Name: laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00
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Die lokale Ethikkommission des tertiären Überweisungszentrums für MRKHS (IRCCS San Raffaele University Hospital, Mailand, Italien) wurde benachrichtigt und genehmigte das Protokoll vor seiner Umsetzung im Juli 2017. Alle Patientinnen oder Erziehungsberechtigten gaben eine unterzeichnete Einverständniserklärung für die laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik und für die Verwendung anonymisierter klinischer / Labordaten für wissenschaftliche Zwecke.
...

<ol>
	<li>Committee on Adolescent Health Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACOG+Committee+Opinion+No.+728:+M&#252;llerian+Agenesis:+Diagnosis,+Management,+And+Treatment.">ACOG Committee Opinion No. 728: M&#252;llerian Agenesis: Diagnosis, Management, And Treatment.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (1), 35-42 (2018).</li><li>Reichman, D. E., Laufer, M. 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J., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+pregnancy+with+laparoscopic+oocyte+retrieval+and+in+vitro+fertilization+in+Mullerian+agenesis.">Successful pregnancy with laparoscopic oocyte retrieval and in vitro fertilization in Mullerian agenesis.</a> Singapore Medicine Journal. 47 (4), 329-331 (2006).</li><li>Liszewska-Kap&#322;on, M., Str&#243;zik, M., Kotarski, &. #. 3. 2. 1. ;., Bag&#322;aj, M., Hirnle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome+as+an+interdisciplinary+problem.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome as an interdisciplinary problem.</a> Advances in Clinical and Experimental Medicine. 29 (4), 505-511 (2020).</li><li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+management+during+the+adolescent+transition+period+of+girls+and+young+women+with+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome+(MRKHS):+A+systematic+literature+review.">Treatment management during the adolescent transition period of girls and young women with Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome (MRKHS): A systematic literature review.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 11 (1), 152 (2016).</li><li>Bean, E. 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Dieses Protokoll reduziert die Invasivität bei der Behandlung von MRKHS durch die Kombination der Verfahren der Vaginoplastik und der Eizellentnahme. Zu diesem Zweck ist es entscheidend, dass ein engagiertes Team benannt wird, um sicherzustellen, dass der Zeitpunkt des COS, der chirurgische Eingriff und die Vitrifikation der Eizellen effizient geplant werden.
MRKHS-Patienten, für die diese kombinierte laparoskopische Methode voraussichtlich am vorteilhaftesten ist, sinddiej...

Mit einer Inzidenz von etwa 1 von 4-10.000 Frauen ist MRKHS die Ursache für 15% der primären Amenorrhoe-Fälle. MRKHS ist gekennzeichnet durch das angeborene Fehlen des oberen Segments der Vagina und der Gebärmutter, während Harnwegs- und Skelettanomalien variabel assoziiert sind. Genauer gesagt ist normalerweise ein Vaginalgewölbe mit einer Tiefe von 1-2 cm vorhanden, und zwei rudimentale Gebärmutterhörner können gefunden werden1.
In der Vergangenheit bestand das primäre medizinische Interesse bei MRKHS darin, normalen Geschlechtsverkehr zu ermöglichen, was in der Regel den Aufbau einer Neovagina durch nicht-chirurgische oder chirurgische Ansätze erfordert2. Fortschritte in der Reproduktionsmedizin ermöglichen jedoch derzeit die genetische Mutterschaft bei MRKHS-Patienten, entweder durch Leihmutterschaft 3,4 oder - in jüngerer Zeit - Gebärmuttertransplantation5. Während die Gebärmuttertransplantation noch ein experimentelles Verfahren ist, ist die Leihmutterschaft in vielen Ländern weltweit verfügbar6, und die berichteten geburtshilflichen und psychosozialen Ergebnisse sind mit denen der Standard-In-vitro-Fertilisation und der Eizellspende vergleichbar7.
Sowohl die Leihmutterschaft als auch die Gebärmuttertransplantation erfordern die Entnahme von Eizellen und die In-vitro-Fertilisation, aber es besteht kein Konsens darüber, wie die Eizellentnahme bei Patienten mit MRKHS durchzuführen ist. Ein transvaginaler Ansatz kann aufgrund unzureichender vaginaler Elastizität8 auch nach Vaginoplastik, atypischer Lage der Eierstöcke9 oder übermäßigem Abstand zwischen den Eierstöcken und der Vaginalmanschette 4,10 nicht durchführbar sein. In diesen Fällen stellt die laparoskopische Eizellentnahme den optimalen Ansatz in Bezug auf den chirurgischen Zugang dar. Da sich die meisten MRKHS-Patientinnen derzeit einer laparoskopischen Neovaginoplastik unterziehen, empfehlen wir jedoch, zum Zeitpunkt der Operation für die Vaginoplastik11 eine laparoskopische Eizellentnahme durchzuführen, gefolgt von der Kryokonservierung der Eizellen für die zukünftige Verwendung, wodurch die Invasivität minimiert und gleichzeitig die Behandlung der sexuellen und reproduktiven Funktion von MRKHS-Patientinnen kombiniert wird.
Demographische Daten von Patienten Dreiundzwanzig MRKH-Patienten wurden bisher mit diesem Protokoll behandelt. Anamnestische, instrumentelle und Laborbefunde von Patienten sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Sofern in Tabelle 1 nicht anders angegeben, wurden keine assoziierten angeborenen Anomalien gefunden.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Oocyte retrieval procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable incubator</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 mL Polystyrene Round-Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin 100 mg/ml in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage Fertilization medium SAGE</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture) medium</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Albumin 100 mg/mL in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture 60 mm petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serum Substitute Supplement</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>99193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (140 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (170 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Container for Cooling rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryodevice/cryotop</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>81111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet</td>
			<td>COOK</td>
			<td>K- 1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Printer LabXpert</td>
			<td>Brady</td>
			<td>XSL-86-461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 20-200 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2160G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 2-20 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2139-HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visotubes</td>
			<td>Cryo Bio System</td>
			<td>20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze Kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome

Bei Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndrom (MRKHS)-Patientinnen, die für eine laparoskopische Vaginoplastik vorgesehen sind und den Wunsch nach biologischer Mutterschaft haben, schlagen wir vor, dass eine gleichzeitige laparoskopische Eizellentnahme zur Kryokonservierung durchgeführt wird. Die Eizellentnahme wird zu Beginn der Laparoskopie durchgeführt. Rechts und links sind 5 mm Trokare positioniert, durch die eine 17 G Eizellenaspirationsnadel zur Punktion des rechten bzw. linken Eierstocks verwendet wird. Um die Freilegung der Follikel zu erleichtern, werden die Eierstöcke mobilisiert und mit laparoskopischen Pinzetten gehalten.
Wenn mehrere Follikel nahe beieinander abgesaugt werden, wird die Nadelspitze im Eierstock verbleiben, um die Häufigkeit zu reduzieren, mit der die Eierstockrinde transfixiert wird, und aufgrund des inhärenten Blutungsrisikos. Die nachfolgenden Schritte sind im Vergleich zur laparoskopisch modifizierten Davydov-Technik für die Vaginoplastik unverändert. Vor der Operation wird eine kontrollierte ovarielle Stimulation mit einem Gonadotropin-Hormon-Releasing-Hormon (Gn-RH) -Antagonistenprotokoll durchgeführt, und das begleitende Verfahren der Eizellentnahme und Vaginoplastik wird 36 Stunden nach dem endgültigen Follikelreifungsauslöser geplant. Follikelflüssigkeit wird in den gleichen 10 ml sterilen Röhrchen gesammelt, die während der transvaginalen Eizellentnahme verwendet werden, und in einem Wärmeblock (37 °C) in das Labor für assistierte Reproduktion überführt, wo reife (Metaphase-II) Eizellen vitrifiziert werden.
In diesem Fall wurde eine Reihe von 23 Frauen mit MRKH, Eizellen erfolgreich entnommen und bei allen Patientinnen kryokonserviert; Die Vaginoplastik wurde anschließend ohne Modifikationen durchgeführt, und die stationäre und ambulante postoperative Versorgung (Tag der Blasenkatheterentfernung, Tag der Krankenhausentlassung, Dilatatoranwendung und Komfort bei der Nachsorge) blieb davon unberührt. Eine postoperative Komplikation trat bei einem Patienten auf (Fieberentwicklung am 5. Tag nach der Operation und intraperitonealer Flüssigkeitsnachweis im transabdominalen Ultraschall) und klang nach konservativer Behandlung ab. Anstatt eine chirurgische Vaginoplastik durchzuführen und die Eizellentnahme bei MRKH-Patientinnen zu verzögern, kombiniert dieser Ansatz beide Verfahren in einer einzigen Laparoskopie, wodurch chirurgische Invasivität und anästhetische Risiken minimiert werden.

Tabelle 2 enthält ovarielle Stimulationsdaten der Patientinnen, während die wichtigsten chirurgischen und funktionellen Ergebnisse in Tabelle 3 beschrieben sind. Die begleitenden laparoskopischen Verfahren der Eizellentnahme und Vaginoplastik wurden bei allen Patientinnen erfolgreich kombiniert. Durchschnittlich wurden 11,4 ± 5,4 (mittlere ± SD) Eizellen entnommen und 9,6 ± 4,3 MII-Eizellen wurden kryokonserviert (Tabelle 3). Nach unserer Erfahrung mit der Kryokonse...

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Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

Ein engagiertes Team kann Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Patientinnen die Möglichkeit bieten, eine kontrollierte Eierstockstimulation und Kryokonservierung der Eizellen zum Zeitpunkt der laparoskopischen Vaginoplastik durchzuführen.

Laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik zur Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

Unser Ansatz ermöglicht es, invasive Erkrankungen bei der Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms zu minimieren, indem wir laparoskopische Vaginoplastik und Eizellentnahme für zukünftige Fruchtbarkeitsbehandlungen kombinieren. Die Hauptvorteile unseres Ansatzes sind die Notwendigkeit einer einmaligen Anästhesie und die Überwindung der Unmöglichkeit einer transvaginalen Eizellentnahme bei jüngeren Rokitansky-Patienten. Das Verfahren wird von Diana Delprato, einer leitenden Gynäkologin unserer Abteilung für Unfruchtbarkeit, und von Alessandra Alteri und Greta Cermisoni, zwei leitenden klinischen Embryologen aus unserem Labor für assistierte Reproduktion, demonstriert.Beginnen Sie mit der kontrollierten Stimulation der Eierstöcke am Tag 14 ab dem Tag der Operation. Überwachung der ovariellen Reaktion durch seriellen transabdominalen Ultraschall und gleichzeitige Messungen von Estradiol und Progesteron. Etablieren Sie ein Pneumoperitoneum mit einer offenen Technik.Positionieren Sie einen 10-Millimeter-Nabeltrokar zum Einführen des Laparoskops und drei Fünf-Millimeter-Trokare im zentralen, rechten und linken unteren Quadranten. Verwenden Sie unter laparoskopischem Sehen eine 17-Gauge-Nadel mit einem Lumen, die mit einer Aspirationspumpe verbunden ist, wie sie üblicherweise für die transvaginale Entnahme durch die zentralen und linken Trokare zur Punktion des rechten bzw. linken Eierstocks verwendet wird. Heben und halten Sie die Eierstöcke mit einer laparoskopischen Pinzette, um die Freilegung der Follikel zu erleichtern.Wenn Sie mehrere Follikel ansaugen, die nahe beieinander liegen, behalten Sie die Nadelspitze im Eierstock bei, um die Häufigkeit der Transfixierung der Eierstockrinde und das inhärente Blutungsrisiko zu reduzieren. Sezieren Sie das Peritoneum, indem Sie den Peritonealstrang quer zwischen den beiden rudimentalen Uterushörnern anheben und schneiden und dann den Schnitt lateral, anterior und posterior verlängern. Belichten Sie das vaginale Grübchen auf dem perinealen Zugang und führen Sie einen H-förmigen Schnitt durch und schaffen Sie einen neovaginalen Raum durch scharfe und stumpfe Dissektion des vesikorektalen Raumes.Ziehen Sie dann die präparierten Peritonealränder bis zum Rand des Vaginalvestibulums herunter. Position unterbrochene Nähte in Polydioxanon synthetisch resorbierbar 3-0 für die peritoneale vestibuläre Anastomose. Beginnen Sie eine Handtaschennaht aus synthetischem Polydioxanon-synthetischem resorbierbarem 2-0-Monofilament in jedem Hemibecken aus dem mobilisierten Peritoneum oberhalb der Blase mit Bindegliedtransfixierung des Rundbandes, des Tubenisthmus, des utero-ovariellen Bandes und des lateralen Peritonealblattes.Dann schließen Sie in die beiden Nähte den lateralen Aspekt des Mesorektums und den vorderen Aspekt der rektalen Serosa unmittelbar unterhalb des rektosigmoidealen Übergangs ein. Zum Schluss legen Sie eine paraffinbeschichtete Gaze in die peritoneumbeschichtete Neovagina. Sammeln Sie die follikulären Aspirate in 10-Millimeter-Rundbodenröhrchen, die in einem tragbaren Inkubator warm gehalten werden, und transportieren Sie sie sofort mit einer Transportzeit von ca. 10 Minuten zum embryologischen Labor.Wenn alle Cumulus-Eizellkomplexe gesammelt sind, legen Sie sie in die Vier-Well-Schale, die das Befruchtungsmedium enthält, und beschriften Sie den Deckel und den Boden mit Daten zur Identität des Patienten. Inkubieren Sie sie bei 37 Grad Celsius in einer kontrollierten Atmosphäre, die 6% Kohlendioxid und 5% Sauerstoff enthält. Stellen Sie sicher, dass eine doppelte Überprüfung des Verfahrens durch ein zweites Mitglied des Laborpersonals durchgeführt wird.Führen Sie die Entfernung von Cumulus-Coronazellen innerhalb von 38 Stunden nach dem Ovulationsauslöser durch. Legen Sie Cumulus-Eizellkomplexe in die zentrale Vertiefung, die das Enzym enthält, um die Cumuluszellen mit einer Pasteur-Glaspipette zu dispergieren, und pipettieren Sie die Lösung, die Cumulus-Eizellkomplexe enthält, vorsichtig bis zu 30 Sekunden lang auf und ab. Bewegen Sie die Eizellen in die zweite zentrale Well-Schale, die nur HEPES-gepuffertes Medium enthält, und stellen Sie sicher, dass eine minimale Menge des Enzyms verdrängt wird.Entfernen Sie die restlichen Koronazellen mit entblößenden Pipetten mit abnehmenden Innendurchmessern. Beurteilen Sie das Stadium der Eizellreifung und trennen Sie Metaphase-II-Eizellen. Übertragen Sie die Metaphase-II-Eizellen in eine 60-Millimeter-Petrischale der IVF-Kultur, die neun Tropfen eines kontinuierlichen Einzelkulturmediums enthält, das mit sechs Millimetern Mineralöl bedeckt ist.Inkubieren Sie sie bei 37 Grad Celsius in einer kontrollierten Atmosphäre, die 6% Kohlendioxid und 5% Sauerstoff enthält. Füllen Sie eine Kühlbox bis oben mit frischem flüssigem Stickstoff und decken Sie sie ab, bis sie verwendet sind, um die Dispersion und Verdunstung zu minimieren. Verwenden Sie eine Stripperpipette mit einem Innendurchmesser von 170 Mikrometern, um eine Beschädigung der Eizellen während der Manipulation zu vermeiden.Schütteln Sie vorsichtig jede Durchstechflasche mit Gleichgewichtslösung, Vitrifikationslösung und Waschlösung, um den Inhalt vor Gebrauch zu mischen. Bereiten Sie den Deckel einer 60-Milliliter-Petrischale mit einem Tropfen 50 Mikroliter Waschlösung vor. Tropfen kurz vor Gebrauch platzieren, um die Verdunstung des Mediums zu begrenzen.Nehmen Sie die Eizellschale aus dem Inkubator und geben Sie die Metaphase-II-Eizellen mit einem minimalen Volumen Medium aus der Kulturschale in die 50 Mikroliter Waschlösung. Geben Sie 50-Mikroliter-Tropfen Waschlösung zwei, Gleichgewichtslösung eins und Gleichgewichtslösung zwei in unmittelbarer Nähe und übertragen Sie Eizellen aus der Tropfenwaschlösung eins in die Tropfenwaschlösung zwei. Den Tropfen der Gleichgewichtslösung eins mit der Waschlösung zwei verschmelzen und zwei Minuten auf das spontane Mischen beider Lösungen warten.Dann verschmelzen Sie den Tropfen der Gleichgewichtslösung zu den zuvor verschmolzenen Tropfen und lassen Sie weitere zwei Minuten stehen. Zum Schluss wird ein neuer 100-Mikroliter-Tropfen Äquilibrierungslösung drei zu den zuvor verschmolzenen Tropfen zusammengefügt und eine weitere Minute stehen gelassen. Legen Sie die Eizellen für 10 Minuten in 100-Mikroliter-Tropfen Gleichgewichtslösung vier.Dosieren Sie zwei 50-Mikroliter-Tropfen Vitrifikationslösung und einen 100-Mikroliter-Vitrifikationslösung. Bewegen Sie die Eizellen nacheinander für 60 Sekunden in die drei Tropfen Vitrifikationslösung, so dass die Eizellen in jedem Tropfen für etwa 20 Sekunden bleiben. Wenn etwa 10 Sekunden vor dem Ende der 60-Sekunden-Inkubation verbleiben, legen Sie das Kryogerät unter das Mikroskop.Tragen Sie die Eizellen an der Spitze der Pipette und legen Sie sie mit der minimalen Menge an Vitrifikationslösung auf das Kryogerät. Saugen Sie die überschüssige Vitrifikationslösung ab und lassen Sie die Eizellen von einer dünnen Schicht Vitrifikationslösung bedeckt. Tauchen Sie das Kryogerät direkt in flüssigen Stickstoff und bewegen Sie es schnell.Bewahren Sie das Gerät in flüssigem Stickstoff auf und decken Sie es mit einem Schutzdeckel ab. Die begleitenden laparoskopischen Verfahren der Eizellentnahme und Vaginoplastik wurden bei allen Patientinnen erfolgreich kombiniert. Es wurden durchschnittlich 11,4 bis 5,4 Eizellen entnommen und 9,6 4,3 M2 Eizellen kryokonserviert.Die durchschnittliche Gesamteinsatzzeit betrug 114 17 Minuten. Der intraoperative Blutverlust war bei allen Patienten unbedeutend und es wurden keine intraoperativen Nebenwirkungen beobachtet. Am dritten Tag nach der Operation begannen die Patienten mit der täglichen Anwendung von Dilatatoren und wurden am Tag 6,0 1,0 entlassen.Eine vorsichtige Aspiration der Follikel innerhalb des Eierstocks wird empfohlen, wobei der automatischen Mobilisierung der Eierstöcke gebührende Aufmerksamkeit geschenkt wird, um einen optimalen Zugang und Abruf zu gewährleisten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolation, Kryokonservierung und Kultur der Menschen Amnion Epithelzellen für Klinische Anwendungen

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Forschung

Medizin

Intraoperative Gastroscopy for Tumor Localization in Laparoscopic Surgery for Gastric Adenocarcinoma

Die intraoperative Gastroskopie für Tumorlokalisation in der laparoskopischen Chirurgie für Adenokarzinom des Magens

Determining resection margins for gastric cancer, which are not exposed to the serosal surface of the stomach, is the most important procedure during ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Netzwerkanalyse von Foramen Ovale Elektrode Recordings in Resistente Temporallappen Epilepsie-Patienten

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

Die laparoskopische Technik zur Serien Sammlung von Leber und mesenterischen Lymphknoten in Makaken

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

Transaxillary First Rib Resection for Treatment of the Thoracic Outlet Syndrome

Transaxilläre erste Rippenresektion zur Behandlung des Thoracic-Outlet-Syndroms

Thoracic outlet syndrome (TOS) is a common disorder that causes a significant loss of productivity. The transaxillary first rib resection (TFRR) protocol ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Laparoskopische radikale linke Panacreatektomie für Bauchspeicheldrüsenkrebs: Chirurgische Strategie und Technik Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Technical Modification of the Terminal Ureter During Total Transperitoneal Laparoscopic Nephroureterectomy for Upper Urinary Tract Urothelial Carcinoma

Technische Modifikation des Terminal Ureter während der totalen transperitonalen laparoskopischen Nephrourrektomie für den oberen Harntrakt Urothelianomen

Upper tract urothelial carcinoma (UTUC) accounts for 5%&ndash;10% of all urothelial tumors. Radical nephroureterectomy is the standard treatment ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Kombination der In-vitro-Reifung nach Eizellentnahme mit gynäkologischer Chirurgie

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Surgical Techniques to Optimize Ovarian Reserve during Laparoscopic Cystectomy for Ovarian Endometrioma

Chirurgische Techniken zur Optimierung der Ovarialreserve während der laparoskopischen Zystektomie für ovarielles Endometriom

Surgical management of ovarian endometrioma in patients desiring fertility is complicated by the need to balance maximal resection of disease with efforts ...

Comparing Objective Conjunctival Hyperemia Grading and the Ocular Surface Disease Index Score in Dry Eye Syndrome During COVID-19

Vergleich der objektiven Bewertung der Bindehauthyperämie und des Index für Augenoberflächenerkrankungen beim Syndrom des trockenen Auges während COVID-19

The incidence of dry eye syndrome (DES) has increased due to wearing masks, utilizing digital devices, and working remotely during the pandemic. A survey ...