Name: nitroreductase/metronidazole-mediated ablation and a matlab platform (rpegen) for studying regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium
Uploaded: 2022-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium at JoVE.com

本明細書に記載された研究は、国立衛生研究所(RO1-EY29410からJ.M.G.へ、およびNIH CORE Grant P30-EY08098から眼科へ)によって支援された。UPMC Immune Transplant & Therapy Center(L.L.L.およびJ.M.G.へ)E. Ronald Salvitti Chair in Ophthalmology Research(J.M.G.へ)。Wiegand Fellowship in Ophthalmology(L.へ)、ピッツバーグのEye & Ear Foundation、およびNew York, NYのResearch to Prevent Blindnessから無制限の助成金が受けられました。著者らはまた、技術支援のアマンダ・プラットと、優れた動物ケアサポートのためのヒュー・ハマー博士と水生生物スタッフに感謝したい。

ここに概説されているすべての方法論は、ピッツバーグ大学の施設動物ケアおよび使用委員会(IACUC)に準拠しています。
1. ゼブラフィッシュ胚採取前の準備
<ol><li>胚培養器を28.5°Cに設定します。</li>
	<li>メラニン生成阻害剤であるN-フェニルチオ尿素(PTU)21,22の25倍の原液を調製する。この原液は、一般的な?...

このプロトコルは、RPEを遺伝的にアブレーションし、幼虫齢ゼブラフィッシュの変性と再生のメカニズムを研究するための方法論を説明しています。このプロトコルは、成虫のゼブラフィッシュ3でも首尾よく実行されていますが、それほど広範な特性評価が行われていないため、幼虫がここで焦点を当てています。プロトコルのこの部分(ステップ1〜4)の重要な側面には、1)...

本明細書に記載の方法論は、ゼブラフィッシュの幼虫を利用して網膜色素上皮(RPE)を遺伝的にアブレーションするためのプロトコールを詳述する。RPEは眼の後ろに延び、神経網膜の層状層と脈絡膜を構成する血管系の層の間に存在する。栄養サポート、光毒性光の吸収、および視覚サイクルタンパク質の維持は、RPEが果たす重要な機能の一部に過ぎず、これらの隣接組織の健康および完全性を維持するために不可欠である1。哺乳類RPEへの損傷は、病変が小さい場合に回復可能である2;しかし、より大きな傷害または進行性変性疾患によって被る損傷は不可逆的である。ヒトでは、RPE変性疾患(加齢黄斑変性症(AMD)やスターガルト病など)は、永久的な視力喪失をもたらし、利用可能な治療選択肢がほとんどなく、患者の生活の質を低下させる。哺乳類のRPEが自己修復する能力が限られているため、RPE再生プロセスの分野で知識のギャップが生じています。多くの異なる組織タイプにわたるゼブラフィッシュの堅牢な再生能力を考慮して、このプロトコルは、本質的に再生RPEに関する研究を容易にし、その応答を駆動するメカニズムを明らかにするために 、in vivo 脊椎動物システムを確立するために開発されました。ここで概説したアブレーションパラダイムを用いて、標準的なWntシグナル伝達経路3、mTOR経路4、および免疫関連応答5 が、RPE再生の重要なメディエーターとして同定され、重複する機能を有する可能性が高い。
この遺伝子アブレーションパラダイムにおいて、Tg(rpe65a:nfsB-eGFP)3ゼブラフィッシュは、RPEエンハンサーエレメントrpe65a7の制御下でeGFPに融合した細菌由来ニトロレダクターゼ(NTR/nfsB)遺伝子6を発現する。アブレーションは、プロドラッグであるメトロニダゾール(MTZ)をゼブラフィッシュを収容する系水に添加することによって達成される。ニトロレダクターゼによるMTZの細胞内活性化は、NTR/nfsB発現細胞においてDNA架橋およびアポトーシスをもたらす8,9。この技術は、網膜10、11、12、13および他の組織8の細胞をアブレーションするためにゼブラフィッシュにおいて広く使用されている。これらの要素を組み合わせることで、誘導性細胞アブレーション法(NTR/MTZ)8,9の標的発現(rpe65a)と蛍光マーカー(eGFP)を可視化することができます。
RPE14の再生可能性を研究するために使用できる他の興味深いインビボモデルも存在する。これらは広範であり、両生類における網膜切除術後のRPEから網膜への分化転換を含み、網膜再増殖によって失われたRPE細胞が置き換えられる15,16;「スーパーヒーリング」MRL/MpJマウスにおける損傷後のRPE回復17;とりわけ、自発的RPEおよび網膜変性のラットモデルにおけるRPE増殖の外因性刺激18が挙げられる。成体ヒトRPE幹細胞(RPESC)19などのインビトロモデルも開発されている。これらのモデルはすべて、RPE再生に関連する細胞プロセス(例えば、増殖、分化など)を明らかにするのに役立つ貴重なツールです。しかし、ゼブラフィッシュは、アブレーション後の固有のRPE修復能力においてユニークです。
ここでの方法論はRPE再生を駆動するメカニズムの理解に焦点を当てるために書かれていますが、 Tg(rpe65a:nfsB-eGFP) ラインとこの遺伝子アブレーションプロトコルは、RPEアポトーシス、RPE変性、および隣接する網膜および血管組織に対するRPE損傷の影響などの他の細胞プロセスを研究するために利用することができます。アブレーションプロトコルはまた、薬理学的操作を含むように改変することもでき、これは、目的のシグナル伝達経路をスクリーニングするための便利な予備的戦略である。例えば、Wnt応答−1の阻害剤(IWR−1)20を用いて標準的なWnt経路を遮断することは、RPE再生3を損なうことが示されている。これは、薬理学的操作実験を通してユーザーを導き、色素沈着の回復に基づいてRPE再生を定量化するために作成されたMATLABスクリプト(RpEGEN)を検証するための概念実証として機能するためにここで繰り返されました。トランスジェニックラインおよびアブレーションプロトコルと同様に、RpEGENスクリプトは適応性があり、RPE内の他のマーカー/細胞プロセスを定量するために使用できます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Lab Material/Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-539-13</td>
			<td>Catalog number is for 50 mL tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond tip scribing pen</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-254-51</td>
			<td>Manufactured by Electron Microscopy Sciences, items similar to this part number are adequate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO) &#8805;99.7 %</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP231</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo incubator (large)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3720A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo incubator (mini/tabletop)</td>
			<td>Labnet</td>
			<td>I5110A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereo microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Zoom.V16</td>
			<td>Or similar, with 488 nm excitation laser/filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-4</td>
			<td>Manufactured by Corning, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Wnt Antagonist I, IWR-1-endo</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5.04462</td>
			<td>Manufactured by Calbiochem; 25 mM in DMSO; check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue (powder)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP117-100</td>
			<td>Also available as a premade aqeuous solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole (MTZ)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M3761</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-phenylthiourea (PTU)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (16 % w/v) methanol free</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AA433689M</td>
			<td>Chemical waste, proper disposal required</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td>10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (powder packets)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Used to make 10 X PBS stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>PRON-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>H2010</td>
			<td>Used for incubating MTZ for 1 hour at 37 degrees Celcius</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S9i</td>
			<td>Or similar, with transmitted light illumination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Dumont #5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91150-20</td>
			<td>Fine-tipped forceps for manual dechorionation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabletop rotator/shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>SK-D1807-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z135003</td>
			<td>3.2 mL bulb draw, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (MS-222)</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>TRS1, TRS2, TRS5</td>
			<td>Also available from Fisher Scientific (NC0342409)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>FIJI (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>https://imagej.net/software/fiji/</td>
			<td>Version: 2.0.0-rc-69/1.52p; Build: 269a0ad53f; Plugin needed: Bio-Formats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GRAMM examples and how-tos</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/54465-gramm-complete-data-visualization-toolbox-ggplot2-r-like.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/get-matlab.html</td>
			<td>Toolboxes needed to run RpEGEN: Image Processing Toolbox, Curve Fitting Toolbox, Statistics and Machine Learning Toolbox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB support</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/support.html</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nitroreductase/metronidazole-mediated ablation and a matlab platform (rpegen) for studying regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium

網膜色素上皮(RPE)は、眼の後ろに存在し、隣接する網膜および血管組織の健康と完全性を維持するために不可欠な機能を果たす。現在、哺乳類RPEの修復能力は小さく、小さな傷害に限定されているため、 in vivoRPE 再生プロセスの理解が進んでいません。ここでは、堅牢な組織再生が可能な脊椎動物モデルであるゼブラフィッシュを利用した in vivo RPE修復の研究を容易にするために詳細な方法論が提供される。このプロトコルは、トランスジェニックニトロレダクターゼ/メトロニダゾール(NTR/MTZ)媒介性傷害パラダイム(rpe65a:nfsB-eGFP)を記述しており、MTZによる24時間治療後にRPEの中央3分の2がアブレーションされ、その後の組織が回復する。ゼブラフィッシュの幼虫におけるRPEアブレーションに焦点が当てられ、RPE再生に対する薬理学的化合物の効果をテストするための方法も概説されている。色素沈着に基づくRPE再生の定量化を自動化するために作成されたMATLABスクリプトであるRpEGENの生成と検証についても説明します。能動的RPE修復機構を超えて、このプロトコルは、RPE変性および傷害応答の研究、ならびに隣接する網膜および血管組織に対するRPE損傷の影響、とりわけ他の細胞および分子プロセスの研究に拡張することができる。このゼブラフィッシュシステムは、RPE再生およびRPE疾患関連メカニズムを駆動する遺伝子、ネットワーク、およびプロセスの同定において大きな可能性を秘めており、この知識を哺乳類系に適用し、最終的には治療開発に応用するという長期的な目標を掲げています。

標準的なWntシグナル伝達経路を阻害することは、プロトコル3に記載されている遺伝子アブレーションパラダイム(rpe65a:nfsB-eGFP)および薬理学的操作方法論(IWR-1)を用いたゼブラフィッシュRPE再生を著しく損なうことが知られている。色素沈着に基づいてゼブラフィッシュRPE再生を定量するための自動化された方法を検証するために、この実験をここで繰り返した。以下?...

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Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

このプロトコルは、トランスジェニックゼブラフィッシュモデルを用いて網膜色素上皮(RPE)を遺伝的にアブレーションする方法論を記載している。薬理学的化合物を用いたシグナル伝達経路調節を組み込むようにプロトコルを適応させることは、広範囲に詳述されている。色素沈着に基づいてRPE再生を定量化するためのMATLABプラットフォームが開発され、提示され、議論される。

ニトロレダクターゼ/メトロニダゾール媒介アブレーションとゼブラフィッシュ網膜色素上皮の再生を研究するためのMATLABプラットフォーム(RpEGEN)

The retinal pigment epithelium (RPE) resides at the back of the eye and performs functions essential for maintaining the health and integrity of adjacent ...

ゼブラフィッシュは、RPEを含む多くの異なる組織タイプを再生するその固有の能力においてユニークです。このプロトコルは、RPE再生およびRPE疾患関連メカニズムを駆動する分子経路を同定するために使用することができる。汎用性は、この方法論の主な利点です。RPE再生の研究に加えて、このプロトコルは、RPE変性プロセスおよび眼内の隣接組織に対するRPE損傷の影響を調べるために利用することができる。ヒトを含む哺乳類は、外傷または変性疾患に起因する大きなRPE傷害を修復することができない。RPE促進再生因子を発見するためのツールとしてゼブラフィッシュを使用することは、哺乳類のRPE再生を促進するための重要なステップです。新鮮な10ミリモルのMTZ溶液を調製するために、受精後5日間、PTUを含まない系水にMTZ粉末を加え、摂氏37度で1時間激しく振とうすることによって十分に混合する。10ミリモルのMTZ溶液を卓上回転子またはシェーカー上で室温で1時間冷却する。rpe65a:nsfB-eGFP導入遺伝子からゼブラフィッシュ幼虫をスクリーニングするために、488ナノメートル励起レーザーを用いた蛍光実体顕微鏡を用いて、トランスジェニックeGFP陽性幼虫を非トランスジェニックeGFP陰性幼虫から分離した。スクリーニングされた幼虫を、トリカインを含まない新鮮な1.5倍PTUのペトリ皿に直接ピペッティングすることによって直ちに起こす。スクリーニングの完了時に、eGFP陽性幼虫をさらに2群のペトリ皿に分離し、1群はMTZ処理を受け、1群はアブレーションなし対照とする。次に、アブレーション処理皿から1.5倍のPTUを除去して網膜色素上皮をアブレーションし、新しく作られた10ミリモルのMTZ溶液を加える。また、アブレーションされていないコントロールディッシュから1.5倍のPTUを取り除き、PTUなしで新鮮なシステム水を追加します。正確に24時間後に10ミリモルのMTZ溶液を除去し、PTUなしで新鮮なシステム水を加える。MTZネガティブディッシュのPTUなしで新鮮なシステム水を交換してください。受精後4日目にeGFP陽性幼虫をスクリーニングする。eGFPは受精後4日目に見えるが、5日目にはシグナル強度よりも薄暗く見える。薬理学的治療のために、eGFP陽性幼虫をペトリ皿の代わりに6ウェルプレートに1ウェルあたり10匹以下の幼虫の密度で配置する。アブレーションされた幼虫とアブレーションされていない幼虫のために別々の6ウェルプレートを指定する。15マイクロモルIWR-1の体積または必要なDMSOビヒクル制御前処理と一致する体積を決定し、それに応じて1.5倍のPTUを円錐形チューブにアリコートします。IWR-1ストックを1.5X PTUに加え、最終濃度15マイクロモルのIWR-1とする。DMSO ストックの一致したボリュームを 1.5 倍の PTU に追加します。ボルテックス処理によりよく混合し、化合物の溶解を目視で確認する。6ウェルプレート中のeGFP陽性幼虫から1.5倍のPTUを除去し、新しく作られた0.06%DMSOまたは15マイクロモルIWR-1処理のウェルあたり5ミリリットルを加える。翌日、RPEをアブレーションする。受精後5日目に、アブレーションされていない6ウェルプレートとアブレーションされた6ウェルプレートの両方に必要な薬理学的およびビヒクルコントロール治療の量を決定し、PTUなしの淡水または10ミリモルMTZ溶液のいずれかの適切な容量を円錐形のチューブにアリコートします。IWR-1およびDMSOストック溶液を、以前に行ったようにそれぞれの円錐管に加える。ボルテックス処理によりよく混合し、化合物の溶解を目視で確認する。1.5X PTU中の0.06%DMSOおよび15マイクロモルIWR-1前処理を、指定された非アブレーションおよびアブレーションされた6ウェルプレートから除去する。PTUおよびMTZ溶液処理なしで適切な淡水で補充する。正確に24時間後に10ミリモルMTZ溶液中の0.06%DMSOおよび15マイクロモルIWR-1処理を除去し、PTUを含まない淡系水で処理を補充する。0.06%DMSOおよび15マイクロモルのIWR-1処理を、アブレーションされていない6ウェルプレート上のPTUを含まない淡水に補充する。遺伝子アブレーション後の幼虫維持のために、実体顕微鏡上の透過光照明を使用して、インビボでのアブレーションの成功および程度を監視する。フィジーを使用してRPE関心領域またはROIを生成するには、8ビットTIFF画像を開き、画像、変換、および水平反転を選択して、背側が上向きで遠位が残るように画像の向きを変えます。最後のコマンドでは、その画像に必要な方向性に最も適したオプションを選択します。分析、ツール、ROI マネージャーを選択して、ROI マネージャーを開始します。画像、ズーム、DAPI チャンネルとブライトフィールドチャンネルの切り替えを使用します。効率を上げるためにキーボードショートカットを使用してください。RPEの頂端側が外側制限膜の先端から隣接する点を特定し、この解剖学的ランドマークをROIの出発点として使用します。フィジーツールバーのポリゴン選択ツールを使用してRPE ROIを作成し、DAPIとブライトフィールドの両方の画像チャンネルと画像ズーム機能を使用して、頂端と基底RPEの境界を識別します。ROIの背側端と腹側端を鈍くしたり丸めたりするのではなく、鋭い点に持って行きます。ROI マネージャーの [追加] をクリックして、ROI を追加します。[詳細] を選択して ROI ファイルを保存し、ROI マネージャー内で保存します。rpegenをダブルクリックします。エディタペインで開くmファイル。rpegen のユーザー定義変数セクションの下。m ファイルで、roi ファイル、tiff イメージ ファイル、および出力ファイルの保存場所を含むフォルダーのディレクトリの場所を入力します。書き出すマットファイルのグループ名と、TIFF 画像スタック内のブライトフィールドチャンネルの位置を入力します。MATLABの上部にあるエディタメニューの実行ボタンをクリックしてスクリプトを実行します。MATファイルを保存した後、3つのパネル図が表示され、各画像実行の出力ディレクトリにPDFとして保存されます。これらの品質管理PDFが出力フォルダに保存され、最後の図が消えるまで待ちます。個々の PDF を開き、すべての ROI が明視野画像と一致することを確認します。rpegen_permplotをダブルクリックします。新しいエディタタブで開くmファイル。セクション 1 ユーザー定義変数で、rpegen の実行時の MAT ファイルを含む出力フォルダーのディレクトリー・ロケーションを入力します。m スクリプト。ロードする各 MAT ファイル名を入力します。スクリプトのこのセクションを実行するには、エディタメニューの[セクションの実行]ボタンをクリックします。セクション2で、統計比較の2つのグループの名前をデータA変数とデータB変数に入力し、reps変数の順列シミュレーションの繰り返し回数を指定します。このデモでは、処理時間を短縮するために 2,000 人の営業担当のみが使用されました。スクリプトのこのセクションを実行するには、エディタメニューの[セクションの実行]ボタンをクリックします。ヒートマップ図を実行し、セクション実行ボタンを使用して結果とP値セクションを個別にグループ化します。受精後5日間の幼虫の全マウント損傷は、遺伝子切除のスクリーニング時にRPEにおいて明るい導入遺伝子発現を示した。無切除受精後6日間の幼虫の横凍結切除は、導入遺伝子発現がRPEの中央2/3に限定された最も明るい発現を有する成熟RPE細胞に制限されたことを示した。矢印は頂端微絨毛を示す。切除された傷害後1日幼虫の横凍結切除は、eGFP陽性細胞形態の破壊を明らかにした。矢印はピクノティック核を示す。アブレーションされていない受精後7日間の幼虫の全山損傷は、眼全体にRPE色素沈着を示し、アブレーションされた傷害後2日間の幼虫は、中央RPEに色素が存在しないアブレーションゾーンを示した。RpEGENを用いて生成されたプロットは、RPEの長さにわたって、無添加の受精後9日間のDMSO群とIWR-1群との間の類似性を示した。プロットは、アブレーションされた傷害後4日間のDMSOおよびIWR-1群において全体的に明るいピクセル強度を示し、これは他の任意の治療群と比較してアブレーションされたIWR-1において最も軽く見えた。中枢RPE色素沈着の差は、アブレーションされたIWR-1処理幼虫をアブレーションされたDMSO処理対照と比較すると有意であった。このゼブラフィッシュアブレーションパラダイムを使用して、RPE再生の重要な調節因子である、ここで示した風のシグナル伝達など、いくつかの分子シグナル伝達経路を同定することができました。

Research

JoVE Journal

Biology

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

イモリのレンズ再生を研究するために培養虹彩色素上皮細胞のためのシステム

Salamanders like newt and axolotl possess the ability to regenerate many of its lost body parts such as limbs, the tail with spinal cord, eye, brain, ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

腎上皮再生を研究するためにゼブラフィッシュの前腎のレーザーアブレーション

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

ヒトiPS細胞のマイクロRNA発現プロファイル、IPから派生網膜色素上皮、および胎児の網膜色素上皮

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

Methylnitrosourea MNU-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

組織学的および機能的特性：メチルニトロソ尿素（MNU）は、網膜変性·再生ゼブラフィッシュでの誘発

Retinal degenerative diseases, e.g. retinitis pigmentosa, with resulting photoreceptor damage account for the majority of vision loss in the industrial ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

マウス網膜色素上皮からの一次電池文化

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation of Primary Mouse Retinal Pigmented Epithelium Cells

初代マウス網膜色素上皮細胞の単離

The retinal pigmented epithelium (RPE) layer lies immediately behind the photoreceptors and harbors a complex metabolic system that plays several critical ...

Efficient and Consistent Generation of Retinal Pigment Epithelium/Choroid Flatmounts from Human Eyes for Histological Analysis

組織学的分析のためのヒトの眼からの網膜色素上皮/脈絡膜フラットマウントの効率的かつ一貫した生成

The retinal pigment epithelium (RPE) and retina are functionally and structurally connected tissues that work together to regulate light perception and ...