Name: using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model
Uploaded: 2022-03-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Yazarlar, uzun vadeli hayvan sağlığının özel denetimi için DVM, PhD, Alessandra Bergadano'ya teşekkür eder. Bu çalışma, Araştırma Konseyi, Kantonsspital Aarau, Aarau, İsviçre ve İsviçre ulusal bilim vakfı SNF'nin (310030_182450) araştırma fonları tarafından desteklenmiştir.

Veteriner desteği kurumsal kılavuzlara göre yapıldı. Deneyler İsviçre Yerel Etik Komitesi (BE 60/19) tarafından onaylanmıştır. ARRIVE yönergeleri ve 3R ilkeleri sıkı bir şekilde takip edilmiştir 6,7. 12 haftalık ve 492 ± 8 g ağırlığında otuz bir erkek Lewis sıçanı dahil edildi. Tüm sıçanları 23 ° C'lik bir oda sıcaklığında ve 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsünde barındırın. Suya ve peletlere ücretsiz erişim s...

<ol>
	<li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Macdonald, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+vasospasm+improves+outcome+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage:+rationale+and+design+of+CONSCIOUS-2+and+CONSCIOUS-3+trials.">Preventing vasospasm improves outcome after aneurysmal subarachnoid hemorrhage: rationale and design of CONSCIOUS-2 and CONSCIOUS-3 trials.</a> Neurocritical Care. 13 (3), 416-424 (2010).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levosimendan+as+a+therapeutic+strategy+to+prevent+neuroinflammation+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage.">Levosimendan as a therapeutic strategy to prevent neuroinflammation after aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. , (2021).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+treatment+prevents+inflammation+in+experimental+bifurcation+aneurysms+in+New+Zealand+White+rabbits.">Aspirin treatment prevents inflammation in experimental bifurcation aneurysms in New Zealand White rabbits.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 14 (2), 189-195 (2021).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neointima+formation+after+coil+or+stent+treatment+in+a+rat+saccular+sidewall+aneurysm+model.">Patterns of neointima formation after coil or stent treatment in a rat saccular sidewall aneurysm model.</a> Stroke. 52 (3), 1043-1052 (2021).</li><li>Kilkenny, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> British Journal of Pharmacology. 160 (7), 1577-1579 (2010).</li><li>Tornqvist, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategic+focus+on+3R+principles+reveals+major+reductions+in+the+use+of+animals+in+pharmaceutical+toxicity+testing.">Strategic focus on 3R principles reveals major reductions in the use of animals in pharmaceutical toxicity testing.</a> PLoS One. 9 (7), 101638 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+wall+cellularity+affects+healing+after+coil+embolization:+assessment+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Aneurysm wall cellularity affects healing after coil embolization: assessment in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 12 (6), 621-625 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Helsinki+rat+microsurgical+sidewall+aneurysm+model.">The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (92), e51071 (2014).</li><li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+magnesium+stent+treatment+of+saccular+aneurysms+in+a+rt+model+-+introduction+of+the+surgical+technique.">Biodegradable magnesium stent treatment of saccular aneurysms in a rt model - introduction of the surgical technique.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56359 (2017).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+bioresorbable+stent+feasibility+in+a+rat+aneurysm+model.">Testing bioresorbable stent feasibility in a rat aneurysm model.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 11 (10), 1050-1054 (2019).</li><li>Kadirvel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+aneurysm+occlusion+after+treatment+with+a+flow+diverter.">Cellular mechanisms of aneurysm occlusion after treatment with a flow diverter.</a> Radiology. 270 (2), 394-399 (2014).</li><li>Li, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+neointima+formation+in+rabbit+elastase-induced+aneurysm+after+flow+diverter+treatment.">Endothelial progenitor cells contribute to neointima formation in rabbit elastase-induced aneurysm after flow diverter treatment.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 19 (5), 352-357 (2013).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+cell+transplantation+prevents+growth+and+rupture+in+a+model+of+rupture-prone+saccular+aneurysms.">Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms.</a> Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58 (5), 936-944 (2006).</li><li>Marbacher, S., Niemela, M., Hernesniemi, J., Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+of+endovascularly+and+microsurgically+treated+intracranial+aneurysms-review+of+the+putative+role+of+aneurysm+wall+biology.">Recurrence of endovascularly and microsurgically treated intracranial aneurysms-review of the putative role of aneurysm wall biology.</a> Neurosurgical Review. 42 (1), 49-58 (2019).</li><li>Frosen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cells+and+the+formation,+degeneration,+and+rupture+of+saccular+intracranial+aneurysm+wall--a+review+of+current+pathophysiological+knowledge.">Smooth muscle cells and the formation, degeneration, and rupture of saccular intracranial aneurysm wall--a review of current pathophysiological knowledge.</a> Translational Stroke Research. 5 (3), 347-356 (2014).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+are+involved+in+aneurysm+repair+in+rabbits.">Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 19 (9), 1283-1286 (2012).</li><li>Morel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+wall+remodeling+and+intraluminal+thrombus+resolution+in+a+rat+saccular+aneurysm+model.">Sex-related differences in wall remodeling and intraluminal thrombus resolution in a rat saccular aneurysm model.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-14 (2019).</li><li>Gruter, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+video+angiography+for+evaluation+of+dynamic+perfusion+status+in+an+aneurysm+preclinical+experimental+setting.">Fluorescence video angiography for evaluation of dynamic perfusion status in an aneurysm preclinical experimental setting.</a> Operative Neurosurgery. 17 (4), 432-438 (2019).</li><li>Marbacher, S., Strange, F., Frosen, J., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+extracranial+aneurysm+models+for+the+study+and+treatment+of+brain+aneurysms:+A+systematic+review.">Preclinical extracranial aneurysm models for the study and treatment of brain aneurysms: A systematic review.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (5), 922-938 (2020).</li><li>Ravindran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+and+biology+of+flow+diverters+in+the+treatment+of+intracranial+aneurysms.">Mechanism of action and biology of flow diverters in the treatment of intracranial aneurysms.</a> Neurosurgery. 86, 13-19 (2020).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+mural+cells+leads+to+wall+degeneration,+aneurysm+growth,+and+eventual+rupture+in+a+rat+aneurysm+model.">Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model.</a> Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).</li><li>Morosanu, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+cadaveric+and+in+vivo+large+animal+training+models+for+cranial+and+spinal+approaches+and+techniques+-+systematic+review+of+current+literature.">Neurosurgical cadaveric and in vivo large animal training models for cranial and spinal approaches and techniques - systematic review of current literature.</a> Neurologia i Neurochirurgia Polska. 53 (1), 8-17 (2019).</li><li>Wanderer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+pouch+microsurgical+bifurcation+aneurysm+model+in+the+rabbit.">Arterial pouch microsurgical bifurcation aneurysm model in the rabbit.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61157 (2020).</li></ol>

Bu çalışma, neointima oluşumuna anevrizma kompleksinin ana arterinden köken alan endotel hücreleri aracılığıyla aracılık edildiğini, ancak vital anevrizmalarda anevrizma duvarından türetilen hücrelerin işe alınması ile desteklendiğini göstermektedir. Bununla birlikte, dolaşımdaki progenitör hücrelerin anevrizma iyileşmesindeki rolü tartışmalı olmaya devam etmektedir12,13. Genel olarak, 31 erkek Lewis sıçanı bu araştırmaya dahil ...

İntrakraniyal anevrizmanın (İA) rüptürü sonucu gelişen subaraknoid kanama, yüksek morbidite ve mortaliteile ilişkili yıkıcı bir nöroşirürjik durumdur 1,2,3,4. Endotelden endotele doğrudan temas sağlayan mikrocerrahi kırpmaya ek olarak, endovasküler cihazlar son yıllarda rüptüre olmuş ve tesadüfen keşfedilen İA'ların tedavisinde giderek artan bir önem kazanmıştır. Endovasküler olarak tedavi edilen İA'larda iyileşme yanıtı esas olarak neointima oluşumuna ve trombüs organizasyonuna bağlıdır. Her ikisi de bitişik damardan ve anevrizma duvarından hücre göçüne bağlı olarak sinerjik süreçlerdir. 5 Endovasküler tedavi edilen anevrizmaların neointima oluşumunda endotel hücrelerinin kökeni bugüne kadar belirsizliğini korumaktadır. Literatürde, neointima oluşturan hücrelerin işe alındığı kaynak hakkında devam eden bir tartışma vardır.
Sıçanların abdominal aortunda CM-Dil boyasının hücre izleyici enjeksiyonunu kullanarak ( Materyal Tablosuna bakınız), iki farklı FU zaman noktasında (gün 7 ve gün 21) neointima oluşumunda ana arterden kaynaklanan endotel hücrelerinin rolünü analiz etmeyi amaçladık (Şekil 1). Modelin bir avantajı, anevrizma sütüründen önce bir ebeveyn arterinde in vivo olarak doğrudan lokal hücre izleyici inkübasyonudur ve daha sonraki zaman noktalarında FU'ya izin verir. Hücre izleyici inkübasyonu gibi in vivo enjeksiyon teknikleri literatürde tanımlanmamıştır. Bu tekniğin bir avantajı, modeli sağlam ve tekrarlanabilir kılan doğrudan, tek noktalı, intraoperatif, in vivo enjeksiyondur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-0 resorbable suture</td>
			<td>Ethicon Inc., USA</td>
			<td>VCP428G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G0762563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>C0766070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-0 non-absorbable suture</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>G1111140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol</td>
			<td>Arovet AG, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter blue</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FD1B</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter green</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FGV9</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicycle spotlight</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Board (20 x 10 cm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior, Switzerland</td>
			<td>1014197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27-1/2 G)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell count software</td>
			<td>Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker CM-Dil dye</td>
			<td>ThermoFisher SCIENTIFIC, USA</td>
			<td>C7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coil-Device</td>
			<td>Styker, Kalamazoo, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye-lubricant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>Sintetica, S.A., Switzerland</td>
			<td>98683</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenil</td>
			<td>Labatec-Pharma, Switerzland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sodium chloride solution (0.9%)</td>
			<td>Fresenius KABI</td>
			<td>336769</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longuettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>P7626406</td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Virbac, Switzerland</td>
			<td>QN05CM91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Roche, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitoring-system</td>
			<td>Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2-Face mask</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operation microscope</td>
			<td>OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpell</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>210</td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smartphone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11667289001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft feed</td>
			<td>Emeraid Omnivore</td>
			<td></td>
			<td>any generic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue spreader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel sponge bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stent-Device</td>
			<td>Biotroni, B&#252;lach, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile micro swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microforceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved microscissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight and curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip applicator</td>
			<td>B. Braun, Germany</td>
			<td>FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titan standard clip (2x)</td>
			<td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td>
			<td>FT242T</td>
			<td>temporary</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a cell-tracer injection to investigate the origin of neointima-forming cells in a rat saccular side wall model

Mikrocerrahi kırpma, intrakraniyal anevrizmalara kan akışının daha sonra bir bariyerini oluştururken, endovasküler tedavi neointima ve trombüs oluşumuna dayanır. Neointimanın endoluminal tabakasını kaplayan endotel hücrelerinin kaynağı belirsizliğini korumaktadır. Bu nedenle, bu çalışmanın amacı, halihazırda köklü Helsinki sıçan mikrocerrahi yanak anevrizma modelinde hücre izleyici enjeksiyonu sonrası neointima oluşturan hücrelerin kökenini araştırmaktır.
Yanak anevrizmaları, erkek Lewis sıçanlarında desellülarize veya vital arteriyel poşetlerin aortla uçtan yana dikilmesi ile oluşturuldu. Anevrizma sütürü ile arteriyotomiden önce, komşu damardaki endotel hücrelerini etiketlemek ve takip sırasında proliferasyonlarını izlemek için kelepçeli aort içine CM-Dil boyası içeren bir hücre izleyici enjeksiyonu yapıldı (FU). Tedavi sonrasında sarma (n = 16) veya stent (n = 15) uygulanır. FU'da (7 gün veya 21 gün), tüm sıçanlara floresan anjiyografi, ardından anevrizma hasadı ve belirli ilgi alanları için immünohistolojik hücre sayımları ile makroskopik ve histolojik değerlendirme yapıldı. 
31 anevrizmanın hiçbiri takipte yırtılmamıştı. Dört hayvan erken öldü. Stentli sıçanların %75.0'ında ve %7.0'ında makroskopik olarak rezidüel perfüzyon gözlendi. Desellülarize stentlerde hücre izleyici pozitif hücre miktarı, 7. günde trombüs (p=0.01) ve 21. günde neointima (p=0.04) açısından sarmal anevrizmalara göre anlamlı derecede artmıştır. Vital anevrizmalarda trombüs veya neointimada anlamlı fark saptanmadı.
Bu bulgular, stentli anevrizmalara kıyasla sarmallarda daha kötü iyileşme paternlerini doğrulamaktadır. Neointima oluşumu özellikle desellülerize anevrizmalarda ana artere bağımlı görünürken, vital hücre bakımından zengin duvarlarda anevrizma duvarı hücrelerinden işe alım ile desteklenmektedir. Translasyon açısından, stent tedavisi yüksek oranda dejenere olmuş anevrizmalar için daha uygun olabilirken, çoğunlukla sağlıklı damar duvarlarına sahip anevrizmalar için tek başına sarma yeterli olabilir.

Laboratuvar ortamına toplam 31 hayvan dahil edildi: Son istatistiksel analize 27 sıçan dahil edildi; 4 sıçan erken öldü (%12.9 mortalite oranı). İntraoperatif olarak, solunum distansiyonu stent- (12.9 μm ± 0.7) stent- (12.9 μm ± 0.7) ile tedavi edilen sıçanlarda anlamlı olarak azaldı (p = 0.03). Son FU'nun sonunda her sıçan için floresan anjiyografi yapıldı. Reperfüzyon, bobinle tedavi edilen 6 hayvanın hepsinde endikeyken, stentle tedavi edilen 8 hayvanın sadece% 12.5'inde reperfüzyon ...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model at JoVE.com

Using a Cell-Tracer Injection to Investigate the Origin of Neointima-Forming Cells in a Rat Saccular Side Wall Model

Endotel hücrelerini izlemek için tek noktalı, lipofilik hücre izleyici enjeksiyonu, ardından arteriyotomi ve abdominal sıçan aortunda yanak duvar anevrizmalarının dikilmesi yapıldı. Neointima oluşumu, desellülarize anevrizmalarda ana artere bağımlı görünüyordu ve hayati hücre bakımından zengin duvarlardaki anevrizma duvarı hücrelerinden işe alım ile desteklendi.

Bir Sıçan Sakküler Yan Duvar Modelinde Neointima Oluşturan Hücrelerin Kökenini Araştırmak için Bir Hücre İzleyici Enjeksiyonu Kullanma

Microsurgical clipping creates a subsequent barrier of blood flow into intracranial aneurysms, whereas endovascular treatment relies on neointima and ...

Doğrudan intra-aort hücre izleyici uygulaması kullanarak, ana arterden kaynaklanan endotel hücrelerinin neointima oluşumundaki rolünü iki farklı zaman noktasında analiz edebiliriz. Bu tekniğin büyük bir avantajı, bu modeli sağlam ve tekrarlanabilir bir teknik haline getiren doğrudan, tek noktalı, yorumlayıcı bir in-vivo enjeksiyondur. Ameliyattan önce, desellülarize anevrizmalar elde etmek için donör sıçanlardan arteriyel poşetleri 37 santigrat derecede 10 saat boyunca% 0.1 sodyum dodesil sülfat içinde inkübe edin.Bu keseleri ameliyattan birkaç gün önce donör hayvanlardan toplayın. Başlamak için, hayvanın davranışını analiz edin ve ameliyat öncesi klinik muayenenin bir parçası olarak mukus zarlarını ve turgoru inceleyin. Her hayvanın ağırlığını kaydedin.Anestezi indüksiyonu için, tüm sıçanları beş ila 10 dakika sonra bilinç kaybına kadar oksijenle donatılmış temiz bir kutuya yerleştirin. Pedal çekilme refleksinin yokluğunda anestezi derinliğini kontrol edin. Sıçanları sırtüstü pozisyona yerleştirin ve torakoabdominal bölgeyi elektrikli tıraş makinesiyle tıraş edin.Bant kullanarak, sıçanın pençelerini otomatik olarak düzenleyen bir rektal proba bağlı bir ısıtma yastığı ile kaplı bir tahtaya sabitleyin. Bir ısıtma yastığı yardımıyla istenen sıcaklığı 37 santigrat derece korumak için rektal probu sıçanın anüsüne yerleştirin. Ardından, intraoperatif olarak hayati belirtileri kontrol etmek için bilgisayarlı bir sisteme bağlı sağ arka bacağa bir sensör takın.Perianestetik bakım için, gözlere steril bir oftalmik kayganlaştırıcı uygulayın ve cerrahi lambanın kurumasını ve zarar görmesini önlemek için opak bir folyo maskesi ile örtün. Cerrahi alanı povidon iyotla dezenfekte edin ve cerrahi alanı steril bir şekilde örtün. Arteri kaval damardan ayrılır ayrılmaz daha iyi görselleştirmek için aortun proksimal ve distal kısımlarının altına mor dolgulu bir mikro çubuk koyun.Sonra karnı beyaz gazlı bezle koruyun. Çalışma gününde, bir mililitre PBS'de pipetleme yaparak hücre izleyicinin iki mikrolitresini çözün. Karışımı bir kanülle donatılmış bir mililitrelik bir şırıngaya aktarın.Ameliyathanedeki ışığı kapatın. Bir mikroskop kullanarak, aortun orta ventral kısmına mikro forseps ile tek noktalı enjeksiyonu gerçekleştirin ve bir mililitre heparize% 0.9 salin çözeltisini dikkatlice enjekte edin. Hücre izleyiciyi dikkatlice enjekte edin ve hemen çalışma mikroskobunu da kapatın.Karnı tekrar ıslak gazlı bezle koruyun. Boyanın en az 15 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin. Ardından mikroskop ve ameliyathane ışıklarını açın.Uzunlamasına arteriyotomi yapmak için mikro forseps ve mikro makas kullanın, böylece uzunluğu hasat edilen anevrizmanın çapının ortalamasını alır. Doğru uzunluğu sağlamak için arteriyotomi yapmadan önce anevrizmayı aortun yanına yerleştirin. Anevrizmayı emilemeyen 10-0 dikiş kullanarak sekiz ila 10 tek dikişle dikişleyin.Son dikişten önce, bobini bir santimetrelik bir ambalaj yoğunluğu ile teslim edin. Bu modelde bobin veya stent tedavisi yapılabilir. Ardından, heparinize salin ile sürekli sulama altında, distal olarak başlayan geçici kelepçeleri dikkatlice çıkarın.Yarayı katmanlı bir şekilde kapatın. Ameliyatın sonunda, anesteziyi deri altı enjeksiyonu ile tersine çevirin. Çalıştırılan her hayvanın temiz bir kafeste tamamen uyanana ve bir ısıtma lambası ile gerektiği gibi ısınana kadar iyileşmesine izin verin.Yedinci gün ve 21. gün için çekilen başlangıç anevrizması hacimleri, bobin veya stent tedavi grupları arasında desellülarize veya vital anevrizmalar için anlamlı farklılık göstermedi. Desellülarize anevrizmalar için çekilen FU hacimleri, stentli anevrizmalara kıyasla sarmallarda anlamlı olmayan bir anevrizma büyümesi gösterdi. Çekilen FU hacmi, vital bobinli grupta stentli gruba göre anlamlı derecede daha fazlaydı.Desellülarize anevrizmaların neointimasındaki hücre izleyici pozitif hücrelerin miktarları, yedinci FU gününde stent veya sarmal tedavi edilen gruplar arasında anlamlı olarak farklılık göstermedi, ancak 21. günde stent sıçanlarda anlamlı derecede yüksekti FU.No vital-anevrizma dikişli sıçanlarda, yedi gün FU'da desellülarize anevrizmalar FU.In yedi gün veya 21 günde anlamlı farklılıklar kaydedildi. Stent ile tedavi edilen trombusta, bobin ile tedavi edilen gruba kıyasla önemli ölçüde daha fazla hücre izleyici pozitif hücre kalmıştır. Bu fark yedi günlük FU'da vital anevrizmalarda gözlenmedi. Solmayı önlemek için hücre izleyiciyi enjekte etmeden önce ameliyathanedeki ışıkları her zaman kapatmayı unutmayın. Ayrıca, boyayı en az 15 dakika kuluçkaya yatırın.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Non-ventriküler Plazmid Enjeksiyon ve Elektroporasyon Postnatal Rat Beyin Gen Teslimat

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Baba Yanıtları Nörobiyoloji incelenmesi Karşılaştırmalı Türlerin Yaklaşım

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Glutamat ve GABA hızlı Micro-iyontoforez: Synaptic Entegrasyon Araştırma yararlı bir araç

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

Sprague-Dawley Sıçan nodoz Ganglionlar Enjeksiyon Bir Yöntem

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Bir sıçan modelinde - cerrahi tekniğin getirilmesi Saccular Anevrizmalarının biyobozunur magnezyum Stent tedavisi

The steady progess in the armamentarium of techniques available for endovascular treatment of intracranial aneurysms requires affordable and reproducable ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

Bir fare modeli değiştirilmiş bir kullanarak merkezi yorgunluk birden çok Platform yöntemi

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Birden fazla Motor yolları sıçan Spinal Kord Lentiviral bir vektör direkt enjeksiyon vurgulamaktadır

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Aksonal İnhibisyon ve Rejenerasyon Çalışması için Sıçan Modelinde Yüz Sinir Cerrahisi

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...