Name: quantitative analysis of viscoelastic properties of red blood cells using optical tweezers and defocusing microscopy
Uploaded: 2022-03-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Viscoelastic Properties of Red Blood Cells Using Optical Tweezers and Defocusing Microscopy at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke alle medlemmene av CENABIOs avanserte mikroskopianlegg for viktig hjelp. Dette arbeidet ble støttet av de brasilianske byråene Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) - Financial Code 001, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ), og Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Fluidos Complexos (INCT-FCx) sammen med Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP). BP ble støttet av et JCNE-stipend fra FAPERJ.

Menneskelige blodprøver ble levert av voksne menn og kvinner frivillige i henhold til protokoller godkjent av forskningsetisk komité ved Federal University of Rio de Janeiro (protokoll 2.889.952) og registrert i Brasil-plattformen under CAAE-nummer 88140418.5.0000.5699. En skriftlig form for samtykke ble utstedt til og samlet inn fra alle frivillige. De med hemoglobinopati og/eller kontrollerte medikamenter ble ekskludert. Hele prosessen fulgte de retningslinjer som ble godkjent av instituttets etiske komité.
<p c...

<ol>
	<li>Fowler, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+erythrocyte+plasma+membrane:+a+Rosetta+Stone+for+decoding+membrane-cytoskeleton+structure.">The human erythrocyte plasma membrane: a Rosetta Stone for decoding membrane-cytoskeleton structure.</a> Current Topics in Membranes. 72, 39-88 (2013).</li><li>Tomaiuolo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+properties+of+red+blood+cells+in+health+and+disease+towards+microfluidics.">Biomechanical properties of red blood cells in health and disease towards microfluidics.</a> Biomicrofluidics. 8 (5), 051501 (2014).</li><li>Depond, M., Henry, B., Buffet, P., Ndour, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+investigate+the+deformability+of+RBC+during+malaria.">Methods to investigate the deformability of RBC during malaria.</a> Frontiers in Physiology. 10, 1613 (2019).</li><li>Boal, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mechanics of the Cell. 2 edn. , (2012).</li><li>Balland, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Power+laws+in+microrheology+experiments+on+living+cells:+Comparative+analysis+and+modeling.">Power laws in microrheology experiments on living cells: Comparative analysis and modeling.</a> Physical Review E. 74 (2), 021911 (2006).</li><li>Amin, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microrheology+of+red+blood+cell+membranes+using+dynamic+scattering+microscopy.">Microrheology of red blood cell membranes using dynamic scattering microscopy.</a> Optics Express. 15 (25), 17001-17009 (2007).</li><li>Puig-de-Morales-Marinkovic, M., Turner, K. T., Butler, J. P., Fredberg, J. J., Suresh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscoelasticity+of+the+human+red+blood+cell.">Viscoelasticity of the human red blood cell.</a> American Journal of Physiology Cell Physiology. 293 (2), 597-605 (2007).</li><li>Gomez, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cell+geometry+in+the+evaluation+of+erythrocyte+viscoelastic+properties.">Effect of cell geometry in the evaluation of erythrocyte viscoelastic properties.</a> Physical Review E. 101 (6-1), 062403 (2020).</li><li>Gomez, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+maturation+across+the+intra-erythrocytic+cycle+shifts+the+soft+glassy+viscoelastic+properties+of+red+blood+cells+from+a+liquid-like+towards+a+solid-like+behavior.">Plasmodium falciparum maturation across the intra-erythrocytic cycle shifts the soft glassy viscoelastic properties of red blood cells from a liquid-like towards a solid-like behavior.</a> Experimental Cell Research. 397 (2), 112370 (2020).</li><li>Pompeu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+to+measure+the+membrane+tension+and+bending+modulus+of+cells+using+optical+tweezers+and+scanning+electron+microscopy.">Protocol to measure the membrane tension and bending modulus of cells using optical tweezers and scanning electron microscopy.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100283 (2021).</li><li>Agero, U., Mesquita, L. G., Neves, B. R., Gazzinelli, R. T., Mesquita, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defocusing+microscopy.">Defocusing microscopy.</a> Microscopy Research and Technique. 65 (3), 159-165 (2004).</li><li>Agero, U., Monken, C. H., Ropert, C., Gazzinelli, R. T., Mesquita, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+fluctuations+studied+with+defocusing+microscopy.">Cell surface fluctuations studied with defocusing microscopy.</a> Physical Review E. 67 (5), 051904 (2003).</li><li>Roma, P. M. S., Siman, L., Amaral, F. T., Agero, U., Mesquita, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+three-dimensional+imaging+of+phase+objects+using+defocusing+microscopy:+Application+to+red+blood+cells.">Total three-dimensional imaging of phase objects using defocusing microscopy: Application to red blood cells.</a> Applied Physics Letters. 104 (25), 251107 (2014).</li><li>K&#246;hler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+illumination+for+photomicrographical+purposes.">New method of illumination for photomicrographical purposes.</a> Journal of the Royal Microscopical Society. 14, 261-262 (1894).</li><li>Nans, A., Mohandas, N., Stokes, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+ultrastructure+of+the+red+cell+cytoskeleton+by+cryo-electron+tomography.">Native ultrastructure of the red cell cytoskeleton by cryo-electron tomography.</a> Biophysical Journal. 101 (10), 2341-2350 (2011).</li><li>Ayala, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheological+properties+of+cells+measured+by+optical+tweezers.">Rheological properties of cells measured by optical tweezers.</a> BMC Biophysics. 9, 5 (2016).</li><li>Ayala, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cytoskeletal+drugs+on+actin+cortex+elasticity.">Effects of cytoskeletal drugs on actin cortex elasticity.</a> Experimental Cell Research. 351 (2), 173-181 (2017).</li></ol>

I denne protokollen presenteres en integrert metode basert på optisk pinsett og defokuseringsmikroskopi for kvantitativt å kartlegge de viskoelastiske egenskapene til RBC. Resultater for lagrings- og tapsskjærmoduli, sammen med skaleringseksponenten som karakteriserer den myke glassaktige reologien til RBC, bestemmes. Anvendelse av denne protokollen for forskjellige eksperimentelle forhold, som i fysiologisk situasjon8 eller langs hvert stadium av P. falciparum intra-erytrocytisk syklu...

Eldre røde blodlegemer (RBC), også kjent som erytrocytter, er i stand til å strekke seg mer enn dobbelt så store når de passerer gjennom de smaleste kapillærenei menneskekroppen. Slike kapasiteter tilskrives deres unike evne til å deformere når de utsettes for ytre belastninger.
De siste årene har forskjellige studier karakterisert denne funksjonen i RBC-overflater 2,3. Fysikkområdet som beskriver materialets elastiske og viskøse responser på grunn av ytre belastninger kalles reologi. Generelt, når en ekstern kraft påføres, avhenger den resulterende deformasjonen av materialets egenskaper og kan deles inn i elastiske deformasjoner, som lagrer energi, eller viskøse deformasjoner, som sprer energi4. Alle celler, inkludert RBC, utviser en viskoelastisk oppførsel; Med andre ord blir energi både lagret og spredt. Den viskoelastiske responsen til en celle kan således karakteriseres ved dens komplekse skjærmodul G * (ω) = G'(ω) + iG"(ω), hvor G '(ω) er lagringsmodulen, relatert til den elastiske oppførselen, og G "(ω) er tapsmodulen, relatert til viskositeten4. Videre har fenomenologiske modeller blitt brukt til å beskrive celleresponser, en av de mest brukte kalles den myke glassaktige reologimodellen5, preget av en kraftlovavhengighet av den komplekse skjærmodulen med lastfrekvensen.
Encellebaserte metoder har blitt brukt til å karakterisere de viskoelastiske egenskapene til RBC, ved å anvende kraft og måle forskyvning som en funksjon av den påførte belastningen 2,3. For den komplekse skjærmodulen finnes imidlertid få resultater i litteraturen. Ved bruk av dynamisk lysspredning ble verdier for RBC-lagring og tapsmoduli rapportert varierende fra 0,01-1 Pa, i frekvensområdet 1-100 Hz6. Ved bruk av optisk magnetisk vridningscytometri fikk man en tilsynelatende kompleks elastisk modul7, og for sammenlikningsformål hevdet man en multiplikativ faktor som eventuelt kunne avklare avvikene.
Mer nylig bledet etablert en ny metodikk basert på optisk pinsett (OT) sammen med defokuseringsmikroskopi (DM), som et integrert verktøy for kvantitativt å kartlegge lagring og tap av skjærmoduler av humane erytrocytter over tidsavhengige belastninger, 8,9. I tillegg ble en myk glassaktig reologimodell brukt for å passe resultatene og oppnå en kraftlovkoeffisient som karakteriserer RBCene 8,9.
Samlet sett klargjør den utviklede metodikken8,9, protokollen som er beskrevet i detalj nedenfor, tidligere uoverensstemmelser ved å bruke de målte verdiene for formfaktoren, Ff, som relaterer krefter og deformasjoner til spenninger og tøyninger i RBC-overflaten og kan brukes som en ny diagnostisk metode som er i stand til kvantitativt å bestemme viskoelastiske parametere og myke glassaktige egenskaper av RBC oppnådd fra individer med forskjellig blod Patologi. Slik karakterisering, ved hjelp av protokollen beskrevet nedenfor, kan åpne for nye muligheter for å forstå oppførselen til RBC fra et mekanobiologisk perspektiv.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35mm culture dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Knittel Glass</td>
			<td>VD12460Y1A.01 and VD12432Y1A.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-bottom dishes</td>
			<td>MatTek Life Sciences</td>
			<td>P35G-0-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MXA22165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KaleidaGraph</td>
			<td>Synergy Software</td>
			<td>https://www.synergy.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>C11440-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer chamber</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BR717805-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>PLAN APO 100X 1.4 NA DIC H; PLAN APO 60x 1.4 NA DIC H and Plan APO 10x XXNA PH2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical table</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>T1020CK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OT laser</td>
			<td>IPG Photonics</td>
			<td>YLR-5-1064-LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene microspheres</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>17134-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rubber ring</td>
			<td>Forever Seals</td>
			<td>NBR O-Ring</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>Z273554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stage positioning</td>
			<td>PI</td>
			<td>P-545.3R8S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>P1000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative analysis of viscoelastic properties of red blood cells using optical tweezers and defocusing microscopy

De viskoelastiske egenskapene til erytrocytter har blitt undersøkt ved hjelp av en rekke teknikker. De rapporterte eksperimentelle dataene varierer imidlertid. Dette tilskrives ikke bare den normale variasjonen av celler, men også til forskjellene i metoder og modeller for cellerespons. Her brukes en integrert protokoll ved hjelp av optisk pinsett og defokuseringsmikroskopi for å oppnå de reologiske egenskapene til røde blodlegemer i frekvensområdet 1 Hz til 35 Hz. Mens optisk pinsett brukes til å måle erytrocytkompleksets elastiske konstant, er defokuseringsmikroskopi i stand til å oppnå cellehøydeprofilen, volumet og dens formfaktor en parameter som tillater konvertering av kompleks elastisk konstant til kompleks skjærmodul. Ved å anvende en myk glassaktig reologimodell, kan skaleringseksponenten for begge modulene oppnås. Den utviklede metoden gjør det mulig å utforske den mekaniske oppførselen til røde blodlegemer, karakterisere deres viskoelastiske parametere, oppnådd under veldefinerte eksperimentelle forhold, for flere fysiologiske og patologiske forhold.

Figur 1 viser skjemaene til OT-systemet som ble brukt til reologimålingene. Figur 2 viser skjemaene til mikroreologieksperimentet med begge sfærer, og en representativ RBC er også vist. Figur 3 viser en typisk kurve for amplitudene til begge sfærene som en funksjon av tiden når sinusformede bevegelser produseres av det piezoelektriske stadiet. Mens referansesfæren (figur 3 - rød kurve) svinger etter scenebevegelsen, svinger R...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Viscoelastic Properties of Red Blood Cells Using Optical Tweezers and Defocusing Microscopy at JoVE.com

Quantitative Analysis of Viscoelastic Properties of Red Blood Cells Using Optical Tweezers and Defocusing Microscopy

Her beskrives en integrert protokoll basert på optisk pinsett og defokuseringsmikroskopi for å måle cellens reologiske egenskaper. Denne protokollen har bred anvendelighet ved å studere de viskoelastiske egenskapene til erytrocytter under variable fysiopatologiske forhold.

Kvantitativ analyse av viskoelastiske egenskaper til røde blodlegemer ved hjelp av optisk pinsett og defokuseringsmikroskopi

The viscoelastic properties of erythrocytes have been investigated by a range of techniques. However, the reported experimental data vary. This is not ...

Denne metoden gjør det mulig å utforske den mekaniske oppførselen til erytrocytter, karakterisere deres viskoelastiske parametere og myke glassaktige egenskaper for flere fysiologiske og patologiske forhold. Vår encellebaserte metode verifiserer videoreferanser ved å bruke metallverdiene for formfaktoren som relaterer krefter og forskyvninger, spenninger og skraper i erytrocyttoverflaten. Begynn med å helle silikonfett over gummiringsoverflaten på en måte som dekker hele omkretsen.Deretter plasserer du gummiringen på dekselet med fettsiden mot dekselet. Vent i fem minutter for riktig vedlegg, og prøveholderne er da klare til å motta cellekulturen. Deretter, med løsningen av celler som tidligere er fremstilt etter den skriftlige protokollen, frø cellene i prøveholderen.Tilsett 0,2 mikroliter av en 10% volum volum polystyren kule løsning til prøven. Plasser det andre dekselet over gummiringen. Lukk oppsettet og fullfør prøveklargjøringen.Til slutt flytter du hele prøven til mikroskopet. For å starte med eksperimenteringen, bruk OT-systemet, fell sfæren med OT-laseren, og fest den deretter til dekselet, nær cellen. Deretter fanger du en annen kule og gjentar den samme festeprosedyren ved å trykke kulen mot celleoverflaten, nær den øverste overflaten og nær cellekanten.Legg til en sinusformet funksjon av amplitude og varierende frekvenser. Deretter trykker du på startknappen, ved hjelp av det piezoelektriske trinnet for å tillate den piezoelektriske forskyvningen. Hold RBC-sfæren i fellen og send prøven til en bevegelsessyklus ved hjelp av den tidligere innstilte sinusformede funksjonen.For analyse, åpne ImageJ-programvaren og importer hele filmen som er oppnådd under sinusformede bevegelser. Klikk på juster, og velg deretter alternativterskel. Juster terskelen med begge rullefeltene, og velg referansesfæren ved å klikke på fil, etterfulgt av rektangel.Klikk deretter på angi målinger i analysefanen"og velg massesenter"alternativet. Klikk igjen på analysefanen og velg analyser partikler. Et nytt vindu som inneholder en tabell med xy-koordinater for sentrum av massen vises.Gjenta prosedyren for den andre sfæren festet til RBC-overflaten. Åpne analyseprogramvaren og importer txt-filene som tidligere er oppnådd. Generer et plott med massesentrene på y-aksen og tiden på x-aksen.Plott resultatene på en graf ved hjelp av x-aksen for tapskonstant, betegnet med K dobbel prime, og y-aksen for lagringskonstant, betegnet med K prime. For det første, for videooppkjøp, flytt det piezoelektriske trinnet i xy-retningen, ved hjelp av programvaren for å søke etter en isolert celle festet til dekselet. Fell og fest en polystyrenkule med kjent diameter til RBC-overflaten.Deretter flytter du den fangede perlen festet til RBC-overflaten ved hjelp av det piezoelektriske trinnet for å deformere cellen, og fest deretter perlen til dekselet. Endre nå z-akseposisjonen for å finne det fokuserte bildet. Etter å ha festet posisjonen, bruk kameraprogramvaren til å lage en film av hele cellen.Flytt deretter z-akseposisjonen to mikrometer ned eller opp for å få et defokusert bilde for den valgte cellen. Til slutt, uten å endre z-akseposisjonen, søk etter et område uten celler for å gjenta samme prosedyre, og lag en film av bildebakgrunnen. For kontrastbildeoppkjøp, finn først verdien av N null, klikk på polygonvalgikonet, klikk deretter på analysefanen og velg mål.Deretter bruker du kontrastligningen til å bestemme N-bilde minus N null, og utfører dette ved å velge matematikk "under prosess, etterfulgt av subtrahering. Senere deler du resultatet med N null minus B.Til slutt finner du kontrasten for de fokuserte og defokuserte bildene. Bruk nå Hartley-transformasjonen for å oppnå RBC-tykkelsen.I ImageJ klikker du på prosess, etterfulgt av FFT "og FFT-alternativer, og velger deretter FHT. Utfør deretter den inverse transformere FHT ved å velge prosess, etterfulgt av FFT "og FFT. Bruk det resulterende bildet for å få høydeprofilen.Når du har funnet bildet som inneholder RBC-høydeprofilen, bruker du de to mikrometerne defokusert kontrast til å lage et sett med to bilder i ImageJ. Hvis du vil finne formfaktoren, bruker du en ImageJ-tilpasset makro til å analysere stakken. Makroen vil levere en tabell med kantens posisjon, omkretsen, den inverse av omkretsen og et bilde av den analyserte cellen.Kontroller om kantene på dette bildet ligner kantene på referansefiguren. Ellers gjentar du prosedyren, og bruker summen av den inverse av omkretsen for å finne formfaktoren. Start med å organisere de eksperimentelle dataene i en tabell.Opprett en ny tabell i analyseprogrammet ved å klikke på filfanen. Bestem 10 forskjellige kolonner for parametrene. For å plotte kurven G prime og G double prime i analyseprogramvaren, bruk dataene fra forrige tabell og klikk på plottknappen.For å hente parameterne Gamma og GM, klikk på fanen kurvetilpasning og velg fit1" for å åpne et nytt vindu. Velg firkanten, klikk på definer-knappen, og skriv inn ligningen. Klikk på ok"-knappen i begge vinduene, og beslaget vises.Deretter lager du to andre tomter, nemlig G prime og G double prime som en funksjon av omega. Plasser feilfeltene bare på y-aksen, som tidligere vist. Gjenta kurvetilpasningsprosedyren, velg G "alternativet.Klikk kurvedefinisjon "under generell tilpasning, og skriv deretter den aktuelle formelen. Til slutt klikker du på ok, og en kurvetilpasning vises sammen med verdiene for Alpha og G zero. Igjen, utfør en annen kurvetilpasningsprosedyre.Velg G "alternativ, klikk kurvedefinisjon" under generell tilpasning, og skriv deretter den aktuelle formelen. Til slutt klikker du på ok, og en kurvetilpasning vises. Figuren viser lagringselastisk konstant som funksjon av tapselastiskonstanten.Den lineære avhengigheten som observeres viser at RBC-overflaten kan betraktes som et mykt glassaktig materiale. Ved å bruke verdiene for total celleformfaktor og RBC-overflatetykkelse, kan verdiene for eksponenten alfa bestemmes. Denne teknikken kan gi grunnlag for nye diagnostiske metoder som korrelerer endringer i erytrocytters viskoelastiske egenskaper med modifikasjoner i blodstrømmen hos individer med forskjellige patologier.

Research

JoVE Journal

Biology

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitative Live-Cell fluorescens-mikroskopi Analyse av Fission gjær

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Kvantitativ analyse av Random migrasjon av celler ved hjelp av Time-lapse video Mikroskopi

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

Kvantitativ analyse av Autophagy med Avansert 3D fluorescens mikroskopi

Prostate cancer is the leading form of malignancies among men in the U.S. While surgery carries a significant risk of impotence and incontinence, ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering og analyse av mRNA molekyler med fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induksjon og analyse av Epiteliale til Mesenchymale Transition

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Klonal Sporing av Hematopoetiske Stem og stamceller Preget av fem Fluorescent Proteiner bruker Confocal og multiphoton Mikros

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Teknikker for analyse av Ekstracellulær Blemmer ved hjelp av flowcytometri

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...