעיקר בהיווצרות ניאו-ינטימה ובארגון פקקת. שניהם תהליכים סינרגטיים, בהתאם לנדידת התאים מכלי השיט הסמוך ולדופן המפרצת. 5 נכון להיום, מקורם של תאי אנדותל בהיווצרות ניאו-ינטימה של מפרצות אנדווסקולריות מטופלות עדיין אינו ברור. יש ויכוח מתמשך בספרות על המקור שממנו מגויסים תאים יוצרי ניאו-אינטימה.
על-ידי שימוש בזריקת מעקב תאים של צבע CM-Dil (ראו טבלת החומרים) באבי העורקים הבטני של חולדות, אנו שואפים לנתח את תפקידם של תאי האנדותל, שמקורם בעורק האב, ביצירת ניאו-אינטימה בשתי נקודות זמן FU שונות (יום 7 ויום 21) (איור 1). יתרון של המודל הוא הדגירה הישירה של עוקבי התאים in vivo בעורק אב לפני תפר המפרצת, המאפשרת FU בנקודות זמן מאוחרות יותר. טכניקות הזרקת In vivo , כגון דגירה של תאי מעקב אחר תאים, לא תוארו בספרות. יתרון של טכניקה זו הוא ההזרקה הישירה, החד-פעמית, התוך-ניתוחית, in vivo , מה שהופך את המודל לחזק וניתן לשחזור.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

חיתוך מיקרו-כירורגי יוצר מחסום נוסף של זרימת הדם למפרצות תוך גולגולתיות, בעוד שהטיפול האנדווסקולרי מסתמך על ניאו-אינטימה והיווצרות פקקת. מקורם של תאי האנדותל המכסים את השכבה האנדולומינלית של הניאו-אינטימה עדיין אינו ברור. לכן, מטרת המחקר הנוכחי הייתה לחקור את מקורם של תאים יוצרי ניאו-אינטימה לאחר הזרקת עוקבים אחר תאים במודל המפרצת המיקרו-כירורגית של חולדות הלסינקי, שכבר היה מבוסס היטב.
מפרצות דופן הדופן נוצרו על ידי תפירה של שקיות עורקים נטולות תאים או חיוניות מקצה לקצה באבי העורקים בחולדות לואיס זכריות. לפני טרשת עורקים עם תפר מפרצת, בוצעה הזרקת מעקב אחר תאים המכילה צבע CM-Dil לתוך אבי העורקים המהודק כדי לתייג תאי אנדותל בכלי הסמוך ולעקוב אחר התפשטותם במהלך מעקב (FU). הטיפול ואחריו סליל (n = 16) או סטנטים (n = 15). ב-FU (7 ימים או 21 ימים), כל החולדות עברו אנגיוגרפיה פלואורסצנטית, ואחריה קצירת מפרצת והערכה מקרוסקופית והיסטולוגית עם ספירת תאים אימונוהיסטולוגית לאזורי עניין ספציפיים. 
אף אחת מ-31 המפרצות לא נקרעה במעקב. ארבע חיות מתו בטרם עת. זלוף שיורי מקרוסקופי נצפה ב-75.0% מפותלים וב-7.0% מהחולדות הסטנטיות. כמות התאים החיוביים למעקב אחר תאים עלתה באופן משמעותי בסטנטים דה-תאיים בהשוואה למפרצת מפותלת ביחס לפקקת ביום 7 (p = 0.01) וניאו-ינטימה ביום 21 (p = 0.04). לא נמצאו הבדלים משמעותיים בפקקת או בניאינטימה במפרצות חיוניות. 
ממצאים אלה מאשרים דפוסי ריפוי גרועים יותר במפרצות מפותלות בהשוואה למפרצות סטנטות. נראה כי היווצרות ניאו-ינטימה תלויה במיוחד בעורק האב במפרצות שעברו דה-תאיזציה, בעוד שהיא נתמכת על ידי גיוס מתאי דופן מפרצת בקירות חיוניים עשירים בתאים. במונחים של תרגום, טיפול בסטנט עשוי להיות מתאים יותר למפרצות מנוונות מאוד, בעוד שסליל לבדו עשוי להיות מתאים למפרצות עם דפנות כלי דם בריאות ברובן.

בסך הכל נכללו 31 בעלי חיים בסביבת המעבדה: 27 חולדות נכללו בניתוח הסטטיסטי הסופי; 4 חולדות מתו בטרם עת (שיעור תמותה של 12.9%). באופן תוך ניתוחי, התנפחות הנשימה הופחתה באופן משמעותי (p = 0.03) בסטנטים (12.9 מיקרומטר ± 0.7) בהשוואה לחולדות שטופלו בסליל (13.5 מיקרומטר ± 0.6). אנגיוגרפיה פלואורסצנטית בוצעה עב...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

ביצענו זריקה חד-נקודתית, ליפופילית, לאיתור תאי אנדותל, ולאחר מכן טרשת עורקים ותפירה של מפרצות דופן הדופן באבי העורקים של חולדות הבטן. היווצרות ניאו-ינטימה נראתה תלויה בעורק האב במפרצות דה-תאיות וקודמה על ידי גיוס מתאי דופן מפרצת בקירות חיוניים עשירים בתאים.

שימוש בזריקת מעקב אחר תאים כדי לחקור את מקורם של תאים יוצרי ניאו-אינטימה במודל דופן צד סקולרית של חולדה

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

על ידי שימוש ביישום ישיר של מעקב אחר תאים תוך-אבי העורקים, אנו יכולים לנתח את תפקידם של תאי אנדותל שמקורם בעורק האב בהיווצרות ניאו-אינטימה בשתי נקודות זמן שונות. יתרון גדול של טכניקה זו הוא הזרקת in-vivo פרשנית ישירה, חד-פעמית, שהופכת את המודל הזה לטכניקה חזקה וניתנת לשחזור. לפני הניתוח, דגירה של שקיות העורקים מחולדות תורמות ב-0.1% נתרן דודציל סולפט למשך 10 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי לקבל מפרצות שעברו דה-תאיזציה.אספו את השקיות האלה מבעלי חיים תורמים כמה ימים לפני הניתוח. ראשית, נתחו את התנהגות החיה ובדקו את קרומי הריר והטורגור כחלק מהבדיקה הקלינית שלפני הניתוח. רשום את משקלו של כל בעל חיים.להשראת הרדמה, הניחו את כל החולדות בקופסה נקייה עם חמצן עד לאובדן הכרה לאחר חמש עד עשר דקות. בדוק את עומק ההרדמה על ידי היעדר רפלקס הגמילה מהדוושה. מניחים את החולדות בתנוחת שכיבה ומגלחים את אזור בית החזה באמצעות מכונת גילוח חשמלית.באמצעות סרט הדבקה, יש לקבע את כפותיה של החולדה על לוח המכוסה על ידי כרית חימום המחוברת לבדיקה רקטלית המווסתת אוטומטית. הכנס את הבדיקה הרקטלית לפי הטבעת של החולדה כדי לשמור על הטמפרטורה הרצויה של 37 מעלות צלזיוס בעזרת כרית חימום. לאחר מכן התקינו חיישן על הרגל האחורית הימנית המחוברת למערכת ממוחשבת לבדיקת סימנים חיוניים תוך ניתוחית.לטיפול פריאנסתטי, יש למרוח חומר סיכה אופתלמי סטרילי על העיניים, ולכסות אותן במסכת נייר כסף אטומה כדי למנוע ייבוש ונזק מהמנורה הכירורגית. יש לחטא את שדה הניתוח ביוד פובידון, ולעטוף את שדה הניתוח בצורה סטרילית. שים מיקרו ספוגית עם ריפוד סגול מתחת לחלקים הפרוקסימליים והדיסטליים של אבי העורקים כדי לדמיין טוב יותר את העורק ברגע שהוא מופרד מהווריד הפרשי.לאחר מכן הגן על הבטן עם גזה לבנה. ביום הפעולה, להמיס שני מיקרוליטרים של עוקב התאים על ידי צנרת במיליליטר אחד של PBS. מעבירים את התערובת למזרק של מיליליטר אחד המצויד בצינורית.כבו את האור בחדר הניתוח. באמצעות מיקרוסקופ, בצע את ההזרקה החד-נקודתית בחלק הגחוני האמצעי של אבי העורקים עם מיקרו מלקחיים, והזריק בזהירות מיליליטר אחד של תמיסת מלח 0.9% הפריניזציה. הזריקו את עוקב התאים בזהירות, ומיד כבו גם את המיקרוסקופ הפועל.הגן על הבטן עם גזה רטובה שוב. תנו לצבע לדגום לפחות 15 דקות. לאחר מכן הפעל את אורות המיקרוסקופ וחדר הניתוח.השתמש במיקרו מלקחיים ובמיקרו מספריים כדי לבצע את העורק האורכי כך שאורכו ממוצע את קוטר המפרצת שנקטפה. מניחים את המפרצת ליד אבי העורקים לפני ביצוע טרשת עורקים כדי להבטיח את האורך הנכון. לתפור את המפרצת עם שמונה עד 10 תפרים בודדים באמצעות תפר 10-0 שאינו נספג.לפני התפירה הסופית, ספקו את הסליל בצפיפות אריזה של סנטימטר אחד. ניתן לבצע טיפול בסליל או בסטנטים במודל זה. לאחר מכן להסיר בזהירות את המהדקים הזמניים, החל באופן דיסטלי, תחת השקיה מתמשכת עם מלוחים heparinized.סגרו את הפצע בצורה מרובדת. בסוף הניתוח, להפוך את ההרדמה עם זריקה תת עורית. תנו לכל בעל חיים המופעל להתאושש בכלוב נקי עד שהוא ער לחלוטין וחם לפי הצורך עם מנורת חימום.נפחי המפרצת הבסיסית שנמשכו ליום השביעי וליום ה-21 לא היו שונים באופן משמעותי עבור מפרצות שעברו דה-תאיזציה או חיוניות בין קבוצות הטיפול בסליל או בסטנטים. נפחי FU משוכים עבור מפרצות שעברו דה-תאיזציה הראו צמיחה לא משמעותית במפרצת מפותלת בהשוואה למפרצות הסטנטליות. נפח FU משוך היה גדול משמעותית בסלילים החיוניים מאשר בקבוצת הסטנטים.כמויות התאים החיוביים למעקב אחר תאים בניאו-אינטימה של מפרצות דה-תאיות לא היו שונות באופן משמעותי בין הקבוצות שטופלו בסטנטים או בסלילים ביום השביעי ל-FU, אך היו גבוהות משמעותית בחולדות סטנטות ביום ה-21 FU.No נצפו הבדלים משמעותיים בחולדות תפורות מפרצות בעלות מפרצת חיונית במשך שבעה ימים או 21 ימים FU.In מפרצות שעברו דה-תאיזציה בשבעה ימי FU, באופן משמעותי יותר תאים חיוביים למעקב אחר תאים נותרו בפקק של הסטנט שטופל בהשוואה לקבוצה שטופלה בסליל. הבדל זה לא נצפה במפרצות חיוניות בשבעה ימים FU. זכרו לכבות תמיד את האורות בחדר הניתוח לפני הזרקת עוקב התאים כדי למנוע דהייה. כמו כן, תן הדגירה של הצבע במשך 15 דקות לפחות.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

ג&#39;ין משלוח מוח החולדה אחרי לידה על ידי הזרקת Non-חדרית electroporation פלסמיד ו

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

הזרקת דם עצמיים על דגם דימום intracerebral ספונטנית עכברים

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

באמצעות גישה המינים השוואתי לחקירת לנוירוביולוגיה התגובות של אבי האב

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

מיקרו-Iontophoresis מהיר של גלוטמט וגאבא: כלי שימושי לחקירת האינטגרציה סינפטית

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

שיטה של ​​הזרקת Nodose הגרעינים בSprague-Dawley עכברוש

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

השימוש של התניה קלאסית Eyeblink מעקב כדי להעריך תפקוד בהיפוקמפוס במודל של עכברים של אלכוהול עוברית ספקטרום הפרעות

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

מגנזיום מתכלה סטנט לטיפול מפרצות Saccular במודל חולדה - מבוא לשיטת כירורגי

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

חולדה מודל מרכזי עייפות בעזרת ששונה שיטת פלטפורמה מרובים

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

הזרקה ישירה של וקטור Lentiviral מדגיש מספר מסלולים מוטוריים בחוט השדרה עכברוש

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

ניתוח עצבי הפנים במודל חולדה כדי ללמוד עיכוב Axonal והתחדשות

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...