Name: laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome at JoVE.com

この作業に対する具体的な資金は受け取られていません。

MRKHSの三次紹介センター(IRCCSサンラッファエーレ大学病院、イタリア、ミラノ)の地元の倫理委員会は、2017年7月に実施される前にプロトコルに通知され、承認されました。すべての患者または保護者は、膣形成術中の腹腔鏡下卵母細胞回収と凍結保存、および科学的目的での匿名化された臨床/検査データの使用について、署名されたインフォームドコンセントを与えました。
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<ol>
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このプロトコルは、膣形成術と卵母細胞回収の手順を組み合わせることにより、MRKHSの治療における侵襲性を軽減します。そのためには、COS、外科手術、卵母細胞ガラス化のタイミングを効率的にスケジュールするために、専任チームを任命することが重要です。
この併用腹腔鏡法が最も有益であると予想されるMRKHS患者は、骨盤壁に沿って横方向に位置する骨盤外卵巣<...

4〜10,000人の女性に約1人の発生率で、MRKHSは原発性無月経症例の15%の原因です。MRKHSは、膣および子宮の上部部分の先天性欠如によって特徴付けられるが、尿路および骨格異常はさまざまに関連している。より具体的には、通常、深さ1〜2 cmの膣金庫が存在し、2つの初歩的な子宮角が見つかることがあります1。
過去には、MRKHSの主な医学的関心は正常な性交を可能にすることであり、それは一般的に非外科的または外科的アプローチのいずれかによって新膣を構築することを必要とする2。しかし、生殖医学の進歩により、現在、代理出産3,4または最近では子宮移植5のいずれかによって、MRKHS患者の遺伝的母性が可能になりました。子宮移植はまだ実験的な手順ですが、代理出産は世界中の多くの国で利用可能であり6、報告されている産科および心理社会的結果は、標準的な体外受精および卵母細胞提供の結果に匹敵します7。
代理出産と子宮移植はどちらも卵母細胞回収と体外受精を必要としますが、MRKHS患者の採卵方法に関するコンセンサスは存在しません。経膣的アプローチは、膣形成術後でも不十分な膣弾力性8、卵巣の非定型位置9、または卵巣と膣カフ4,10の間の過度の距離のために実行不可能な場合があります。これらの場合、腹腔鏡下卵母細胞回収は、外科的アクセスの観点から最適なアプローチを表しています。しかし、現在、ほとんどのMRKHS患者が腹腔鏡下新膣形成術を受けているため、膣形成術11の手術時に腹腔鏡下卵母細胞回収を行い、その後、将来の使用のために卵母細胞凍結保存を行い、MRKHS患者の有性生殖機能の治療を組み合わせながら侵襲性を最小限に抑えることをお勧めします。
患者の人口統計データ これまでに23人のMRKH患者がこのプロトコルによる治療を受けました。患者の既往歴、機器、および検査所見を 表1に要約します。. 表1で指定されていない限り、関連する先天異常は見つかりませんでした。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Oocyte retrieval procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable incubator</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 mL Polystyrene Round-Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin 100 mg/ml in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage Fertilization medium SAGE</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 O2 Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Cooper Surgical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture) medium</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Albumin 100 mg/mL in Normal Saline (5%)</td>
			<td>Origio</td>
			<td>3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture 60 mm petri dish</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>FA9150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil for embryo culture</td>
			<td>Origio</td>
			<td>4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Well Dish</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-CW05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#8217;s Advantage medium with HEPES</td>
			<td>Origio</td>
			<td>1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serum Substitute Supplement</td>
			<td>Fujifilm irvine Scientific</td>
			<td>99193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass pasteur pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (140 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stripping pipette tips (170 &#956;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oocyte vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>150360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Container for Cooling rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryodevice/cryotop</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>81111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet</td>
			<td>COOK</td>
			<td>K- 1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Printer LabXpert</td>
			<td>Brady</td>
			<td>XSL-86-461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 20-200 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2160G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 2-20 &#181;L</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>2139-HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visotubes</td>
			<td>Cryo Bio System</td>
			<td>20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze Kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic oocyte retrieval and cryopreservation during vaginoplasty for treatment of mayer-rokitansky-kuster-hauser syndrome

腹腔鏡下膣形成術を予定しており、生物学的母性を希望するメイヤー・ロキタンスキー・クスター・ハウザー症候群(MRKHS)患者において、凍結保存のために腹腔鏡下卵母細胞回収を併用することを提案する。卵母細胞回収は腹腔鏡検査の開始時に追求される。左右の5mmのトロカールを配置し、それを通して17Gの卵子吸引針を使用してそれぞれ右卵巣と左卵巣の穿刺を行います。卵胞の露出を容易にするために、卵巣を動員し、腹腔鏡下鉗子で保持する。
複数の卵胞を互いに近く吸引する場合、卵巣皮質がトランスフィックスされる回数を減らすために針先が卵巣に保持され、出血の固有のリスクがあります。その後のステップは、膣形成術のためのDavydov腹腔鏡下修正技術と比較して変更されていません。手術前に、ゴナドトロピンホルモン放出ホルモン(Gn-RH)アンタゴニストプロトコルを使用して制御された卵巣刺激が行われ、卵母細胞回収と膣形成術の付随する手順は、最終的な卵胞成熟トリガーの36時間後に予定されています。卵胞液は、経膣卵母細胞回収時に使用されるのと同じ10 mL滅菌チューブに収集され、加温ブロック(37°C)で生殖補助医療検査室に移され、そこで成熟(中期II)卵母細胞がガラス化されます。
この場合、MRKHの一連の23人の女性、卵母細胞が正常に回収され、すべての患者で凍結保存されました。その後,膣形成術はそのまま施行し,術後入院・外来診療(尿道カテーテル抜去日,退院日,拡張器使用,経過観察時の快適性)は影響を受けなかった.術後合併症は1例(術後5日目に発熱,経腹腔超音波で腹腔内液検出)を合併し,保存的治療後に消失した.このアプローチは、MRKH患者の外科的膣形成術を行い、卵母細胞回収を遅らせるのではなく、両方の手順を1回の腹腔鏡検査に組み合わせることで、外科的侵襲性と麻酔リスクを最小限に抑えます。

表2には患者の卵巣刺激データが含まれていますが、主な外科的および機能的転帰は表3に記載されています。卵母細胞回収と膣形成術の付随する腹腔鏡手術は、すべての患者でうまく組み合わされました。平均11.4±5.4(平均±SD)の卵母細胞を回収し、9.6±4.3のMII卵母細胞を凍結保存しました(表3)。ARTを受けている患者における卵母細胞の凍結保存に関する私...

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Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

専任チームは、メイヤー・ロキタンスキー・クスター・ハウザー患者に、腹腔鏡下膣形成術時に制御された卵巣刺激と卵母細胞の凍結保存を行うオプションを提供できます。

マイヤー・ロキタンスキー・クスター・ハウザー症候群の治療のための膣形成術中の腹腔鏡下卵母細胞回収と凍結保存

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

私たちのアプローチは、将来の不妊治療のために腹腔鏡下膣形成術と卵母細胞回収を組み合わせることにより、マイヤー・ロキタンスキー・クスター・ハウザー症候群の治療における侵襲性疾患を最小限に抑えることを可能にします。私たちのアプローチの主な利点は、単一の麻酔の必要性と、若いRokitansky患者における経膣卵母細胞回収の実現可能性の克服です。この手順は、私たちの不妊症ユニットの上級婦人科医であるダイアナデルプラトと、生殖補助医療研究所の2人の上級臨床発生学者であるアレッサンドラアルテリとグレタセルミソーニによって実証されます。手術日から14日目に制御された卵巣刺激を開始します。連続経腹部超音波およびエストラジオールおよびプロゲステロンの同時測定による卵巣反応を監視する。オープンテクニックで気腹膜を確立します。腹腔鏡を挿入するための1つの10ミリメートルのアンビリカルトロカールと、中央、右、左の下象限に3つの5ミリメートルのトロカールを配置します。腹腔鏡視下では、右卵巣と左卵巣の穿刺のために中央トロカールと左トロカールを介した経膣的回収に一般的に使用されるように、吸引ポンプに接続された17ゲージの単一ルーメン針を使用します。卵胞の露出を容易にするために腹腔鏡下鉗子で卵巣を持ち上げて保持します。互いに近い複数の卵胞を吸引する場合は、卵巣に針先を保持して、卵巣皮質が固定される回数と出血の固有のリスクを減らします。腹膜を2つの初歩的な子宮角の間で横方向に持ち上げて切開し、次に切開部を横方向、前方、および後方に伸ばして腹膜を解剖します。会陰アプローチで膣のくぼみを露出させ、H字型の切開を行い、膀胱直腸腔の鋭く鈍い解剖によって新膣腔を作成します。次に、解剖した腹膜縁を膣前庭の端まで引き下げます。腹膜前庭吻合のためのポリジオキサノン合成吸収性3−0で縫合糸を中断した位置。丸い靭帯、卵管峡部、子宮卵巣靭帯、および外側腹膜葉の結合伝達を伴う膀胱の上の動員された腹膜から、各半骨盤のポリジオキサノン合成吸収性2-0モノフィラメントの巾着糸縫合を開始します。次に、2つの縫合糸に、直腸直腸の外側の側面と直腸S状結腸接合部の直腸漿膜の前方の側面を含めます。最後に、腹膜コーティングされた新膣にパラフィンコーティングされたガーゼを置きます。卵胞吸引液をポータブルインキュベーターで保温した10mm丸底チューブに集め、すぐに約10分の輸送時間で発生学研究室に輸送します。すべての積雲卵母細胞複合体が収集されたら、それらを受精培地を含む4ウェル皿に入れ、蓋と底に患者の身元に関するデータをラベル付けします。6%の二酸化炭素と5%の酸素を含む制御された雰囲気の中で摂氏37度でそれらをインキュベートします。手順の再確認が実験室スタッフの2人目のメンバーによって実行されていることを確認してください。排卵トリガー後38時間以内に積雲コロナ細胞の除去を行います。酵素を含む中央のウェルに積雲卵母細胞複合体を置き、ガラスパスツールピペットで卵丘細胞を分散させ、卵母細胞複合体を含む溶液を最大30秒間穏やかに上下にピペッティングします。HEPES緩衝培地のみを含む第2の中央ウェルディッシュに卵母細胞を移動し、酵素の最小量を置換することを確認します。内径が減少したデービングピペットを使用して残りのコロナセルを取り除きます。卵母細胞の成熟段階を評価し、中期IIの卵母細胞を分離します。中期II卵母細胞を、6ミリメートルの鉱物油で覆われた9滴の連続単一培養培地を含むIVF培養60ミリメートルペトリ皿に移します。6%の二酸化炭素と5%の酸素を含む制御された雰囲気の中で摂氏37度でそれらをインキュベートします。冷却ボックスの上部まで新鮮な液体窒素を満たし、分散と蒸発を最小限に抑えるために使用されるまで覆います。内径170マイクロメートルのストリッパーピペットを使用して、操作中に卵母細胞を損傷しないようにします。平衡化溶液、ガラス化溶液、洗浄液の各バイアルを静かに振って内容物を混合してから使用してください。60ミリリットルのペトリ皿の蓋を50マイクロリットルの洗浄液1滴で準備します。媒体の蒸発を制限するために、使用直前に滴を置きます。インキュベーターから卵母細胞ディッシュを取り出し、培養ディッシュから最小量の培地を含む中期II卵母細胞を50マイクロリットルの洗浄液に移します。洗浄液2、平衡化溶液1、平衡化溶液2の50マイクロリットル滴を近接して分注し、液滴洗浄液1から液滴洗浄液2に卵母細胞を移します。平衡化溶液1の滴を洗浄溶液2にマージし、両方の溶液が自発的に混合されるまで2分間待ちます。次いで、平衡化溶液2の滴を先に合流した液滴に合流させ、さらに2分間放置する。最後に、100マイクロリットルの新しい100マイクロリットルの平衡溶液3滴を以前にマージした液滴にマージし、さらに1分間放置します。卵母細胞を100マイクロリットルの平衡化溶液4滴に10分間入れます。50マイクロリットルのガラス化保存液2滴と100マイクロリットルのガラス化保存液1滴を分注します。卵母細胞を3滴のガラス化保存液に60秒間順次移動させ、卵母細胞が各滴に約20秒間留まるようにします。60秒間のインキュベーションが終了するまでに約10秒が経過したら、クライオデバイスを顕微鏡下に置きます。卵母細胞をピペットの先端に運び、最小限のガラス化保存液を入れたクライオデバイスに置きます。余分なガラス化保存液を吸引し、卵母細胞をガラス化保存液の薄層で覆ったままにします。クライオデバイスを液体窒素に直接突っ込み、すばやく動かします。デバイスを液体窒素に保ち、保護蓋で覆います。卵母細胞回収と膣形成術の付随する腹腔鏡手術は、すべての患者でうまく組み合わされました。平均11.4 5.4卵母細胞が回収され、9.6 4.3 M2卵母細胞が凍結保存されました。総平均手術時間は114 17分であった。術中失血はすべての患者で重要ではなく、術中の有害事象は観察されませんでした。.術後3日目に、患者は毎日拡張器の使用を開始し、6.0 1.0日目に退院しました。最適なアクセスと回収を確実にするために卵巣の自動動員に十分な注意を払いながら、卵巣内の卵胞の慎重な吸引が推奨されます。

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

臨床応用のためのヒト羊膜上皮細胞の単離、凍結保存と文化

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Transaxillary First Rib Resection for Treatment of the Thoracic Outlet Syndrome

胸郭出口症候群の治療のための経腋窩第一肋骨切除術

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Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

膵臓癌のための腹腔鏡下左膵切れ切れ:手術戦略と技術ビデオ

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Technical Modification of the Terminal Ureter During Total Transperitoneal Laparoscopic Nephroureterectomy for Upper Urinary Tract Urothelial Carcinoma

上部尿路尿道尿道癌に対する全腹腹腔鏡下腎摘出術中の末端尿管の技術的改変

Upper tract urothelial carcinoma (UTUC) accounts for 5%&ndash;10% of all urothelial tumors. Radical nephroureterectomy is the standard treatment ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM:卵母細胞検索後の体外成熟と婦人科手術の組み合わせ

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Surgical Techniques to Optimize Ovarian Reserve during Laparoscopic Cystectomy for Ovarian Endometrioma

卵巣子宮内膜症の腹腔鏡下膀胱切除術中に卵巣予備を最適化する外科技術

Surgical management of ovarian endometrioma in patients desiring fertility is complicated by the need to balance maximal resection of disease with efforts ...

Comparing Objective Conjunctival Hyperemia Grading and the Ocular Surface Disease Index Score in Dry Eye Syndrome During COVID-19

COVID-19中のドライアイ症候群における客観的結膜充血グレーディングと眼表面疾患指数スコアの比較

The incidence of dry eye syndrome (DES) has increased due to wearing masks, utilizing digital devices, and working remotely during the pandemic. A survey ...