Name: laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00
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Non sono stati ricevuti finanziamenti specifici per questo lavoro.

Il comitato etico locale presso il centro di riferimento terziario per MRKHS (IRCCS Ospedale Universitario San Raffaele, Milano, Italia) è stato informato e approvato il protocollo prima della sua attuazione nel luglio 2017. Tutti i pazienti o i tutori hanno dato il consenso informato firmato per il prelievo laparoscopico degli ovociti e la crioconservazione durante la vaginoplastica e per l'uso di dati clinici / di laboratorio anonimizzati per scopi scientifici.
1. Composizione del tea...

<ol>
	<li>Committee on Adolescent Health Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACOG+Committee+Opinion+No.+728:+M&#252;llerian+Agenesis:+Diagnosis,+Management,+And+Treatment.">ACOG Committee Opinion No. 728: M&#252;llerian Agenesis: Diagnosis, Management, And Treatment.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (1), 35-42 (2018).</li><li>Reichman, D. E., Laufer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome:+Fertility+counseling+and+treatment.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome: Fertility counseling and treatment.</a> Fertility and Sterility. 94 (5), 1941-1943 (2010).</li><li>Ben-Rafael, Z., Bar-Hava, I., Levy, T., Orvieto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplifying+ovulation+induction+for+surrogacy+in+women+with+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome.">Simplifying ovulation induction for surrogacy in women with Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 13 (6), 1470-1471 (1998).</li><li>Beski, S., Gorgy, A., Venkat, G., Craft, I. L., Edmonds, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gestational+surrogacy:+a+feasible+option+for+patients+with+Rokitansky+syndrome.">Gestational surrogacy: a feasible option for patients with Rokitansky syndrome.</a> Human Reproduction. 15 (11), 2326-2328 (2000).</li><li>Br&#228;nnstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Livebirth+after+uterus+transplantation.">Livebirth after uterus transplantation.</a> Lancet. 385 (9968), 607-616 (2015).</li><li>Sreenivas, K., Campo-Engelstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domestic+and+international+surrogacy+laws:+implications+for+cancer+survivors.">Domestic and international surrogacy laws: implications for cancer survivors.</a> Cancer Treatment and Research. 156, 135-152 (2010).</li><li>Soderstrom-Anttila, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surrogacy:+outcomes+for+surrogate+mothers,+children+and+the+resulting+families-a+systematic+review.">Surrogacy: outcomes for surrogate mothers, children and the resulting families-a systematic review.</a> Human Reproductive Update. 22 (2), 260-276 (2016).</li><li>Wood, E. G., Batzer, F. R., Corson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+response+to+gonadotrophins,+optimal+method+for+oocyte+retrieval+and+pregnancy+outcome+in+patients+with+vaginal+agenesis.">Ovarian response to gonadotrophins, optimal method for oocyte retrieval and pregnancy outcome in patients with vaginal agenesis.</a> Human Reproduction. 14 (5), 1178-1181 (1999).</li><li>Raziel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surrogate+in+vitro+fertilization+outcome+in+typical+and+atypical+forms+of+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome.">Surrogate in vitro fertilization outcome in typical and atypical forms of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 27 (1), 126-130 (2012).</li><li>Egarter, C., Huber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+stimulation+and+retrieval+of+oocytes+in+patient+with+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster+syndrome.">Successful stimulation and retrieval of oocytes in patient with Mayer-Rokitansky-K&#252;ster syndrome.</a> Lancet. 1 (8597), 1283 (1988).</li><li>Candiani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+retrieval+during+laparoscopic+vaginoplasty+to+reduce+invasiveness+in+the+treatment+of+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome.">Oocyte retrieval during laparoscopic vaginoplasty to reduce invasiveness in the treatment of Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 27 (1), 74-79 (2020).</li><li>Fedele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+a+neovagina+by+Davydov's+laparoscopic+modified+technique+in+patients+with+Rokitansky+syndrome.">Creation of a neovagina by Davydov's laparoscopic modified technique in patients with Rokitansky syndrome.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 202 (1), 1-6 (2010).</li><li>ESHRE Working Group on Ultrasound in ART et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+good+practice+in+ultrasound:+oocyte+pick+up.">Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up.</a> Human Reproduction Open. 2019 (4), (2019).</li><li>Callens, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+on+surgical+and+non-surgical+treatments+for+vaginal+hypoplasia.">An update on surgical and non-surgical treatments for vaginal hypoplasia.</a> Human Reproductive Update. 20 (5), 775-801 (2014).</li><li>S&#246;nmezer, M., G&#252;l&#252;mser, &. #. 1. 9. 9. ;., S&#246;nmezer, M., S&#252;k&#252;r, Y. E., Atabeko&#287;lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transabdominal+ultrasound+guided+oocyte+retrieval+using+vaginal+ultrasound+probe:+Definition+of+the+technique.">Transabdominal ultrasound guided oocyte retrieval using vaginal ultrasound probe: Definition of the technique.</a> The Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 47 (2), 800-806 (2021).</li><li>Raju, G. A., Haranath, G. B., Krishna, K. M., Prakash, G. J., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+pregnancy+with+laparoscopic+oocyte+retrieval+and+in+vitro+fertilization+in+Mullerian+agenesis.">Successful pregnancy with laparoscopic oocyte retrieval and in vitro fertilization in Mullerian agenesis.</a> Singapore Medicine Journal. 47 (4), 329-331 (2006).</li><li>Liszewska-Kap&#322;on, M., Str&#243;zik, M., Kotarski, &. #. 3. 2. 1. ;., Bag&#322;aj, M., Hirnle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome+as+an+interdisciplinary+problem.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome as an interdisciplinary problem.</a> Advances in Clinical and Experimental Medicine. 29 (4), 505-511 (2020).</li><li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+management+during+the+adolescent+transition+period+of+girls+and+young+women+with+Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome+(MRKHS):+A+systematic+literature+review.">Treatment management during the adolescent transition period of girls and young women with Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome (MRKHS): A systematic literature review.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 11 (1), 152 (2016).</li><li>Bean, E. J., Mazur, T., Robinson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser+syndrome:+sexuality,+psychological+effects,+and+quality+of+life.">Mayer-Rokitansky-K&#252;ster-Hauser syndrome: sexuality, psychological effects, and quality of life.</a> Journal of Pediatric and Adolescent Gynecology. 22 (6), 339-346 (2009).</li></ol>

Questo protocollo riduce l'invasività nel trattamento della MRKHS combinando le procedure di vaginoplastica e recupero degli ovociti. A tal fine, è fondamentale che venga designato un team dedicato per garantire che i tempi della COS, la procedura chirurgica e la vitrificazione degli ovociti siano programmati in modo efficiente.
I pazienti MRKHS per i quali questo metodo laparoscopico combinato dovrebbe essere più vantaggioso sono quelli in cui un recupero transvaginale sarebbe considerato ...

Con un'incidenza di circa 1 su 4-10.000 donne, MRKHS è la causa del 15% dei casi di amenorrea primaria. La MRKHS è caratterizzata dall'assenza congenita del segmento superiore della vagina e dell'utero, mentre le anomalie del tratto urinario e scheletrico sono associate in modo variabile. Più specificamente, di solito è presente una volta vaginale con una profondità di 1-2 cm e si possono trovare due corna uterine rudimentali1.
In passato, l'interesse medico primario nel MRKHS era quello di consentire un normale rapporto sessuale, che generalmente richiede la costruzione di una neovagina con approcci non chirurgici o chirurgici2. Tuttavia, i progressi nella medicina riproduttiva attualmente consentono la maternità genetica nei pazienti MRKHS, mediante maternità surrogata3,4 o, più recentemente, trapianto di utero5. Mentre il trapianto di utero è ancora una procedura sperimentale, la maternità surrogata è disponibile in molti paesi del mondo6 e gli esiti ostetrici e psicosociali riportati sono paragonabili a quelli della fecondazione in vitro standard e della donazione di ovociti7.
Sia la maternità surrogata che il trapianto di utero richiedono il prelievo degli ovociti e la fecondazione in vitro, ma non esiste un consenso su come eseguire la raccolta degli ovociti nei pazienti con MRKHS. Un approccio transvaginale può essere impraticabile a causa dell'insufficiente elasticità vaginale8 anche dopo vaginoplastica, posizione atipica delle ovaie9 o distanza eccessiva tra le ovaie e il bracciale vaginale 4,10. In questi casi, il prelievo laparoscopico degli ovociti rappresenta l'approccio ottimale in termini di accesso chirurgico. Tuttavia, poiché la maggior parte dei pazienti MRKHS attualmente sottoposti a neovaginoplastica laparoscopica, suggeriamo di eseguire un prelievo laparoscopico degli ovociti al momento dell'intervento chirurgico per vaginoplastica11, seguito dalla crioconservazione degli ovociti per uso futuro, riducendo così al minimo l'invasività e combinando il trattamento della funzione sessuale e riproduttiva dei pazienti MRKHS.
Dati demografici dei pazienti Ventitré pazienti MRKH sono stati sottoposti finora a trattamento con questo protocollo. I risultati anamnestici, strumentali e di laboratorio dei pazienti sono riassunti nella Tabella 1. Se non specificato nella Tabella 1, non sono state riscontrate anomalie congenite associate.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Oocyte retrieval procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable incubator</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 mL Polystyrene Round-Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin 100 mg/ml in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage Fertilization medium SAGE</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture) medium</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Albumin 100 mg/mL in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture 60 mm petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serum Substitute Supplement</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>99193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (140 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (170 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Container for Cooling rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryodevice/cryotop</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>81111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet</td>
			<td>COOK</td>
			<td>K- 1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Printer LabXpert</td>
			<td>Brady</td>
			<td>XSL-86-461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 20-200 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2160G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 2-20 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2139-HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visotubes</td>
			<td>Cryo Bio System</td>
			<td>20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze Kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome

Nei pazienti con sindrome di Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser (MRKHS) che sono programmati per vaginoplastica laparoscopica e hanno un desiderio di maternità biologica, proponiamo che venga eseguito un concomitante prelievo laparoscopico degli ovociti per la crioconservazione. Il prelievo ovocitario viene effettuato all'inizio della laparoscopia. Vengono posizionati trocar destro e sinistro da 5 mm, attraverso i quali viene utilizzato un ago di aspirazione dell'ovulo da 17 G per la puntura delle ovaie destra e sinistra, rispettivamente. Per facilitare l'esposizione dei follicoli, le ovaie vengono mobilitate e trattenute con una pinza laparoscopica.
Quando si aspirano più follicoli vicini l'uno all'altro, la punta dell'ago viene trattenuta nell'ovaio per ridurre il numero di volte in cui la corteccia ovarica viene trafitta e a causa del rischio intrinseco di sanguinamento. I passaggi successivi sono invariati rispetto alla tecnica modificata laparoscopica Davydov per vaginoplastica. Prima dell'intervento chirurgico, la stimolazione ovarica controllata viene eseguita con un protocollo antagonista dell'ormone di rilascio dell'ormone gonadotropina (Gn-RH) e la procedura concomitante di prelievo degli ovociti e vaginoplastica è programmata 36 ore dopo il trigger finale della maturazione follicolare. Il liquido follicolare viene raccolto nelle stesse provette sterili da 10 ml utilizzate durante il prelievo transvaginale degli ovociti e trasferito in un blocco riscaldante (37 °C) al laboratorio di riproduzione assistita, dove gli ovociti maturi (metafase II) vengono vitrificati.
In questo caso, una serie di 23 donne con MRKH, ovociti sono stati recuperati con successo e crioconservati in tutte le pazienti; La vaginoplastica è stata successivamente condotta senza modifiche e le cure postoperatorie ospedaliere e ambulatoriali (giorno della rimozione del catetere urinario, giorno della dimissione ospedaliera, uso del dilatatore e comfort al follow-up) sono rimaste inalterate. Una complicanza postoperatoria si è verificata in un paziente (febbre che si è sviluppata il giorno 5 dopo l'intervento chirurgico e rilevamento del liquido intraperitoneale all'ecografia transaddominale) e si è risolta dopo un trattamento conservativo. Piuttosto che eseguire vaginoplastica chirurgica e ritardare il prelievo degli ovociti nei pazienti MRKH, questo approccio combina entrambe le procedure in un'unica laparoscopia, riducendo così al minimo l'invasività chirurgica e i rischi anestesiologici.

La Tabella 2 include i dati di stimolazione ovarica delle pazienti, mentre i principali esiti chirurgici e funzionali sono descritti nella Tabella 3. Le procedure laparoscopiche concomitanti di prelievo degli ovociti e vaginoplastica sono state combinate con successo in tutte le pazienti. Sono stati recuperati in media 11,4 ± 5,4 (media ± DS) ovociti e 9,6 ± 4,3 ovociti MII sono stati crioconservati (Tabella 3). Nella nostra esperienza con la crioconservazione degli o...

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Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

Un team dedicato può offrire alle pazienti Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser la possibilità di eseguire la stimolazione ovarica controllata e la crioconservazione degli ovociti al momento della vaginoplastica laparoscopica.

Recupero laparoscopico degli ovociti e crioconservazione durante la vaginoplastica per il trattamento della sindrome di Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

Il nostro approccio consente di ridurre al minimo la malattia invasiva nel trattamento della sindrome di Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser combinando vaginoplastica laparoscopica e prelievo ovocitario per futuri trattamenti di fertilità. I principali vantaggi del nostro approccio sono la necessità di una singola anestesia e il superamento dell'impossibilità di un prelievo transvaginale degli ovociti nelle pazienti Rokitansky più giovani. La procedura sarà dimostrata da Diana Delprato, ginecologa senior della nostra unità di infertilità e da Alessandra Alteri e Greta Cermisoni, due embriologhe cliniche senior del nostro laboratorio di riproduzione assistita.Inizia la stimolazione ovarica controllata il giorno 14 dal giorno dell'intervento. Monitorare la risposta ovarica mediante ecografia transaddominale seriale e misurazioni concomitanti di estradiolo e progesterone. Stabilire lo pneumoperitoneo con una tecnica aperta.Posizionare un trocar ombelicale da 10 millimetri per l'inserimento del laparoscopio e tre trocar da cinque millimetri nei quadranti inferiori centrale, destro e sinistro. Sotto visione laparoscopica, utilizzare un ago a lume singolo calibro 17 collegato a una pompa di aspirazione, come comunemente impiegato per il recupero transvaginale attraverso i trocar centrali e sinistri per la puntura dell'ovaio destro e sinistro, rispettivamente. Sollevare e tenere le ovaie con una pinza laparoscopica per facilitare l'esposizione dei follicoli.Quando si aspirano più follicoli vicini l'uno all'altro, mantenere la punta dell'ago nell'ovaio per ridurre il numero di volte in cui la corteccia ovarica viene trafitta e il rischio intrinseco di sanguinamento. Sezionare il peritoneo sollevando e incidendo il filamento peritoneale trasversalmente tra le due corna uterine rudimentali, quindi estendendo l'incisione lateralmente, anteriormente e posteriormente. Esporre la fossetta vaginale sull'approccio perineale ed eseguire un'incisione a forma di H e creare uno spazio neo-vaginale mediante una dissezione netta e smussata dello spazio vescicorettale.Quindi, tirare giù i margini peritoneali sezionati fino al bordo del vestibolo vaginale. Suture di posizione interrotta in polidiossanone sintetico assorbibile 3-0 per l'anastomosi vestibolare peritoneale. Iniziare una sutura di corda della borsa in polidiossanone sintetico assorbibile 2-0 monofilamento in ciascun emipelvi dal peritoneo mobilizzato sopra la vescica con trasfissazione connettiva del legamento rotondo, dell'istmo tubarico, del legamento utero-ovarico e della foglia peritoneale laterale.Quindi, includere nelle due suture l'aspetto laterale del mesoretto e l'aspetto anteriore della sierosa rettale immediatamente sotto la giunzione rettosigmoideo. Infine, posizionare una garza rivestita di paraffina nella neovagina rivestita di peritoneo. Raccogliere gli aspirati follicolari in tubi a fondo tondo da 10 millimetri tenuti caldi in un'incubatrice portatile e trasportarli immediatamente al laboratorio di embriologia con un tempo di trasporto di circa 10 minuti.Man mano che tutti i complessi di ovociti cumuliformi vengono raccolti, posizionarli nel piatto a quattro pozzetti contenente il mezzo di fecondazione ed etichettare il coperchio e il fondo con i dati relativi all'identità del paziente. Incubarli a 37 gradi Celsius in un'atmosfera controllata contenente il 6% di anidride carbonica e il 5% di ossigeno. Assicurarsi che un secondo membro del personale del laboratorio esegua un doppio controllo della procedura.Eseguire la rimozione delle cellule della corona cumuliforme entro 38 ore dal trigger post-ovulazione. Posizionare i complessi di ovociti cumuliformi nel pozzetto centrale contenente l'enzima per disperdere le cellule cumuliformi con una pipetta Pasteur di vetro, pipettando delicatamente la soluzione contenente complessi di ovociti cumuliformi su e giù per un massimo di 30 secondi. Spostare gli ovociti nel secondo piatto centrale contenente solo terreno tamponato HEPES, assicurandosi di spostare una quantità minima dell'enzima.Rimuovere le cellule corona rimanenti utilizzando pipette denudate con diametri interni decrescenti. Valutare lo stadio di maturazione degli ovociti, separando gli ovociti in metafase II. Trasferire gli ovociti in metafase II in una capsula di Petri di 60 millimetri per coltura IVF contenente nove gocce di terreno di coltura singolo continuo coperto con sei millimetri di olio minerale.Incubarli a 37 gradi Celsius in un'atmosfera controllata contenente il 6% di anidride carbonica e il 5% di ossigeno. Riempire una scatola di raffreddamento fino alla parte superiore con azoto liquido fresco e coprire fino a quando non viene utilizzato per ridurre al minimo la dispersione e l'evaporazione. Utilizzare una pipetta stripper con un diametro interno di 170 micrometri per evitare di danneggiare gli ovociti durante la manipolazione.Agitare delicatamente ogni flaconcino di soluzione equilibrante, soluzione di vitrificazione e soluzione di lavaggio per miscelare il contenuto prima dell'uso. Preparare il coperchio di una capsula di Petri da 60 millilitri con una goccia di 50 microlitri di soluzione di lavaggio uno. Posizionare le gocce appena prima dell'uso per limitare l'evaporazione del mezzo.Prelevare il piatto ovocitario dall'incubatrice e trasferire gli ovociti in metafase II con un volume minimo di terreno dal piatto di coltura nei 50 microlitri di soluzione di lavaggio. Erogare gocce da 50 microlitri di soluzione di lavaggio due, soluzione di equilibrio uno e soluzione di equilibrio due in prossimità e trasferire gli ovociti dalla soluzione di lavaggio a goccia uno alla soluzione di lavaggio a goccia due. Unire la goccia di soluzione di equilibrio uno alla soluzione di lavaggio due e attendere due minuti per la miscelazione spontanea di entrambe le soluzioni.Quindi, unire la goccia di soluzione di equilibrio due alle gocce precedentemente unite e lasciare per altri due minuti. Infine, unire una nuova goccia da 100 microlitri di soluzione di equilibrio tre alle gocce precedentemente unite e lasciare per un altro minuto. Mettere gli ovociti in una goccia da 100 microlitri di soluzione equilibrante quattro per 10 minuti.Erogare due gocce da 50 microlitri di soluzione di vitrificazione e una da 100 microlitri di soluzione di vitrificazione. Spostare gli ovociti in sequenza nelle tre gocce di soluzione vitrificata per 60 secondi in modo che gli ovociti rimangano in ogni goccia per circa 20 secondi. Quando mancano circa 10 secondi alla fine dei 60 secondi di incubazione, posizionare il criodispositivo al microscopio.Portare gli ovociti sulla punta della pipetta e posizionarli sul criodispositivo con la quantità minima di soluzione di vitrificazione. Aspirare la soluzione vitrificica in eccesso, lasciando gli ovociti coperti da un sottile strato di soluzione vitrificativa. Immergere il criodispositivo direttamente nell'azoto liquido e spostarlo rapidamente.Conservare il dispositivo in azoto liquido e coprirlo con un coperchio protettivo. Le procedure laparoscopiche concomitanti di prelievo degli ovociti e vaginoplastica sono state combinate con successo in tutte le pazienti. Sono stati recuperati in media 11,4 ovociti 5,4 e crioconservati 9,6 ovociti da 4,3 M2.Il tempo operativo medio totale è stato di 114 17 minuti. La perdita di sangue intraoperatoria è stata insignificante in tutti i pazienti e non sono stati osservati eventi avversi intraoperatori. Il terzo giorno dopo l'intervento, i pazienti hanno iniziato l'uso quotidiano del dilatatore e sono stati dimessi il giorno 6.0 1.0.Si raccomanda una prudente aspirazione dei follicoli all'interno dell'ovaio, con la dovuta attenzione alla mobilizzazione automatica delle ovaie al fine di garantire un accesso e un recupero ottimali.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolamento, Crioconservazione e Cultura umani Cellule epiteliali Amnion per le applicazioni cliniche

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Ricerca

Medicina

Intraoperative Gastroscopy for Tumor Localization in Laparoscopic Surgery for Gastric Adenocarcinoma

Gastroscopia intraoperatoria per tumore Localizzazione in chirurgia laparoscopica per adenocarcinoma gastrico

Determining resection margins for gastric cancer, which are not exposed to the serosal surface of the stomach, is the most important procedure during ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Network Analysis di forame ovale elettrodi Recordings in farmaco-resistenti epilessia del lobo temporale pazienti

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

Tecnica laparoscopica per la raccolta di serie del fegato e linfonodi mesenterica in macachi

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

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Resezione transascellare della prima costola per il trattamento della sindrome dello stretto toracico

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