Name: analysis of fecal microbiota dynamics in lupus-prone mice using a simple, cost-effective dna isolation method
Uploaded: 2022-05-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method at JoVE.com

Vi setter pris på hjelpen fra Argonne National Laboratory og våre samarbeidende bioinformatikere. Dette arbeidet støttes av ulike NIH og interne tilskudd.

Cx3cr1 gfp/gfp-lokuset til B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J-mus ble tilbakekrysset til MRL/MpJ-Fas lpr/J (MRL/lpr) i 10 generasjoner for å generere MRL/lpr-CX 3CR1 gfp/gfp-mus. Genom screening ved hjelp av single nucleotide polymorphism (SNP) paneler bekreftet at den genetiske bakgrunnen til nygenererte mus var mer enn 97% identisk med MRL / lpr. Etter det ble mus avlet og vedlikeholdt i et spesifikt patogenfritt miljø etter de spesifikke kravene fra ...

<ol>
	<li>Lee, Y. K., Mazmanian, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Has+the+microbiota+played+a+critical+role+in+the+evolution+of+the+adaptive+immune+system.">Has the microbiota played a critical role in the evolution of the adaptive immune system.</a> Science. 330 (6012), 1768-1773 (2010).</li><li>Lee, Y. K., Menezes, J. S., Umesaki, Y., Mazmanian, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinflammatory+T-cell+responses+to+gut+microbiota+promote+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Proinflammatory T-cell responses to gut microbiota promote experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 4615-4622 (2011).</li><li>Yeoh, N., Burton, J. P., Suppiah, P., Reid, G., Stebbings, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+microbiome+in+rheumatic+diseases.">The role of the microbiome in rheumatic diseases.</a> Current Rheumatology Reports. 15 (3), 314 (2013).</li><li>Larsen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+human+adults+with+type+2+diabetes+differs+from+non-diabetic+adults.">Gut microbiota in human adults with type 2 diabetes differs from non-diabetic adults.</a> PLoS One. 5 (2), 9085 (2010).</li><li>Alam, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+imbalance+in+inflammatory+bowel+disease+patients+at+different+taxonomic+levels.">Microbial imbalance in inflammatory bowel disease patients at different taxonomic levels.</a> Gut Pathogens. 12 (1), (2020).</li><li>Vieira, S. M., Pagovich, O. E., Kriegel, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet,+microbiota+and+autoimmune+diseases.">Diet, microbiota and autoimmune diseases.</a> Lupus. 23 (6), 518-526 (2014).</li><li>Mu, Q., Zhang, H., Luo, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLE:+another+autoimmune+disorder+influenced+by+microbes+and+diet.">SLE: another autoimmune disorder influenced by microbes and diet.</a> Frontiers of Immunology. 6, 608 (2015).</li><li>Tektonidou, M. G., Wang, Z., Dasgupta, A., Ward, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+serious+infections+in+adults+with+systemic+lupus+erythematosus:+a+national+population-based+study.">Burden of serious infections in adults with systemic lupus erythematosus: a national population-based study.</a> Arthritis Care &amp; Research. 67 (8), 1078-1085 (2015).</li><li>Mu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+lupus+nephritis+by+changes+of+gut+microbiota.">Control of lupus nephritis by changes of gut microbiota.</a> Microbiome. 5 (1), 73 (2017).</li><li>Panek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+challenges+in+studying+human+gut+microbiota+-+effects+of+collection,+storage,+DNA+extraction+and+next+generation+sequencing+technologies.">Methodology challenges in studying human gut microbiota - effects of collection, storage, DNA extraction and next generation sequencing technologies.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5143 (2018).</li><li>Fiedorov&#225;, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+dna+extraction+methods+on+stool+bacterial+and+fungal+microbiota+community+recovery.">The impact of dna extraction methods on stool bacterial and fungal microbiota community recovery.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 821 (2019).</li><li>Gerasimidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+DNA+extraction+methodology+on+gut+microbiota+research+applications.">The effect of DNA extraction methodology on gut microbiota research applications.</a> BMC Research Notes. 9, 365 (2016).</li><li>Bukin, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+16S+rRNA+region+choice+on+bacterial+community+metabarcoding+results.">The effect of 16S rRNA region choice on bacterial community metabarcoding results.</a> Scientific Data. 6 (1), 190007 (2019).</li><li>Galloway-Pe&#241;a, J., Hanson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+for+analysis+of+the+microbiome.">Tools for analysis of the microbiome.</a> Digestive Diseases and Sciences. 65 (3), 674-685 (2020).</li><li>Sharpton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+analysis+of+shotgun+metagenomic+data.">An introduction to the analysis of shotgun metagenomic data.</a> Frontiers in Plant Science. 5, 209 (2014).</li></ol>

Balansert tarmmikrobiota kan beskytte menneskekroppen mot sykdommer. Når denne balansen er forstyrret av eksterne eller interne utløsere, kan konsekvensene være ødeleggende. Denne metoden presenterer en måte å analysere dynamikken i tarmmikrobiota i murine modeller. Metoden er egnet ikke bare for sammenligninger mellom grupper, men også for å spore tarmmikrobiotaen over tid for bedre å identifisere tidsavhengige faktorer som forstyrrer tarmmikrobiotaen.
Alle musene i forsøket må hå...

Mennesker og bakterier har eksistert sammen i lang tid. De har etablert et medavhengig forhold med gjensidige gunstige effekter som påvirker vertsimmunresponser på kvantitative og kvalitative måter1. Nylige studier tyder på en sammenheng mellom tarmmikrobiotasammensetningen og patogenesen av autoimmune sykdommer som inkluderer multippel sklerose 2, revmatoid artritt3, type2 diabetes4, inflammatorisk tarmsykdom5 og systemisk lupus erythematosus (SLE)6. Men om tarmmikrobiotaen er hovedårsaken eller en sekundær effekt av disse autoimmune sykdommene, er det fortsatt uklart7. Potensielt kan tarmmikrobiota forverre sykdommen under effektorfasen av autoimmune lidelser eller spille en rolle i å regulere induksjonen av disse sykdommene8.
Intestinal dysbiose er rapportert hos kvinnelige lupus-utsatte MRL / Mp-Faslpr (MRL / lpr) mus, og tarmmikrobiotaendringer med signifikant uttømming av laktobaciller ble observert9. Når en blanding av fem Lactobacillus-stammer ble oralt administrert, ble lupus-lignende symptomer i stor grad dempet i disse musene, noe som tyder på en viktig rolle for mikrobiota i regulering av SLE-patogenese.
Følgende teknikk for DNA-ekstraksjon gjør det mulig å følge mikrobiotafluktuasjoner og analysere dem kvalitativt og kvantitativt i løpet av murine SLE-lignende sykdom hos lupus-utsatte mus. Enten du skal undersøke den sunne tarmmikrobiotaen eller definere dysbiose, er det viktig å kritisk undersøke hvordan data samles inn og om det er nøyaktig og reproduserbart10. Hvert trinn er kritisk i denne prosessen. En passende metode må brukes til å trekke ut mikrobielt DNA, da ethvert mulig problem som introduserer forstyrrelser under DNA-ekstraksjonsprosessen kan føre til unøyaktig mikrobiell representasjon. Mens fenol-kloroformmetoden er beskrevet her, er det kommersielt tilgjengelige sett for å trekke ut DNA fra bakterier som fungerer bra i spesielle tilfeller11. Imidlertid er deres brukervennlighet begrenset av kostnaden og nødvendig prøvemengde.
Protokollen som presenteres her er kostnadseffektiv og krever bare en liten mengde prøve. Det fungerer fint med alle slags avføringsprøver og er nyttig for å studere dynamikken i tarmmikrobiotaen over tid, samt sammenligninger mellom grupper. DNA isoleres med en metode for alkoholrensing, som bruker fenol, kloroform og isoamylalkohol. Alkoholbasert ekstraksjon bidrar til å rense og fjerne prøven av proteiner og lipider, hvor DNA utfelles i det siste trinnet. Den foreslåtte metoden har betydelig høy effektivitet og kvalitet og har vist seg å være nøyaktig i å identifisere bakteriepopulasjoner. Et kritisk notat under prosedyren er at DNA-forurensning kan oppstå, og dermed er det nødvendig med passende prøvehåndtering12.
DNA blir deretter analysert av Next Generation Sequencing-plattformene for 16S rRNA-genet, for eksempel Illumina MiSeq. Spesielt analyseres V4 hypervariabel region for å gi en bedre kvantifisering for høyrangs taxa13. Den påfølgende bioinformatikkanalysen er outsourcet, etterfulgt av intern analyse ved hjelp av standard statistiske metoder. Det finnes mange open-source bioinformatikk programmer tilgjengelig for nedstrøms sekvensering, og den type analyser som utføres avhenger sterkt av det spesifikke biologiske spørsmålet av interesse14. Denne protokollen fokuserer spesielt på de eksperimentelle trinnene før sekvensering og gir en mer allsidig, kostnadseffektiv, sammenlignbar og effektiv metode for å oppnå DNA fra fekale prøver.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.1 mm glass beads</td>
			<td>BioSpec Products</td>
			<td>11079101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL screw cap tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% SDS</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1311-1</td>
			<td>SDS 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96% Ethanol, Molecular Biology Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T032021000CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Acetate (5 M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9071</td>
			<td>NH4AC 5M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>005582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender storm 24</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>4116-BBY24M</td>
			<td>Homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC-Treated Water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediamine Tetraacetic Acid</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP118-500</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil plate seal</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>NC0302491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes-Kimtech 34256</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>06-666C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRL/MpJ-Faslpr/J (MRL/lpr) mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>000485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotomer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND2000CLAPTOP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol: chloroform: isoamylalchohol (25:24:1)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1752I-400</td>
			<td>PCI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale with 4 decimals</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MS205DU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skirted 96-well plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AB-0800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>15528154</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydrochloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1757-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>SI-0236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of fecal microbiota dynamics in lupus-prone mice using a simple, cost-effective dna isolation method

Tarmmikrobiota har en viktig rolle i å utdanne immunforsvaret. Denne sammenhengen er ekstremt viktig for å forstå autoimmune sykdommer som ikke bare er drevet av genetiske faktorer, men også miljøfaktorer som kan utløse utbruddet og/eller forverre sykdomsforløpet. En tidligere publisert studie om dynamikken i tarmmikrobiotaen hos lupus-utsatt MRL / lpr kvinnelige mus viste hvordan endringer i tarmmikrobiotaen kan endre sykdomsprogresjonen. Her beskrives en protokoll for å trekke ut representative prøver fra tarmmikrobiotaen for studier av autoimmunitet. Mikrobiotaprøver samles fra anus og behandles, hvorfra DNA ekstraheres ved hjelp av en fenol-kloroformmetode og renses ved alkoholutfelling. Etter at PCR er utført, sekvenseres rensede amplikoner ved hjelp av en Next Generation Sequencing-plattform ved Argonne National Laboratory. Til slutt analyseres 16S ribosomale RNA-gensekvenseringsdata. Som et eksempel er data hentet fra tarmmikrobiota-sammenligninger av MRL / lpr-mus med eller uten CX3CR1 vist. Resultatene viste signifikante forskjeller i slekter som inneholder patogene bakterier som de i phylum Proteobacteria, samt slekten Bifidobacterium, som regnes som en del av den sunne kommensale mikrobiotaen. Oppsummert er denne enkle, kostnadseffektive DNA-isolasjonsmetoden pålitelig og kan hjelpe undersøkelsen av tarmmikrobiotaendringer assosiert med autoimmune sykdommer.

Resultatene fra Argonne National Laboratory analyseres av en kvalifisert bioinformatiker, etterfulgt av en intern analyse av dataene ved hjelp av standard statistiske metoder. Typiske mikrobiomanalyser involverer gruppering av lignende sekvenser i operasjonelle taksonomiske enheter (OTUer) eller amplikonsekvensvarianter (ASV) som en proxy for forskjellige mikroorganismer i en prøve. Tellinger av OTUer eller ASV-er på tvers av prøver kan deretter brukes til å teste for endringer i mangfold innen utvalg (alfa) og mangf...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method at JoVE.com

Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method

Denne protokollen gir en enkel, kostnadseffektiv DNA-isolasjonsmetode for analyse av murine gut mikrobiota endringer under utvikling av autoimmun sykdom.

Analyse av fekal mikrobiotadynamikk i lupusutsatte mus ved hjelp av en enkel, kostnadseffektiv DNA-isolasjonsmetode

Gut microbiota has an important role in educating the immune system. This relationship is extremely important for understanding autoimmune diseases that ...

Den foreslåtte DNA-isolasjonsmetoden kan tjene til å studere tarmmikrobiotadynamikken i autoimmune sykdommer musemodeller. En mer allsidig, kostnadseffektiv og effektiv metode foreslås for å skaffe DNA fra fekale prøver som er sammenlignbare med kommersielt tilgjengelige sett. For å begynne, ta hver mus individuelt ut av buret, samle en fekalpellet direkte fra anus og oppbevar den ved minus 80 grader Celsius til den blir behandlet.Behandle prøvene med sterile og rene tang, rør og hansker. Legg en frossen pellet til et forhåndsveid, to milliliter skrukorkrør, og registrer fekalvekten i gram, som skal være mellom 0,02 og 0,05 gram per fekalpellets. Tilsett pelleten et tynt lag med 0,1 millimeter glassperler, 500 mikroliter lysisbuffer og 200 mikroliter 20% natriumdodecylsulfat.Perle slo røret i fire minutter i en homogenisator, etterfulgt av tre til fem minutter med vortexing. Sentrifuge rørene i kort tid for å eliminere bobler og skum. For å trekke ut DNA fra mikrobiotaprøvene, overfør 350 mikroliter prøvesupernatant til et nytt, 1,5 milliliter snap cap tube, uten rusk.Tilsett 500 mikroliter fenol: kloroform: isoamylalkohol, i forholdet 25: 24: 1, og vortex i ett minutt. Etter sentrifugering, overfør 180 mikroliter av den øverste vandige fasen til et nytt, 1,5 milliliter snap cap rør. Tilsett 180 mikroliter kloroform, inverter og bland.Fra dette overfører du 180 mikroliter av den vandige fasen til et nytt snap cap tube. I et biosikkerhetsskap tilsettes 180 mikroliter kald isopropanol og 36 mikroliter fem molar ammoniumacetat. Inverter det noen ganger for å blande, og legg røret på is i 20 minutter.Kast supernatanten, etterfulgt av å vaske pellets flere ganger med 500 mikroliter kald 70% etanol. Kast supernatanten, og lufttørk røret opp ned på silkepapir i 20 minutter, til pelleten blir klar. Stopp pelleten i 50 mikroliter molekylært vann, og varm væsken ved 37 grader Celsius i 10 minutter for å oppløse store DNA-pellets helt.Etter oppvarming, sentrifuger disse rørene ved 3.400 ganger G i ett minutt for å gjenopprette kondensdråpene fra lokket. Mål konsentrasjonen, og oppnå forholdet 260/280 ved hjelp av et spektrofotometer. Et forhold for DNA av god kvalitet er vanligvis mellom 1,8 og to.Sentrifuge de tilberedte prøvene ved 600 ganger G i ett minutt ved romtemperatur, før de fryser ved minus 80 grader Celsius i 24 timer. Send deretter 20 mikroliter prøver med konsentrasjoner fra ett til 50 nanogram per mikroliter til Argonne National Laboratory for sekvensering. Musestammen som mangler reseptoren CX3CR1 har en annen tarmmikrobiotasammensetning sammenlignet med villtype MRL / lpr, MRL / lpr-CX3CR1 GFP / GFP-mus, viser signifikante forskjeller i visse slekter, relevante for potensielt patogene bakterier som de i phylum Proteobacteria.Vær forsiktig med å forurense prøven. Det må være sterilt. Det er også viktig pipettering med nøyaktighet når du overfører supernatanten i et nytt rør.Denne metoden er egnet for molekylær analyse som PCR, restriksjonsenzymfordøyelse eller genomisk bibliotekkonstruksjon. I lupus viste vi et sterkt forhold mellom tarmmikrobiota og lupusprogresjon.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

We present the video about assisting anti-retroviral therapy (ART) by an apt laboratory service - representing a South-African role model for economical ...

Cost-effective Method for Microbial Source Tracking Using Specific Human and Animal Viruses

Kostnadseffektiv metode for mikrobiell kilde Tracking med bestemte mennesker og dyr virus

Microbial contamination of the environment represents a significant health risk. Classical bacterial fecal indicators have shown to have significant ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

En enkel Chelex Protocol for DNA-ekstraksjon fra<em&gt; Anopheles</em&gt; Spp..

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Isolation and Genome Analysis of Single Virions using 'Single Virus Genomics'

Isolasjon og Genome Analysis of single Virioner bruker &#39;enkelt virus Genomics&#39;

Whole genome amplification and sequencing of single microbial cells enables genomic characterization without the need of cultivation 1-3. Viruses, which ...

An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota

An in vitro batch-kultur modell for å anslå virkningene av interventional regimer på Human avføring bakterieflora

The emerging role of the gut microbiome in several human diseases demands a breakthrough of new tools, techniques and technologies. Such improvements are ...

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

Analyse av interaksjoner mellom Endobiotics og Human gut bakterieflora bruke in vitro Bath Gjærings systemer

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

En DNA/Ki67-basert flowcytometrianalyse for cellesyklusanalyse av antigenspesifikke CD8 T-celler hos vaksinerte mus

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...

Fecal (micro) RNA Isolation

Fecal micro RNA Isolation

Fekal (mikro) RNA-isolasjon

It is becoming clear that RNA exists in the gut lumen and feces in animals and humans. The protocol described below isolates total RNA including microRNAs ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

Terapeutisk evaluering av fekal mikrobiotatransplantasjon i en interleukin 10-mangelfull musemodell

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...