Name: a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation
Uploaded: 2023-01-13T12:30:00
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Randall Raish의 뛰어난 비디오 촬영 및 편집 지원에 감사드립니다.

이 연구는 Mayo Clinic Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC)에 따라 수행되었습니다. BalbC 마우스 (10-12 주령)를 기증자로 사용하고 C57 / BL6 마우스 (10-12 주령)를 수용자로 사용했는데, 이는 주요 조직 적합성 복합체 인 H-2Db 및 H-2Kb가 각각 면역 학적으로 호환되지 않아 이식편에 대한 면역 반응을 추가로 연구 할 수 있기 때문입니다. 수술 중에 사용 된 모든기구는 멸균되었으며 (보충 그림 S1 및 ...

<ol>
	<li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up.">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).</li><li>Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+psychosocial+consequences+of+total+laryngectomy.">Physical and psychosocial consequences of total laryngectomy.</a> Clinical Otolaryngology. 15 (5), 421-425 (1990).</li><li>Heyes, R., Iarocci, A., Tchoukalova, Y., Lott, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+role+of+mesenchymal+stem+cell+therapy+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Immunomodulatory role of mesenchymal stem cell therapy in vascularized composite allotransplantation.</a> Journal of Transplantation. 2016, (2016).</li><li>Kluyskens, P., Ringoir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follow-up+of+a+human+larynx+transplantation.">Follow-up of a human larynx transplantation.</a> Laryngoscope. 80 (8), 1244-1250 (1970).</li><li>Krishnan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+status+of+human+laryngeal+transplantation+in+2017:+A+state+of+the+field+review.">The current status of human laryngeal transplantation in 2017: A state of the field review.</a> Laryngoscope. 127 (8), 1861-1868 (2017).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), 950-953 (1992).</li><li>Lorenz, R. R., Dan, O., Nelson, M., Fritz, M. A., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+laryngeal+transplant+model:+technical+advancements+and+a+redefined+rejection+grading+system.">Rat laryngeal transplant model: technical advancements and a redefined rejection grading system.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 111 (12), 1120-1127 (2002).</li><li>Shipchandler, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+mouse+model+for+studying+laryngeal+transplantation.">New mouse model for studying laryngeal transplantation.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 118 (6), 465-468 (2009).</li><li>Strome, M., Wu, J., Strome, S., Brodsky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+preservation+techniques+in+a+vascularized+rat+laryngeal+transplant+model.">A comparison of preservation techniques in a vascularized rat laryngeal transplant model.</a> The Laryngoscope. 104 (6), 666-668 (1994).</li><li>Nocini, R., Molteni, G., Mattiuzzi, C., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updates+on+larynx+cancer+epidemiology.">Updates on larynx cancer epidemiology.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 32 (1), 18-25 (2020).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), (1992).</li><li>Work, W. P., Boles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larynx:+Replantation+in+the+dog.">Larynx: Replantation in the dog.</a> Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 82 (4), 401-402 (1965).</li><li>Birchall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+for+experimental+revascularized+laryngeal+allotransplantation.">Model for experimental revascularized laryngeal allotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 89 (11), 1470-1475 (2002).</li><li>Nakai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+laryngeal+transplantation+with+normal+circulation+maintained+by+combination+with+the+tongue.">Rat model of laryngeal transplantation with normal circulation maintained by combination with the tongue.</a> Microsurgery. 23 (2), 135-140 (2003).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+laryngeal+allograft+survival+using+low-dose+everolimus.">Long-term laryngeal allograft survival using low-dose everolimus.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 142 (1), 72-78 (2010).</li><li>Lott, D. G., Russell, J. O., Khariwala, S. S., Dan, O., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten-month+laryngeal+allograft+survival+with+use+of+pulsed+everolimus+and+anti-&#945;&#946;+T-cell+receptor+antibody+immunosuppression.">Ten-month laryngeal allograft survival with use of pulsed everolimus and anti-&#945;&#946; T-cell receptor antibody immunosuppression.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 120 (2), 131-136 (2011).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoy+NF-&#954;B+fortified+immature+dendritic+cells+maintain+laryngeal+allograft+integrity+and+provide+enhancement+of+regulatory+T+cells.">Decoy NF-&#954;B fortified immature dendritic cells maintain laryngeal allograft integrity and provide enhancement of regulatory T cells.</a> The Laryngoscope. 120 (1), 44-52 (2010).</li></ol>

후두암의 발병률과 유병률은 지난 30 년 동안 각각 12 %와 24 % 증가했으며,이 환자들 중 많은 사람들이 치료10을 위해 후두 절제술을받습니다. 이 절차는 사람의 삶의 질을 크게 악화 시키므로 대체 치료가 필요합니다. 후두의 혈관 화 된 복합 동종 이식은 환자의 호흡 및 말하기 능력을 향상시킬 수 있습니다. 그러나 이 기술이 이 환자 집단에 임상적으로 활용되기 전에 연구가 여?...

돌이킬 수없는 후두 손상 또는 후두암으로 고통받는 환자의 경우 전체 후두 절제술이 종종 유일한 옵션1입니다. 전체 후두 절제술은 환자가 스스로 숨을 쉬고 말할 수 없는 상태로 만들고 사회적,심리적 고통을 경험하게 합니다2. 전체 후두 절제술이 필요한 후두암 환자는 후두 이식의 훌륭한 잠재적 후보입니다. 돌이킬 수없는 후두 손상 환경에서 인간 후두 이식이 수행되었지만 종양 재발에 대한 두려움, 만성 거부 반응 가능성 및 기증자 유래 감염3으로 인해 현재 이러한 환자에서 후두 동종 이식이 피됩니다. 면역 억제는 이러한 우려의 주요 원인입니다. 종래의 면역억제 치료 후 종양 재발로 인한 첫 번째 부분 후두 이식 환자의 극적인 손실은 후두암 환자에서 이식을 위한 추가 시도가 이루어지기 전에 적절한 면역억제 요법이 고안되어야 한다는 증거입니다4,5.
이식 된 후두에 대한 숙주 면역 반응을 더 잘 이해하기 위해 1992 년 Strome에 의해 쥐의 첫 번째 후두 이식 모델이 개발되었으며 수술 기술이 2002 년에 개선되었습니다 6,7. 이 모델은 후두 이식을 연구하는 데 효과적이지만, 쥐 특이 적 면역 약제의 부족 및 쥐 모델과 관련된 높은 비용으로 인해 2009 년 후두 이식을 연구하기위한 새로운 마우스 모델이 개발되었습니다8.
설명 된 기술의 주요 적용은 후두 이식에서 다양한 면역 억제 약물 요법을 연구하는 것입니다. 현재의 면역억제 요법을 개선하면 후보 풀을 넓히고 암 환자의 안전한 이식으로 이어질 수 있습니다. 이 마우스 모델의 이점은 비용 효율성과 면역학적 데이터 및 시약의 광범위한 가용성입니다.
후두 이식을 위한 면역억제 치료 요법을 연구하는 팀은 이 방법을 사용하여 대량의 면역학적 데이터를 수집할 수 있으며 다양한 약물 요법을 신속하게 테스트하고 비교할 수 있습니다. 줄기 세포 주사와 같은 이식에 대한 면역 반응을 조절할 수있는 다른 잠재적 인 치료 양식도이 모델을 사용하여 테스트 할 수 있습니다. 마지막으로, 추적 기간을 연장하여 후두 이식의 장기적인 전신 효과를 관찰하기위한 실험을 고안 할 수 있습니다.
여기에 설명된 기술은 종단 간 문합을 사용하여 이종 후두 이식편에 동맥 및 정맥 흐름을 제공합니다. 이식편은 기증자의 후두, 갑상선, 부갑상선, 기관 및 식도로 구성된 후두 기관 식도 (LTE) 복합체이며 양측 경동맥과 척추는 손상되지 않았습니다. 하나의 기증자 경동맥은 수혜자 경동맥에 문합되어 동맥 혈류를 제공하는 반면, 다른 기증자 경동맥은 수혜자 외부 경정맥에 문합되어 정맥 혈류를 제공합니다 (그림 1).
마우스 모델에서 성공을 보장하기 위해 래트 모델의 수술 기술에 몇 가지 수정이 이루어졌습니다. 예를 들어, 마취 깊이에 대한 제어를 높이고 합병증을 줄이기 위해 주사제 대신 흡입 마취제를 사용했습니다. 연속 봉합은 쥐의 동맥 - 동맥 문합에 사용됩니다. 그러나, 마우스 혈관의 크기가 작기 때문에, 이것은 기술적으로 어렵고 혈관 내강7의 협착을 야기 할 수있다. 결과적으로, 중단 된 봉합사가 마우스 모델에서 사용되어 혈관 개통 성을 향상시킵니다. 또한 쥐 모델에서 상 갑상선 동맥 (STA) 척추가 해부되고 시각화됩니다. 마우스에서 STA의 크기가 더 작기 때문에 이러한 해부는 STA의 손상 및 심지어 절개를 초래할 수 있습니다. 결과적으로 마우스 모델에서 해부되지 않습니다. 대신, STA가 손상되지 않도록 근처의 근막이 보존됩니다.
이 기술의 주요 잠재적 함정에는 기증자 LTE 복합 척추 손상, 잘못된 크기의 동맥 절개술 또는 정맥 절개술, 문합 부위의 혈관 폐색 또는 출혈을 유발할 수 있는 문합 부위에 틈을 남기는 것이 포함됩니다. 이러한 실수를 방지하려면 STA 척추 주위에 조직 커프를 남겨 두어 기증자 이식편을 조달할 때 주의를 기울여야 합니다. 동맥 절개술과 정맥 절개술은 혈류를 허용할 만큼 충분히 커야 하지만 누출을 방지할 수 있을 만큼 작아야 합니다. 문합이 틈을 막기 위해 적절한 수의 봉합사를 사용해야하지만 혈관을 막기에는 너무 많지 않아야합니다.
미세 수술 기술에 익숙해지면이 절차를 약 3 시간 내에 수행 할 수 있습니다. 이 후두 이식 모델은 마우스에서 안정적으로 수행 할 수 있으며 혈관 화 복합 동종 이식 후 숙주 면역 반응을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#1 Paperclips</td>
			<td>Staples</td>
			<td>OP-7404</td>
			<td>Clips are shaped manually to be used as retractors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc Insulin Syringes&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>329412</td>
			<td>27 G 5/8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2870G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G Precision Glide Needle</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>305125</td>
			<td>1 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Luer-Lok Tip Syringe</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Sterile Standard Blunt Needles</td>
			<td>Cellink</td>
			<td>NZ5300505001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Monocryl Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y822G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td>Straight, 1 x 2 teeth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adventitia scissors</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>SAS-10</td>
			<td>19 mm, 10 cm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00109-11</td>
			<td>45/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment</td>
			<td>Akorn Animal Health</td>
			<td>59399-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandaid Fabric Fingertip</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>299399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution Swabsticks</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-153-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex Injection</td>
			<td>CIII</td>
			<td>12495-0757-1</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applying forceps without lock</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.CAF5</td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>10806-001-PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermabond Mini</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>315999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Boards</td>
			<td>Mopec</td>
			<td>22-444-314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Sterile Disposable Petri Dish&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25373-041</td>
			<td>35 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scisssors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14029-10</td>
			<td>Curved Sharp-Blunt 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golden A5 2-Speed Blade Clipper&#160;</td>
			<td>Oster</td>
			<td>008OST-78005-140</td>
			<td>#10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Sensitive Formula</td>
			<td>Nair</td>
			<td>2260000033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin&#160;</td>
			<td>Meitheal Pharmaceuticals</td>
			<td>71288-4O2-10</td>
			<td>10,000 USP units per 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>66794-013-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Temp Micro Fine Tip Cautery</td>
			<td>Bovie Medical</td>
			<td>AA90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercian Visibility Background Material</td>
			<td>Synovis Micro Companies</td>
			<td>VB3</td>
			<td>Green</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular Approximator Clamp without Frame</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11V</td>
			<td>0.4-1 mm Vessel Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse face mask kit</td>
			<td>Xenotec</td>
			<td>XRK-S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>C-14 W</td>
			<td>5.5&#34;, 8 mm, 0.4 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Press n&#39; Seal</td>
			<td>Glad</td>
			<td>70441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA210</td>
			<td>10 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Mini Vessel Clamp</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11M</td>
			<td>.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Drape Sheets</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>DYN4410-CASE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze Pads</td>
			<td>Dukal</td>
			<td>1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline&#160;</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>236173</td>
			<td>NaCl 0.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>851_A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00108-11</td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.JFLP3</td>
			<td>13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Pattern Scissors&#160;</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.SDC15RV</td>
			<td>15 cm, 8 mm, curved 7mm blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-10</td>
			<td>3 mm cutting edge, curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator Tip&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00126-11</td>
			<td>Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator, Classic line</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>D-5a.3 W</td>
			<td>9 mm, 0.3 mm, angled 10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation

후두 이종 이식은 기술적으로 어려운 절차이지만 다른 동물 모델에 비해 더 과학적인 분석과 비용 이점을 제공합니다. 2009 년 Shipchandler et al.에 의해 처음 설명되었지만,이 기술은 미세 수술 기술을 배우는 데 어려움과 그것을 습득하는 데 필요한 시간으로 인해 널리 사용되지 않습니다. 이 백서에서는 이 기술의 효과적인 사용을 장려하기 위해 수술 단계와 피해야 할 잠재적인 함정에 대해 자세히 설명합니다.
이 모델에서 기증자 후두의 양측 경동맥은 수용자 경동맥과 외부 경정맥에 문합되어 이식편을 통한 혈류를 허용합니다. 혈류는 이식편 양측 경동맥의 혈액 충전, 이식편의 갑상선 붉어짐, 이식편의 미세 혈관 출혈의 시각화를 통해 수술 중 확인할 수 있습니다. 성공을위한 중요한 요소에는 이식 혈관의 섬세한 보존, 올바른 크기의 동맥 절개술 및 정맥 절개술, 동맥 동맥 및 동맥 정맥 문합에 적절한 수의 봉합사를 사용하여 누출없이 혈관을 고정하고 폐색을 방지하는 것이 포함됩니다. 
누구나 충분한 교육을 통해 이 모델에 능숙해질 수 있으며 약 3시간 내에 절차를 수행할 수 있습니다. 성공적으로 수행되면 이 모델을 통해 면역학적 연구를 쉽고 저렴한 비용으로 수행할 수 있습니다.

성공적인 이식 확인 상술한 프로토콜을 사용하여, 혈관 클램프를 제거한 후 공여 경동맥의 맥동을 관찰함으로써 LTE 복합체로의 혈류를 평가할 수 있다. 맥동은 일반적으로 볼 수 있으며 기증자 동맥의 즉각적인 붉은 색은 활성 혈류를 확인합니다 (그림 4A). 문합이 효과적이지 않으면 동맥에 맥동이 없고 부분적으로 붕괴된 것처럼 보이며 색이 옅어집니다(<stro...

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A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation

이 원고의 목적은 마우스에서 이종 후두 이식을 수행하는 데 필요한 미세 수술 단계를 설명하는 것입니다. 후두 이식의 다른 동물 모델과 비교하여이 마우스 모델의 장점은 비용 효율성과 면역 학적 분석 및 데이터의 가용성입니다.

후두 이식 연구를 위한 이종 마우스 모델

Laryngeal heterotopic transplantation, although a technically challenging procedure, offers more scientific analysis and cost benefits compared to other ...

후두 이식 모델은 마우스와 래트에서 설명되었습니다. Senior alter의 이전 연구는 문합을 위해 기증자 경동맥을 사용하여보다 효율적인 방법을 고안하여 상 갑상선 동맥을 해부 할 필요가 없도록하는 데 중점을 두었습니다. 이 비디오에서는 마우스에서이 절차를 설명했습니다.이 마우스 후두 이식 모델을 사용하면 면역학 연구를 쉽고 저렴한 비용으로 수행 할 수 있습니다. 쥐 모델에 비해 혈관의 크기가 작기 때문에 기술적으로 더 어렵지만, 수술 단계에 익숙해지면 이 절차를 약 3시간 안에 수행할 수 있습니다. 동물이 완전히 마취 된 후, 마우스를 면도 부위로 옮겨 분당 1 리터의 산소 흐름으로 1.5 % 이소 플루 란이 마취 유지를 위해 안면 마스크를 통해 전달됩니다.발가락 꼬집음으로 마취 깊이를 확인하십시오. 마우스의 가슴과 목을 턱선까지 면도하고 제모 크림을 바릅니다. 그리고 30 초 후에 크림을 닦아내고 마우스를 수술 부위로 옮깁니다.마우스를 고정시키고 포비돈 요오드와 알코올로 수술 부위를 세 번 준비한 다음 마우스를 드레이프하십시오. 흉골 상부 노치보다 우수한 작은 수평 절개를 만드십시오. 가는 가위를 사용하여 해당 절개를 통해 피부를 하악까지 양측으로 들어 올리고 사다리꼴 모양의 피부 부분을 절제합니다.샘을 통해 이동하는 작은 정맥이 시각화되는 상부 부분에서 소작을 사용하여 양측 타액선을 절제하십시오. 주변 조직에서 양측 흉쇄 유돌근을 해부하고 옆으로 수축시킵니다. 스트랩 근육에 정중선 절개를하고 기저 갑상선을 손상시키지 않도록주의하여 양측으로 절제하고 후두 식도 또는 LTE 복합체에 남겨 둡니다.이 단계가 끝나면 양측 경동맥이 보입니다. 총 경동맥을 쇄골 수준까지 열등하게 그리고 경동맥 분기 수준까지 우월하게 해부합니다. 미주 신경과 내부 경정맥은 경동맥에서 자유롭게 해부되며 조달 된 이식편에 포함되지 않습니다.내부 및 외부 경동맥을 결찰하고 분열 할 수있을만큼 충분히 멀리 해부하십시오. 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 경동맥 분기보다 2-3mm 우수한 내부 경동맥을 결찰합니다. 상부 갑상선 동맥의 분기점보다 최소 3mm 높은 외경동맥을 결찰하고 흉골 수준에서 총 경동맥을 결찰합니다.모든 결선 용기를 양측으로 절단하십시오. 추가 해부 중에 우발적 인 손상을 방지하기 위해 LTE 복합체 위에 혈관 척추를 유지하십시오. 가스 누출이나 부주의한 마취 상실을 방지하려면 기도 절단을 하기 전에 동물이 만료되었는지 확인하십시오.다섯 번째 기관 링 아래의 기관을 횡단하고 절개를 식도를 통해 추척 전 근막으로 운반하여 LTE 복합체를 열등하게 제거합니다. 밑에있는 척추 전 근막에서 기관과 식도를 열등한 것에서 상급으로 자유롭게하십시오. 설골보다 열등한 전두 인두 절제술을 만듭니다.절개 부위를 추척전 근막까지 옮겨 LTE 복합체를 우수하게 자유롭게합니다. 나머지 림프 또는 결합 조직 부착물을 LTE 복합체와 주변 조직 사이에 나눕니다. 마지막으로 이식편을 제거하십시오.조달 된 이식편을 멸균 된 페트리 접시에 넣고 일반 식염수로 씻어 혈전을 제거하십시오. 1 밀리미터 마이크로 확장기를 사용하여 양측 경동맥을 확장하십시오. 30 게이지의 무딘 바늘을 사용하여 각 경동맥에 약 2 밀리리터의 헤파린 화 된 식염수를 주사하여 이식편을 플러시합니다.혈액과 식염수가 반대쪽 경동맥과 작은 자유 혈관 끝에서 흘러 나오는 것을 볼 수 있으며 이는 손상되지 않은 상부 갑상선 동맥을 확인합니다. 이식편은 헤파린 화 된 식염수에 남겨 둘 수 있으며 수혜자에게 이식하기 전에 최대 3 시간 동안 짧은 휴식을 취할 수 있습니다. 마취 유도, 면도 및 수술 준비 단계 후에 공여자에 대해 기재된 것과 정확히 동일한 방식으로 수용자 마우스를 준비한다.수술 시작 30분 전에 연장 방출 진통제를 수용자 마우스에게 피하 주사합니다. 메스를 사용하여 턱선에서 흉골까지 아래쪽으로 연장되는 정중선 목 절개를하십시오. 왼쪽의 피부를 들어 올리고 옆으로 집어 넣습니다.앞서 설명한 대로 상부 혈관을 소작하는 왼쪽 타액선을 절제하십시오. 눈에 보이는 혈관을 저온 소작기로 나누어 지방과 림프 조직을 절제하십시오. 밑에있는 외부 경정맥을 손상시키지 않도록주의하십시오.외부 경정맥을 원주 방향으로 해부하십시오. 문합을 위해 혈관의 명확한 길이를 최소 5 밀리미터 이상 사용하십시오. 흉골 유돌근을 해부하고 옆으로 수축시킵니다.쇄골에서 경동맥 분기점까지 총 경동맥을 원주 방향으로 우월하게 해부합니다. 외부 경정맥 아래에 배경 재료를 통과시키고 이중 근사 B-3 용기 클램프를 적용하십시오. 원하는 단절제술 위치에 외부 경정맥의 전벽을 통해 10-0 나일론 봉합사를 놓고 봉합사를 사용하여 혈관을 앞쪽으로 당깁니다.마이크로 가위로 봉합사 깊숙이 절단하여 적절한 크기의 단일 슬릿 정맥 절개술을 쉽게 만들고 절단이 정맥벽을 완전히 통과하도록 합니다. 30 게이지 무딘 바늘을 사용하여 헤파린 화 된 식염수로 정맥 내부를 씻어냅니다. 공여 LTE 복합체를 수용자 좌경동맥과 좌측 외부 경정맥 사이에 위치시킨다.기증자 왼쪽 경동맥의 자유 끝을 수혜자 왼쪽 외부 경정맥쪽으로 맞추고 날카로운 가위를 사용하여 끝을 경사지게합니다. 4 개의 10-0 나일론 중단 봉합사를 사용하여 기증자 왼쪽 경동맥과 수혜자 왼쪽 외부 경정맥을 종단 간 방식으로 문합합니다. 수령인 총 경동맥 아래로 배경 재료를 밀고 이중 근사 A-3 혈관 클램프를 적용합니다.정맥 절개술과 같은 방식으로 동맥 절개술을 만듭니다. 기증자 오른쪽 경동맥을 수혜자 왼쪽 경동맥에 종단 간 방식으로 문합합니다. 10-0 나일론으로 6 개의 중단 된 봉합사를 사용하는 것이 동맥 문합에 이상적입니다.정맥 쪽의 클램프를 제거하십시오. 출혈이 발생하면 면봉으로 부드러운 압력을 가하십시오. 동맥의 클램프를 제거하고 즉시면 팁으로 부드러운 압력을가하십시오.보통 부드러운 압력으로 1 분 후에 멈추는 단계에서 약간의 출혈이 예상됩니다. 정맥의 동맥에서 혈류의 완전성을 확인하십시오. 온전한 동맥 흐름으로 기증자 경동맥의 맥동이 일반적으로 나타나고 기증자 갑상선은 플러시 된 투명한 색에서 원래의 붉은 색으로 다시 바뀝니다.LTE 단지에있는 작은 혈관의 붉은 색도 관찰 할 수 있습니다. 달리기 방식으로 5-0 모노 필라멘트 봉합사로 피부 절개를 닫습니다. 절개 부위에 피부 접착제를 바르십시오.수술 중 체액 손실을 설명하기 위해 따뜻한 식염수 1 밀리리터를 피하에 주사하십시오. 마취를 멈추고 마우스를 회복 케이지로 옮깁니다. 저체온증을 피하기 위해 완전히 깨어날 때까지 가열 패드에서 마우스를 관찰하십시오.수술 성공은 혈관 클램프를 제거한 직후에 평가할 수 있습니다. 그림 A는 기증자 후두의 경동맥에서 혈류를 시각화 할 수 있고 갑상선이 빨갛게 변하기 때문에 성공적인 수술을 나타냅니다. 그림 B는 기증자 후두의 경동맥에서 혈류를 시각화 할 수없고 갑상선이 창백하게 남아 있기 때문에 실패한 수술을 나타냅니다.면역 억제가없는 상태에서 15 일 후에는 대부분의 수혜자가 이식으로 혈류가 없습니다. 동맥의 개통성은 주변 수용자 조직에서 후두 복합체를 해부하고 종단 간 문합을 시각화하여 거시적으로 평가할 수 있습니다. 감사. 이 비디오를 본 후에는 약 3 시간 내에 한 마우스에서 다른 마우스로 후두 기관 식도 복합체를 이종 학적으로 이식하는 방법을 이해해야합니다.이 실현 가능하고 상대적으로 저렴한 모델은 후두 복합체의 거부에서 면역 체계의 역할을 연구하는 데 상당한 잠재력을 제공하여 장기 이식에서 새로운 치료법의 잠재력을 제공합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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연구

의학

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Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...