Name: laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00
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Aucun financement spécifique n’a été reçu pour ce travail.

Le comité d’éthique local du centre de référence tertiaire pour MRKHS (IRCCS San Raffaele University Hospital, Milan, Italie) a été informé et approuvé le protocole avant sa mise en œuvre en juillet 2017. Tous les patients ou tuteurs ont donné leur consentement éclairé signé pour le prélèvement et la cryoconservation des ovocytes par laparoscopie pendant la vaginoplastie et pour l’utilisation de données cliniques / de laboratoire anonymisées à des fins scientifiques.
<stron...

<ol>
	<li>Committee on Adolescent Health Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACOG+Committee+Opinion+No.+728:+M&#252;llerian+Agenesis:+Diagnosis,+Management,+And+Treatment.">ACOG Committee Opinion No. 728: M&#252;llerian Agenesis: Diagnosis, Management, And Treatment.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (1), 35-42 (2018).</li><li>Reichman, D. E., Laufer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome:+Fertility+counseling+and+treatment.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome: Fertility counseling and treatment.</a> Fertility and Sterility. 94 (5), 1941-1943 (2010).</li><li>Ben-Rafael, Z., Bar-Hava, I., Levy, T., Orvieto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplifying+ovulation+induction+for+surrogacy+in+women+with+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome.">Simplifying ovulation induction for surrogacy in women with Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 13 (6), 1470-1471 (1998).</li><li>Beski, S., Gorgy, A., Venkat, G., Craft, I. 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G., Batzer, F. R., Corson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+response+to+gonadotrophins,+optimal+method+for+oocyte+retrieval+and+pregnancy+outcome+in+patients+with+vaginal+agenesis.">Ovarian response to gonadotrophins, optimal method for oocyte retrieval and pregnancy outcome in patients with vaginal agenesis.</a> Human Reproduction. 14 (5), 1178-1181 (1999).</li><li>Raziel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surrogate+in+vitro+fertilization+outcome+in+typical+and+atypical+forms+of+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome.">Surrogate in vitro fertilization outcome in typical and atypical forms of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 27 (1), 126-130 (2012).</li><li>Egarter, C., Huber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+stimulation+and+retrieval+of+oocytes+in+patient+with+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster+syndrome.">Successful stimulation and retrieval of oocytes in patient with Mayer-Rokitansky-K&#252;ster syndrome.</a> Lancet. 1 (8597), 1283 (1988).</li><li>Candiani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+retrieval+during+laparoscopic+vaginoplasty+to+reduce+invasiveness+in+the+treatment+of+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome.">Oocyte retrieval during laparoscopic vaginoplasty to reduce invasiveness in the treatment of Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 27 (1), 74-79 (2020).</li><li>Fedele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+a+neovagina+by+Davydov's+laparoscopic+modified+technique+in+patients+with+Rokitansky+syndrome.">Creation of a neovagina by Davydov's laparoscopic modified technique in patients with Rokitansky syndrome.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 202 (1), 1-6 (2010).</li><li>ESHRE Working Group on Ultrasound in ART et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+good+practice+in+ultrasound:+oocyte+pick+up.">Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up.</a> Human Reproduction Open. 2019 (4), (2019).</li><li>Callens, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+on+surgical+and+non-surgical+treatments+for+vaginal+hypoplasia.">An update on surgical and non-surgical treatments for vaginal hypoplasia.</a> Human Reproductive Update. 20 (5), 775-801 (2014).</li><li>S&#246;nmezer, M., G&#252;l&#252;mser, &. #. 1. 9. 9. ;., S&#246;nmezer, M., S&#252;k&#252;r, Y. E., Atabeko&#287;lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transabdominal+ultrasound+guided+oocyte+retrieval+using+vaginal+ultrasound+probe:+Definition+of+the+technique.">Transabdominal ultrasound guided oocyte retrieval using vaginal ultrasound probe: Definition of the technique.</a> The Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 47 (2), 800-806 (2021).</li><li>Raju, G. A., Haranath, G. B., Krishna, K. M., Prakash, G. J., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+pregnancy+with+laparoscopic+oocyte+retrieval+and+in+vitro+fertilization+in+Mullerian+agenesis.">Successful pregnancy with laparoscopic oocyte retrieval and in vitro fertilization in Mullerian agenesis.</a> Singapore Medicine Journal. 47 (4), 329-331 (2006).</li><li>Liszewska-Kap&#322;on, M., Str&#243;zik, M., Kotarski, &. #. 3. 2. 1. ;., Bag&#322;aj, M., Hirnle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome+as+an+interdisciplinary+problem.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome as an interdisciplinary problem.</a> Advances in Clinical and Experimental Medicine. 29 (4), 505-511 (2020).</li><li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+management+during+the+adolescent+transition+period+of+girls+and+young+women+with+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome+(MRKHS):+A+systematic+literature+review.">Treatment management during the adolescent transition period of girls and young women with Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome (MRKHS): A systematic literature review.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 11 (1), 152 (2016).</li><li>Bean, E. J., Mazur, T., Robinson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome:+sexuality,+psychological+effects,+and+quality+of+life.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome: sexuality, psychological effects, and quality of life.</a> Journal of Pediatric and Adolescent Gynecology. 22 (6), 339-346 (2009).</li></ol>

Ce protocole réduit le caractère invasif dans le traitement du MRKHS en combinant les procédures de vaginoplastie et de prélèvement d’ovocytes. À cette fin, il est essentiel qu’une équipe dédiée soit désignée pour s’assurer que le moment de la COS, de l’intervention chirurgicale et de la vitrification ovocytaire est planifié efficacement.
Les patients atteints de MRKHS pour lesquels cette méthode laparoscopique combinée devrait être la plus bénéfique sont ceux chez qui...

Avec une incidence d’environ 1 femme sur 4 à 10 000, MRKHS est la cause de 15% des cas d’aménorrhée primaire. MRKHS se caractérise par l’absence congénitale du segment supérieur du vagin et de l’utérus, tandis que les anomalies des voies urinaires et du squelette sont associées de manière variable. Plus précisément, une voûte vaginale d’une profondeur de 1 à 2 cm est généralement présente et deux cornes utérines rudimentaires peuvent être trouvées1.
Dans le passé, l’intérêt médical principal de MRKHS était de permettre des rapports sexuels normaux, ce qui nécessite généralement la construction d’un néovagin par des approches non chirurgicales ou chirurgicales2. Cependant, les progrès de la médecine de la reproduction permettent actuellement la maternité génétique chez les patientes MRKHS, soit par maternité de substitution3,4 ou, plus récemment, par transplantation utérine5. Bien que la transplantation d’utérus soit encore une procédure expérimentale, la maternité de substitution est disponible dans de nombreux pays du monde6, et les résultats obstétricaux et psychosociaux rapportés sont comparables à ceux de la fécondation in vitro standard et du don d’ovocytes7.
La maternité de substitution et la transplantation d’utérus nécessitent la récupération d’ovocytes et la fécondation in vitro, mais il n’existe aucun consensus sur la façon d’effectuer la collecte d’ovules chez les patientes atteintes de MRKHS. Une approche transvaginale peut être irréalisable en raison d’une élasticité vaginale insuffisante8 même après une vaginoplastie, d’une localisation atypique des ovaires9, ou d’une distance excessive entre les ovaires et la coiffe vaginale 4,10. Dans ces cas, le prélèvement d’ovocytes par laparoscopie représente l’approche optimale en termes d’accès chirurgical. Cependant, comme la plupart des patients atteints de MRKHS subissent actuellement une néovaginoplastie laparoscopique, nous suggérons d’effectuer un prélèvement d’ovocytes par laparoscopie au moment de la chirurgie pour la vaginoplastie11, suivi d’une cryoconservation des ovocytes pour une utilisation future, minimisant ainsi le caractère invasif tout en combinant le traitement de la fonction sexuelle et reproductive des patients MRKHS.
Données démographiques des patients Vingt-trois patients atteints de MRKH ont subi un traitement avec ce protocole jusqu’à présent. Les résultats anamnestiques, instrumentaux et de laboratoire des patients sont résumés dans le tableau 1. À moins d’indication contraire dans le tableau 1, aucune anomalie congénitale associée n’a été observée.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Oocyte retrieval procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable incubator</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 mL Polystyrene Round-Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin 100 mg/ml in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage Fertilization medium SAGE</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture) medium</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Albumin 100 mg/mL in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture 60 mm petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serum Substitute Supplement</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>99193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (140 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (170 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Container for Cooling rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryodevice/cryotop</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>81111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet</td>
			<td>COOK</td>
			<td>K- 1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Printer LabXpert</td>
			<td>Brady</td>
			<td>XSL-86-461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 20-200 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2160G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 2-20 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2139-HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visotubes</td>
			<td>Cryo Bio System</td>
			<td>20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze Kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome

Chez les patientes atteintes du syndrome de Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser (MRKHS) qui doivent subir une vaginoplastie laparoscopique et qui souhaitent une maternité biologique, nous proposons qu’un prélèvement concomitant d’ovocytes par laparoscopie pour la cryoconservation soit effectué. Le prélèvement d’ovocytes est poursuivi au début de la laparoscopie. Des trocarts droit et gauche de 5 mm sont positionnés, à travers lesquels une aiguille d’aspiration d’ovule de 17 G est utilisée pour la ponction des ovaires droit et gauche, respectivement. Pour faciliter l’exposition des follicules, les ovaires sont mobilisés et maintenus avec des pinces laparoscopiques.
Lors de l’aspiration de plusieurs follicules proches les uns des autres, la pointe de l’aiguille est retenue dans l’ovaire pour réduire le nombre de fois que le cortex ovarien est transpercé et en raison du risque inhérent de saignement. Les étapes suivantes sont inchangées par rapport à la technique modifiée laparoscopique de Davydov pour la vaginoplastie. Avant la chirurgie, une stimulation ovarienne contrôlée est réalisée avec un protocole d’antagoniste de l’hormone de libération de l’hormone gonadotrophine (Gn-RH), et la procédure concomitante de prélèvement d’ovocytes et de vaginoplastie est prévue 36 heures après le déclencheur final de la maturation folliculaire. Le liquide folliculaire est recueilli dans les mêmes tubes stériles de 10 ml utilisés lors du prélèvement transvaginal d’ovocytes et transféré dans un bloc chauffant (37 °C) au laboratoire de reproduction assistée, où les ovocytes matures (métaphase II) sont vitrifiés.
Dans ce cas, une série de 23 femmes atteintes de MRKH, les ovocytes ont été prélevés avec succès et cryoconservés chez tous les patients; La vaginoplastie a ensuite été réalisée sans modifications, et les soins postopératoires hospitaliers et ambulatoires (jour du retrait du cathéter urinaire, jour de sortie de l’hôpital, utilisation du dilatateur et confort lors du suivi) n’ont pas été affectés. Une complication postopératoire est survenue chez un patient (fièvre se développant le jour 5 après la chirurgie et détection de liquide intrapéritonéal à l’échographie transabdominale) et résolue après un traitement conservateur. Plutôt que d’effectuer une vaginoplastie chirurgicale et de retarder le prélèvement d’ovocytes chez les patientes atteintes de MRKH, cette approche combine les deux procédures en une seule laparoscopie, minimisant ainsi le caractère invasif chirurgical et les risques anesthésiques.

Le tableau 2 comprend les données de stimulation ovarienne des patientes, tandis que les principaux résultats chirurgicaux et fonctionnels sont décrits dans le tableau 3. Les procédures laparoscopiques concomitantes de prélèvement d’ovocytes et de vaginoplastie ont été combinées avec succès chez toutes les patientes. En moyenne, 11,4 ± 5,4 ovocytes (moyenne ± écart-type) ont été prélevés et 9,6 ± 4,3 ovocytes MII ont été cryoconservés (tableau 3). ...

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Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

Une équipe dédiée peut offrir aux patientes Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser la possibilité d’effectuer une stimulation ovarienne contrôlée et une cryoconservation ovocytaire au moment de la vaginoplastie laparoscopique.

Prélèvement d’ovocytes laparoscopiques et cryoconservation au cours de la vaginoplastie pour le traitement du syndrome de Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

Notre approche permet de minimiser les maladies invasives dans le traitement du syndrome de Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser en combinant la vaginoplastie laparoscopique et le prélèvement d’ovocytes pour de futurs traitements de fertilité. Les principaux avantages de notre approche sont la nécessité d’une anesthésie unique et la résolution de l’impossibilité d’un prélèvement d’ovocytes transvaginaux chez les jeunes patientes Rokitansky. La procédure sera démontrée par Diana Delprato, gynécologue senior de notre unité d’infertilité et par Alessandra Alteri et Greta Cermisoni, deux embryologistes cliniques seniors de notre laboratoire de procréation assistée.Commencez la stimulation ovarienne contrôlée le jour 14 à partir du jour de la chirurgie. Surveiller la réponse ovarienne par échographie transabdominale en série et mesures concomitantes de l’œstradiol et de la progestérone. Établir un pneumopéritoine avec une technique ouverte.Placez un trocart ombilical de 10 millimètres pour l’insertion du laparoscope et trois trocarts de cinq millimètres dans les quadrants inférieurs, central, droit et gauche. Sous vision laparoscopique, utilisez une aiguille à lumière unique de calibre 17 reliée à une pompe d’aspiration, comme couramment utilisé pour le prélèvement transvaginal à travers les trocarts central et gauche pour la ponction de l’ovaire droit et gauche, respectivement. Soulevez et maintenez les ovaires avec une pince laparoscopique pour faciliter l’exposition des follicules.Lorsque vous aspirez plusieurs follicules proches les uns des autres, retenez la pointe de l’aiguille dans l’ovaire pour réduire le nombre de fois que le cortex ovarien est transpercé et le risque inhérent de saignement. Disséquer le péritoine en soulevant et en incisant le brin péritonéal transversalement entre les deux cornes utérines rudimentaires, puis en étendant l’incision latéralement, antérieurement et postérieurement. Exposer la fossette vaginale sur l’approche périnéale et effectuer une incision en forme de H et créer un espace néo-vaginal par dissection nette et contondante de l’espace vésico-rectal.Ensuite, tirez vers le bas les marges péritonéales disséquées jusqu’au bord du vestibulum vaginal. Sutures interrompues de position dans polydioxanone synthétique résorbable 3-0 pour l’anastomose vestibulaire péritonéale. Commencer une suture de corde coulissante dans un monofilament synthétique absorbable 2-0 polydioxanone dans chaque hémibassin du péritoine mobilisé au-dessus de la vessie avec transfixion conjonctive du ligament rond, de l’isthme tubaire, du ligament utéro-ovarien et de la feuille péritonéale latérale.Ensuite, inclure dans les deux sutures la face latérale du mésorectum et la face antérieure de la séreuse rectale immédiatement en dessous de la jonction rectosigmoïde. Enfin, placez une gaze enduite de paraffine dans le néovagin recouvert de péritoine. Recueillir les aspirations folliculaires dans des tubes à fond rond de 10 millimètres maintenus au chaud dans un incubateur portable et les transporter immédiatement au laboratoire d’embryologie avec un temps de transport d’environ 10 minutes.Au fur et à mesure que tous les complexes ovocytaires cumulus sont collectés, placez-les dans le plat à quatre puits contenant le milieu de fécondation et étiquetez le couvercle et le fond avec des données relatives à l’identité du patient. Incuber à 37 degrés Celsius dans une atmosphère contrôlée contenant 6% de dioxyde de carbone et 5% d’oxygène. S’assurer qu’une double vérification de la procédure est effectuée par un deuxième membre du personnel du laboratoire.Effectuer l’élimination des cellules corona cumulus dans les 38 heures suivant le déclenchement de l’ovulation. Placer les complexes ovocytaires cumulus dans le puits central contenant l’enzyme pour disperser les cellules du cumulus avec une pipette Pasteur en verre, en pipetant doucement la solution contenant les complexes ovocytaires cumulus de haut en bas pendant 30 secondes maximum. Déplacez les ovocytes vers le deuxième plat central contenant uniquement un milieu tamponné HEPES, en veillant à déplacer une quantité minimale de l’enzyme.Retirez les cellules corona restantes à l’aide de pipettes de dénudage dont le diamètre intérieur est décroissant. Évaluer le stade de maturation des ovocytes, en séparant les ovocytes de métaphase II. Transférer les ovocytes de la métaphase II dans une boîte de Petri de culture FIV de 60 millimètres contenant neuf gouttes de milieu de culture unique continu recouvert de six millimètres d’huile minérale.Incuber à 37 degrés Celsius dans une atmosphère contrôlée contenant 6% de dioxyde de carbone et 5% d’oxygène. Remplissez une boîte de refroidissement jusqu’au sommet avec de l’azote liquide frais et couvrez jusqu’à ce qu’elle soit utilisée pour minimiser la dispersion et l’évaporation. Utilisez une pipette de stripper d’un diamètre intérieur de 170 micromètres pour éviter d’endommager les ovocytes pendant la manipulation.Agiter délicatement chaque flacon de solution d’équilibre, de solution de vitrification et de solution de lavage pour mélanger le contenu avant utilisation. Préparez le couvercle d’une boîte de Petri de 60 millilitres avec une goutte de 50 microlitres de solution de lavage. Placez les gouttes juste avant utilisation pour limiter l’évaporation du milieu.Prenez le plat d’ovocytes de l’incubateur et transférez les ovocytes de métaphase II avec un volume minimal de milieu de la boîte de culture dans les 50 microlitres de solution de lavage. Distribuer des gouttes de 50 microlitres de la solution de lavage deux, de la solution d’équilibration un et de la solution d’équilibration deux à proximité immédiate et transférer les ovocytes de la solution de lavage des gouttes un dans la solution de lavage des gouttes deux. Fusionner la goutte de solution d’équilibre un à la solution de lavage deux et attendre deux minutes le mélange spontané des deux solutions.Ensuite, fusionnez la goutte de solution d’équilibre deux avec les gouttes précédemment fusionnées et laissez reposer deux minutes supplémentaires. Enfin, fusionnez une nouvelle goutte de 100 microlitres de solution d’équilibration trois aux gouttes précédemment fusionnées et laissez reposer une minute supplémentaire. Placez les ovocytes dans une goutte de 100 microlitres de solution d’équilibre quatre pendant 10 minutes.Distribuer deux gouttes de 50 microlitres de solution de vitrification et une de 100 microlitres de solution de vitrification. Déplacez les ovocytes séquentiellement dans les trois gouttes de solution de vitrification pendant 60 secondes afin que les ovocytes restent dans chaque goutte pendant environ 20 secondes. Lorsqu’il reste environ 10 secondes avant la fin des 60 secondes d’incubation, placez le cryodispositif sous le microscope.Transportez les ovocytes à l’extrémité de la pipette et placez-les sur le cryodispositif avec le minimum de solution de vitrification. Aspirer l’excès de solution de vitrification, en laissant les ovocytes recouverts d’une fine couche de solution de vitrification. Plongez le cryodispositif directement dans l’azote liquide et déplacez-le rapidement.Gardez l’appareil dans de l’azote liquide et couvrez-le avec un couvercle de protection. Les procédures laparoscopiques concomitantes de prélèvement d’ovocytes et de vaginoplastie ont été combinées avec succès chez toutes les patientes. En moyenne, 11,4 ovocytes 5,4 ont été prélevés et 9,6 ovocytes de 4,3 M2 ont été cryo-conservés.Le temps opératoire moyen total était de 114 17 minutes. La perte de sang peropératoire était insignifiante chez tous les patients et aucun événement indésirable peropératoire n’a été observé. Le troisième jour post-opératoire, les patients ont commencé à utiliser quotidiennement des dilatateurs et ont reçu leur congé le jour 6.0 1.0.Une aspiration prudente des follicules dans l’ovaire est recommandée, en accordant une attention particulière à la mobilisation automatique des ovaires afin d’assurer un accès et une récupération optimaux.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolement, cryoconservation et de la culture des droits de cellules épithéliales Amnion pour des applications cliniques

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Recherche

Médecine

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