Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Forfatterne takker Alessandra Bergadano, DVM, PhD, for dedikert tilsyn med langsiktig dyrehelse. Dette arbeidet ble støttet av forskningsmidlene til Forskningsrådet, Kantonsspital Aarau, Aarau, Sveits og den sveitsiske nasjonale vitenskapsstiftelsen SNF (310030_182450).

Veterinærstøtte ble utført i henhold til institusjonelle retningslinjer. Forsøkene ble godkjent av Den lokale etikkkomiteen i Sveits (BE 60/19). ARRIVE-retningslinjene og 3R-prinsippene er strengt fulgt 6,7. 31 hannrotter, 12 uker gamle og veier 492 ± 8 g, ble inkludert. Hus alle rotter ved en romtemperatur på 23 °C og en lys-/mørk syklus på 12 timer. Gi gratis tilgang til vann og pellets. Statistiske analyser er utført ved hjelp av den ikke-parametrisk...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

Denne studien viser at neointimaformasjonen formidles via endotelceller som stammer fra foreldrearterien til aneurismekomplekset, men støttes av rekruttering av celler avledet fra aneurismeveggen i vitale aneurisme. Likevel er rollen som sirkulerende stamceller i aneurismeheling fortsatt kontroversiell12,13. Totalt ble 31 mannlige Lewis rotter inkludert i denne undersøkelsen; bare 4 døde for tidlig (12,9 % dødelighet).
I motsetning...

Subarachnoid blødning forårsaket av brudd på en intrakraniell aneurisme (IA) er en ødeleggende nevrokirurgisk tilstand forbundet med høy sykelighet og dødelighet 1,2,3,4. I tillegg til mikrokirurgisk klipping, som gir direkte endotel-til-endotelkontakt, har endovaskulære enheter fått økende betydning de siste tiårene for behandling av ruptured og for øvrig oppdaget IAer. Den helbredende responsen i endovaskulært behandlede IAer avhenger hovedsakelig av neointimadannelse og trombeorganisasjon. Begge er synergiske prosesser, avhengig av cellemigrasjon fra det tilstøtende fartøyet og aneurismeveggen. 5 Til dags dato er opprinnelsen til endotelceller i neointimadannelse av endovaskulærbehandlede aneurisme fortsatt uklart. Det pågår en debatt i litteraturen om kilden som nyintimadannende celler rekrutteres fra.
Ved å bruke en cellesporerinjeksjon av CM-Dil-fargestoff (se materialtabellen) i abdominal aorta hos rotter, hadde vi som mål å analysere rollen som endotelceller, med opprinnelse i foreldrearterien, i neointimaformasjonen ved to forskjellige FU-tidspunkter (dag 7 og dag 21) (figur 1). En fordel med modellen er den direkte lokale cellesporerinkubasjonen in vivo i en foreldrearterie før aneurisme sutur, slik at FU på senere tidspunkter. In vivo injeksjonsteknikker, som cell-tracer inkubasjon, har ikke blitt beskrevet i litteraturen. En fordel med denne teknikken er den direkte, ettpunkts, intraoperative, in vivo-injeksjonen , noe som gjør modellen robust og reproduserbar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

Mikrokirurgisk klipping skaper en påfølgende barriere av blodstrøm i intrakranielle aneurismer, mens endovaskulær behandling er avhengig av neointima- og trombedannelse. Kilden til endotelceller som dekker det endoluminale laget av neointima er fortsatt uklart. Derfor var målet med den nåværende studien å undersøke opprinnelsen til neointima-dannende celler etter cellesporerinjeksjon i den allerede veletablerte Helsinki rottemikrokirurgiske sidevegganeurismemodellen.
Sidevegganeurisme ble opprettet ved å suturere decellulariserte eller vitale arterielle poser fra ende til side til aorta hos mannlige Lewis-rotter. Før arteriotomi med aneurisme sutur, ble en celle-tracer injeksjon som inneholder CM-Dil fargestoff utført i klemmet aorta for å merke endotelceller i tilstøtende kar og spore deres spredning under oppfølging (FU). Behandling etterfulgt av spoling (n = 16) eller stenting (n = 15). Ved FU (7 dager eller 21 dager) gjennomgikk alle rotter fluorescensangiografi, etterfulgt av aneurismehøsting og makroskopisk og histologisk evaluering med immunhitologiske celletall for bestemte interesseregioner. 
Ingen av de 31 aneurismemene hadde sprukket ved oppfølging. Fire dyr døde for tidlig. Makroskopisk gjenværende perfusjon ble observert hos 75,0% spolet og 7,0% av stenterte rotter. Mengden cellesporerpositive celler ble betydelig forhøyet i decellularisert stent sammenlignet med spolede aneurisme med hensyn til trombe på dag 7 (p = 0,01) og neointima på dag 21 (p = 0,04). Ingen signifikante forskjeller ble funnet i trombe eller neointima i vitale aneurisme. 
Disse funnene bekrefter dårligere helbredende mønstre i spolet sammenlignet med stentede aneurisme. Neointimaformasjonen virker spesielt avhengig av foreldrearterien i decellulariserte aneurisme, mens den støttes av rekrutteringen fra aneurismeveggceller i vitale cellerike vegger. Når det gjelder oversettelse, kan stentbehandling være mer hensiktsmessig for høyt degenererte aneurisme, mens spoling alene kan være tilstrekkelig for aneurisme med for det meste sunne karvegger.

Totalt 31 dyr ble inkludert i laboratoriet: 27 rotter ble inkludert i den endelige statistiske analysen; 4 rotter døde for tidlig (12,9% dødelighet). Intraoperativt var pustedistensjon signifikant (p = 0,03) redusert i stent- (12,9 μm ± 0,7) sammenlignet med spolebehandlede (13,5 μm ± 0,6) rotter. Fluorescens angiografi ble utført for hver rotte på slutten av den endelige FU. Reperfusjon ble indisert hos alle 6 spolebehandlede dyr, mens reperfusjon ble observert hos bare 12,5% av de 8 stentbehandlede dyr...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

Vi utførte en ett-punkts, lipofil celle-tracer injeksjon for å spore endotelceller, etterfulgt av en arteriotomi og suturering av sidevegganeurismer på abdominal rotte aorta. Neointimaformasjonen virket avhengig av foreldrearterien i decellulariserte aneurisme og ble fremmet av rekrutteringen fra aneurismeveggceller i vitale cellerike vegger.

Bruke en cellesporerinjeksjon for å undersøke opprinnelsen til neointimadannende celler i en rottesekkulær sideveggmodell

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

Ved å bruke en direkte intra-aortal cellesporerapplikasjon kan vi analysere rollen som endotelceller som stammer fra foreldrearterien i neointimaformasjonen på to forskjellige tidspunkter. En stor fordel med denne teknikken er en direkte, ett-punkts, fortolkende in-vivo injeksjon som gjør denne modellen til en robust og reproduserbar teknikk. Før operasjonen, inkuber arterielle poser fra donorrotter i 0,1% natrium dodecyl sulfat i 10 timer ved 37 grader Celsius for å oppnå decellulariserte aneurisme.Samle disse posene fra donor dyr noen dager før operasjonen. For å begynne med, analyser dyrets oppførsel og inspiser slimmembranene og turgor som en del av den preoperative kliniske undersøkelsen. Registrer vekten av hvert dyr.For anestesiinduksjon, plasser alle rotter i en ren boks utstyrt med oksygen til bevissthetstap etter fem til 10 minutter. Kontroller dybden på anestesi ved fravær av pedaluttakets refleks. Plasser rottene i en liggende stilling og barber thoracoabdominalområdet med en elektrisk barbermaskin.Bruk tape, fest rottens poter på et brett dekket av en varmepute koblet til en autoregulerende rektal sonde. Sett rektal sonde inn i rottens anus for å opprettholde ønsket temperatur på 37 grader Celsius ved hjelp av en varmepute. Installer deretter en sensor på høyre bakben koblet til et datastyrt system for å sjekke vitale tegn intraoperativt.For perianestetisk omsorg, bruk et sterilt oftalmisk smøremiddel på øynene, og dekk dem med en ugjennomsiktig foliemaske for å forhindre tørking og skade fra den kirurgiske lampen. Desinfiser det kirurgiske feltet med povidon jod, og draper det kirurgiske feltet på en steril måte. Sett en mikropinne med lilla polstring under de proksimale og distale delene av aorta for bedre å visualisere arterien så snart den er skilt fra kavalvenen.Beskytt deretter magen med hvit gasbind. På operasjonsdagen oppløses to mikrolitere av cellesporeren ved å pipettere i en milliliter PBS. Overfør blandingen til en en milliliter sprøyte utstyrt med en kanyle.Slå av lyset i operasjonssalen. Bruk et mikroskop, utfør ettpunktsinjeksjonen i den midterste ventrale delen av aorta med mikro tang, og injiser forsiktig en milliliter heparinisert 0,9% saltoppløsning. Injiser cellesporeren nøye, og slå umiddelbart av operasjonsmikroskopet også.Beskytt magen med våt gasbind igjen. La fargestoffet inkubere i minst 15 minutter. Slå deretter på mikroskopet og driftsromslysene.Bruk mikro tang og mikro saks for å utføre langsgående arteriotomi slik at lengden gjennomsnitt diameteren av høstet aneurisme. Plasser aneurisme ved siden av aorta før du utfører arteriotomi for å sikre riktig lengde. Suturer aneurismen med åtte til ti enkle masker ved hjelp av en ikke-absorberbar 10-0 sutur.Før den endelige masken, lever spolen med en pakketetthet på en centimeter. Enten spole- eller stentbehandling kan utføres i denne modellen. Fjern deretter forsiktig de midlertidige klemmene, som starter distalt, under kontinuerlig vanning med heparinisert saltvann.Lukk såret på en lagdelt måte. På slutten av operasjonen, reversere anestesi med en subkutan injeksjon. La hvert operert dyr komme seg i et rent bur til det er helt våkent og varmt etter behov med en varmelampe.Trukket baseline aneurisme volumer for dag syv og dag 21 var ikke signifikant forskjellig for decellulariserte eller vitale aneurisme mellom spole- eller stentbehandlingsgruppene. Trukket FU-volumer for decellulariserte aneurisme viste en ikke-signifikant aneurismevekst i spolet sammenlignet med de stentede aneurisme. Trukket FU-volum var betydelig større i den vitale spolen enn i den stentede gruppen.Mengder av cellesporerpositive celler i neointima av decellulariserte aneurisme var ikke signifikant forskjellig mellom stenten eller spolebehandlede grupper på dag syv FU, men var betydelig høyere hos stenterte rotter på dag 21 FU.No signifikante forskjeller ble notert i vitale aneurisme sutured rotter på enten syv dager eller 21 dager FU.In decellulariserte aneurisme ved syv dager, signifikant flere cellesporerpositive celler forble i tromben til den stentbehandlede sammenlignet med den spolebehandlede gruppen. Denne forskjellen ble ikke observert i vitale aneurisme ved syv dager FU. Husk alltid å slå av lysene i operasjonsrommet før du injiserer cellesporeren for å forhindre falming. La også inkubere fargestoffet i minst 15 minutter.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Fast Micro-iontoforese av glutamat og GABA: Et nyttig verktøy for å etterforske Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

En Måte Nodose ganglia Injeksjon i Sprague-Dawley Rat

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Bruk av spor Eyeblink klassisk betinging å vurdere hippocampus dysfunksjon i en rotte modell av Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Biologisk nedbrytbart Magnesium Stent behandling av Saccular aneurismer i en rotte modell - innføring av kirurgiske teknikken

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

En rotte modell av sentral Fatigue bruker en modifisert flere plattform-metoden

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Direkte injeksjon av en Lentiviral vektor høydepunkter flere Motor veier i ryggmargen rotte

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Ansikts nerve kirurgi i rottemodellen for å studere aksonal hemming og regenerering

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...