Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Авторы благодарят Алессандру Бергадано, DVM, PhD, за целенаправленный надзор за долгосрочным здоровьем животных. Эта работа была поддержана исследовательскими фондами Исследовательского совета, Kantonsspital Aarau, Aarau, Швейцария, и Швейцарского национального научного фонда SNF (310030_182450).

Ветеринарная поддержка осуществлялась в соответствии с институциональными руководящими принципами. Эксперименты были одобрены Местным комитетом по этике, Швейцария (BE 60/19). Руководящие принципы ARRIVE и принципы 3R строгособлюдаются 6,7. Тридцать один самец...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

Это исследование показывает, что образование неоинтимы опосредовано эндотелиальными клетками, происходящими из родительской артерии комплекса аневризмы, но поддерживается набором клеток, полученных из стенки аневризмы в жизненно важных аневризмах. Тем не менее, роль циркулирующих к...

Субарахноидальное кровоизлияние, вызванное разрывом внутричерепной аневризмы (ИА), является разрушительным нейрохирургическим состоянием, связанным с высокой заболеваемостью и смертностью 1,2,3,4. В дополнение к микрохирургическому клипированию, которое обеспечивает прямой контакт эндотелия с эндотелием, эндоваскулярные устройства приобретают все большее значение за последние десятилетия для лечения разорванных и случайно обнаруженных МА. Реакция заживления в эндоваскулярно обработанных ИА в основном зависит от образования неоинтимы и организации тромба. Оба являются синергетическими процессами, зависящими от миграции клеток из соседнего сосуда и стенки аневризмы. 5 На сегодняшний день происхождение эндотелиальных клеток в неоинтиме образование эндоваскулярных обработанных аневризм остается неясным. В литературе продолжаются споры об источнике, из которого набираются неоинтимообразующие клетки.
Используя клеточно-индикаторную инъекцию красителя CM-Dil (см. Таблицу материалов) в брюшную аорту крыс, мы стремились проанализировать роль эндотелиальных клеток, происходящих из родительской артерии, в формировании неоинтимы в двух разных точках времени FU (день 7 и день 21) (рисунок 1). Преимуществом модели является прямая локальная инкубация индикатора клеток in vivo в родительской артерии до шва аневризмы, что позволяет FU в более поздние моменты времени. Методы инъекций in vivo , такие как инкубация клеточного индикатора, не были описаны в литературе. Преимуществом этой методики является прямая, одноточечная, интраоперационная, in vivo инъекция, что делает модель надежной и воспроизводимой.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

Микрохирургическое обрезание создает последующий барьер кровотока в внутричерепные аневризмы, тогда как эндоваскулярное лечение опирается на образование неоинтимы и тромба. Источник эндотелиальных клеток, покрывающих эндолюминальный слой неоинтимы, остается неясным. Поэтому целью настоящего исследования было исследование происхождения неоинтимообразующих клеток после инъекции клеточного индикатора в уже хорошо зарекомендовавшей себя модели микрохирургической аневризмы боковой стенки крыс в Хельсинки.
Аневризмы боковых стенок были созданы путем наложения швов децеллюляризированных или жизненно важных артериальных мешочков из стороны в сторону к аорте у самцов крыс Льюиса. Перед артериотомией со швом аневризмы в зажатую аорту была выполнена инъекция клеточного индикатора, содержащая краситель CM-Dil, для маркировки эндотелиальных клеток в соседнем сосуде и отслеживания их пролиферации во время наблюдения (FU). Лечение с последующим намоткой (n = 16) или стентированием (n = 15). В FU (7 дней или 21 день) все крысы прошли флуоресцентную ангиографию с последующим сбором аневризмы и макроскопической и гистологической оценкой с иммуногистологическим количеством клеток для конкретных областей, представляющих интерес. 
Ни одна из 31 аневризмы не разорвалась при последующем наблюдении. Четыре животных умерли преждевременно. Макроскопически остаточная перфузия наблюдалась у 75,0% спиральных и 7,0% стентированных крыс. Количество клеточно-индикатор-положительных клеток было значительно повышено в децеллюляризированном стентированном стентировании по сравнению с спиральными аневризмами по отношению к тромбу на 7-й день (p = 0,01) и неоинтиме на 21-й день (p = 0,04). Не было обнаружено существенных различий в тромбе или неоинтиме при жизненно важных аневризмах. 
Эти результаты подтверждают худшие закономерности заживления в спиральных по сравнению со стентированными аневризмами. Образование неоинтимы, по-видимому, особенно зависит от родительской артерии в децеллюляризированных аневризмах, тогда как оно поддерживается рекрутацией из клеток стенки аневризмы в жизненно важные клеточные стенки. С точки зрения трансляции, лечение стентом может быть более подходящим для сильно дегенеративных аневризм, тогда как одна только спираль может быть адекватной для аневризм с в основном здоровыми стенками сосудов.

В лабораторных условиях было включено в общей сложности 31 животное: 27 крыс были включены в окончательный статистический анализ; 4 крысы умерли преждевременно (смертность 12,9%). Интраоперационно растяжение дыхания было значительно снижено (p = 0,03) у стент- (12,9 мкм ± 0,7) по сравнению с кры...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

Мы выполнили одноточечную инъекцию липофильного индикатора клеток для отслеживания эндотелиальных клеток, после чего последовала артериотомия и наложение швов аневризм боковой стенки на брюшную аорту крыс. Образование неоинтимы, по-видимому, зависело от родительской артерии в децеллюляризованных аневризмах и стимулировалось набором из клеток стенки аневризмы в жизненно важные клеточные стенки.

Использование инъекции клеточного индикатора для исследования происхождения неоинтимообразующих клеток в модели мешковидной боковой стенки крысы

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

Используя прямое применение внутриаортального индикатора клеток, мы можем проанализировать роль эндотелиальных клеток, происходящих из родительской артерии, в формировании неоинтимы в двух разных точках времени. Большим преимуществом этой техники является прямая, одноточечная, интерпретирующая инъекция in vivo, которая делает эту модель надежной и воспроизводимой техникой. Перед операцией инкубируют артериальные мешочки от донорских крыс в 0,1% додецилсульфата натрия в течение 10 часов при 37 градусах Цельсия для получения децеллюляризованных аневризм.Соберите эти мешочки с животных-доноров за несколько дней до операции. Для начала проанализируйте поведение животного и осмотрите слизистые оболочки и тургор в рамках предоперационного клинического обследования. Запишите вес каждого животного.Для индукции анестезии поместите всех крыс в чистую коробку, обеспеченную кислородом, до потери сознания через пять-10 минут. Проверьте глубину анестезии по отсутствию рефлекса снятия педали. Поместите крыс в лежачее положение и побрейте торакоабдоминальную область электробритвой.С помощью ленты зафиксируйте лапы крысы на доске, покрытой грелкой, подключенной к авторегулирующему ректальному зонду. Вставьте ректальный зонд в анус крысы для поддержания нужной температуры 37 градусов Цельсия с помощью грелки. Затем установите датчик на правой задней ноге, подключенный к компьютеризированной системе для интраоперационной проверки жизненно важных показателей.Для перианестетической помощи нанесите стерильную офтальмологическую смазку на глаза и накройте их непрозрачной фольгированной маской, чтобы предотвратить высыхание и повреждение от хирургической лампы. Продезинфицируйте хирургическое поле повидон-йодом и задрапируйте хирургическое поле стерильным способом. Поместите микромаг с фиолетовой прокладкой под проксимальную и дистальную части аорты, чтобы лучше визуализировать артерию, как только она отделится от кавальной вены.Затем защитите брюшко белой марлей. В день операции растворяют два микролитра ячеек-индикатора путем пипетирования в одном миллилитре PBS. Переложите смесь на одномиллилитровой шприц, снабженный канюлей.Выключите свет в операционной. С помощью микроскопа выполняют одноточечную инъекцию в среднюю вентральную часть аорты микрощипцами, и осторожно вводят один миллилитр гепаринизированного 0,9% физиологического раствора. Осторожно введите индикатор клеток и немедленно выключите работающий микроскоп.Снова защитите живот мокрой марлей. Дайте красителю высиживаться не менее 15 минут. Затем включите микроскоп и подсветку операционной.Используйте микрощипцы и микроножницы для выполнения продольной артериотомии так, чтобы ее длина усредняла диаметр собранной аневризмы. Поместите аневризму рядом с аортой перед выполнением артериотомии, чтобы обеспечить правильную длину. Зашить аневризму восемью-10 одиночными швами с помощью нерассасывающегося шва 10-0.Перед окончательным стежением доставьте катушку с плотностью упаковки один сантиметр. В этой модели может быть выполнено лечение катушкой или стентом. Затем аккуратно снимают временные зажимы, начиная дистально, под непрерывным орошением гепаринизированным физиологическим раствором.Закройте рану послойным способом. В конце операции отмените анестезию подкожной инъекцией. Пусть каждое эксплуатируемое животное выздоровеет в чистой клетке до полного бодрствования и тепла по мере необходимости с помощью нагревательной лампы.Объемы вытянутой исходной аневризмы за седьмой и 21-й день существенно не различались для децеллюляризованных или жизненно важных аневризм между группами лечения катушкой или стентом. Вытянутые объемы FU для децеллюляризованных аневризм показали незначительный рост аневризмы в спиральных по сравнению со стентированными аневризмами. Объем вытянутого FU был значительно больше в жизненно важной спиральной, чем в стентированной группе.Количество клеточно-индикаторных положительных клеток в неоинтиме децеллюляризованных аневризм не существенно различалось между группами стента или спирально обработанных на седьмой день FU, но было значительно выше у стентированных крыс на 21-й день FU.No значительные различия были отмечены у крыс с витал-аневризмой, зашитых либо через семь дней, либо через 21 день, FU.In децеллюляризованные аневризмы через семь дней FU, в тромбе стента, обработанного стентом, оставалось значительно больше клеточных индикаторных положительных клеток по сравнению с группой, обработанной катушкой. Эта разница не наблюдалась при жизненно важных аневризмах на семи днях FU. Не забывайте всегда выключать свет в операционной перед инъекцией индикатора клеток, чтобы предотвратить затухание. Кроме того, дайте инкубировать краситель не менее 15 минут.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Гена Доставка в послеродовой мозга крысы по Non-желудочковой плазмиды инъекция и Электропорация

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Инъекции аутологичной крови в модели спонтанного внутримозгового кровоизлияния у мышей

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Использование сравнительного подхода видов по расследованию нейробиологии Отцовский Ответы

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Быстрый Micro-ионтофорезом глутамата и ГАМК: полезный инструмент по расследованию Synaptic интеграции

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

Метод Узловые ганглиев инъекций в Спрэг Dawley крыс

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Использование трассировки Eyeblink классический подготовлять для оценки гиппокампа дисфункции в мышиной модели плода алкоголь спектра расстройств

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Биоразлагаемые магния стента лечение аневризмы саккулярной в мышиной модели - введение хирургической техники

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

Крыса модель Центральной усталости, с использованием модифицированных несколько метод платформы

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Прямой впрыск лентивирусные вектора выделяет несколько мотор путей спинного мозга крысы

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Лицевая хирургия нерва в модели крыс для изучения аксоналинизм и регенерации

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...