Name: a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation
Uploaded: 2023-01-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Рэндалла Райша за его отличную видеографию и помощь в редактировании.

Это исследование было выполнено в соответствии с Комитетом по уходу и использованию животных клиники Майо (IACUC). Мыши BalbC (10-12 недель) использовались в качестве доноров, а мыши C57 / BL6 (10-12 недель) использовались в качестве реципиентов, потому что их основные комплексы гистосовместимости, H-2D...

<ol>
	<li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up.">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).</li><li>Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+psychosocial+consequences+of+total+laryngectomy.">Physical and psychosocial consequences of total laryngectomy.</a> Clinical Otolaryngology. 15 (5), 421-425 (1990).</li><li>Heyes, R., Iarocci, A., Tchoukalova, Y., Lott, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+role+of+mesenchymal+stem+cell+therapy+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Immunomodulatory role of mesenchymal stem cell therapy in vascularized composite allotransplantation.</a> Journal of Transplantation. 2016, (2016).</li><li>Kluyskens, P., Ringoir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follow-up+of+a+human+larynx+transplantation.">Follow-up of a human larynx transplantation.</a> Laryngoscope. 80 (8), 1244-1250 (1970).</li><li>Krishnan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+status+of+human+laryngeal+transplantation+in+2017:+A+state+of+the+field+review.">The current status of human laryngeal transplantation in 2017: A state of the field review.</a> Laryngoscope. 127 (8), 1861-1868 (2017).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), 950-953 (1992).</li><li>Lorenz, R. R., Dan, O., Nelson, M., Fritz, M. A., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+laryngeal+transplant+model:+technical+advancements+and+a+redefined+rejection+grading+system.">Rat laryngeal transplant model: technical advancements and a redefined rejection grading system.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 111 (12), 1120-1127 (2002).</li><li>Shipchandler, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+mouse+model+for+studying+laryngeal+transplantation.">New mouse model for studying laryngeal transplantation.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 118 (6), 465-468 (2009).</li><li>Strome, M., Wu, J., Strome, S., Brodsky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+preservation+techniques+in+a+vascularized+rat+laryngeal+transplant+model.">A comparison of preservation techniques in a vascularized rat laryngeal transplant model.</a> The Laryngoscope. 104 (6), 666-668 (1994).</li><li>Nocini, R., Molteni, G., Mattiuzzi, C., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updates+on+larynx+cancer+epidemiology.">Updates on larynx cancer epidemiology.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 32 (1), 18-25 (2020).</li><li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft.">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 101 (11), (1992).</li><li>Work, W. P., Boles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larynx:+Replantation+in+the+dog.">Larynx: Replantation in the dog.</a> Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 82 (4), 401-402 (1965).</li><li>Birchall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+for+experimental+revascularized+laryngeal+allotransplantation.">Model for experimental revascularized laryngeal allotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 89 (11), 1470-1475 (2002).</li><li>Nakai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+laryngeal+transplantation+with+normal+circulation+maintained+by+combination+with+the+tongue.">Rat model of laryngeal transplantation with normal circulation maintained by combination with the tongue.</a> Microsurgery. 23 (2), 135-140 (2003).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+laryngeal+allograft+survival+using+low-dose+everolimus.">Long-term laryngeal allograft survival using low-dose everolimus.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 142 (1), 72-78 (2010).</li><li>Lott, D. G., Russell, J. O., Khariwala, S. S., Dan, O., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten-month+laryngeal+allograft+survival+with+use+of+pulsed+everolimus+and+anti-&#945;&#946;+T-cell+receptor+antibody+immunosuppression.">Ten-month laryngeal allograft survival with use of pulsed everolimus and anti-&#945;&#946; T-cell receptor antibody immunosuppression.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 120 (2), 131-136 (2011).</li><li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoy+NF-&#954;B+fortified+immature+dendritic+cells+maintain+laryngeal+allograft+integrity+and+provide+enhancement+of+regulatory+T+cells.">Decoy NF-&#954;B fortified immature dendritic cells maintain laryngeal allograft integrity and provide enhancement of regulatory T cells.</a> The Laryngoscope. 120 (1), 44-52 (2010).</li></ol>

Заболеваемость и распространенность рака гортани увеличились на 12% и 24% соответственно за последние три десятилетия, и многие из этих пациентов проходят ларингэктомию для лечения10. Эта процедура значительно ухудшает качество жизни человека, а потому желательно альтернат?...

Для пациентов, страдающих непоправимым повреждением гортани или раком гортани, тотальная ларингэктомия часто является единственным вариантом1. Тотальная ларингэктомия оставляет пациентов без возможности дышать и говорить самостоятельно, в дополнение к переживанию социального и психологического стресса2. Пациенты с раком гортани, которые нуждаются в тотальной ларингэктомии, являются отличными потенциальными кандидатами на трансплантацию гортани. В то время как трансплантация гортани человека в условиях непоправимого повреждения гортани была выполнена, аллотрансплантация гортани в настоящее время избегается у этих пациентов из-за страха рецидива опухоли, возможности хронического отторжения и инфекций донорского происхождения3. Иммуносупрессия является основной причиной этих проблем. Резкая потеря первого пациента с частичной трансплантацией гортани из-за рецидива опухоли после обычного иммуносупрессивного лечения является свидетельством того, что соответствующий иммуносупрессивный режим должен быть разработан до дальнейших попыток трансплантации у пациентов с раком гортани 4,5.
Чтобы лучше понять иммунный ответ хозяина на пересаженную гортань, первая модель трансплантации гортани у крыс была разработана в 1992 году Стромом, а улучшения в хирургической технике были сделаны в 2002 году 6,7. Хотя эта модель эффективна для изучения трансплантации гортани, отсутствие специфических для крыс иммунологических агентов и более высокая стоимость, связанная с моделями крыс, привели к разработке новой мышиной модели для изучения трансплантации гортани в 2009году8.
Основным применением описанной методики является изучение различных схем иммуносупрессивных препаратов при трансплантации гортани. Улучшение современных иммуносупрессивных методов лечения может расширить пул кандидатов и привести к безопасной трансплантации у больных раком. Преимуществами этой мышиной модели являются ее экономическая эффективность и широкая доступность иммунологических данных и реагентов.
Команды, работающие над иммуносупрессивными схемами лечения трансплантации гортани, могут использовать этот метод для сбора большого объема иммунологических данных, а различные схемы лечения могут быть быстро протестированы и сопоставлены. Другие потенциальные методы лечения, которые могут модулировать иммунный ответ на трансплантацию, такие как инъекции стволовых клеток, также могут быть протестированы с использованием этой модели. Наконец, эксперименты могут быть разработаны для наблюдения долгосрочных системных эффектов трансплантации гортани путем продления периода наблюдения.
Метод, описанный здесь, использует сквозные анастомозы для обеспечения артериального и венозного потока к гетеротопному трансплантату гортани. Трансплантат представляет собой ларинготрахеэзофагеальный (LTE) комплекс, включающий гортань, щитовидную железу, паращитовидные железы, трахею и пищевод донора, с двусторонними сонными артериями и нетронутыми ножками. Одна донорская сонная артерия анастомозируется к сонной артерии реципиента и обеспечивает артериальный кровоток, в то время как другая донорская сонная артерия анастомозируется к наружной яремной вене реципиента и обеспечивает венозный кровоток (рисунок 1).
Несколько модификаций были внесены в хирургическую технику модели крысы, чтобы обеспечить успех в мышиной модели. Например, вместо инъекционного агента использовался ингаляционный анестетик для повышения контроля над глубиной анестезии и уменьшения осложнений. Непрерывное наложение швов применяется при артериально-артериальном анастомозе у крыс; однако из-за меньшего размера сосудов мышей это технически сложно и может вызвать сужение просвета сосуда7. В результате прерывистые швы используются в мышиной модели и приводят к улучшению проходимости сосудов. Кроме того, в модели крысы верхняя ножка щитовидной артерии (STA) рассечена и визуализирована. Учитывая меньший размер STA у мышей, это рассечение может привести к повреждению и даже трансекции STA. В результате он не препарируется в мышиной модели. Вместо этого близлежащая фасция сохраняется, чтобы гарантировать, что STA остается нетронутым.
Основные потенциальные подводные камни этого метода включают повреждение донорских ножек комплекса LTE, проведение артериотомии или венотомии неправильного размера, окклюзию сосудов в местах анастомоза или оставление пробелов в местах анастомоза, которые могут вызвать кровотечение. Чтобы избежать этих ошибок, необходимо соблюдать осторожность при приобретении донорского трансплантата, оставляя манжету ткани вокруг ножки STA. Артериотомия и венотомия должны быть достаточно большими, чтобы обеспечить кровоток, но достаточно маленькими, чтобы предотвратить утечку. Для анастомозов должно быть использовано соответствующее количество швов, чтобы закрыть любые промежутки, но не слишком много, чтобы закрыть сосуды.
Если получено знакомство с микрохирургическими методиками, эту процедуру можно выполнить примерно через 3 ч. Эта модель трансплантации гортани может быть надежно выполнена на мышах и использована для изучения иммунного ответа хозяина после васкуляризированной композитной аллотрансплантации.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#1 Paperclips</td>
			<td>Staples</td>
			<td>OP-7404</td>
			<td>Clips are shaped manually to be used as retractors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc Insulin Syringes&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>329412</td>
			<td>27 G 5/8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2870G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G Precision Glide Needle</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>305125</td>
			<td>1 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Luer-Lok Tip Syringe</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Sterile Standard Blunt Needles</td>
			<td>Cellink</td>
			<td>NZ5300505001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Monocryl Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y822G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td>Straight, 1 x 2 teeth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adventitia scissors</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>SAS-10</td>
			<td>19 mm, 10 cm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00109-11</td>
			<td>45/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment</td>
			<td>Akorn Animal Health</td>
			<td>59399-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandaid Fabric Fingertip</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>299399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution Swabsticks</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-153-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex Injection</td>
			<td>CIII</td>
			<td>12495-0757-1</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applying forceps without lock</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.CAF5</td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>10806-001-PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermabond Mini</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>315999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Boards</td>
			<td>Mopec</td>
			<td>22-444-314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Sterile Disposable Petri Dish&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25373-041</td>
			<td>35 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scisssors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14029-10</td>
			<td>Curved Sharp-Blunt 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golden A5 2-Speed Blade Clipper&#160;</td>
			<td>Oster</td>
			<td>008OST-78005-140</td>
			<td>#10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Sensitive Formula</td>
			<td>Nair</td>
			<td>2260000033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin&#160;</td>
			<td>Meitheal Pharmaceuticals</td>
			<td>71288-4O2-10</td>
			<td>10,000 USP units per 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>66794-013-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Temp Micro Fine Tip Cautery</td>
			<td>Bovie Medical</td>
			<td>AA90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercian Visibility Background Material</td>
			<td>Synovis Micro Companies</td>
			<td>VB3</td>
			<td>Green</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular Approximator Clamp without Frame</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11V</td>
			<td>0.4-1 mm Vessel Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse face mask kit</td>
			<td>Xenotec</td>
			<td>XRK-S</td>
			<td>Small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>C-14 W</td>
			<td>5.5&#34;, 8 mm, 0.4 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Press n&#39; Seal</td>
			<td>Glad</td>
			<td>70441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA210</td>
			<td>10 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Mini Vessel Clamp</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.ABB11M</td>
			<td>.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Drape Sheets</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>DYN4410-CASE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze Pads</td>
			<td>Dukal</td>
			<td>1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline&#160;</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>236173</td>
			<td>NaCl 0.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>851_A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00108-11</td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.JFLP3</td>
			<td>13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Pattern Scissors&#160;</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments</td>
			<td>ASSI.SDC15RV</td>
			<td>15 cm, 8 mm, curved 7mm blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-10</td>
			<td>3 mm cutting edge, curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator Tip&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00126-11</td>
			<td>Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator, Classic line</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>D-5a.3 W</td>
			<td>9 mm, 0.3 mm, angled 10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a heterotopic mouse model for studying laryngeal transplantation

Гетеротопная трансплантация гортани, хотя и является технически сложной процедурой, предлагает больше научного анализа и экономических преимуществ по сравнению с другими моделями животных. Хотя эта техника впервые описана Шипчандлером и др. в 2009 году, она не получила широкого распространения, возможно, из-за трудностей в изучении микрохирургической техники и времени, необходимого для ее освоения. В этой статье подробно описываются хирургические этапы, а также потенциальные подводные камни, которых следует избегать, чтобы стимулировать эффективное использование этой техники.
В этой модели двусторонние сонные артерии донорской гортани анастомозируются к сонной артерии реципиента и наружной яремной вене, что позволяет кровотоку через трансплантат. Кровоток может быть подтвержден интраоперационно визуализацией наполнения крови в двусторонних сонных артериях трансплантата, покраснением щитовидной железы трансплантата и кровотечением из микрососудов в трансплантате. Важнейшими элементами успеха являются деликатное сохранение сосудов трансплантата, проведение артериотомии и венотомии правильного размера, а также использование соответствующего количества швов на артериально-артериальных и артериально-венозных анастомозах для обеспечения безопасности сосудов без утечки и предотвращения окклюзии. 
Любой желающий может овладеть этой моделью с достаточной подготовкой и выполнить процедуру примерно за 3 часа. В случае успешного выполнения эта модель позволяет проводить иммунологические исследования с легкостью и по низкой цене.

Подтверждение успешной трансплантации Используя протокол, описанный выше, можно оценить приток крови к комплексу LTE, наблюдая пульсацию донорской сонной артерии после удаления зажимов сосудов. Пульсация обычно видна, а немедленная красная окраска донорской артерии подтвер...

Watch this Scientific Journal Video about A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation at JoVE.com

A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation

Целью этой рукописи является описание микрохирургических этапов, необходимых для выполнения гетеротопной трансплантации гортани у мышей. Преимуществами этой мышиной модели по сравнению с другими животными моделями трансплантации гортани являются ее экономическая эффективность и доступность иммунологических анализов и данных.

Гетеротопная модель мыши для изучения трансплантации гортани

Laryngeal heterotopic transplantation, although a technically challenging procedure, offers more scientific analysis and cost benefits compared to other ...

Модели пересадки гортани были описаны у мышей и крыс. Предыдущая работа Старшего альтера была сосредоточена на разработке более эффективного метода с использованием донорских сонных артерий для анастомоза, устраняя необходимость рассечения верхних артерий щитовидной железы. В этом видео мы описали эту процедуру на мышах.Эта модель трансплантации гортани мыши позволяет проводить иммунологические исследования с легкостью и по низкой цене. Хотя технически эта процедура более сложна из-за меньшего размера сосудов по сравнению с моделью крысы, она может быть выполнена примерно за три часа, если получено знакомство с хирургическими шагами. После того, как животное будет полностью обезболено, перенесите мышь в зону бритья, где 1,5% изофлурана с одним литром в минуту потока кислорода будет доставлено через маску для лица для поддержания анестезии.Подтвердите глубину анестезии ущемлением пальца ноги. Побрейте грудь и шею мыши до линии челюсти и нанесите крем для удаления волос. А через 30 секунд протрите крем и перенесите мышь в хирургическую область.Обездвижьте мышь и трижды подготовьте хирургическую область повидоном-йодом и спиртом, затем задрапируйте мышь. Сделайте небольшой горизонтальный разрез, чуть превосходящий надгрудничную выемку. Используя тонкие ножницы, поднимите кожу двусторонне через этот разрез до нижней челюсти и иссечь трапециевидный сегмент кожи.Иссечение двусторонних слюнных желез с помощью прижигания в верхней части, где визуализируется небольшая вена, проходящая через железу. Рассекают двусторонние грудино-ключично-сосцевидные мышцы из окружающих тканей и втягивают их латерально. Сделайте разрез средней линии на мышцах ремешка и двусторонне иссекните их, чтобы не повредить подлежащую щитовидную железу и оставив ее на ларинготрахеальном пищеводном или LTE-комплексе.После этого шага видны двусторонние сонные артерии. По окружности рассекают общие сонные артерии до уровня ключицы ниже и до уровня бифуркации сонной артерии выше. Блуждающий нерв и внутренняя яремная вена рассечены свободно от сонных артерий и не включены в приобретенный трансплантат.Рассекайте внутренние и наружные сонные артерии достаточно далеко, чтобы иметь возможность связывать и разделять. Используя 10-0 нейлоновых швов, сажают внутренние сонные артерии на два-три миллиметра выше, чем бифуркация сонной артерии. Лигировать наружные сонные артерии не менее чем на три миллиметра выше точки ветвления верхней щитовидной артерии и связывать общие сонные артерии на уровне грудины.Отрежьте все сосуды для лигата на двусторонней основе. Держите сосудистые ножки поверх комплекса LTE, чтобы избежать случайного повреждения во время дальнейшего рассечения. Чтобы предотвратить утечку газа или непреднамеренную потерю анестезии, убедитесь, что срок годности животного истек, прежде чем делать какие-либо порезы дыхательных путей.Трансектируйте трахею ниже пятого трахеального кольца и проведите разрез через пищевод вниз к превертебральной фасции, чтобы освободить комплекс LTE ниже. Освободите трахею и пищевод от нижележащей превертебральной фасции от нижней до верхней. Создают переднюю глоточную эктомию, как раз уступающую подъязычной.Проведите разрез вниз к превертебральной фасции, чтобы лучше освободить комплекс LTE. Разделите все оставшиеся лимфоидные или соединительнотканные соединения между комплексом LTE и окружающими тканями. И, наконец, удалите трансплантат.Поместите полученный трансплантат в стерильную чашку Петри и вымойте обычным физиологическим раствором, чтобы избавиться от любых сгустков крови. Расширьте двусторонние сонные артерии с помощью одного миллиметра микроразрывников. Используя иглу с тупым наконечником 30-го калибра, введите примерно два миллилитра гепаринизированного физиологического раствора в каждую сонную артерию, чтобы промыть трансплантат.Кровь и физиологический раствор будут вымываться из контралатеральной сонной артерии и небольших свободных окончаний сосудов, что подтверждает неповрежденные верхние артерии щитовидной железы. Трансплантат можно оставить в гепаринизированном физиологическом растворе и сделать небольшой перерыв на срок до трех часов, прежде чем пересаживать его реципиенту. Подготовьте мышь-реципиент точно так же, как описано для донора после индукции анестезии, бритья и хирургической подготовки.Вводите мышке-реципиенту анальгетик пролонгированного высвобождения подкожно за 30 минут до начала операции. Используя скальпель, сделайте разрез средней линии шеи, простирающийся от линии челюсти выше грудины ниже. Приподнимите кожу с левой стороны и втяните ее сбоку.Иссекайте левую слюнную железу, прижигая высшие сосуды, как описано ранее. Иссекайте жировую и лимфоидную ткань, разделяя любые видимые сосуды с помощью низкотемпературного прижигания. Забота о том, чтобы не повредить подстилающую наружную яремную вену.Рассекните наружную яремную вену по окружности. Используйте не менее пяти миллиметров прозрачной длины сосуда для анастомоза. Рассекните грудиномастоидную мышцу и втяните ее латерально.По окружности рассекают общую сонную артерию от ключицы ниже до бифуркации сонной артерии. Пропустите фоновый материал под наружную яремную вену и нанесите двойные приближающиеся зажимы сосуда B-3. Поместите нейлоновый шов 10-0 через переднюю стенку наружной яремной вены в месте желаемой монотомии и используйте шов для вытягивания переднего отверстия сосуда.Нарежьте только глубоко до шва микроножными ножницами, чтобы облегчить создание венотомии правильного размера с одной щелью и обеспечить, чтобы разрез полностью проходил через венозную стенку. Используя иглу с тупым наконечником 30-го калибра, промойте внутреннюю часть вены гепаринизированным физиологическим раствором. Поместите донорский комплекс LTE между левой сонной артерией реципиента и левой наружной яремной веной.Выровняйте свободный конец донорской левой сонной артерии по направлению к левой наружной яремной вене реципиента и скосите конец с помощью острых ножниц. Используя четыре 10-0 нейлоновых прерванных швов, анастомоз донора левой сонной артерии и реципиента оставила наружную яремную вену сквозным способом. Сдвиньте фоновый материал под общую сонную артерию реципиента и нанесите двойные приближающиеся зажимы сосуда А-3.Создайте артериотомию таким же образом, как и венотомию. Анастомоз донорской правой сонной артерии к левой сонной артерии реципиента сквозным способом. Использование шести прерывистых швов с 10-0 нейлоном идеально подходит для артериального анастомоза.Снимите зажимы на венозной стороне. При возникновении кровотечения прикладывайте мягкое давление ватными наконечниками. Снимите зажимы на артерии и сразу же приложите мягкое давление ватными наконечниками.Некоторое кровотечение ожидается на шаге, которое обычно останавливается через одну минуту при мягком давлении. Проверьте целостность кровотока в артерии в вене. При интактном артериальном потоке обычно наблюдается пульсация донорской сонной артерии, и донорская щитовидная железа изменится от своего покрасневшего прозрачного цвета обратно к своему первоначальному красноватому цвету.Также может наблюдаться красная окраска малых судов на комплексе LTE. Закройте разрез кожи 5-0 монофиламентным швом в беговой манере. Нанесите на разрез клей для кожи.Введите один миллилитр теплого физиологического раствора подкожно, чтобы учесть потерю жидкости во время операции. Прекратите анестезию и переведите мышь в клетку восстановления. Наблюдайте за мышью на грелке до тех пор, пока она полностью не проснется, чтобы избежать переохлаждения.Хирургический успех можно оценить сразу после снятия зажимов сосудов. Рисунок А является репрезентативным для успешной операции, потому что кровоток может быть визуализирован в сонных артериях донорской гортани, а щитовидная железа становится красной. Рисунок B является репрезентативным для неудачной операции, потому что кровоток не может быть визуализирован в сонных артериях донорской гортани, а щитовидная железа осталась бледной.Через 15 дней при отсутствии иммуносупрессии у большинства реципиентов нет притока крови к трансплантату. Проходимость артерии может быть оценена макроскопически путем рассечения ларинготрахеального комплекса, свободного от окружающих тканей реципиента, и визуализации сквозного анастомоза. Спасибо. Посмотрев это видео, вы должны понять, как гетеротопно пересадить гортанный трахеэзофагеальный комплекс от одной мыши к другой примерно за три часа.Эта осуществимая и относительно недорогая модель предлагает значительный потенциал в изучении роли иммунной системы в отторжении ларинготрахеального комплекса, тем самым предлагая потенциал для новых методов лечения в трансплантации органов.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Мышь Модель В утробе матери Трансплантации

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Модифицированный метод для гетеротопической Mouse сердца Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Мышиные Гетеротопическая пересадке сердца Техника

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Трансплантация клапана легочной артерии с помощью мыши Модель гетеротопической Трансплантация сердца

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Гетеротопическая шейки Трансплантация сердца у мышей

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Роман микрохирургические модели для Гетеротопическая, Собственная Блока грудной стенки, тимус, и Трансплантация сердца у мышей

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Модель мыши для трансплантации поджелудочной железы с помощью модифицированных манжеты

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

Мышь Модель васкуляризированной гетеротопной трансплантации селезенки для изучения биологии селезенки и трансплантации иммунитета

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

Упрощенная модель трансплантации гетеротопного клапана сердца у грызунов

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Протокол гетеротопной трансплантации сердца свиней для доставки терапевтических средств к сердечному аллотрансплантату

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...