Name: nitroreductase/metronidazole-mediated ablation and a matlab platform (rpegen) for studying regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium
Uploaded: 2022-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium at JoVE.com

O trabalho aqui descrito foi apoiado pelos Institutos Nacionais de Saúde (RO1-EY29410 a J.M.G, e nih CORE Grant P30-EY08098 para o Departamento de Oftalmologia); o Centro de Transplante e Terapia Imunológica da UPMC (para L.L.L. e J.M.G.); e a Cadeira E. Ronald Salvitti em Pesquisa oftalmológica (para J.M.G.). Apoio adicional foi recebido da Wiegand Fellowship em Oftalmologia (para L.L.L), da Eye & Ear Foundation de Pittsburgh, e de uma bolsa irrestrita da Research to Prevent Blindness, Nova York, NY. Os autores também desejam agradecer amanda Platt por assistência técnica e Dr. Hugh Hammer e a equipe aquática para um excelente apoio aos animais.

Todas as metodologias aqui descritas estão em conformidade com o Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Pittsburgh.
1. Preparação antes da coleta de embriões de zebrafish
<ol><li>Coloque a incubadora de embriões a 28,5°C.</li>
	<li>Prepare uma solução de estoque de 25x do inibidor de melanogênese, N-phenylthiourea (PTU)21,22. Esta solução de estoque é dimens...

Este protocolo descreve a metodologia para ablto genético do RPE e mecanismos de estudo de degeneração e regeneração em zebrafish envelhecidos em larvas. Este protocolo também foi realizado com sucesso em zebrafishadulto 3, mas com caracterização menos extensa, e é por isso que as larvas são o foco aqui. Aspectos críticos desta parte do protocolo (etapas 1-4) incluem: 1) adicionar 1,5x PTU a embriões antes do início da melanogênese, 2) descorioar embriões tratados com PTU em 2-3 dpf...

A metodologia aqui descrita detalha um protocolo para abolar geneticamente o epitélio pigmento da retina (RPE) utilizando zebrafish larval. O RPE se estende sobre a parte de trás do olho e reside entre as camadas estratificadas da retina neural e a camada de vasculatura que constitui o coroide. Suporte trófico, absorção de luz fototóxica e manutenção de proteínas do ciclo visual são apenas algumas das funções críticas que o RPE desempenha que são essenciais para sustentar a saúde e a integridade desses tecidos adjacentes1. Os danos ao RPE mamífero são reparáveis quando as lesões são pequenas2; no entanto, os danos sofridos por lesões maiores ou doenças degenerativas progressivas são irreversíveis. Em humanos, as doenças degenerativas de RPE (por exemplo, degeneração macular relacionada à idade (AMD) e doença de Stargardt levam à perda permanente da visão e, com poucas opções de tratamento disponíveis, diminuíram a qualidade de vida do paciente. A capacidade limitada de rpe mamífero para auto-reparação criou uma lacuna de conhecimento no campo dos processos regenerativos RPE. Dada a robusta capacidade regenerativa do zebrafish em muitos tipos diferentes de tecidos, este protocolo foi desenvolvido para estabelecer um sistema de vertebrados in vivo para facilitar estudos sobre a regeneração intrinseca do RPE e descobrir mecanismos que conduzem essa resposta. Usando o paradigma de ablação aqui descrito, a via de sinalização canônica Wnt3, a via mTOR4 e as respostas relacionadas à imunidade5 foram identificadas como mediadoras críticas da regeneração de RPE, provavelmente com funções sobrepostas.
Neste paradigma de ablação genética, o gene Tg(rpe65a:nfsB-eGFP)3 zebrafish expressam o gene nitroreductase derivado da bactéria (NTR/nfsB)6 fundido ao eGFP sob controle do elemento melhorador RPE, rpe65a7. A ablação é alcançada adicionando o pró-drogas, metronidazol (MTZ), ao sistema de água que abriga zebrafish. A ativação intracelular de MTZ por nitroreductase resulta em cruzamento de DNA e apoptose em células expressasNTR/nfsB 8,9. Esta tecnologia tem sido amplamente utilizada em zebrafish para ablate células da retina 10,11,12,13 e outros tecidos 8. Juntos, esses elementos permitem a expressão direcionada (rpe65a) de uma metodologia de ablação celular indutível (NTR/MTZ)8,9 e um marcador fluorescente (eGFP) para visualização.
Outros modelos in vivo interessantes também existem que podem ser usados para estudar o potencial regenerativo do RPE14. Estes são amplos e incluem a transdiferenteição RPE-para-retina pós-retinoctomia em anfíbios, nos quais as células RPE perdidas para o recrescimento da retina são substituídas15,16; Restauração RPE pós-lesão no mouse MRL/MpJ "super curativo"17; e estimulação exógena da proliferação de RPE em um modelo de rato de RPE espontânea e degeneração da retina18, entre outros. Modelos in vitro, como células-tronco RPE humanas adultas (RPESCs)19 também foram desenvolvidos. Esses modelos são ferramentas valiosas que trabalham para desvendar os processos celulares relacionados à regeneração de RPE (por exemplo, proliferação, diferenciação, etc.); no entanto, o zebrafish é único em sua capacidade de reparo de RPE intrínseco pós-ablação.
Enquanto a metodologia aqui é escrita para focar na compreensão dos mecanismos que impulsionam a regeneração do RPE, a linha Tg(rpe65a:nfsB-eGFP) e este protocolo de ablação genética poderiam ser utilizados para estudar outros processos celulares, como apoptose RPE, degeneração RPE e o efeito da lesão de RPE em tecidos de retina e vascular adjacentes. O protocolo de ablação também pode ser modificado para incluir manipulação farmacológica, que é uma estratégia preliminar conveniente para rastrear caminhos de sinalização de interesse. Por exemplo, bloquear a via canônica Wnt usando o Inibidor do Wnt Response-1 (IWR-1)20, mostrou-se prejudicado a regeneração de RPE3. Isso foi repetido aqui para orientar os usuários através de um experimento de manipulação farmacológica e servir como prova de conceito para validar um script MATLAB (RpEGEN) criado para quantificar a regeneração de RPE com base na recuperação da pigmentação. Como a linha transgênica e o protocolo de ablação, os scripts RpEGEN são adaptáveis e podem ser usados para quantificar outros marcadores/processos celulares dentro do RPE.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Lab Material/Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-539-13</td>
			<td>Catalog number is for 50 mL tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond tip scribing pen</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-254-51</td>
			<td>Manufactured by Electron Microscopy Sciences, items similar to this part number are adequate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO) &#8805;99.7 %</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP231</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo incubator (large)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3720A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo incubator (mini/tabletop)</td>
			<td>Labnet</td>
			<td>I5110A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereo microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Zoom.V16</td>
			<td>Or similar, with 488 nm excitation laser/filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-4</td>
			<td>Manufactured by Corning, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Wnt Antagonist I, IWR-1-endo</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5.04462</td>
			<td>Manufactured by Calbiochem; 25 mM in DMSO; check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue (powder)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP117-100</td>
			<td>Also available as a premade aqeuous solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole (MTZ)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M3761</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-phenylthiourea (PTU)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (16 % w/v) methanol free</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AA433689M</td>
			<td>Chemical waste, proper disposal required</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td>10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (powder packets)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Used to make 10 X PBS stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>PRON-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>H2010</td>
			<td>Used for incubating MTZ for 1 hour at 37 degrees Celcius</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S9i</td>
			<td>Or similar, with transmitted light illumination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Dumont #5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91150-20</td>
			<td>Fine-tipped forceps for manual dechorionation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabletop rotator/shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>SK-D1807-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z135003</td>
			<td>3.2 mL bulb draw, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (MS-222)</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>TRS1, TRS2, TRS5</td>
			<td>Also available from Fisher Scientific (NC0342409)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>FIJI (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>https://imagej.net/software/fiji/</td>
			<td>Version: 2.0.0-rc-69/1.52p; Build: 269a0ad53f; Plugin needed: Bio-Formats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GRAMM examples and how-tos</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/54465-gramm-complete-data-visualization-toolbox-ggplot2-r-like.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/get-matlab.html</td>
			<td>Toolboxes needed to run RpEGEN: Image Processing Toolbox, Curve Fitting Toolbox, Statistics and Machine Learning Toolbox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB support</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/support.html</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nitroreductase/metronidazole-mediated ablation and a matlab platform (rpegen) for studying regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium

O epitélio pigmento da retina (RPE) reside na parte de trás do olho e desempenha funções essenciais para manter a saúde e integridade dos tecidos adjacentes da retina e vascular. Atualmente, a capacidade reparativa limitada do RPE mamífero, que se restringe a pequenas lesões, tem dificultado o progresso na compreensão dos processos regenerativos in vivo RPE. Aqui, uma metodologia detalhada é fornecida para facilitar o estudo do reparo in vivo RPE utilizando o zebrafish, um modelo de vertebrado capaz de regeneração robusta do tecido. Este protocolo descreve um paradigma de lesão mediada por nitroreductase/metronidazol (NTR/MTZ) (rpe65a:nfsB-eGFP), que resulta em ablação dos dois terços centrais do RPE após tratamento de 24 horas com MTZ, com posterior recuperação tecidual. O foco é colocado em ablações de RPE em zebrafish larval e métodos para testar os efeitos de compostos farmacológicos na regeneração de RPE também são descritos. Também é discutida a geração e validação do RpEGEN, um script MATLAB criado para automatizar a quantificação da regeneração de RPE com base na pigmentação. Além dos mecanismos ativos de reparação de RPE, este protocolo pode ser expandido para estudos de degeneração de RPE e respostas de lesões, bem como os efeitos dos danos de RPE em tecidos adjacentes da retina e vascular, entre outros processos celulares e moleculares. Este sistema de zebrafish mantém uma promessa significativa na identificação de genes, redes e processos que impulsionam a regeneração do RPE e mecanismos relacionados à doença de RPE, com o objetivo de longo prazo de aplicar esse conhecimento a sistemas de mamíferos e, em última instância, ao desenvolvimento terapêutico.

A inibição da via de sinalização canônica do Wnt é conhecida por prejudicar significativamente a regeneração do RPE de zebrafish usando o paradigma de ablação genética (rpe65a:nfsB-eGFP) e a metodologia de manipulação farmacológica (IWR-1) descrita no protocolo3. Este experimento foi repetido aqui para validar um método automatizado para quantificar a regeneração de RPE de zebrafish com base na pigmentação. Os resultados resumidos abaixo abrangeram todas as etapas do pr...

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Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

Este protocolo descreve a metodologia para abolar geneticamente o epitélio pigmento da retina (RPE) usando um modelo transgênico de zebrafish. A adaptação do protocolo para incorporar a modulação da via de sinalização usando compostos farmacológicos é extensivamente detalhada. Uma plataforma MATLAB para quantificar a regeneração de RPE com base na pigmentação foi desenvolvida e é apresentada e discutida.

Ablação Mediada por Nitroreductase/Metronidazole e uma Plataforma MATLAB (RpEGEN) para estudar a regeneração do Pigmento Retinal de Zebrafish Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) resides at the back of the eye and performs functions essential for maintaining the health and integrity of adjacent ...

O zebrafish é único em sua capacidade intrínseca de regenerar muitos tipos diferentes de tecidos, incluindo o RPE. Este protocolo pode ser usado para identificar vias moleculares que impulsionam a regeneração de RPE e mecanismos relacionados à doença de RPE. A versatilidade é uma vantagem primária dessa metodologia.Além de estudar a regeneração do RPE, este protocolo pode ser utilizado para examinar os processos degenerativos rpe e os efeitos dos danos de RPE em tecidos adjacentes no olho. Os mamíferos, incluindo os humanos, são incapazes de reparar grandes lesões de RPE resultantes de trauma ou doença degenerativa. O uso do zebrafish como ferramenta para descobrir fatores pró-regenerativos da RPE é um passo significativo para promover a regeneração de RPE dos mamíferos.Para preparar uma solução fresca de MTZ de 10 milimose, cinco dias após a fertilização, adicione pó MTZ à água do sistema sem PTU e misture completamente por um tremor vigoroso por uma hora a 37 graus Celsius. Esfrie a solução MTZ de 10 milimólares por uma hora à temperatura ambiente em um rotador de mesa ou agitador. Para testar larvas de zebrafish do transgene rpe65a:nsfB-eGFP, separe larvas positivas transgênicas eGFP de larvas negativas eGFP não transgênicas usando um microscópio estéreo fluorescente com um laser de excitação de 488 nanômetros.Acorde larvas com tela imediatamente, pipetando diretamente em uma placa de Petri com PTU de 1,5X fresco sem tricaine. Após a conclusão da triagem, separe ainda mais as larvas positivas eGFP em dois grupos de placas de Petri, um grupo para receber tratamento MTZ e um grupo para ser o controle não controlado. Em seguida, ablate o pigmento de retina epitélio removendo 1,5X PTU dos pratos de tratamento ablado e adicionar a solução MTZ recém-feita de 10 milimolar.Também remova 1,5X PTU dos pratos de controle não jateados e adicione água fresca do sistema sem PTU. Remova a solução MTZ de 10 milimões após exatamente 24 horas e adicione água fresca do sistema sem PTU. Mude a água fresca do sistema sem PTU nos pratos negativos MTZ.Tela eGFP larvas positivas em quatro dias após a fertilização. O eGFP é visível quatro dias após a fertilização, mas parece mais fraco que a intensidade do sinal no quinto dia. Coloque larvas positivas eGFP em placas de seis poços em vez de placas de Petri a uma densidade de não mais de 10 larvas por poço para tratamento farmacológico.Designe placas separadas de seis poços para larvas abladas e nãobladas. Determine o volume de 15 micromolar IWR-1 ou volume compatível com os pré-tratamentos de controle de veículo DMSO necessários e alíquota de 1,5X PTU em tubos cônicos em conformidade. Adicione ações IWR-1 a 1,5X PTU para uma concentração final de 15 micromolar IWR-1.Adicione um volume compatível de estoque DMSO a 1,5X PTU. Misture bem com vórtice e confirme visualmente a dissolução dos compostos. Remova 1,5X PTU das larvas positivas eGFP em placas de seis poços e adicione cinco mililitros por poço de tratamentos recém-fabricados 0,06%DMSO ou 15 micromolar IWR-1.Abule o RPE no dia seguinte. Em cinco dias após a fertilização, determine o volume de tratamentos farmacológicos e de controle de veículos necessários tanto para placas não abladas quanto para seis poços e volumes apropriados de aliquot de água do sistema fresco sem PTU ou solução MTZ de 10 milimões em tubos cônicos. Adicione as soluções de estoque IWR-1 e DMSO aos respectivos tubos cônicos, conforme realizado anteriormente.Misture bem com vórtice e confirme visualmente a dissolução dos compostos. Remova 0,06% DMSO e 15 pré-tratamentos micromolar IWR-1 em PTU de 1,5X de placas designadas não abladas e abladas de seis poços. Reabasteca com a água adequada do sistema fresco sem tratamentos de solução PTU e MTZ.Remova tratamentos de 0,06% DMSO e 15 micromolar IWR-1 em solução MTZ de 10 milômlares após exatamente 24 horas e reabasteça-se com tratamentos em água do sistema fresco sem PTU. Reabastecer tratamentos IWR-1 de 0,06% e 15 micromolar em água fresca do sistema sem PTU na placa de seis poços não jatada. Monitore o sucesso e a extensão da ablação in vivo usando iluminação de luz transmitida em um microscópio estéreo para manutenção larval pós-ablação genética.Para gerar a região de interesse do RPE ou ROI usando Fiji, abra uma imagem TIFF de oito bits, reoriente a imagem para que o lado dorsal fique para cima e distal seja deixado escolhendo imagem, transforme e gire horizontalmente. Para o último comando, escolha a opção que melhor se adequa à direcionalidade necessária para essa imagem. Inicie o gerenciador de ROI escolhendo análise, ferramentas, gerenciador de ROI.Use imagem, zoom e alternar entre os canais DAPI e Brightfield. Use atalhos de teclado para obter eficiência. Identifique o ponto em que o lado apical do RPE está adjacente da ponta da membrana limitante externa e use este marco anatômico como ponto de partida do ROI.Crie o ROI RPE com a ferramenta de seleções de polígonos na barra de ferramentas fiji usando os canais de imagem DAPI e Brightfield e a função de zoom de imagem para identificar limites de RPE apical e basal. Leve as extremidades dorsal e ventral do ROI a um ponto afiado em vez de cortar ou arredondar. Adicione o ROI clicando em adicionar no gerenciador de ROI.Salve o arquivo ROI escolhendo mais e salve dentro do gerenciador de ROI. Clique duas vezes no rpegen. m arquivo para abrir no painel do editor.Sob a seção variável definida pelo usuário do rpegen. m arquivo, digite os locais do diretório para pastas contendo os arquivos roi, os arquivos de imagem de tiff e onde os arquivos de saída devem ser salvos. Digite o nome do grupo para que o arquivo do tapete seja exportado e a localização do canal Brightfield na pilha de imagens TIFF.Execute o script clicando no botão executar no menu do editor na parte superior do MATLAB. Depois de salvar o arquivo MAT, uma figura de três painéis aparecerá e também será salva como um PDF para o diretório de saída para cada execução de imagem. Aguarde até que esses PDFs de controle de qualidade tenham sido salvos na pasta de saída e a última figura tenha desaparecido.Abra os PDFs individuais e verifique se todos os ROIs correspondem às imagens de Brightfield. Clique duas vezes no rpegen_permplot. m arquivo para abrir em uma nova guia de editor.Em variáveis definidas pela seção de um usuário, digite o local do diretório para a pasta de saída contendo os arquivos MAT de execução do rpegen. m script. Digite cada nome de arquivo MAT a ser carregado.Execute esta seção do script clicando no botão executar seção no menu do editor. Na seção dois, digite os nomes dos dois grupos para uma comparação estatística nas variáveis dados A e dados B e designe o número de repetições de simulação de permutação na variável reps. Apenas 2.000 repetições foram usadas para esta demonstração para diminuir o tempo de processamento.Execute esta seção do script clicando no botão executar seção no menu do editor. Execute a figura do mapa de calor e os resultados do grupo e seções de valor P independentemente usando o botão de seção executar. Danos inteiros de uma larva pós-fertilização de cinco dias mostraram expressão transgênica brilhante no RPE no momento da triagem para ablação genética.A crioseção transversa de larva pós-fertilização de seis dias nãoblada mostrou que a expressão transgênica era restrita a células RPE maduras com a expressão mais brilhante confinada ao 2/3 central do RPE. Pontas de flecha indicam microvilli apical. A crioseção transversal de uma larva pós-lesão de um dia ablada revelou interrupção da morfologia celular positiva eGFP.Flechas indicam núcleos pyknotic. Danos inteiros de montagem de larvas pós-fertilização nãobladas de sete dias mostraram pigmentação de RPE em todo o olho e larvas pós-lesões de dois dias abladas mostraram uma zona de ablação sem pigmento no RPE central. Um gráfico gerado usando RpEGEN mostrou semelhança entre os grupos DMSO pós-fertilização pós-fertilização de nove dias não jatidos e IWR-1 em toda a extensão do RPE.A trama mostrou intensidade de pixel mais leve nos grupos DMSO e IWR-1 mais leves de quatro dias, que pareciam mais leves no IWR-1 ablado quando comparados a qualquer outro grupo de tratamento. As diferenças na pigmentação central de RPE foram significativas ao comparar larvas tratadas IWR-1 abladas com controles tratados com DMSO ablados. Usando este paradigma de ablação de zebrafish, conseguimos identificar várias vias de sinalização molecular, como sinalização de vento que mostramos aqui, que são reguladores críticos da regeneração de RPE.

Research

JoVE Journal

Biology

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

Um sistema para a cultura de células epiteliais pigmentadas da íris para estudo da regeneração Lens em Newt

Salamanders like newt and axolotl possess the ability to regenerate many of its lost body parts such as limbs, the tail with spinal cord, eye, brain, ...

Biologia

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Ablação a laser da Pronephros Zebrafish para estudo da regeneração epitelial renal

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

Perfis de expressão de microRNA iPS Human Cells, Retinal Pigment Epithelium Derivado de Ips, e Fetal Retinal Pigment Epithelium

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

Methylnitrosourea MNU-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

Metilnitrosouréia (MNU) induzida Retinal degeneração e regeneração no peixe zebra: características histológicas e funcionais

Retinal degenerative diseases, e.g. retinitis pigmentosa, with resulting photoreceptor damage account for the majority of vision loss in the industrial ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Culturas de células primárias do Mouse epithelium Retinal do Pigment

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation of Primary Mouse Retinal Pigmented Epithelium Cells

Isolamento das células epitélio pigmentadas do rato primário

The retinal pigmented epithelium (RPE) layer lies immediately behind the photoreceptors and harbors a complex metabolic system that plays several critical ...

Efficient and Consistent Generation of Retinal Pigment Epithelium/Choroid Flatmounts from Human Eyes for Histological Analysis

Geração eficiente e consistente de epitélio/coroide de pigmento da retina a partir de olhos humanos para análise histológica

The retinal pigment epithelium (RPE) and retina are functionally and structurally connected tissues that work together to regulate light perception and ...

Caudal Peduncle Cryoinjury in Adult Zebrafish

A Cryoinjury Model for Studying Skeletal Muscle Regeneration of the Caudal Peduncle in Adult Zebrafish

A Cryoinjury Model for Studying Skeletal Muscle Regeneration of the Caudal Peduncle in Adult Zebrafish (Video) | JoVE 

Modelo de criolesão para o estudo da regeneração muscular esquelética do pedúnculo caudal em zebrafish adulto

Skeletal muscle undergoes renewal and restoration after minor injury through the activation of satellite-like stem cells. Severe injuries of the ...

Modeling and Analyzing Retinal Degeneration

LipidUNet-Machine Learning-Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

Unraveling the Pathogenesis of Age-Related Macular Degeneration and Discovering Potential Therapies (Video) | JoVE

Método LipidUNet-Machine Learning de Caracterização e Quantificação de Depósitos Lipídicos Usando Epitélio Pigmentado Retiniano Derivado de iPSC

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of hexagonal cells located at the back of the eye. It provides nourishment and support to ...

Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium (RPE) Deposits

Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium (RPE) Deposits (Video) | JoVE 

Coloração de depósitos de epitélio pigmentado sub-retiniano (EPR)