Name: quantitative analysis of viscoelastic properties of red blood cells using optical tweezers and defocusing microscopy
Uploaded: 2022-03-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Viscoelastic Properties of Red Blood Cells Using Optical Tweezers and Defocusing Microscopy at JoVE.com

Författarna vill tacka alla medlemmar i CENABIO avancerade mikroskopianläggning för all viktig hjälp. Detta arbete stöddes av de brasilianska byråerna Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) - Financial Code 001, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) och Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Fluidos Complexos (INCT-FCx) tillsammans med Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP). B.P. stöddes av ett JCNE-bidrag från FAPERJ.

Mänskliga blodprover tillhandahölls av vuxna män och kvinnor volontärer enligt protokoll godkända av forskningsetikkommittén vid Federal University of Rio de Janeiro (protokoll 2.889.952) och registrerade i Brasilien Platform under CAAE-nummer 88140418.5.0000.5699. En skriftlig form av samtycke utfärdades till och samlades in från alla volontärer. De med någon hemoglobinopati och / eller tar kontrollerad medicinering uteslöts. Hela processen följde de riktlinjer som godkänts av institutets etiska kommitté.<...

<ol>
	<li>Fowler, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+erythrocyte+plasma+membrane:+a+Rosetta+Stone+for+decoding+membrane-cytoskeleton+structure.">The human erythrocyte plasma membrane: a Rosetta Stone for decoding membrane-cytoskeleton structure.</a> Current Topics in Membranes. 72, 39-88 (2013).</li><li>Tomaiuolo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+properties+of+red+blood+cells+in+health+and+disease+towards+microfluidics.">Biomechanical properties of red blood cells in health and disease towards microfluidics.</a> Biomicrofluidics. 8 (5), 051501 (2014).</li><li>Depond, M., Henry, B., Buffet, P., Ndour, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+investigate+the+deformability+of+RBC+during+malaria.">Methods to investigate the deformability of RBC during malaria.</a> Frontiers in Physiology. 10, 1613 (2019).</li><li>Boal, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mechanics of the Cell. 2 edn. , (2012).</li><li>Balland, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Power+laws+in+microrheology+experiments+on+living+cells:+Comparative+analysis+and+modeling.">Power laws in microrheology experiments on living cells: Comparative analysis and modeling.</a> Physical Review E. 74 (2), 021911 (2006).</li><li>Amin, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microrheology+of+red+blood+cell+membranes+using+dynamic+scattering+microscopy.">Microrheology of red blood cell membranes using dynamic scattering microscopy.</a> Optics Express. 15 (25), 17001-17009 (2007).</li><li>Puig-de-Morales-Marinkovic, M., Turner, K. T., Butler, J. P., Fredberg, J. J., Suresh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscoelasticity+of+the+human+red+blood+cell.">Viscoelasticity of the human red blood cell.</a> American Journal of Physiology Cell Physiology. 293 (2), 597-605 (2007).</li><li>Gomez, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cell+geometry+in+the+evaluation+of+erythrocyte+viscoelastic+properties.">Effect of cell geometry in the evaluation of erythrocyte viscoelastic properties.</a> Physical Review E. 101 (6-1), 062403 (2020).</li><li>Gomez, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+maturation+across+the+intra-erythrocytic+cycle+shifts+the+soft+glassy+viscoelastic+properties+of+red+blood+cells+from+a+liquid-like+towards+a+solid-like+behavior.">Plasmodium falciparum maturation across the intra-erythrocytic cycle shifts the soft glassy viscoelastic properties of red blood cells from a liquid-like towards a solid-like behavior.</a> Experimental Cell Research. 397 (2), 112370 (2020).</li><li>Pompeu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+to+measure+the+membrane+tension+and+bending+modulus+of+cells+using+optical+tweezers+and+scanning+electron+microscopy.">Protocol to measure the membrane tension and bending modulus of cells using optical tweezers and scanning electron microscopy.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100283 (2021).</li><li>Agero, U., Mesquita, L. G., Neves, B. R., Gazzinelli, R. T., Mesquita, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defocusing+microscopy.">Defocusing microscopy.</a> Microscopy Research and Technique. 65 (3), 159-165 (2004).</li><li>Agero, U., Monken, C. H., Ropert, C., Gazzinelli, R. T., Mesquita, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+fluctuations+studied+with+defocusing+microscopy.">Cell surface fluctuations studied with defocusing microscopy.</a> Physical Review E. 67 (5), 051904 (2003).</li><li>Roma, P. M. S., Siman, L., Amaral, F. T., Agero, U., Mesquita, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+three-dimensional+imaging+of+phase+objects+using+defocusing+microscopy:+Application+to+red+blood+cells.">Total three-dimensional imaging of phase objects using defocusing microscopy: Application to red blood cells.</a> Applied Physics Letters. 104 (25), 251107 (2014).</li><li>K&#246;hler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+illumination+for+photomicrographical+purposes.">New method of illumination for photomicrographical purposes.</a> Journal of the Royal Microscopical Society. 14, 261-262 (1894).</li><li>Nans, A., Mohandas, N., Stokes, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+ultrastructure+of+the+red+cell+cytoskeleton+by+cryo-electron+tomography.">Native ultrastructure of the red cell cytoskeleton by cryo-electron tomography.</a> Biophysical Journal. 101 (10), 2341-2350 (2011).</li><li>Ayala, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheological+properties+of+cells+measured+by+optical+tweezers.">Rheological properties of cells measured by optical tweezers.</a> BMC Biophysics. 9, 5 (2016).</li><li>Ayala, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cytoskeletal+drugs+on+actin+cortex+elasticity.">Effects of cytoskeletal drugs on actin cortex elasticity.</a> Experimental Cell Research. 351 (2), 173-181 (2017).</li></ol>

I detta protokoll presenteras en integrerad metod baserad på optisk pincett och defokuseringsmikroskopi för att kvantitativt kartlägga de viskoelastiska egenskaperna hos RBC. Resultat för lagrings- och förlustskjuvmodulen, tillsammans med skalningsexponenten som kännetecknar den mjuka glasartade reologin hos RBC bestäms. Tillämpning av detta protokoll för olika experimentella betingelser, såsom i fysiologisk situation8 eller längs varje stadium av P. falciparum intraerytrocytis...

Mogna röda blodkroppar (RBC), även kända som erytrocyter, kan sträcka sig mer än dubbelt så stor när de passerar genom de smalaste kapillärerna i människokroppen1. Sådan kapacitet tillskrivs deras unika förmåga att deformeras när de utsätts för yttre belastningar.
Under de senaste åren har olika studier karakteriserat denna funktion i RBC-ytor 2,3. Fysikområdet som beskriver de elastiska och viskösa svaren hos material på grund av yttre belastningar kallas reologi. I allmänhet, när en yttre kraft appliceras, beror den resulterande deformationen på materialets egenskaper och kan delas in i elastiska deformationer, som lagrar energi eller viskösa deformationer, som sprider energi4. Alla celler, inklusive röda blodkroppar, uppvisar ett viskoelastiskt beteende; Med andra ord både lagras och försvinner energi. Det viskoelastiska svaret hos en cell kan således karakteriseras av dess komplexa skjuvmodul G * (ω) = G'(ω) + iG "(ω), där G '(ω) är lagringsmodulen, relaterad till det elastiska beteendet, och G" (ω) är förlustmodulen, relaterad till dess viskositet4. Dessutom har fenomenologiska modeller använts för att beskriva cellsvar, en av de mest använda kallas den mjuka glasartade reologimodellen5, kännetecknad av ett kraftlagsberoende av den komplexa skjuvmodulen med belastningsfrekvensen.
Encellsbaserade metoder har använts för att karakterisera de viskoelastiska egenskaperna hos RBC, genom att applicera kraft och mäta förskjutning som en funktion av den pålagda belastningen 2,3. För den komplexa skjuvmodulen finns dock få resultat i litteraturen. Med hjälp av dynamisk ljusspridning rapporterades värden för RBC-lagring och förlustmoduler som varierade från 0,01-1 Pa, i frekvensområdet 1-100 Hz6. Genom att använda optisk magnetisk vridcytometri erhölls en uppenbar komplex elastisk modul7, och för jämförelseändamål hävdades en multiplikativ faktor för att möjligen klargöra skillnaderna.
Mer nyligen etablerades en ny metod baserad på optisk pincett (OT) tillsammans med defokuseringsmikroskopi (DM), som ett integrerat verktyg för att kvantitativt kartlägga lagring och förlust av skjuvmodul hos humana erytrocyter över tidsberoende belastningar, 8,9. Dessutom användes en mjuk glasartad reologimodell för att passa resultaten och erhålla en effektlagskoefficient som kännetecknar RBC: erna 8,9.
Sammantaget klargör den utvecklade metoden8,9, vars protokoll beskrivs i detalj nedan, tidigare avvikelser genom att använda de uppmätta värdena för formfaktorn, Ff, som relaterar krafter och deformationer till spänningar och töjningar i RBC-ytan och kan användas som en ny diagnostisk metod som kvantitativt kan bestämma de viskoelastiska parametrarna och mjuka glasartade egenskaperna hos RBC erhållna från individer med olika blod Patologier. Sådan karakterisering, med hjälp av protokollet som beskrivs nedan, kan öppna nya möjligheter att förstå beteendet hos RBC ur ett mekanobiologiskt perspektiv.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35mm culture dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Knittel Glass</td>
			<td>VD12460Y1A.01 and VD12432Y1A.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-bottom dishes</td>
			<td>MatTek Life Sciences</td>
			<td>P35G-0-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MXA22165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KaleidaGraph</td>
			<td>Synergy Software</td>
			<td>https://www.synergy.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>C11440-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer chamber</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BR717805-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>PLAN APO 100X 1.4 NA DIC H; PLAN APO 60x 1.4 NA DIC H and Plan APO 10x XXNA PH2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical table</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>T1020CK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OT laser</td>
			<td>IPG Photonics</td>
			<td>YLR-5-1064-LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene microspheres</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>17134-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rubber ring</td>
			<td>Forever Seals</td>
			<td>NBR O-Ring</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>Z273554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stage positioning</td>
			<td>PI</td>
			<td>P-545.3R8S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>P1000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative analysis of viscoelastic properties of red blood cells using optical tweezers and defocusing microscopy

De viskoelastiska egenskaperna hos erytrocyter har undersökts med en rad tekniker. De rapporterade experimentella data varierar dock. Detta tillskrivs inte bara cellernas normala variabilitet utan också skillnaderna i metoder och modeller för cellrespons. Här används ett integrerat protokoll som använder optisk pincett och defokuseringsmikroskopi för att erhålla de reologiska egenskaperna hos röda blodkroppar i frekvensområdet 1 Hz till 35 Hz. Medan optiska pincetter används för att mäta den erytrocytkomplexa elastiska konstanten, kan defokuseringsmikroskopi erhålla cellhöjdsprofilen, volymen och dess formfaktor en parameter som möjliggör omvandling av komplex elastisk konstant till komplex skjuvmodul. Genom att tillämpa en mjuk glasartad reologimodell kan skalningsexponenten för båda modulerna erhållas. Den utvecklade metoden gör det möjligt att utforska det mekaniska beteendet hos röda blodkroppar, som karakteriserar deras viskoelastiska parametrar, erhållna under väldefinierade experimentella betingelser, för flera fysiologiska och patologiska tillstånd.

Figur 1 visar schemat för OT-systemet som används för reologimätningarna. Figur 2 visar schemat för mikroreologiexperimentet med båda sfärerna och en representativ RBC visas också. Figur 3 visar en typisk kurva för amplituderna för båda sfärerna som en funktion av tiden när sinusformade rörelser produceras av det piezoelektriska steget. Medan referenssfären (figur 3 - röd kurva) svänger efter scenrörelsen, svänger...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Viscoelastic Properties of Red Blood Cells Using Optical Tweezers and Defocusing Microscopy at JoVE.com

Quantitative Analysis of Viscoelastic Properties of Red Blood Cells Using Optical Tweezers and Defocusing Microscopy

Här beskrivs ett integrerat protokoll baserat på optisk pincett och defokuseringsmikroskopi för att mäta cellernas reologiska egenskaper. Detta protokoll har bred tillämplighet vid studier av erytrocyters viskoelastiska egenskaper under variabla fysiopatologiska förhållanden.

Kvantitativ analys av viskoelastiska egenskaper hos röda blodkroppar med hjälp av optisk pincett och defokuseringsmikroskopi

The viscoelastic properties of erythrocytes have been investigated by a range of techniques. However, the reported experimental data vary. This is not ...

Denna metod gör det möjligt att utforska erytrocyternas mekaniska beteende, karakterisera deras viskoelastiska parametrar och mjuka glasartade egenskaper för flera fysiologiska och patologiska tillstånd. Vår encellsbaserade metod verifierar videoreferenser genom att använda metallvärdena för formfaktorn som relaterar krafter och förskjutningar, spänningar och skrapor i erytrocytytan. Börja med att hälla silikonfett över gummiringens yta på ett sätt som täcker hela omkretsen.Placera sedan gummiringen på täckglaset med fettsidan vänd mot täckglaset. Vänta i fem minuter för korrekt fastsättning, och provhållarna är sedan redo att ta emot cellkulturen. Därefter, med lösningen av celler som tidigare framställts enligt det skriftliga protokollet, frö cellerna i provhållaren.Tillsätt 0,2 mikroliter av en 10 volymprocent polystyrensfärisk lösning till provet. Placera det andra täckglaset ovanför gummiringen. Stäng installationen och avsluta provberedningen.Slutligen flytta hela provet till mikroskopet. För att börja med experimentet, använd OT-systemet, fånga sfären med OT-lasern och fäst den sedan på täckglaset, nära cellen. Fäll sedan en annan sfär och upprepa samma fästprocedur genom att trycka sfären mot cellytan, nära den övre ytan och nära cellkanten.Lägg till en sinusformad funktion av amplitud och varierande frekvenser. Tryck sedan på startknappen med hjälp av det piezoelektriska steget för att tillåta den piezoelektriska förskjutningen. Håll RBC-sfären i fällan och skicka provet till en rörelsecykel med den tidigare inställda sinusformade funktionen.För analys, öppna ImageJ-programvaran och importera hela filmen som erhållits under sinusformade rörelser. Klicka på justera och välj sedan alternativtröskel. Justera tröskeln med båda rullningslisterna och välj referenssfären genom att klicka på fil, följt av rektangel.Klicka sedan på fliken analysera uppsättningen mätningar"och välj masscentrum"alternativet. Klicka igen på fliken analysera och välj analysera partiklar. Ett nytt fönster som innehåller en tabell med xy-koordinater för mitten av massan visas.Upprepa proceduren för den andra sfären som är fäst vid RBC-ytan. Öppna analysprogrammet och importera txt-filerna som tidigare erhållits. Generera ett diagram med masscentrum på y-axeln och tid på x-axeln.Rita resultaten i ett diagram med x-axeln för förlustkonstant, betecknad med K dubbel primtal, och y-axeln för lagringskonstant, betecknad med K primtal. Först, för videoförvärv, flytta det piezoelektriska steget i xy-riktningen med hjälp av programvaran för att söka efter en isolerad cell fäst vid täckglaset. Fäll och fäst en polystyrensfär med känd diameter på RBC-ytan.Använd sedan det piezoelektriska steget, flytta den fångade pärlan som är fäst vid RBC-ytan för att deformera cellen och fäst sedan pärlan på täckläppen. Ändra nu z-axelns position för att hitta den fokuserade bilden. När du har fixerat positionen använder du kameraprogramvaran för att skapa en film av hela cellen.Flytta sedan z-axelns position två mikrometer nedåt eller uppåt för att få en ofokuserad bild för den valda cellen. Slutligen, utan att ändra z-axelns position, sök efter ett område utan celler för att upprepa samma procedur och skapa en film av bildbakgrunden. För kontrastbildförvärv, hitta först värdet på N noll, klicka på polygonvalsikonen, klicka sedan på fliken analysera och välj mått.Använd sedan kontrastekvationen för att bestämma N-bild minus N noll och kör detta genom att välja math"under process, följt av subtrahera. Senare delar du resultatet med N noll minus B.Slutligen, hitta kontrasten för de fokuserade och oskarpa bilderna. Använd nu Hartley-transformeringen för att erhålla RBC-tjockleken.I ImageJ klickar du på process, följt av FFT"och FFT-alternativ och väljer sedan FHT. Utför sedan den omvända transformen FHT genom att välja process, följt av FFT "och FFT. Använd den resulterande bilden för att få höjdprofilen.När du har hittat bilden som innehåller RBC-höjdprofilen använder du de två mikrometrarnas oskarpa kontrast för att skapa en uppsättning med två bilder i ImageJ. Om du vill hitta formfaktorn använder du ett anpassat ImageJ-makro för att analysera stacken. Makrot levererar en tabell med kantens position, omkretsen, inversen av omkretsen och en bild av den analyserade cellen.Kontrollera om kanterna på den här bilden liknar kanterna på referensbilden. Annars upprepar du proceduren och använder summan av omkretsens invers för att hitta formfaktorn. Börja med att organisera experimentella data i en tabell.Skapa en ny tabell i analysprogrammet genom att klicka på filfliken. Bestäm 10 olika kolumner för parametrarna. För att plotta kurvan G prime och G double prime i analysprogramvaran, använd data från föregående tabell och klicka på plot"knappen.För att få parametrarna Gamma och GM, klicka på fliken kurvpassning och välj fit1"för att öppna ett nytt fönster. Markera rutan, klicka på knappen definiera och skriv ekvationen. Klicka på okej"-knappen i båda fönstren så visas beslaget.Skapa sedan två andra tomter, nämligen G prime och G double prime som en funktion av omega. Placera felstaplarna endast på y-axeln, som tidigare visats. Upprepa kurvpassningsproceduren, välj G"alternativ.Klicka på kurvdefinition"under allmän anpassning och skriv sedan den berörda ekvationen. Klicka slutligen på okej så visas en kurvpassning tillsammans med värdena för Alpha och G zero. Återigen, utför en annan kurvpassningsprocedur.Välj G"alternativ, klicka på kurvdefinition"under allmän anpassning och skriv sedan den berörda ekvationen. Klicka slutligen på okej så visas en kurvpassning. Figuren visar den elastiska lagringskonstanten som en funktion av den elastiska förlustkonstanten.Det observerade linjära beroendet visar att RBC-ytan kan betraktas som ett mjukt glasartat material. Genom att tillämpa värdena för total cellformfaktor och RBC-yttjocklek kan värdena för exponenten Alpha bestämmas. Denna teknik kan ligga till grund för nya diagnostiska metoder som korrelerar förändringar i erytrocyters viskoelastiska egenskaper med förändringar i blodflödet hos individer med olika patologier.

Research

JoVE Journal

Biology

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

Faskontrast och differentierad interferenskontrast (DIC) Mikroskopi

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Isolering och odling av pulmonell endotelceller från neonatala möss

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitativa levande celler fluorescens-mikroskopi Analys av fissionsjäst

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Kvantitativ analys av Random migration av celler med Time-lapse video Mikroskopi

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

Kvantitativ analys av Autophagy med Advanced 3D Fluorescensmikroskopi

Prostate cancer is the leading form of malignancies among men in the U.S. While surgery carries a significant risk of impotence and incontinence, ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering och analys av mRNA-molekyler användning av fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion och Analys av Epithelial till mesenkymala övergång

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Klon Spårning av hematopoetiska stam och progenitorceller märkta med fem fluorescerande proteiner med hjälp Konfokal och multifoton mikroskopi

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Tekniker för analys av extracellulärt Blåsor Använda flödescytometri

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...