Name: analysis of fecal microbiota dynamics in lupus-prone mice using a simple, cost-effective dna isolation method
Uploaded: 2022-05-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method at JoVE.com

Vi uppskattar hjälpen från Argonne National Laboratory och våra samarbetande bioinformatiker. Detta arbete stöds av olika NIH och interna bidrag.

Cx3cr1 gfp/gfp-locus för B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J-mössen backades tillbaka till MRL/MpJ-Fas lpr/J (MRL/lpr) i 10 generationer för att generera MRL/lpr-CX 3CR1 gfp/gfp-möss. Genomscreening med hjälp av SNP-paneler (single nucleotide polymorphism) bekräftade att den genetiska bakgrunden hos nygenererade möss var mer än 97% identisk med den för MRL/lpr. Därefter föddes möss och underhålls i en specifik patogenfri miljö enligt de speci...

<ol>
	<li>Lee, Y. K., Mazmanian, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Has+the+microbiota+played+a+critical+role+in+the+evolution+of+the+adaptive+immune+system.">Has the microbiota played a critical role in the evolution of the adaptive immune system.</a> Science. 330 (6012), 1768-1773 (2010).</li><li>Lee, Y. K., Menezes, J. S., Umesaki, Y., Mazmanian, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinflammatory+T-cell+responses+to+gut+microbiota+promote+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Proinflammatory T-cell responses to gut microbiota promote experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 4615-4622 (2011).</li><li>Yeoh, N., Burton, J. P., Suppiah, P., Reid, G., Stebbings, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+microbiome+in+rheumatic+diseases.">The role of the microbiome in rheumatic diseases.</a> Current Rheumatology Reports. 15 (3), 314 (2013).</li><li>Larsen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+human+adults+with+type+2+diabetes+differs+from+non-diabetic+adults.">Gut microbiota in human adults with type 2 diabetes differs from non-diabetic adults.</a> PLoS One. 5 (2), 9085 (2010).</li><li>Alam, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+imbalance+in+inflammatory+bowel+disease+patients+at+different+taxonomic+levels.">Microbial imbalance in inflammatory bowel disease patients at different taxonomic levels.</a> Gut Pathogens. 12 (1), (2020).</li><li>Vieira, S. M., Pagovich, O. E., Kriegel, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet,+microbiota+and+autoimmune+diseases.">Diet, microbiota and autoimmune diseases.</a> Lupus. 23 (6), 518-526 (2014).</li><li>Mu, Q., Zhang, H., Luo, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLE:+another+autoimmune+disorder+influenced+by+microbes+and+diet.">SLE: another autoimmune disorder influenced by microbes and diet.</a> Frontiers of Immunology. 6, 608 (2015).</li><li>Tektonidou, M. G., Wang, Z., Dasgupta, A., Ward, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+serious+infections+in+adults+with+systemic+lupus+erythematosus:+a+national+population-based+study.">Burden of serious infections in adults with systemic lupus erythematosus: a national population-based study.</a> Arthritis Care &amp; Research. 67 (8), 1078-1085 (2015).</li><li>Mu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+lupus+nephritis+by+changes+of+gut+microbiota.">Control of lupus nephritis by changes of gut microbiota.</a> Microbiome. 5 (1), 73 (2017).</li><li>Panek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+challenges+in+studying+human+gut+microbiota+-+effects+of+collection,+storage,+DNA+extraction+and+next+generation+sequencing+technologies.">Methodology challenges in studying human gut microbiota - effects of collection, storage, DNA extraction and next generation sequencing technologies.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5143 (2018).</li><li>Fiedorov&#225;, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+dna+extraction+methods+on+stool+bacterial+and+fungal+microbiota+community+recovery.">The impact of dna extraction methods on stool bacterial and fungal microbiota community recovery.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 821 (2019).</li><li>Gerasimidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+DNA+extraction+methodology+on+gut+microbiota+research+applications.">The effect of DNA extraction methodology on gut microbiota research applications.</a> BMC Research Notes. 9, 365 (2016).</li><li>Bukin, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+16S+rRNA+region+choice+on+bacterial+community+metabarcoding+results.">The effect of 16S rRNA region choice on bacterial community metabarcoding results.</a> Scientific Data. 6 (1), 190007 (2019).</li><li>Galloway-Pe&#241;a, J., Hanson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+for+analysis+of+the+microbiome.">Tools for analysis of the microbiome.</a> Digestive Diseases and Sciences. 65 (3), 674-685 (2020).</li><li>Sharpton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+analysis+of+shotgun+metagenomic+data.">An introduction to the analysis of shotgun metagenomic data.</a> Frontiers in Plant Science. 5, 209 (2014).</li></ol>

Balanserad tarmmikrobiota kan skydda människokroppen från sjukdomar. När denna balans störs av externa eller interna utlösare kan konsekvenserna bli förödande. Denna metod presenterar ett sätt att analysera dynamiken i tarmmikrobiota i murina modeller. Metoden lämpar sig inte bara för jämförelser mellan grupper utan också för att spåra tarmmikrobiotan över tid för att bättre identifiera tidsberoende faktorer som stör tarmmikrobiotan.
Alla möss i experimentet måste hanteras...

Människor och bakterier har samexisterat under lång tid. De har etablerat ett medberoende förhållande med ömsesidiga fördelaktiga effekter som påverkar värdens immunsvar på kvantitativa och kvalitativa sätt1. Nya studier tyder på ett samband mellan tarmmikrobiotakompositionen och patogenesen av autoimmuna sjukdomar som inkluderar multipel skleros 2, reumatoid artrit3, typ2-diabetes 4, inflammatorisk tarmsjukdom5 och systemisk lupus erythematosus (SLE)6. Huruvida tarmmikrobiotan är huvudorsaken eller en sekundär effekt av dessa autoimmuna sjukdomar är dock fortfarande oklart7. Potentiellt kan tarmmikrobiota förvärra sjukdomen under effektorfasen av autoimmuna störningar eller spela en roll för att reglera induktionen av dessa sjukdomar8.
Tarmdysbios har rapporterats hos kvinnliga lupusbenägna MRL/Mp-Faslpr (MRL/lpr) möss, och tarmmikrobiotaförändringar med en signifikant utarmning av laktobaciller observerades9. När en blandning av fem Lactobacillus stammar administrerades oralt, lupus-liknande symtom dämpades till stor del i dessa möss, vilket tyder på en viktig roll av mikrobiota i regleringen av SLE patogenes.
Följande teknik för DNA-extraktion gör det möjligt att följa mikrobiotafluktuationer och analysera dem kvalitativt och kvantitativt under loppet av murin SLE-liknande sjukdom hos lupusbenägna möss. Oavsett om man ska undersöka den friska tarmmikrobiotan eller definiera dysbios är det viktigt att kritiskt undersöka hur data samlas in och om den är korrekt och reproducerbar10. Varje steg är avgörande i denna process. En lämplig metod måste användas för att extrahera mikrobiellt DNA eftersom eventuella problem med att införa fördomar under DNA-extraktionsprocessen kan leda till felaktig mikrobiell representation. Medan fenol-kloroformmetoden beskrivs här finns det kommersiellt tillgängliga kit för att extrahera DNA från bakterier som fungerar bra i vissa fall11. Deras användbarhet begränsas emellertid av kostnaden och den erforderliga provkvantiteten.
Protokollet som presenteras här är kostnadseffektivt och kräver endast en liten mängd prov. Det fungerar bra med alla typer av avföringsprover och är användbart för att studera dynamiken i tarmmikrobiotan över tid samt jämförelser mellan grupper. DNA isoleras med en metod för alkoholrening, som använder fenol, kloroform och isoamylalkohol. Alkoholbaserad extraktion hjälper till att rengöra och ta bort provet av proteiner och lipider, där DNA fälls ut i det sista steget. Den föreslagna metoden har signifikant hög effektivitet och kvalitet och har visat sig vara korrekt vid identifiering av bakteriepopulationer. En kritisk anmärkning under proceduren är att DNA-kontaminering kan uppstå, och därmed krävs lämplig provhantering12.
DNA:t analyseras sedan av nästa generations sekvenseringsplattformar för 16S rRNA-genen, såsom Illumina MiSeq. I synnerhet analyseras V4 hypervariabelregionen för att ge en bättre kvantifiering för högt rankade taxa13. Den efterföljande bioinformatikanalysen outsourcas, följt av intern analys med hjälp av vanliga statistiska metoder. Det finns många bioinformatikprogram med öppen källkod tillgängliga för nedströms sekvensering, och vilken typ av analyser som utförs beror starkt på den specifika biologiska frågan av intresse14. Detta protokoll fokuserar specifikt på de experimentella stegen före sekvensering och ger en mer mångsidig, kostnadseffektiv, jämförbar och effektiv metod för att erhålla DNA från fekala prover.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.1 mm glass beads</td>
			<td>BioSpec Products</td>
			<td>11079101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL screw cap tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% SDS</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1311-1</td>
			<td>SDS 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96% Ethanol, Molecular Biology Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T032021000CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Acetate (5 M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9071</td>
			<td>NH4AC 5M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>005582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender storm 24</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>4116-BBY24M</td>
			<td>Homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC-Treated Water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediamine Tetraacetic Acid</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP118-500</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil plate seal</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>NC0302491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes-Kimtech 34256</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>06-666C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRL/MpJ-Faslpr/J (MRL/lpr) mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>000485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotomer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND2000CLAPTOP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol: chloroform: isoamylalchohol (25:24:1)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1752I-400</td>
			<td>PCI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale with 4 decimals</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MS205DU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skirted 96-well plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AB-0800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>15528154</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydrochloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1757-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>SI-0236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of fecal microbiota dynamics in lupus-prone mice using a simple, cost-effective dna isolation method

Tarmmikrobiota har en viktig roll för att utbilda immunsystemet. Detta förhållande är oerhört viktigt för att förstå autoimmuna sjukdomar som inte bara drivs av genetiska faktorer utan också miljöfaktorer som kan utlösa uppkomsten och / eller förvärra sjukdomsförloppet. En tidigare publicerad studie om tarmmikrobiotans dynamik hos lupusbenägna MRL/lpr-honmöss visade hur förändringar i tarmmikrobiotan kan förändra sjukdomsförloppet. Här beskrivs ett protokoll för att extrahera representativa prover från tarmmikrobiotan för studier av autoimmunitet. Mikrobiotaprover samlas in från anus och bearbetas, från vilka DNA extraheras med användning av en fenol-kloroformmetod och renas genom alkoholutfällning. Efter att PCR har utförts sekvenseras renade amplikoner med hjälp av en nästa generations sekvenseringsplattform vid Argonne National Laboratory. Slutligen analyseras 16S ribosomala RNA-gensekvenseringsdata. Som ett exempel visas data som erhållits från tarmmikrobiotajämförelser av MRL/lpr-möss med eller utan CX3CR1. Resultaten visade signifikanta skillnader i släkten som innehåller patogena bakterier såsom de i fylumet Proteobacteria, liksom släktet Bifidobacterium, som anses vara en del av den friska kommensala mikrobiotan. Sammanfattningsvis är denna enkla, kostnadseffektiva DNA-isoleringsmetod tillförlitlig och kan hjälpa till att undersöka tarmmikrobiotaförändringar i samband med autoimmuna sjukdomar.

Resultaten från Argonne National Laboratory analyseras av en kvalificerad bioinformatiker, följt av en intern analys av data med hjälp av statistiska standardmetoder. Typiska mikrobiomanalyser involverar klustring av liknande sekvenser i operativa taxonomiska enheter (OTU) eller ampliconsekvensvarianter (ASV) som en proxy för olika mikroorganismer i ett prov. Antal OTU eller ASV:er över prover kan sedan användas för att testa förändringar i mångfald inom provet (alfa) och mångfald mellan prov (beta). De kan oc...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method at JoVE.com

Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method

Detta protokoll ger en enkel, kostnadseffektiv DNA-isoleringsmetod för analys av murina tarmmikrobiotaförändringar under utvecklingen av autoimmun sjukdom.

Analys av fekal mikrobiotadynamik hos lupusbenägna möss med hjälp av en enkel, kostnadseffektiv DNA-isoleringsmetod

Gut microbiota has an important role in educating the immune system. This relationship is extremely important for understanding autoimmune diseases that ...

Den föreslagna DNA-isoleringsmetoden kan tjäna till att studera tarmmikrobiotadynamiken i autoimmuna sjukdomar musmodeller. En mer mångsidig, kostnadseffektiv och effektiv metod föreslås för att erhålla DNA från fekala prover som är jämförbara med kommersiellt tillgängliga kit. För att börja, ta varje mus individuellt ur buret, samla en fekal pellet direkt från anusen och förvara den vid minus 80 grader Celsius tills den bearbetas.Bearbeta proverna med sterila och rena pincett, rör och handskar. Tillsätt en frusen pellet till ett förvägt, två milliliters skruvlockrör och registrera fekalvikten i gram, som bör vara mellan 0,02 och 0,05 gram per fekal pellet. Lägg till pelleten ett tunt lager av 0,1 millimeter glaspärlor, 500 mikroliter lysbuffert och 200 mikroliter 20% natriumdodecylsulfat.Pärlan slog röret i fyra minuter i en homogenisator, följt av tre till fem minuters virvel. Centrifugera rören under en kort tid för att eliminera bubblorna och skummet. För att extrahera DNA från mikrobiotaproverna, överför 350 mikroliter provsupernatant till ett nytt 1,5 ml snap cap-rör, utan skräp.Tillsätt 500 mikroliter fenol:kloroform:isoamylalkohol, i förhållandet 25:24:1, och virvel i en minut. Efter centrifugering, överför 180 mikroliter av den övre vattenfasen till ett nytt 1,5 ml snäpplockrör. Tillsätt 180 mikroliter kloroform, invertera och blanda.Från detta överför 180 mikroliter av vattenfasen till ett nytt snap cap-rör. I ett biosäkerhetsskåp tillsätt 180 mikroliter kall isopropanol och 36 mikroliter fem molära ammoniumacetat. Vänd det några gånger för att blanda och placera röret på is i 20 minuter.Kassera supernatanten, följt av att tvätta pellets flera gånger med 500 mikroliter kall 70% etanol. Kassera supernatanten och lufttorka röret upp och ner på silkespapper i 20 minuter tills pelleten blir klar. Suspendera pelleten i 50 mikroliter vatten av molekylär kvalitet och värm vätskan vid 37 grader Celsius i 10 minuter för att helt lösa upp stora DNA-pellets.Efter uppvärmning, centrifugera dessa rör vid 3 400 gånger G i en minut för att återvinna kondensdropparna från locket. Mät koncentrationen och få förhållandet 260/280 med hjälp av en spektrofotometer. Ett förhållande för DNA av god kvalitet är i allmänhet mellan 1,8 och två.Centrifugera de beredda proverna vid 600 gånger G i en minut vid rumstemperatur innan de fryser vid minus 80 grader Celsius i 24 timmar. Skicka sedan 20 mikroliter prover med koncentrationer från ett till 50 nanogram per mikroliter till Argonne National Laboratory för sekvensering. Musstammen som saknar receptorn CX3CR1 har en annan tarmmikrobiotasammansättning jämfört med MRL / lpr av vild typ, MRL / lpr-CX3CR1 GFP / GFP-möss, visar signifikanta skillnader i vissa släkten, relevanta för potentiellt patogena bakterier som de i fylumet Proteobacteria.Var försiktig med att förorena provet. Det måste vara sterilt. Det är också viktigt pipettering med noggrannhet vid överföring av supernatanten i ett nytt rör.Denna metod är lämplig för molekylär analys såsom PCR, restriktionsenzymsmältning eller genomisk bibliotekskonstruktion. I lupus visade vi ett starkt samband mellan tarmmikrobiotan och lupusprogressionen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Omfattande och kostnadseffektiva Laboratoriet Övervakning av hiv / aids: ett afrikanskt föredöme

We present the video about assisting anti-retroviral therapy (ART) by an apt laboratory service - representing a South-African role model for economical ...

Cost-effective Method for Microbial Source Tracking Using Specific Human and Animal Viruses

Kostnadseffektiv metod för mikrobiell källa Spårning med specifika människors och djurs virus

Microbial contamination of the environment represents a significant health risk. Classical bacterial fecal indicators have shown to have significant ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

En metod för märkning vaskulatur i embryonala möss

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

En enkel Chelex protokoll för DNA-extraktion från<em&gt; Anopheles</em&gt; SPP.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Isolation and Genome Analysis of Single Virions using 'Single Virus Genomics'

Isolering och Genome Analys av Single Virioner använder &quot;enda virus Genomics &#39;

Whole genome amplification and sequencing of single microbial cells enables genomic characterization without the need of cultivation 1-3. Viruses, which ...

An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota

En in vitro-modell för att uppskatta effekterna av interventionella regimer på human fekal Microbiota

The emerging role of the gut microbiome in several human diseases demands a breakthrough of new tools, techniques and technologies. Such improvements are ...

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

Analys av interaktioner mellan Endobiotika och Human Gut Microbiota med in vitro-system för bad jäsning

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

En DNA/Ki67-baserad flödescytometrianalys för cellcykelanalys av antigenspecifika CD8 T-celler hos vaccinerade möss

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...

Fecal (micro) RNA Isolation

Fecal micro RNA Isolation

Fekal (mikro) RNA-isolering

It is becoming clear that RNA exists in the gut lumen and feces in animals and humans. The protocol described below isolates total RNA including microRNAs ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

Terapeutisk utvärdering av fekal mikrobiotatransplantation i en interleukin 10-bristfällig musmodell

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...