Name: a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation
Uploaded: 2023-01-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation at JoVE.com

我们要感谢Randall Raish出色的摄像和编辑协助。

这项研究是根据妙佑医疗国际机构动物护理和使用委员会 （IACUC） 进行的。BalbC小鼠（10-12周龄）用作供体，C57 / BL6小鼠（10-12周龄）用作受体，因为它们的主要组织相容性复合体H-2Db和H-2Kb分别在免疫学上不相容，因此可以进一步研究对移植物的免疫反应。手术期间使用的所有器械都进行了灭菌（见补充图 S1 和 补充图S2），并且根据IACUC说明在整个方案中保持手术区域无?...

<ol>
	<li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up.">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).</li><li>Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+psychosocial+consequences+of+total+laryngectomy.">Physical and psychosocial consequences of total laryngectomy.</a> Clinical Otolaryngology. 15 (5), 421-425 (1990).</li><li>Heyes, R., Iarocci, A., Tchoukalova, Y., Lott, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+role+of+mesenchymal+stem+cell+therapy+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Immunomodulatory role of mesenchymal stem cell therapy in vascularized composite allotransplantation.</a> Journal of Transplantation. 2016, (2016).</li><li>Kluyskens, P., Ringoir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follow-up+of+a+human+larynx+transplantation.">Follow-up of a human larynx transplantation.</a> Laryngoscope. 80 (8), 1244-1250 (1970).</li><li>Krishnan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+status+of+human+laryngeal+transplantation+in+2017:+A+state+of+the+field+review.">The current status of human laryngeal transplantation in 2017: A state of the field review.</a> Laryngoscope. 127 (8), 1861-1868 (2017).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), 950-953 (1992).</li><li>Lorenz, R. R., Dan, O., Nelson, M., Fritz, M. A., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+laryngeal+transplant+model:+technical+advancements+and+a+redefined+rejection+grading+system.">Rat laryngeal transplant model: technical advancements and a redefined rejection grading system.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 111 (12), 1120-1127 (2002).</li><li>Shipchandler, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+mouse+model+for+studying+laryngeal+transplantation.">New mouse model for studying laryngeal transplantation.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 118 (6), 465-468 (2009).</li><li>Strome, M., Wu, J., Strome, S., Brodsky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+preservation+techniques+in+a+vascularized+rat+laryngeal+transplant+model.">A comparison of preservation techniques in a vascularized rat laryngeal transplant model.</a> The Laryngoscope. 104 (6), 666-668 (1994).</li><li>Nocini, R., Molteni, G., Mattiuzzi, C., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updates+on+larynx+cancer+epidemiology.">Updates on larynx cancer epidemiology.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 32 (1), 18-25 (2020).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), (1992).</li><li>Work, W. P., Boles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larynx:+Replantation+in+the+dog.">Larynx: Replantation in the dog.</a> Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 82 (4), 401-402 (1965).</li><li>Birchall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+for+experimental+revascularized+laryngeal+allotransplantation.">Model for experimental revascularized laryngeal allotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 89 (11), 1470-1475 (2002).</li><li>Nakai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+laryngeal+transplantation+with+normal+circulation+maintained+by+combination+with+the+tongue.">Rat model of laryngeal transplantation with normal circulation maintained by combination with the tongue.</a> Microsurgery. 23 (2), 135-140 (2003).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+laryngeal+allograft+survival+using+low-dose+everolimus.">Long-term laryngeal allograft survival using low-dose everolimus.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 142 (1), 72-78 (2010).</li><li>Lott, D. G., Russell, J. O., Khariwala, S. S., Dan, O., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten-month+laryngeal+allograft+survival+with+use+of+pulsed+everolimus+and+anti-&#945;&#946;+T-cell+receptor+antibody+immunosuppression.">Ten-month laryngeal allograft survival with use of pulsed everolimus and anti-&#945;&#946; T-cell receptor antibody immunosuppression.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 120 (2), 131-136 (2011).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoy+NF-&#954;B+fortified+immature+dendritic+cells+maintain+laryngeal+allograft+integrity+and+provide+enhancement+of+regulatory+T+cells.">Decoy NF-&#954;B fortified immature dendritic cells maintain laryngeal allograft integrity and provide enhancement of regulatory T cells.</a> The Laryngoscope. 120 (1), 44-52 (2010).</li></ol>

在过去的三十年中，喉癌的发病率和患病率分别增加了12%和24%，其中许多患者接受了喉切除术进行治疗10。这种手术会显着恶化一个人的生活质量，因此需要替代治疗。喉部血管化复合同种异体移植可以改善患者的呼吸和说话能力;然而，在该技术可用于临床上该患者群体之前，仍需要进行研究。本文提供了一种具有成本效益的喉移植小鼠模型，可以研究各种免疫抑制方案。
<p...

对于患有无法修复的喉损伤或喉癌的患者，全喉切除术通常是唯一的选择1.全喉切除术使患者除了经历社会和心理困扰外，还无法自行呼吸和说话2.需要全喉切除术的喉癌患者是喉移植的绝佳潜在候选人。虽然已经在喉损伤无法弥补的情况下进行了人喉移植，但由于担心肿瘤复发、慢性排斥反应的可能性和供体来源的感染，目前这些患者避免进行喉部同种异体移植3。免疫抑制是这些问题的主要原因。常规免疫抑制治疗后，首例部分喉移植患者因肿瘤复发而急剧丢失，这证明在喉癌患者进一步尝试移植之前，应设计适当的免疫抑制方案4，5。
为了更好地了解宿主对移植喉的免疫反应，Strome于1992年开发了第一个大鼠喉移植模型，并于2002年对手术技术进行了改进6，7。尽管该模型对研究喉移植有效，但由于缺乏大鼠特异性免疫制剂以及与大鼠模型相关的较高成本，导致在2009年开发了用于研究喉移植的新小鼠模型8。
所述技术的主要应用是研究喉移植中的不同免疫抑制药物方案。改善目前的免疫抑制疗法可能会扩大候选库，并导致癌症患者的安全移植。该小鼠模型的优点是其成本效益以及免疫学数据和试剂的广泛可用性。
研究喉移植免疫抑制治疗方案的团队可以使用这种方法收集大量的免疫学数据，并且可以快速测试和比较不同的药物方案。其他可以调节对移植免疫反应的潜在治疗方式，例如干细胞注射，也可以使用该模型进行测试。最后，可以通过延长随访期来观察喉移植的长期全身效应。
这里描述的技术使用端对侧吻合为异位喉移植物提供动脉和静脉血流。移植物是一种喉气管食管 （LTE） 复合体，包括供体的喉、甲状腺、甲状旁腺、气管和食道，双侧颈动脉和椎弓根完好无损。一条供体颈动脉吻合到受者颈动脉并提供动脉血流，而另一条供体颈动脉与受体颈外静脉吻合并提供静脉血流（图1）。
对大鼠模型的手术技术进行了一些修改，以确保小鼠模型的成功。例如，使用吸入麻醉剂代替注射剂，以增加对麻醉深度的控制并减少并发症。连续缝合用于大鼠的动脉 - 动脉吻合术;然而，由于小鼠血管的尺寸较小，这在技术上是困难的，并且可能导致血管管腔7变窄。因此，在小鼠模型中使用中断缝合线，并改善血管通畅性。此外，在大鼠模型中，甲状腺上动脉（STA）椎弓根被解剖并可视化。鉴于小鼠中STA的尺寸较小，这种解剖可能导致STA的损伤甚至横断。因此，它不会在鼠标模型中剖析。相反，附近的筋膜被保留以确保 STA 保持完整。
该技术的主要潜在缺陷包括损坏供体LTE复合椎弓根，进行尺寸不正确的动脉切开术或静脉切开术，吻合部位的血管闭塞或在吻合部位留下可能导致出血的间隙。为避免这些失误，在获取供体移植物时必须小心，在STA椎弓根周围留下一束组织。动脉切开术和静脉切开术应足够大以允许血液流动，但又应足够小以防止渗漏。吻合缝应使用适当数量的缝合线以缝合任何间隙，但不要太多以阻塞血管。
如果熟悉显微外科技术，该过程可以在大约3小时内进行。这种喉移植模型可以在小鼠中可靠地进行，并用于研究血管化复合同种异体移植后的宿主免疫反应。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#1 Paperclips</td>
			<td>Staples</td>
			<td>OP-7404</td>
			<td>Clips are shaped manually to be used as retractors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc Insulin Syringes&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>329412</td>
			<td>27 G 5/8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2870G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G Precision Glide Needle</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>305125</td>
			<td>1 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Luer-Lok Tip Syringe</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Sterile Standard Blunt Needles</td>
			<td>Cellink</td>
			<td>NZ5300505001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Monocryl Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y822G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td>Straight, 1 x 2 teeth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adventitia scissors</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>SAS-10</td>
			<td>19 mm, 10 cm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00109-11</td>
			<td>45/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment</td>
			<td>Akorn Animal Health</td>
			<td>59399-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandaid Fabric Fingertip</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>299399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution Swabsticks</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-153-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex Injection</td>
			<td>CIII</td>
			<td>12495-0757-1</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applying forceps without lock</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.CAF5</td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>10806-001-PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermabond Mini</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>315999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Boards</td>
			<td>Mopec</td>
			<td>22-444-314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Sterile Disposable Petri Dish&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25373-041</td>
			<td>35 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scisssors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14029-10</td>
			<td>Curved Sharp-Blunt 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golden A5 2-Speed Blade Clipper&#160;</td>
			<td>Oster</td>
			<td>008OST-78005-140</td>
			<td>#10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Sensitive Formula</td>
			<td>Nair</td>
			<td>2260000033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin&#160;</td>
			<td>Meitheal Pharmaceuticals</td>
			<td>71288-4O2-10</td>
			<td>10,000 USP units per 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>66794-013-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Temp Micro Fine Tip Cautery</td>
			<td>Bovie Medical</td>
			<td>AA90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercian Visibility Background Material</td>
			<td>Synovis Micro Companies</td>
			<td>VB3</td>
			<td>Green</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular Approximator Clamp without Frame</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11V</td>
			<td>0.4-1 mm Vessel Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse face mask kit</td>
			<td>Xenotec</td>
			<td>XRK-S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>C-14 W</td>
			<td>5.5&#34;, 8 mm, 0.4 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Press n&#39; Seal</td>
			<td>Glad</td>
			<td>70441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA210</td>
			<td>10 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Mini Vessel Clamp</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11M</td>
			<td>.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Drape Sheets</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>DYN4410-CASE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze Pads</td>
			<td>Dukal</td>
			<td>1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline&#160;</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>236173</td>
			<td>NaCl 0.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>851_A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00108-11</td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.JFLP3</td>
			<td>13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Pattern Scissors&#160;</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.SDC15RV</td>
			<td>15 cm, 8 mm, curved 7mm blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-10</td>
			<td>3 mm cutting edge, curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator Tip&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00126-11</td>
			<td>Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator, Classic line</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>D-5a.3 W</td>
			<td>9 mm, 0.3 mm, angled 10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation

喉异位移植虽然在技术上具有挑战性，但与其他动物模型相比，它提供了更多的科学分析和成本效益。虽然Shipchandler等人在2009年首次描述了这项技术，但这种技术并未被广泛使用，可能是由于学习显微外科技术的困难和掌握它所需的时间。本文详细描述了手术步骤，以及需要避免的潜在陷阱，以鼓励有效使用该技术。
在该模型中，供体喉的双侧颈动脉与受体颈动脉和颈外静脉吻合，允许血液流经移植物。术中可通过观察移植物双侧颈动脉充血、移植物甲状腺变红以及移植物微血管出血来确认血流。成功的关键因素包括精细保存移植血管，进行正确大小的动脉切开术和静脉切开术，以及在动脉-动脉和动脉-静脉吻合上使用适当数量的缝合线，以固定血管而不会渗漏并防止闭塞。 
任何人都可以通过足够的培训精通该模型，并在大约 3 小时内执行该过程。如果成功执行，该模型可以轻松且低成本地进行免疫学研究。

确认移植成功 使用上述协议，可以通过观察取下血管夹后供体颈动脉的脉动来评估流向LTE复合体的血流量。脉动通常是可见的，供体动脉的立即红色确认活跃的血流（图4A）。如果吻合无效，动脉将不会有搏动，看起来部分塌陷，颜色苍白（图4B）。
确认动脉通畅的另一种技术是在移除夹子后寻找供体甲状腺的颜色?...

Watch this Scientific Journal Video about A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation at JoVE.com

A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation

本手稿的目的是描述在小鼠中进行异位喉移植所需的显微外科步骤。与其他喉移植动物模型相比，该小鼠模型的优势在于其成本效益以及免疫学测定和数据的可用性。

用于研究喉移植的异位小鼠模型

Laryngeal heterotopic transplantation, although a technically challenging procedure, offers more scientific analysis and cost benefits compared to other ...

在小鼠和大鼠中描述了喉移植模型。Senior alter之前的工作重点是设计一种更有效的方法，使用供体颈动脉进行吻合，避免解剖甲状腺上动脉的需要。在本视频中，我们在小鼠中描述了此过程。这种小鼠喉移植模型可以轻松、低成本地进行免疫学研究。尽管与大鼠模型相比，由于血管尺寸较小，因此在技术上更具挑战性，但如果熟悉手术步骤，该过程可以在大约三个小时内完成。动物完全麻醉后，将小鼠转移到剃须区域，其中1.5%异氟醚每分钟一升氧气流量将通过面罩输送以维持麻醉。用脚趾捏确认麻醉深度。将鼠标的胸部和颈部剃到下颌线，并涂抹脱毛霜。30秒后，擦去乳膏并将鼠标转移到手术区域。固定小鼠并用聚维酮碘和酒精准备手术区域三次，然后悬垂小鼠。做一个小的水平切口，刚好优于胸骨上切口。使用细剪刀，通过该切口将皮肤双侧抬高至下颌骨，并切除梯形皮肤段。使用上部的烧灼术切除双侧唾液腺，其中可以看到穿过腺体的小静脉。从周围组织中解剖双侧胸锁乳突肌并将其横向缩回。在带状肌肉上做一个中线切口，并双侧切除它们，注意不要损坏下面的甲状腺并将其留在喉气管食管或LTE复合体上。完成此步骤后，可见双侧颈动脉。将颈总动脉圆周解剖至锁骨下部水平，上部至颈动脉分叉水平。迷走神经和颈内静脉从颈动脉中分离出来，不包括在购买的移植物中。解剖颈内动脉和颈外动脉，使其能够结扎和分裂。使用10-0尼龙缝合线，结扎颈内动脉比颈动脉分叉高2至3毫米。结扎颈外动脉至少比甲状腺上动脉分支点高三毫米，并在胸骨水平结扎颈总动脉。双侧切断所有结扎血管。将血管蒂放在LTE复合体的顶部，以避免在进一步解剖过程中意外损坏。为防止任何气体泄漏或麻醉意外丢失，请确保动物在进行任何气道切割之前已过期。将气管横断到第五气管环下方，并将切口穿过食道向下传递到椎前筋膜，以释放下部LTE复合体。将气管和食道从下层到上层的椎前筋膜中释放出来。创建一个仅次于舌骨的前咽切除术。将切口向下带到椎前筋膜，以释放LTE复合体。在LTE复合物和周围组织之间分割任何剩余的淋巴或结缔组织附着物。最后，去除移植物。将获得的移植物放入无菌培养皿中，并用生理盐水洗涤以去除任何血凝块。使用一毫米微扩张器扩张双侧颈动脉。使用 30 号钝尖针，在每个颈动脉中注射约 2 毫升肝素化盐水以冲洗移植物。可以看到血液和盐水从对侧颈动脉和小游离血管末端冲洗出来，确认甲状腺上动脉完整。移植物可以留在肝素化的盐水中，在将其移植到受体之前可以短暂休息长达三个小时。在麻醉诱导、剃须和手术准备步骤之后，以与供体描述的完全相同的方式准备受体小鼠。在手术开始前30分钟皮下注射受体小鼠缓释镇痛药。使用手术刀，做一个中线颈部切口，从下颌线向上延伸到胸骨下部。抬高左侧的皮肤并横向缩回。如前所述，切除烧灼上血管的左侧唾液腺。通过用低温烧灼分隔任何可见血管来切除脂肪和淋巴组织。注意不要损伤下面的颈外静脉。沿颈外静脉圆周解剖。使用至少 5 毫米净长的血管进行吻合。解剖胸骨瘤肌并将其横向缩回。从锁骨下到颈动脉上部颈动脉分叉的圆周解剖。将背景材料传递到颈外静脉下，并应用双近似 B-3 血管夹。将 10-0 尼龙缝合线穿过颈外静脉前壁的所需单体切合处，并使用缝合线向前拉动血管。用微型剪刀切到缝合线深处，以促进创建适当大小的单缝静脉切开术，并确保切口完全穿过静脉壁。使用 30 号钝尖针，用肝素化盐水冲洗静脉内部。将供体LTE复合物放置在受者左颈动脉和左颈外静脉之间。将供体左颈动脉的自由端对准接受者的左颈外静脉，并使用锋利的剪刀将末端倾斜。使用四条10-0尼龙中断缝合线，以端到端的方式吻合供体左颈动脉和受体左颈外静脉。将背景材料滑动到受体颈总动脉下方，并应用双近似A-3血管夹。以与静脉切开术相同的方式创建动脉切开术。将供体右颈动脉以端到端的方式吻合到受体左颈动脉。使用六条10-0尼龙的断续缝合线是动脉吻合的理想选择。取下静脉侧的夹子。如果遇到出血，请用棉尖轻轻按压。取下动脉上的夹子，立即用棉尖轻轻按压。预计该步骤会有一些出血，通常在一分钟后以温和的压力停止。检查静脉动脉血流的完整性。在动脉血流完整的情况下，通常可以看到供体颈动脉的搏动，供体甲状腺将从其冲洗的透明颜色变回其原始的红色。还可以观察到LTE复合体上小型船只的红色。以运行方式用5-0单丝缝合线关闭皮肤切口。在切口上涂上皮肤粘合剂。皮下注射一毫升温盐水，以解决手术期间的液体流失。停止麻醉并将鼠标转移到恢复笼中。在加热垫上观察鼠标，直到它完全清醒以避免体温过低。取下血管夹后可立即评估手术成功与否。图A是成功手术的代表，因为可以在供体喉的颈动脉中可视化血流，甲状腺变成红色。图B是手术失败的代表，因为供体喉的颈动脉中无法看到血流，甲状腺仍然苍白。在没有免疫抑制的情况下15天后，大多数受者没有血液流向移植。通过解剖周围受体组织的喉气管复合体并观察端对侧吻合术，可以通过肉眼评估动脉的通畅性。谢谢。观看此视频后，您应该了解如何在大约三个小时内将喉气管食管复合物从一只小鼠异位移植到另一只小鼠。这种可行且相对低成本的模型在研究免疫系统在排斥喉气管复合物中的作用方面具有巨大的潜力，从而为器官移植的新疗法提供了潜力。

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

一个小鼠模型在子宫内移植

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

科研

医学

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

对于异位小鼠心脏移植技术的一种改进方法

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

小鼠异位心脏移植技术

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

肺动脉瓣使用异位心脏移植小鼠模型移植

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

颈椎异位心脏移植小鼠

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

一种新的显微模型异位，整块胸壁，胸腺，和心脏移植小鼠

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

应用改良袖套技术的小鼠胰腺移植模型

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

血管化异位脾移植小鼠模型在脾细胞生物学和移植免疫研究中的应用

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

啮齿动物异位心脏瓣膜移植的简化模型

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

一种猪异位心脏移植方案，用于向心脏同种异体移植物提供治疗药物

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...