Name: a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation
Uploaded: 2023-01-13T12:30:00
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ランドール・レイシュの優れたビデオ撮影と編集支援に感謝します。

この研究は、メイヨークリニックの施設動物管理および使用委員会(IACUC)に準拠して実施されました。BalbCマウス(10-12週齢)をドナーとして使用し、C57/BL6マウス(10-12週齢)をレシピエントとして使用したのは、それらの主要な組織適合遺伝子複合体であるH-2DbおよびH-2Kbがそれぞれ免疫学的に不適合であり、したがって移植片に対する免疫応答をさらに研究することができるためである。手術中に...

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	<li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up.">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).</li><li>Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+psychosocial+consequences+of+total+laryngectomy.">Physical and psychosocial consequences of total laryngectomy.</a> Clinical Otolaryngology. 15 (5), 421-425 (1990).</li><li>Heyes, R., Iarocci, A., Tchoukalova, Y., Lott, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+role+of+mesenchymal+stem+cell+therapy+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Immunomodulatory role of mesenchymal stem cell therapy in vascularized composite allotransplantation.</a> Journal of Transplantation. 2016, (2016).</li><li>Kluyskens, P., Ringoir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follow-up+of+a+human+larynx+transplantation.">Follow-up of a human larynx transplantation.</a> Laryngoscope. 80 (8), 1244-1250 (1970).</li><li>Krishnan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+status+of+human+laryngeal+transplantation+in+2017:+A+state+of+the+field+review.">The current status of human laryngeal transplantation in 2017: A state of the field review.</a> Laryngoscope. 127 (8), 1861-1868 (2017).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), 950-953 (1992).</li><li>Lorenz, R. R., Dan, O., Nelson, M., Fritz, M. A., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+laryngeal+transplant+model:+technical+advancements+and+a+redefined+rejection+grading+system.">Rat laryngeal transplant model: technical advancements and a redefined rejection grading system.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 111 (12), 1120-1127 (2002).</li><li>Shipchandler, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+mouse+model+for+studying+laryngeal+transplantation.">New mouse model for studying laryngeal transplantation.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 118 (6), 465-468 (2009).</li><li>Strome, M., Wu, J., Strome, S., Brodsky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+preservation+techniques+in+a+vascularized+rat+laryngeal+transplant+model.">A comparison of preservation techniques in a vascularized rat laryngeal transplant model.</a> The Laryngoscope. 104 (6), 666-668 (1994).</li><li>Nocini, R., Molteni, G., Mattiuzzi, C., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updates+on+larynx+cancer+epidemiology.">Updates on larynx cancer epidemiology.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 32 (1), 18-25 (2020).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), (1992).</li><li>Work, W. P., Boles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larynx:+Replantation+in+the+dog.">Larynx: Replantation in the dog.</a> Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 82 (4), 401-402 (1965).</li><li>Birchall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+for+experimental+revascularized+laryngeal+allotransplantation.">Model for experimental revascularized laryngeal allotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 89 (11), 1470-1475 (2002).</li><li>Nakai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+laryngeal+transplantation+with+normal+circulation+maintained+by+combination+with+the+tongue.">Rat model of laryngeal transplantation with normal circulation maintained by combination with the tongue.</a> Microsurgery. 23 (2), 135-140 (2003).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+laryngeal+allograft+survival+using+low-dose+everolimus.">Long-term laryngeal allograft survival using low-dose everolimus.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 142 (1), 72-78 (2010).</li><li>Lott, D. G., Russell, J. O., Khariwala, S. S., Dan, O., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten-month+laryngeal+allograft+survival+with+use+of+pulsed+everolimus+and+anti-&#945;&#946;+T-cell+receptor+antibody+immunosuppression.">Ten-month laryngeal allograft survival with use of pulsed everolimus and anti-&#945;&#946; T-cell receptor antibody immunosuppression.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 120 (2), 131-136 (2011).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoy+NF-&#954;B+fortified+immature+dendritic+cells+maintain+laryngeal+allograft+integrity+and+provide+enhancement+of+regulatory+T+cells.">Decoy NF-&#954;B fortified immature dendritic cells maintain laryngeal allograft integrity and provide enhancement of regulatory T cells.</a> The Laryngoscope. 120 (1), 44-52 (2010).</li></ol>

喉頭がんの発生率と有病率は、過去30年間でそれぞれ12%と24%増加しており、これらの患者の多くは治療のために喉頭切除術を受けています10。この手順は人の生活の質を著しく悪化させるため、代替治療が望まれます。喉頭の血管化複合同種移植は、患者の呼吸能力および発話能力を改善することができる。ただし、この技術をこの患者集団に臨床的に利用する前に、まだ研...

回復不能な喉頭損傷または喉頭癌に苦しむ患者にとって、喉頭全摘出術が唯一の選択肢であることがよくあります1。喉頭全摘出術は、社会的および心理的苦痛を経験することに加えて、患者を自分で呼吸して話す能力を失わせます2。喉頭全摘出術を必要とする喉頭がん患者は、喉頭移植の優れた潜在的候補です。回復不能な喉頭損傷の設定でのヒト喉頭移植が行われてきましたが、腫瘍再発の恐れ、慢性拒絶反応の可能性、およびドナー由来の感染症のために、喉頭の同種移植は現在避けられています3。免疫抑制は、これらの懸念の主な原因です。従来の免疫抑制治療後の腫瘍再発による最初の部分喉頭移植患者の劇的な喪失は、喉頭癌患者への移植をさらに試みる前に、適切な免疫抑制レジメンを考案する必要があるという証拠です4,5。
移植された喉頭に対する宿主免疫応答をよりよく理解するために、ラットにおける最初の喉頭移植モデルは1992年にStromeによって開発され、2002年に外科的技術の改良が加えられた6,7。このモデルは喉頭移植の研究に有効であるが、ラット特異的免疫剤の欠如とラットモデルに関連する高コストは、2009年に喉頭移植を研究するための新しいマウスモデルの開発につながった8。
記載された技術の主な用途は、喉頭移植における異なる免疫抑制薬レジメンを研究することである。現在の免疫抑制療法を改善することで、候補プールが広がり、がん患者の安全な移植につながる可能性があります。このマウスモデルの利点は、その費用対効果と免疫学的データと試薬の幅広い入手可能性です。
喉頭移植の免疫抑制治療レジメンに取り組んでいるチームは、この方法を使用して大量の免疫学的データを収集でき、さまざまな薬物レジメンを迅速にテストして比較できます。幹細胞注射など、移植に対する免疫応答を調節できる他の潜在的な治療法も、このモデルを使用してテストできます。最後に、追跡期間を延長することにより、喉頭移植の長期的な全身効果を観察するための実験を考案することができます。
ここで説明する技術は、端から側への吻合を使用して、異所性喉頭移植片に動脈および静脈の流れを提供します。移植片は、ドナーの喉頭、甲状腺、副甲状腺、気管、食道を含む喉頭気管食道(LTE)複合体であり、両側頸動脈と茎は無傷です。一方のドナー頸動脈はレシピエントの頸動脈に吻合されて動脈血流を提供し、もう一方のドナー頸動脈はレシピエントの外頸静脈に吻合され、静脈血流を提供します(図1)。
マウスモデルでの成功を確実にするために、ラットモデルの外科的技術にいくつかの変更が加えられました。たとえば、麻酔の深さの制御を強化し、合併症を減らすために、注射剤の代わりに吸入麻酔薬が使用されました。連続縫合は、ラットの動脈 - 動脈吻合に使用される。しかしながら、マウス血管のサイズが小さいため、これは技術的に困難であり、血管内腔の狭窄を引き起こす可能性がある7。その結果、中断された縫合糸がマウスモデルで使用され、血管の開存性が改善されます。さらに、ラットモデルでは、上甲状腺動脈(STA)茎を解剖し、視覚化します。マウスのSTAのサイズが小さいことを考えると、この解剖はSTAの損傷、さらには切断をもたらす可能性があります。その結果、マウスモデルでは解剖されない。代わりに、STAが無傷に保たれるように、近くの筋膜が保存されます。
この技術の主な潜在的な落とし穴には、ドナーLTE複雑な茎の損傷、誤ったサイズの動脈切開または静脈切開、吻合部位での血管閉塞、または出血を引き起こす可能性のある吻合部位のギャップの残しが含まれます。これらの失敗を避けるために、STA茎の周りに組織のカフを残してドナー移植片を調達するときは注意が必要です。動脈切開術と静脈切開術は、血流を可能にするのに十分な大きさである必要がありますが、漏れを防ぐのに十分小さい必要があります。吻合部が隙間を埋めるために適切な数の縫合糸を使用する必要がありますが、血管を閉塞するには多すぎないでください。
顕微手術技術に精通している場合、この手順は約3時間で実行できます。この喉頭移植モデルは、マウスで確実に実施することができ、血管新生複合同種移植後の宿主免疫応答の研究に使用できます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#1 Paperclips</td>
			<td>Staples</td>
			<td>OP-7404</td>
			<td>Clips are shaped manually to be used as retractors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc Insulin Syringes&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>329412</td>
			<td>27 G 5/8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2870G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G Precision Glide Needle</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>305125</td>
			<td>1 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Luer-Lok Tip Syringe</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Sterile Standard Blunt Needles</td>
			<td>Cellink</td>
			<td>NZ5300505001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Monocryl Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y822G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td>Straight, 1 x 2 teeth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adventitia scissors</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>SAS-10</td>
			<td>19 mm, 10 cm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00109-11</td>
			<td>45/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment</td>
			<td>Akorn Animal Health</td>
			<td>59399-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandaid Fabric Fingertip</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>299399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution Swabsticks</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-153-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex Injection</td>
			<td>CIII</td>
			<td>12495-0757-1</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applying forceps without lock</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.CAF5</td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>10806-001-PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermabond Mini</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>315999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Boards</td>
			<td>Mopec</td>
			<td>22-444-314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Sterile Disposable Petri Dish&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25373-041</td>
			<td>35 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scisssors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14029-10</td>
			<td>Curved Sharp-Blunt 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golden A5 2-Speed Blade Clipper&#160;</td>
			<td>Oster</td>
			<td>008OST-78005-140</td>
			<td>#10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Sensitive Formula</td>
			<td>Nair</td>
			<td>2260000033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin&#160;</td>
			<td>Meitheal Pharmaceuticals</td>
			<td>71288-4O2-10</td>
			<td>10,000 USP units per 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>66794-013-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Temp Micro Fine Tip Cautery</td>
			<td>Bovie Medical</td>
			<td>AA90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercian Visibility Background Material</td>
			<td>Synovis Micro Companies</td>
			<td>VB3</td>
			<td>Green</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular Approximator Clamp without Frame</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11V</td>
			<td>0.4-1 mm Vessel Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse face mask kit</td>
			<td>Xenotec</td>
			<td>XRK-S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>C-14 W</td>
			<td>5.5&#34;, 8 mm, 0.4 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Press n&#39; Seal</td>
			<td>Glad</td>
			<td>70441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA210</td>
			<td>10 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Mini Vessel Clamp</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11M</td>
			<td>.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Drape Sheets</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>DYN4410-CASE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze Pads</td>
			<td>Dukal</td>
			<td>1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline&#160;</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>236173</td>
			<td>NaCl 0.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>851_A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00108-11</td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.JFLP3</td>
			<td>13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Pattern Scissors&#160;</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.SDC15RV</td>
			<td>15 cm, 8 mm, curved 7mm blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-10</td>
			<td>3 mm cutting edge, curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator Tip&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00126-11</td>
			<td>Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator, Classic line</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>D-5a.3 W</td>
			<td>9 mm, 0.3 mm, angled 10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation

喉頭異所性移植は、技術的に困難な手順ですが、他の動物モデルと比較して、より多くの科学的分析と費用便益を提供します。2009年にShipchandlerらによって最初に記述されましたが、この技術は、おそらく顕微手術技術の習得の難しさとそれを習得するために必要な時間のために、広く使用されていません。このホワイトペーパーでは、この技術の効果的な使用を促進するために、外科的ステップと回避すべき潜在的な落とし穴について詳しく説明します。
このモデルでは、ドナー喉頭の両側頸動脈がレシピエント頸動脈と外頸静脈に吻合され、移植片を通る血流が可能になります。移植片両側頸動脈の血液充満、移植片の甲状腺の発赤、移植片の微小血管からの出血を可視化することで術中に血流を確認することができます。成功のための重要な要素には、移植血管の繊細な保存、正しいサイズの動脈切開と静脈切開の作成、動脈-動脈および動脈-静脈吻合に適切な数の縫合糸を使用して、漏れのない血管を確保し、閉塞を防ぐことが含まれます。 
十分なトレーニングを受ければ、誰でもこのモデルに習熟し、約3時間で手順を実行できます。このモデルが正常に実行されれば、免疫学的研究を簡単かつ低コストで実施することができます。

移植成功の確認 上記のプロトコルを使用して、血管クランプを取り外した後のドナー頸動脈の脈動を観察することによってLTE複合体への血流を評価することができる。脈動は通常目に見え、ドナー動脈の即時の赤い着色は活発な血流を確認します(図4A)。吻合が効果的でない場合、動脈は脈動がなく、部分的につぶれているように見え、色が薄くなります...

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A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation

この原稿の目的は、マウスで異所性喉頭移植を行うために必要な顕微手術ステップを説明することです。喉頭移植の他の動物モデルと比較したこのマウスモデルの利点は、その費用対効果と免疫学的アッセイとデータの入手可能性です。

喉頭移植研究のための異所性マウスモデル

Laryngeal heterotopic transplantation, although a technically challenging procedure, offers more scientific analysis and cost benefits compared to other ...

喉頭移植モデルは、マウスおよびラットで記載された。シニアアルターの以前の研究は、吻合のためにドナー頸動脈を使用するより効率的な方法を考案することに焦点を当て、上甲状腺動脈を解剖する必要がなくなりました。このビデオでは、マウスでこの手順について説明しました。このマウス喉頭移植モデルにより、免疫学的研究を簡単かつ低コストで実施することができます。ラットモデルに比べて血管のサイズが小さいため、技術的には困難ですが、手術手順に精通していれば、この手順は約3時間で実行できます。動物が完全に麻酔された後、マウスをシェービング領域に移し、麻酔の維持のためにフェイスマスクを介して毎分1リットルの酸素流を含む1.5%イソフルランが送達されます。つま先ピンチで麻酔の深さを確認します。マウスの胸と首を顎のラインまで剃り、脱毛クリームを塗ります。そして30秒後、クリームを拭き取り、マウスを手術領域に移します。マウスを固定し、ポビドンヨードとアルコールで手術部位を3回準備してから、マウスをドレープします。胸骨上ノッチのすぐ上に小さな水平切開を行います。細かいハサミを使用して、その切開部から下顎骨まで皮膚を両側に持ち上げ、台形の皮膚部分を切除します。両側唾液腺を切除し、腺を通過する小さな静脈が視覚化される上部で焼灼を使用します。両側胸鎖乳突筋を周囲の組織から解剖し、横方向に引っ込めます。ストラップの筋肉を正中線で切開し、下にある甲状腺を傷つけないように注意しながら両側に切除し、喉頭気管食道またはLTE複合体に残します。このステップの後、両側頸動脈が見えます。総頸動脈を下鎖骨のレベルまで、頸動脈分岐部を上方に円周方向に解剖する。迷走神経と内頸静脈は頸動脈から解剖され、調達された移植片には含まれていません。内頸動脈と外頸動脈を結紮して分裂させることができるほど十分に高く解剖します。10-0ナイロン縫合糸を使用して、頸動脈分岐部より2〜3ミリメートル優れた内頸動脈を結紮します。上甲状腺動脈の分岐点より少なくとも3ミリメートル高い外頸動脈を結睭化し、胸骨のレベルで総頸動脈を結紮する。すべての結紮血管を両側に切断します。さらなる解剖中の偶発的な損傷を避けるために、血管茎をLTE複合体の上に保ちます。ガス漏れや不注意による麻酔の喪失を防ぐために、気道を切る前に動物の有効期限が切れていることを確認してください。第5気管リングの下の気管を横断し、切開部を食道を通って椎前筋膜まで運び、LTE複合体を下方に解放します。気管と食道を下の椎骨前筋膜から下から上へと解放します。舌骨よりすぐ下の前咽頭切除術を作成します。切開部を椎前筋膜まで運び、LTE複合体を上手に解放します。LTE複合体と周囲の組織の間で残りのリンパ系または結合組織の付着物を分割します。そして最後に、移植片を取り除きます。調達した移植片を滅菌ペトリ皿に入れ、通常の生理食塩水で洗って血栓を取り除きます。1ミリメートルのマイクロ拡張器を使用して両側頸動脈を拡張します。30ゲージの先端の鈍い針を使用して、各頸動脈に約2ミリリットルのヘパリン化生理食塩水を注入して移植片を洗い流します。血液と生理食塩水が反対側の頸動脈と小さな自由血管の端から洗い流されているのが見られ、無傷の上甲状腺動脈が確認されます。移植片はヘパリン処理生理食塩水に残すことができ、レシピエントに移植する前に最大3時間短い休憩を取ることができます。麻酔導入、剃毛、および外科的準備ステップに続くドナーについて説明したのとまったく同じ方法でレシピエントマウスを準備します。レシピエントマウスに徐放性鎮痛剤を手術開始の30分前に皮下注射する。メスを使用して、顎のラインから下にある胸骨まで伸びる正中線の首の切開を行います。左側の皮膚を持ち上げ、横方向に引っ込めます。前述のように上血管を焼灼する左唾液腺を切除する。目に見える血管を低温焼灼で分割することにより、脂肪組織とリンパ組織を切除します。下にある外頸静脈を傷つけないように注意してください。外頸静脈を円周方向に解剖します。吻合のために血管の少なくとも5ミリメートルの明確な長さを使用してください。胸骨乳突筋を解剖し、横方向に引っ込めます。鎖骨から頸動脈分岐部まで総頸動脈を円周方向に解剖する。背景資料を外頸静脈の下に通し、二重近似B-3血管クランプを適用します。10-0ナイロン縫合糸を外頸静脈の前壁に通して目的の単調解術の位置に配置し、縫合糸を使用して血管を前方に引っ張ります。マイクロハサミで縫合糸まで深くカットして、適切なサイズのシングルスリット静脈切開の作成を容易にし、カットが静脈壁を完全に貫通するようにします。30ゲージの先端の鈍い針を使用して、静脈の内側をヘパリン化生理食塩水で洗い流します。ドナーLTE複合体をレシピエントの左頸動脈と左外頸静脈の間に配置します。ドナー左頸動脈の自由端をレシピエントの左外頸静脈に合わせ、鋭利なハサミを使用して端を面取りします。4本の10-0ナイロン中断縫合糸を用いて、ドナーは頸動脈を左に、レシピエントは外頸静脈を端から左右に吻合した。背景物質をレシピエントの副頸動脈の下にスライドさせ、二重近似A-3血管クランプを適用します。静脈切開と同じ方法で動脈切開を作成します。ドナー右頚動脈をレシピエント左頚動脈に端から横に吻合する。10-0ナイロンで6つの中断された縫合糸を使用することは、動脈吻合に最適です。静脈側のクランプを取り外します。出血が発生した場合は、綿の先端で穏やかな圧力をかけます。動脈のクランプを外し、すぐに綿の先端で穏やかな圧力をかけます。穏やかな圧力で通常1分後に止まるステップでいくらかの出血が予想されます。静脈内の動脈の血流の完全性を確認してください。無傷の動脈流では、通常、ドナー頸動脈の脈動が見られ、ドナー甲状腺は紅潮した透明な色から元の赤みがかった色に戻ります。LTE複合体上の小血管の赤い着色も観察することができます。ランニング方式で5-0モノフィラメント縫合糸で皮膚切開を閉じます。切開部に皮膚接着剤を塗布します。手術中の体液損失を考慮して、1ミリリットルの温かい生理食塩水を皮下注射します。麻酔を停止し、マウスを回復ケージに移します。低体温症を避けるために、完全に目覚めるまで加熱パッドでマウスを観察します。外科的成功は、血管クランプを取り外した直後に評価することができる。図Aは、ドナー喉頭の頸動脈に血流が可視化され、甲状腺が赤くなったため、手術の成功を表しています。図Bは、ドナー喉頭の頸動脈の血流を視覚化できず、甲状腺が青白いままであったため、失敗した手術を表しています。免疫抑制がない状態で15日後、ほとんどのレシピエントは移植への血流がありません。動脈の開存性は、周囲のレシピエント組織から遊離した喉頭気管複合体を解剖し、端部から側方への吻合を視覚化することによって巨視的に評価することができる。感謝。このビデオを見た後、約3時間で喉頭気管食道複合体をあるマウスから別のマウスに異所性に移植する方法を理解する必要があります。この実現可能で比較的低コストのモデルは、喉頭気管複合体の拒絶における免疫系の役割を研究する上で大きな可能性を提供し、それによって臓器移植における新しい治療法の可能性を提供します。

Research

JoVE Journal

Medicine

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