Name: dose uptake of platinum- and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications
Uploaded: 2022-04-21T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dose Uptake of Platinum- and Ruthenium-based Compound Exposure in Zebrafish by Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry with Broader Applications at JoVE.

Finanziamento: NJAES-Rutgers NJ01201, NIEHS Training Grant T32-ES 007148, NIH-NIEHS P30 ES005022. Inoltre, Brittany Karas è supportata dalla borsa di formazione T32NS115700 di NINDS, NIH. Gli autori riconoscono Andreia Valente e la Fondazione portoghese per la scienza e la tecnologia (Fundação para a Ciência e Tecnologia, FCT; PTDC/QUI-QIN/28662/2017) per la fornitura di PMC79.

Il pesce zebra del ceppo AB (Danio rerio) è stato utilizzato per tutti gli esperimenti (vedi la Tabella dei materiali) e il protocollo di allevamento (# 08-025) è stato approvato dal Comitato per la cura e le strutture degli animali della Rutgers University.
1. Allevamento di pesci zebra
<ol><li>Allevare e mantenere il pesce zebra in un sistema di habitat acquatico a ricircolo su un ciclo buio di 14 ore di luce: 10 ore.<ol>
<li>Purificare l'acqua ...

<ol>
	<li>Rehman, K., Fatima, F., Waheed, I., Akash, M. S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+exposure+of+heavy+metals+and+their+impact+on+health+consequences.">Prevalence of exposure of heavy metals and their impact on health consequences.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (1), 157-184 (2018).</li><li>Anyanwu, B. O., Ezejiofor, A. N., Igweze, Z. N., Orisakwe, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heavy+metal+mixture+exposure+and+effects+in+developing+nations:+an+update.">Heavy metal mixture exposure and effects in developing nations: an update.</a> Toxics. 6 (4), 65 (2018).</li><li>Doherty, C. L., Buckley, B. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+assays+for+drug+toxicity+screening.">Zebrafish assays for drug toxicity screening.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 2 (2), 231-240 (2006).</li><li>Cassar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+zebrafish+in+drug+discovery+toxicology.">Use of zebrafish in drug discovery toxicology.</a> Chemical Research in Toxicology. 33 (1), 95-118 (2020).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). 4th edition. , (2000).</li><li>Material safety data sheet: cisplatin injection). Pfizer Available from: <a target="_blank" href="https://cdn.pfizer.com/pfizercom/products/material_safety_data/PZ01470.pdf">https://cdn.pfizer.com/pfizercom/products/material_safety_data/PZ01470.pdf</a> (2011)</li><li>Nasiadka, A., Clark, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+breeding+in+the+laboratory+environment.">Zebrafish breeding in the laboratory environment.</a> ILAR Journal. 53 (2), 161-168 (2012).</li><li>OECD. Test No. 236: Fish embryo acute toxicity (FET) test. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals Available from: <a target="_blank" href="https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-236-fish-embryo-acute-toxicity-fet-test_9789264203709-en">https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-236-fish-embryo-acute-toxicity-fet-test_9789264203709-en</a> (2013)</li><li>EMD Millipore Corporation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+Safety+Data+Sheet:+OmniTrace+Nitric+Acid.">Material Safety Data Sheet: OmniTrace Nitric Acid.</a> EMD Millipore Corporation. , (2013).</li><li>Safety data sheet: Hydrogen peroxide 30% Suprapur. EMD Millipore Corporation Available from: <a target="_blank" href="https://www.merckmillipore.com/IN/en/product/Hydrogen-peroxide-300-0">https://www.merckmillipore.com/IN/en/product/Hydrogen-peroxide-300-0</a> (2014)</li><li>Karas, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+screening+method+for+transition+metal-based+anticancer+compounds+using+zebrafish+embryo-larval+assay+and+inductively+coupled+plasma-mass+spectrometry+analysis.">A novel screening method for transition metal-based anticancer compounds using zebrafish embryo-larval assay and inductively coupled plasma-mass spectrometry analysis.</a> Journal of Applied Toxicology. 39 (8), 1173-1180 (2019).</li><li>Henn, K., Braunbeck, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dechorionation+as+a+tool+to+improve+the+fish+embryo+toxicity+test+(FET)+with+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Dechorionation as a tool to improve the fish embryo toxicity test (FET) with the zebrafish (Danio rerio).</a> Comparative Biochemistry and Physiology. Toxicology &amp; Pharmacology: CBP. 153 (1), 91-98 (2011).</li><li>Mandrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+zebrafish+chorion+removal+and+single+embryo+placement:+optimizing+throughput+of+zebrafish+developmental+toxicity+screens.">Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).</li><li>Karas, B. F., Hotz, J. M., Buckley, B. T., Cooper, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+alkylating+activity+in+zebrafish+causes+resistance+to+chorionic+degradation+and+inhibition+of+osteogenesis.">Cisplatin alkylating activity in zebrafish causes resistance to chorionic degradation and inhibition of osteogenesis.</a> Aquatic Toxicology. 229, 105656 (2020).</li></ol>

Il protocollo qui descritto è stato implementato per determinare la somministrazione e l'assorbimento di farmaci antitumorali a base di metalli contenenti Pt o Ru. Sebbene questi metodi siano già stati pubblicati, questo protocollo discute importanti considerazioni e dettagli per adattare questa metodologia a una serie di composti. Il protocollo OCSE abbinato alla digestione dei tessuti e all'analisi ICPMS ci ha permesso di determinare che il PMC79 era più potente del cisplatino e ha provocato un accumulo di tessuto d...

I metalli e i composti a base di metalli continuano ad avere rilevanza farmacologica e tossicologica. La prevalenza dell'esposizione ai metalli pesanti e il suo impatto sulla salute hanno aumentato esponenzialmente le indagini scientifiche dal 1960 e hanno raggiunto il massimo storico nel 2021. Le concentrazioni di metalli pesanti nell'acqua potabile, nell'inquinamento atmosferico e nell'esposizione professionale superano i limiti normativi in tutto il mondo e rimangono un problema per arsenico, cadmio, mercurio, cromo, piombo e altri metalli. Nuovi metodi per quantificare l'esposizione ambientale e analizzare lo sviluppo patologico continuano ad essere molto richiesti 1,2,3.
Al contrario, il campo medico ha sfruttato le proprietà fisiochimiche di vari metalli per il trattamento clinico. I farmaci a base di metalli o metallofarmaci hanno una ricca storia di scopi medicinali e hanno mostrato attività contro una serie di malattie, con il più alto successo come chemioterapici4. Il più famoso dei metallofarmaci, il cisplatino, è un farmaco antitumorale a base di Pt considerato dall'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) come uno dei farmaci essenziali del mondo5. Nel 2010, il cisplatino e i suoi derivati del Pt hanno avuto un tasso di successo fino al 90% in diversi tumori e sono stati utilizzati in circa il 50% dei regimichemioterapici 6,7,8. Sebbene i chemioterapici a base di Pt abbiano avuto un successo inconfutabile, la tossicità dose-limitante ha messo in moto indagini su farmaci alternativi a base di metalli con somministrazione e attività biologica raffinata. Di queste alternative, i composti a base di Ru sono diventati i più popolari 9,10,11,12.
Sono necessari nuovi modelli e metodologie per tenere il passo con il tasso di necessità di studi di farmacocinetica e tossicocinetica sui metalli. Il modello del pesce zebra si trova all'intersezione tra complessità e produttività, essendo un vertebrato ad alta fecondità con il 70% di omologia genica conservata13. Questo modello è stato una risorsa in farmacologia e tossicologia, con ampi screening per vari composti per la scoperta di piombo, l'identificazione del bersaglio e l'attività meccanicistica 14,15,16,17. Tuttavia, lo screening ad alta produttività delle sostanze chimiche si basa in genere sulle esposizioni trasmesse dall'acqua. Dato che l'assorbimento può essere variabile in base alle proprietà fisico-chimiche del composto in soluzione (cioè fotodegradazione, solubilità), questo può essere un importante limite di correlazione tra l'erogazione della dose e la risposta.
Per superare questa limitazione per il confronto della dose con i vertebrati superiori, è stata progettata una metodologia per analizzare le concentrazioni di metalli in tracce nel tessuto larvale del pesce zebra. Qui, le curve dose-risposta degli endpoint letali e subletali sono state valutate per il cisplatino e nuovi composti antitumorali a base di Ru. La letalità e la schiusa ritardata sono state valutate per concentrazioni nominali di 0, 3,75, 7,5, 15, 30 e 60 mg/L di cisplatino. L'accumulo di Pt nel tessuto dell'organismo è stato determinato dall'analisi ICPMS e l'assorbimento da parte dell'organismo delle rispettive dosi è stato di 0,05, 8,7, 23,5, 59,9, 193,2 e 461,9 ng (Pt) per organismo. Inoltre, le larve di zebrafish sono state esposte a 0, 3,1, 6,2, 9,2, 12,4 mg / L di PMC79. Queste concentrazioni sono state determinate analiticamente per contenere 0, 0,17, 0,44, 0,66 e 0,76 mg/ L di Ru. Questo protocollo consentiva anche la distinzione delle concentrazioni di Pt sequestrate nel coro delle larve rispetto al tessuto del pesce zebra. Questa metodologia è stata in grado di fornire dati affidabili e solidi per il confronto dell'attività farmaco-tossicocinetica tra un chemioterapico ben consolidato e un nuovo composto. Questo metodo può essere applicato a una vasta gamma di metalli e composti a base di metalli.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AB Strain Zebrafish (Danio reri)</td>
			<td>Zebrafish International Resource Center</td>
			<td>Wild-Type AB</td>
			<td>Wild-Type AB Zebrafish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACS Grade Nitric Acid</td>
			<td>VWR BDH Chemicals</td>
			<td>BDH3130-2.5LP</td>
			<td>Nitric Acid (68-70%); used to make 10% HNO3 acid-bath solution for soaking/pre-celaning centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquatox Fish Diet (Flake)</td>
			<td>Zeigler Bros, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Flake food to be mixed in a 1:4 ratio of Aquatox Fish Diet to TetraMin Tropical Flakes and used as feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artemia cysts, brine shrimp</td>
			<td>PentairAES</td>
			<td>BS90</td>
			<td>Brine shrimp eggs sold in 15-ozz, vacuum-packed cans to be hatched and used as feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ASX-510 Autosampler for ICPMS</td>
			<td>Teledyne CETAC</td>
			<td></td>
			<td>Automatic sampler with conifgurable XYZ movement, flowing rinse station, and 0.3 mm inner dimension probe. Compatible with Nu AttoLab software for programmable batch analyses.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CL 2</td>
			<td>Thermo Scientific CL 2 compact benchtop centrifuge with variable speed range up to 5200 rpm; used to bring sample and acid condensate to the bottom of the centrifuge tube bewteen microwave digestion intervals; aids in sample retention</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-105</td>
			<td>Ultra high performance polypropylene centrifuge tubes with flat cap; 15 mL volume; leak-proof with conical bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class A Clear Glass Threaded Vials</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>03-339-25B</td>
			<td>Individual glass vials for exposure containment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Solvent or vehicle for hydrophobic compounds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixed Speed Vortex Mixer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-834</td>
			<td>Vortex mixer; used to homogenize sample after acid digestion and dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Purity Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Merk KGaA, EDM Millipore</td>
			<td>1.07298.0250</td>
			<td>Suprapur Hydrogen peroxide (30%); used for sample digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Purity Nitric Acid</td>
			<td>EDM Millipore</td>
			<td>NX0408-2</td>
			<td>Omni Trace Ultra Nitric Acid (69%); used for sample digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Spectrum Brands, Inc.</td>
			<td>Instant Ocean&#174; Sea Salt</td>
			<td>Egg water solution contains instand ocean sea salt with a final concentration of 60 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mars X Microwave Digestion System</td>
			<td>CEM, Matthews, NC</td>
			<td></td>
			<td>Microwave acid digestion system used to digest and homogenize samples under uniform conditions. For this methodology the open vessel digestion method was completed using single-use polypropylene centrifuge tubes at low power (300 W).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-element Solution 3</td>
			<td>SPEX CertiPREP</td>
			<td>CLMS-3</td>
			<td>Contains 10 mg/L Au, Hf, Ir, Pd, Pt, Fu, Sb, Sr, Te, Sn in 10% HCl/1% HNO3; used as a quality control standard for Pt and Ru analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nu Instruments AttoM High Resolution Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometer (HR-ICP-MS)</td>
			<td>Nu Instruments/Amatek</td>
			<td></td>
			<td>Double focussing magnetic sector inductively coupled plasma mass spectrometer with flexible low to high resolution slit system, and dynamic range detector system. Data processing and quantification is done using NuQuant companion software.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum (Pt) standard solution, NIST 3140</td>
			<td>National Institute of Standards and Technology</td>
			<td>3140</td>
			<td>Prepared from ampoule containing 9.996 mg/g Pt in 10% HCl; ; used as a quality control standard for Pt analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum (Pt) standard solution, single-element</td>
			<td>High Purity Standards</td>
			<td>100040-2</td>
			<td>Contains 1000 mg/L Pt in 5% HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ruthenium (Ru) standard solution, single-element</td>
			<td>High Purity Standards</td>
			<td>100046-2</td>
			<td>Contains 1000 mg/L Ru in 2% HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TetraMin Tropical Flakes</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>77101</td>
			<td>Flake food to be mixed in a 1:4 ratio of Aquatox Fish Diet to TetraMin Tropical Flakes and used as feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trace Metal Grade Nitric Acid</td>
			<td>VWR BDH Chemicals</td>
			<td>87003-261</td>
			<td>Aristar Plus Nitric Acid (67-70%); used for rinse solution in ASX-510 Autosampler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic water bath</td>
			<td>VWR</td>
			<td>B2500A-DTH</td>
			<td>Ultrasonic water bath used to aid in acid digestion prior to microwave digestion</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dose uptake of platinum- and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications

I metalli e i composti a base di metalli comprendono molteplici xenobiotici farmacoattivi e tossicologici. Dalla tossicità dei metalli pesanti ai chemioterapici, la tossicocinetica di questi composti ha rilevanza sia storica che moderna. I pesci zebra sono diventati un organismo modello attraente nel chiarire la farmacocinetica e la tossicocinetica negli studi di esposizione ambientale e traduzione clinica. Sebbene gli studi sui pesci zebra abbiano il vantaggio di avere un rendimento più elevato rispetto ai modelli di roditori, ci sono diversi vincoli significativi al modello.
Una di queste limitazioni è inerente al regime di dosaggio a base acquosa. Le concentrazioni di acqua da questi studi non possono essere estrapolate per fornire dosaggi interni affidabili. Le misurazioni dirette dei composti a base di metalli consentono una migliore correlazione con le risposte molecolari e biologiche correlate ai composti. Per superare questa limitazione per i metalli e i composti a base di metalli, è stata sviluppata una tecnica per digerire il tessuto larvale del pesce zebra dopo l'esposizione e quantificare le concentrazioni di metalli all'interno dei campioni di tessuto mediante spettrometria di massa al plasma accoppiato induttivamente (ICPMS).
I metodi ICPMS sono stati utilizzati per determinare le concentrazioni metalliche di platino (Pt) da cisplatino e rutenio (Ru) da diversi nuovi chemioterapici a base di Ru nel tessuto zebrafish. Inoltre, questo protocollo distingueva le concentrazioni di Pt che venivano sequestrate nel coro della larva rispetto al tessuto del pesce zebra. Questi risultati indicano che questo metodo può essere applicato per quantificare la dose di metallo presente nei tessuti larvali. Inoltre, questo metodo può essere adattato per identificare metalli specifici o composti a base di metalli in una vasta gamma di studi di esposizione e dosaggio.

Questi risultati sono stati precedentemente pubblicati24. Sono stati condotti studi sull'assorbimento dei tessuti con esposizioni trasmesse dall'acqua di cisplatino e un nuovo composto antitumorale a base di Ru, PMC79. La letalità e la schiusa ritardata sono state valutate per le concentrazioni nominali di cisplatino 0, 3,75, 7,5, 15, 30 e 60 mg/L di cisplatino. L'accumulo di Pt nel tessuto dell'organismo è stato determinato mediante analisi ICPMS e il tessuto dell'organismo conteneva le rispett...

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Dose Uptake of Platinum- and Ruthenium-based Compound Exposure in Zebrafish by Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry with Broader Applications

L'aumento del tasso di analisi farmaco-e tossicocinetiche di metalli e composti a base di metalli nel pesce zebra può essere vantaggioso per gli studi di traduzione ambientale e clinica. La limitazione dell'assorbimento sconosciuto dell'esposizione all'acqua è stata superata conducendo analisi di metalli in tracce su tessuto zebrafish digerito utilizzando la spettrometria di massa al plasma accoppiata induttivamente.

Assorbimento della dose dell'esposizione a composti a base di platino e rutenio in Zebrafish mediante spettrometria di massa al plasma accoppiato induttivamente con applicazioni più ampie

Metals and metal-based compounds comprise multifarious pharmaco-active and toxicological xenobiotics. From heavy metal toxicity to chemotherapeutics, the ...

I pesci zebra sono un modello attraente, ma gli scienziati non sanno quanto l'organismo stia assorbendo con il dosaggio per via d'acqua. Abbiamo sviluppato una tecnica per digerire il tessuto dopo l'esposizione e quantificare i metalli tramite ICPMS. Questa tecnica ci consente di quantificare e convalidare con precisione la risposta alla dose utilizzando ICPMS.Questo metodo ha un grande potenziale. Le esposizioni farmacologiche o ambientali ai metalli possono essere applicate dal livello cellulare fino a interi sistemi di organi in modelli animali. Aggiungere circa 0,25 millilitri di acido nitrico ad alta purezza ai tubi della centrifuga in polipropilene da 15 millilitri per un massimo di 10 larve.Ultrasuoni per un'ora per predigestare i campioni. Per l'ultrasonicazione, eseguire brevi cicli di digestione dei tessuti con intervalli di cinque minuti in un digestore a microonde sicuro per l'acido fino a quando tutto il tessuto è visibilmente ossidato, producendo una soluzione gialla uniforme e chiara. Monitorare attentamente l'integrità dei tubi per evitare rotture e condurre brevi giri nella centrifuga tra un ciclo e l'altro.Una volta che il tessuto è visibilmente ossidato, diluire i campioni in una cappa aspirante al 3,5% di acido nitrico usando 6,75 millilitri di acqua ad alta purezza e vortice per mescolare accuratamente. Quindi condurre una curva di calibrazione a 7 punti abbinata alla matrice per tenere conto di eventuali potenziali interferenze isobariche. Utilizzando una concentrazione di stock dello standard elementare certificato acquoso, prendere un'aliquota di 0,1 millilitri e per pipetto in un nuovo tubo centrifugo da 15 millilitri.Diluire con acido nitrico al 3,5% per un volume finale di 10 millilitri per produrre 10 parti per miliardo di soluzioni standard. Utilizzando le 10 parti per miliardo di stock, effettuare le diluizioni seriali 0,1, 1,0 e 5,0 parti per miliardo di soluzioni standard in acido nitrico al 3,5%. Utilizzando lo stock 0.1, effettuare le diluizioni seriali 0.001, 0.005 e 0.01 parti per miliardo di soluzioni standard in acido nitrico al 3,5%.Quindi, prima di preparare lo strumento ICPMS per l'analisi del campione, assicurarsi che la valvola del gas argon sia aperta, che tutti i tubi siano collegati e puliti in modo sicuro, che l'acido nitrico al 5% sia aperto per il risciacquo di tubi e bicchieri tra le analisi dei campioni. Controllare le condizioni della torcia e dei coni e assicurarsi che la scatola della torcia sia saldamente bloccata. E il tubo di drenaggio della camera di spruzzatura è collegato correttamente alla peripompa.Aprire il software, controllare le letture del vuoto e assicurarsi che tutte le turbopompe funzionino al 100% Fare clic su START nella finestra di stato del sistema di controllo al plasma per avviare la sequenza di avvio. Accendere la pompa al plasma e il refrigeratore al plasma, appollaiare il nebulizzatore e accendere il plasma. Attendere che il plasma sia acceso e stabile quando la finestra Stato indica che la sequenza di avvio è completa.A questo punto, osserva i punti verdi sulla finestra dello stato del sistema che indicano che tutti gli alimentatori sono accesi. Nella barra dei menu, fai clic su Controllo, Autocampionatore nel menu a discesa. Inserire la posizione del rack dell'autocampionatore per il tubo contenente il 5% di acido nitrico, consentire all'acido di entrare nel plasma.Nella barra dei menu, fai clic su Scansioni, Magnete nel menu a discesa. Nella finestra MagnetScan, digitare 115 nella posizione di massa del marcatore e fare clic su Invio. Lasciare che il magnete esegua la scansione attraverso l'intervallo di massa per 30 minuti mentre lo strumento si riscalda.Dopo 30 minuti, utilizzare il controllo autocampionatore per spostarsi nella posizione di una soluzione di ottimizzazione multielemento di una parte per miliardo. Aspirare la soluzione di accordatura e sintonizzare lo strumento per ottimizzare la lettura del segnale. Regolare la posizione della torcia per le coordinate X, Y, Z, in modo che la torcia si allinei con il centro dei coni e la portata del nebulizzatore nella finestra Controllo plasma.Effettuare le regolazioni necessarie nella finestra Sintonizzazione ottica ionica per sorgente, rilevatore e analizzatore. Una volta ottimizzata la lettura del segnale, fare clic su Stop nella finestra Scansione magnete, fare clic su Calibra magnete e selezionare una bassa risoluzione nella finestra popup. Fare clic su OK e aprire il file smc di calibrazione di massa per calibrare il magnete.Fare clic su Salva, Usa per applicare la calibrazione del magnete corrente alle analisi. Quando si misurano campioni sconosciuti con una vasta gamma di concentrazioni, eseguire una calibrazione del rilevatore per confrontare i segnali di conteggio degli impulsi ionici a basse concentrazioni con segnali ionici attenuati prodotti a concentrazioni più elevate. Avviare l'analisi del campione facendo clic su Acquisizione dati, quindi fare clic su Impostazione metodo nel menu a discesa.Utilizzare un metodo esistente fornito dal produttore o creare un metodo basato sugli elementi di interesse. Se necessario, regolare la modalità di analisi, il tempo di permanenza, il ritardo dell'interruttore, il numero di sweep e cicli, la risoluzione, la modalità di rilevamento e la massa del parco per le impostazioni del deflettore. Fare clic su Salva per registrare le impostazioni del metodo.Ottimizzare i parametri per ogni metallo e isotipo. Nella barra dei menu, fare clic su Acquisizione dati. Fare clic su Esecuzione batch nel menu a discesa.In alternativa, fare clic sull'icona BATCH sotto la barra dei menu, importare i parametri batch da un foglio di calcolo o creare una sequenza nella finestra Esecuzione batch. Immettere il tipo di campione, la posizione del rack dell'autocampionatore, il tempo di trasferimento, il tempo di lavaggio, le repliche, l'ID campione e il file di metodo. Disporre l'esecuzione del batch per soluzioni standard per la curva di calibrazione, seguita da uno standard di controllo qualità, quindi campioni sconosciuti.Monitora la deriva dello strumento e la riproducibilità del campione includendo uno standard di controllo qualità di 0,5 parti per miliardo ogni 5-10 campioni. Sono stati condotti studi sull'assorbimento dei tessuti con esposizioni a base acquosa di cisplatino e un nuovo composto antitumorale a base di rutenio PMC79. La letalità e la schiusa ritardata sono state valutate per le concentrazioni nominali di cisplatino.0, 3,75, 7,5 15, 30 e 60 milligrammi per litro di cisplatino. L'accumulo di platino nel tessuto dell'organismo è stato determinato dall'analisi ICPMS e il tessuto dell'organismo conteneva rispettive dosi di 0,05, 8,7, 23,5, 59,9, 193,2 e 461,9 nanogrammi per organismo. La schiusa ritardata è stata osservata a tutte le concentrazioni di cisplatino.Dopo la deconionezione, i cori sono stati raccolti e analizzati separatamente per il platino. Dosi non letali di cisplatino utilizzate per studi di decoernia hanno determinato che dal 93 al 96% della dose totale di cisplatino erogata si era accumulata nel corion, con la dose rimanente all'interno del tessuto larvale. Le larve di zebrafish sono state esposte a 0, 3,1, 6,2, 9,2 e 12,4 milligrammi per litro di PMC79.Queste concentrazioni sono state determinate analiticamente per contenere 0, 0,17, 0,44, 0,66 e 0,76 milligrammi per litro di rutenio. A differenza di questo cisplatino, la schiusa ritardata non è stata osservata nelle larve esposte a PMC79. I corioni non sono stati inclusi nell'analisi del rutenio in quanto si degradavano naturalmente prima della raccolta larvale.Il metallo massiccio all'interno dei tessuti larvali analizzati ad ogni concentrazione era di 0,19, 0,41 e 0,68 nanogrammi di rutenio per larva. Tutti i reagenti aggiunti al protocollo di esposizione danno il potenziale per interferenze isobariche. Quando possibile, prendere in considerazione alternative come il raffreddamento rapido rispetto alla tricaina.Questo metodo consente di quantificare la dose di metallo per tossicità, efficacia, esperimenti da confrontare tra vertebrati superiori. Eravamo particolarmente entusiasti del fatto che la nostra dose soglia fosse entro un ordine di grandezza somministrato ai pazienti.

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