Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Författarna tackar Alessandra Bergadano, DVM, PhD, för den dedikerade övervakningen av långsiktig djurhälsa. Detta arbete stöddes av forskningsfonderna från forskningsrådet, Kantonsspital Aarau, Aarau, Schweiz och den schweiziska nationella vetenskapsstiftelsen SNF (310030_182450).

Veterinärstöd utfördes enligt institutionella riktlinjer. Experimenten godkändes av den lokala etikkommittén, Schweiz (BE 60/19). ARRIVE-riktlinjerna och 3R-principerna har följts strikt 6,7. Trettioen hanråttor från Lewis, 12 veckor gamla och väger 492 ± 8 g, inkluderades. Hus alla råttor vid en rumstemperatur på 23 ° C och en 12 h ljus / mörk cykel. Ge fri tillgång till vatten och pellets. Statistiska analyser har utförts med hjälp av det icke-...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

Denna studie visar att neointimabildning medieras via endotelceller med ursprung i aneurysmkomplexets moderartär men stöds av rekryteringen av celler som härrör från aneurysmväggen i vitala aneurysmer. Ändå är rollen som cirkulerande stamceller i aneurysmläkning fortfarande kontroversiell12,13. Totalt ingick 31 lewis-hanråttor i denna undersökning; endast 4 dog i förtid (12,9% dödlighet).
I motsats till kirurgisk klippnin...

Subaraknoidalblödning orsakad av bristning av en intrakraniell aneurysm (IA) är ett förödande neurokirurgiskt tillstånd förknippat med hög sjuklighet och dödlighet 1,2,3,4. Förutom mikrokirurgisk klippning, som ger direkt endotel-till-endotelkontakt, har endovaskulära enheter fått ökad betydelse under de senaste decennierna för behandling av brustna och för övrigt upptäckta IA. Det helande svaret i endovaskulärt behandlade IA beror huvudsakligen på neointimabildning och tromborganisation. Båda är synergiska processer, beroende på cellmigration från det intilliggande kärlet och aneurysmväggen. 5 Hittills är ursprunget till endotelceller i neointimabildning av endovaskulära behandlade aneurysmer fortfarande oklart. Det pågår en debatt i litteraturen om källan från vilken neointimabildande celler rekryteras.
Genom att använda en cellspårarinjektion av CM-Dil-färgämne (se materialförteckningen) i bukaortan hos råttor syftade vi till att analysera endotelcellernas roll, med ursprung i moderartären, i neointimabildning vid två olika FU-tidpunkter (dag 7 och dag 21) (Figur 1). En fördel med modellen är den direkta lokala cellspårarinkubationen in vivo i en moderartär före aneurysmsutur, vilket möjliggör FU vid senare tidpunkter. In vivo-injektionstekniker , såsom cellspårämnesinkubation, har inte beskrivits i litteraturen. En fördel med denna teknik är den direkta, enpunkts, intraoperativa, in vivo-injektionen , vilket gör modellen robust och reproducerbar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

Mikrokirurgisk klippning skapar en efterföljande barriär av blodflödet i intrakraniella aneurysmer, medan endovaskulär behandling bygger på neointima och trombbildning. Källan till endotelceller som täcker det endoluminala skiktet i neointima är fortfarande oklart. Syftet med föreliggande studie var därför att undersöka ursprunget till neointimabildande celler efter cellspårämnesinjektion i den redan väletablerade helsingforsråttans mikrokirurgiska sidewallaneurysmmodellen.
Sidewall aneurysmer skapades genom att suturera decellulariserade eller vitala arteriella påsar från sida till aortan hos manliga Lewis-råttor. Före arteriotomi med aneurysmsutur utfördes en cellspårarinjektion innehållande CM-Dil-färgämne i den klämda aortan för att märka endotelceller i det intilliggande kärlet och spåra deras proliferation under uppföljning (FU). Behandling följt av spolning (n = 16) eller stenting (n = 15). Vid FU (7 dagar eller 21 dagar) genomgick alla råttor fluorescensangiografi, följt av aneurysmskörd och makroskopisk och histologisk utvärdering med immunohistologiska cellantal för specifika regioner av intresse. 
Ingen av de 31 aneurysmerna hade brustit vid uppföljningen. Fyra djur dog i förtid. Makroskopiskt kvarvarande perfusion observerades hos 75,0 % lindade och 7,0 % av stenterade råttor. Mängden cellspårarpositiva celler var signifikant förhöjd i decellulariserad stented jämfört med lindade aneurysmer med avseende på trombus på dag 7 (p = 0,01) och neointima på dag 21 (p = 0,04). Inga signifikanta skillnader hittades i tromb eller neointima i vitala aneurysmer. 
Dessa fynd bekräftar sämre läkningsmönster i lindade jämfört med stenterade aneurysmer. Neointima bildning verkar särskilt beroende av moderartären i decellulariserade aneurysmer, medan den stöds av rekryteringen från aneurysmväggceller i vitala cellrika väggar. När det gäller översättning kan stentbehandling vara mer lämplig för mycket degenererade aneurysmer, medan spolning ensam kan vara tillräcklig för aneurysmer med mestadels friska kärlväggar.

Totalt 31 djur ingick i laboratoriemiljön: 27 råttor ingick i den slutliga statistiska analysen; 4 råttor dog i förtid (12,9% dödlighet). Intraoperativt reducerades andningsdistension signifikant (p = 0,03) hos stent- (12,9 μm ± 0,7) jämfört med spolbehandlade (13,5 μm ± 0,6) råttor. Fluorescensangiografi utfördes för varje råtta i slutet av den slutliga FU. Reperfusion indikerades hos alla 6 spolbehandlade djur, medan reperfusion observerades hos endast 12,5 % av de 8 stentbehandlade djuren.
...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

Vi utförde en enpunkts, lipofil cellspårarinjektion för att spåra endotelceller, följt av en arteriotomi och suturering av sidoväggsaneurysmer på bukråttaortan. Neointima-bildning verkade beroende av moderartären i decellulariserade aneurysmer och främjades av rekryteringen från aneurysmväggceller i vitala cellrika väggar.

Använda en cellspårarinjektion för att undersöka ursprunget till neointimabildande celler i en råtta saccular sidoväggsmodell

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

Genom att använda en direkt intra-aortal cellspårarapplikation kan vi analysera rollen av endotelceller som härrör från moderartären i neointimabildning vid två olika tidpunkter. En stor fördel med denna teknik är en direkt, enpunkts, tolkande in vivo-injektion vilket gör denna modell till en robust och reproducerbar teknik. Före operationen, inkubera artärpåsarna från givarråttor i 0,1% natriumdodecylsulfat i 10 timmar vid 37 grader Celsius för att erhålla decellulariserade aneurysmer.Samla dessa påsar från donatordjur några dagar före operationen. Börja med att analysera djurets beteende och inspektera slemhinnorna och turgor som en del av den preoperativa kliniska undersökningen. Registrera vikten av varje djur.För anestesiinduktion, placera alla råttor i en ren låda försedd med syre tills medvetslöshet efter fem till 10 minuter. Kontrollera anestesidjupet genom frånvaron av pedaluttagsreflexen. Placera råttorna i ryggläge och raka thoracoabdominalområdet med en elektrisk rakapparat.Fixera råttans tassar på ett bräde täckt av en värmedyna ansluten till en automatiskt reglerande rektal sond med tejp. Sätt in rektalsonden i råttans anus för att bibehålla önskad temperatur på 37 grader Celsius med hjälp av en värmepanna. Installera sedan en sensor på höger bakben ansluten till ett datoriserat system för att kontrollera vitala tecken intraoperativt.För perianestetisk vård, applicera ett sterilt oftalmiskt smörjmedel på ögonen och täck dem med en ogenomskinlig foliemask för att förhindra torkning och skador från den kirurgiska lampan. Desinficera det kirurgiska fältet med povidonjod och drapera det kirurgiska fältet på ett sterilt sätt. Lägg en mikropinne med lila vaddering under de proximala och distala delarna av aortan för att bättre visualisera artären så snart den separeras från kavalvenen.Skydda sedan buken med vit gasbindning. På driftsdagen lös upp två mikroliter av cellspåraren genom pipettering i en milliliter PBS. Överför blandningen till en en milliliter spruta försedd med en kanyl.Stäng av ljuset i operationssalen. Använd ett mikroskop, utför enpunktsinjektionen i den mellersta ventrala delen av aortan med mikrotång och injicera försiktigt en milliliter hepariniserad 0,9% saltlösning. Injicera cellspåraren försiktigt och stäng omedelbart av operationsmikroskopet också.Skydda buken med våt gasbindning igen. Låt färgämnet inkubera i minst 15 minuter. Slå sedan på mikroskopet och operationssalens lampor.Använd mikrotång och mikrosax för att utföra den längsgående arteriotomin så att dess längd är i genomsnitt diametern på den skördade aneurysmen. Placera aneurysmen bredvid aortan innan du utför arteriotomi för att säkerställa rätt längd. Suturera aneurysmen med åtta till 10 enkla stygn med en icke-absorberbar 10-0 sutur.Innan den sista sömmen, leverera spolen med en förpackningstäthet på en centimeter. Antingen spole eller stentbehandling kan utföras i denna modell. Ta sedan försiktigt bort de tillfälliga klämmorna, med början distally, under kontinuerlig bevattning med hepariniserad saltlösning.Stäng såret på ett skiktat sätt. Vid slutet av operationen, vänd anestesi med en subkutan injektion. Låt varje opererat djur återhämta sig i en ren bur tills det är helt vaket och varmt efter behov med en värmelampa.Dragna aneurysmvolymer vid baseline för dag sju och dag 21 skilde sig inte signifikant för decellulariserade eller vitala aneurysmer mellan spol- eller stentbehandlingsgrupperna. Dragna FU-volymer för decellulariserade aneurysmer visade en icke-signifikant aneurysmtillväxt i spolade jämfört med de stenterade aneurysmerna. Dragen FU-volym var betydligt större i den vitala lindade än i den stenade gruppen.Mängden cellspårarpositiva celler i neointima av decellulariserade aneurysmer skilde sig inte signifikant mellan de stent- eller lindbehandlade grupperna vid dag sju FU men var signifikant högre hos stenterade råttor vid dag 21 FU.No signifikanta skillnader noterades hos vital-aneurysm suturerade råttor vid antingen sju dagar eller 21 dagar FU.In decellulariserade aneurysmer vid sju dagars FU, signifikant fler cellspårarpositiva celler kvarstod i tromben hos den stentbehandlade jämfört med den spolbehandlade gruppen. Denna skillnad observerades inte i vitala aneurysmer vid sju dagars FU. Kom ihåg att alltid släcka lamporna i operationssalen innan du injicerar cellspåraren för att förhindra blekning. Låt också inkubera färgämnet i minst 15 minuter.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Gene Leverans till Postnatal råtthjärna av icke-ventrikulär Plasmid Injection och elektroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Autologt blod Injection till Model Spontan intracerebralt blödning i Möss

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Med hjälp av en jämförande Arter metoden för att undersöka neurobiologi av Paternal svar

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Snabb Micro-iontophoresis av glutamat och GABA: Ett användbart verktyg för att undersöka Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

En metod för KNUTIG Ganglia Injektion i Sprague-Dawley-råtta

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Användning av Trace Blink klassisk betingning att bedöma Hippocampus dysfunktion i en råtta modell av fetala alkoholeffekter spektrum

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Biologiskt nedbrytbara Magnesium Stent behandling av Saccular aneurysm i en råtta modell - införandet av kirurgisk teknik

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

En råtta modell av Central trötthet använder en modifierad metoden med flera plattform

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Direktinsprutning av en Lentiviral vektor belyser flera motoriska vägar i råtta ryggmärgen

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Facial nervkirurgi i råtta modell för att studera axonal hämning och regenerering

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...