Name: nitroreductase/metronidazole-mediated ablation and a matlab platform (rpegen) for studying regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium
Uploaded: 2022-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium at JoVE.com

Работа, описанная здесь, была поддержана Национальными институтами здравоохранения (RO1-EY29410 для J.M.G и грант NIH CORE P30-EY08098 для департамента офтальмологии); Центр иммунной трансплантации и терапии UPMC (для L.L.L. и J.M.G.); и кафедра офтальмологических исследований Э. Рональда Сальвитти (дж.м.г.). Дополнительная поддержка была получена от стипендии Виганда в области офтальмологии (L.L.L.), Фонда глаз и ушей Питтсбурга и неограниченного гранта от Research to Prevent Blindness, New York, NY. Авторы также хотели бы поблагодарить Аманду Платт за техническую помощь и доктора Хью Хаммера и персонал водных видов спорта за отличную поддержку по уходу за животными.

Все методологии, изложенные в настоящем документе, соответствуют требованиям Институционального комитета по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Питтсбурга.
1. Подготовка перед сбором эмбрионов рыбок данио
<ol><li>Установите инкубатор эмбрион...

Этот протокол описывает методологию генетической абляции RPE и изучает механизмы дегенерации и регенерации у личиночных рыбок данио. Этот протокол также был успешно выполнен у взрослых рыбок данио3, но с менее обширной характеристикой, поэтому личинки находятся в центре вн...

Методология, описанная в настоящем описании, детализирует протокол генетической абляции пигментного эпителия сетчатки (RPE) с использованием личинок рыбок данио. RPE простирается над задней частью глаза и находится между стратифицированными слоями нервной сетчатки и слоем сосудистой системы, составляющим сосудистую оболочку. Трофическая поддержка, поглощение фототоксического света и поддержание белков зрительного цикла являются лишь некоторыми из критических функций, выполняемых RPE, которые необходимы для поддержания здоровья и целостности этих смежных тканей1. Повреждения РПЭ млекопитающих поддаются исправлению, когда поражения небольшие2; однако ущерб, нанесенный более крупными травмами или прогрессирующими дегенеративными заболеваниями, является необратимым. У людей дегенеративные заболевания RPE (например, возрастная макулярная дегенерация (ВМД) и болезнь Штаргардта) приводят к постоянной потере зрения и, при небольшом количестве доступных вариантов лечения, снижению качества жизни пациента. Ограниченная способность RPE млекопитающих к самовосстановлению создала пробел в знаниях в области регенеративных процессов RPE. Учитывая надежную регенеративную способность рыбок данио во многих различных типах тканей, этот протокол был разработан для создания системы позвоночных in vivo для облегчения исследований внутренне регенерирующего RPE и выявления механизмов, которые управляют этим ответом. Используя парадигму абляции, описанную здесь, канонический сигнальный путь Wnt3, путь mTOR4 и иммунные ответы5 были идентифицированы как критические медиаторы регенерации RPE, вероятно, с перекрывающимися функциями.
В этой парадигме генетической абляции Tg(rpe65a:nfsB-eGFP)3 рыбки данио экспрессируют ген нитроредуктазы бактериального происхождения (NTR/nfsB)6, слитый с eGFP под контролем энхансерного элемента RPE, rpe65a7. Абляция достигается путем добавления пролекарства, метронидазола (MTZ), в систему воды, в которой содержатся рыбки данио. Внутриклеточная активация МТЗ нитроредуктазой приводит к сшиванию ДНК и апоптозу в NTR/nfsB-экспрессирующих клетках 8,9. Эта технология была широко использована у рыбок данио для удаления клеток сетчатки 10,11,12,13 и других тканей 8. Вместе эти элементы обеспечивают целенаправленную экспрессию (rpe65a) индуцируемой методологии абляции клеток (NTR/MTZ)8,9 и флуоресцентного маркера (eGFP) для визуализации.
Существуют и другие интересные модели in vivo, которые могут быть использованы для изучения регенеративного потенциала RPE14. Они являются широкими и включают трансдифференциацию RPE-to-retina после ретинэктомии у амфибий, при которой клетки RPE, потерянные при отрастании сетчатки, заменяются15,16; Восстановление РПЭ после травмы у «супер заживляющей» мыши MRL/MpJ17; и экзогенная стимуляция пролиферации RPE в крысиной модели спонтанной RPE и дегенерации сетчатки18, среди прочих. Также были разработаны модели in vitro, такие как взрослые стволовые клетки RPE человека (RPESCs)19. Все эти модели являются ценными инструментами, работающими над выявлением клеточных процессов, связанных с регенерацией RPE (например, пролиферация, дифференциация и т. Д.); тем не менее, рыбка данио уникальна своей способностью к внутреннему восстановлению RPE после абляции.
В то время как методология здесь написана, чтобы сосредоточиться на понимании механизмов, приводящих к регенерации RPE, линия Tg(rpe65a: nfsB-eGFP) и этот протокол генетической абляции могут быть использованы для изучения других клеточных процессов, таких как апоптоз RPE, дегенерация RPE и влияние повреждения RPE на соседние ткани сетчатки и сосудов. Протокол абляции также может быть модифицирован для включения фармакологических манипуляций, что является удобной предварительной стратегией для скрининга интересующих сигнальных путей. Например, было показано, что блокирование канонического пути Wnt с помощью ингибитора ответа Wnt-1 (IWR-1)20 ухудшает регенерацию RPE3. Это было повторено здесь, чтобы провести пользователей через фармакологический эксперимент манипуляции и служить доказательством концепции для проверки сценария MATLAB (RpEGEN), созданного для количественной оценки регенерации RPE на основе восстановления пигментации. Как и трансгенная линия и протокол абляции, скрипты RpEGEN адаптируются и могут быть использованы для количественной оценки других маркеров / клеточных процессов в RPE.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Lab Material/Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-539-13</td>
			<td>Catalog number is for 50 mL tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond tip scribing pen</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-254-51</td>
			<td>Manufactured by Electron Microscopy Sciences, items similar to this part number are adequate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO) &#8805;99.7 %</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP231</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo incubator (large)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3720A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo incubator (mini/tabletop)</td>
			<td>Labnet</td>
			<td>I5110A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereo microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Zoom.V16</td>
			<td>Or similar, with 488 nm excitation laser/filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-4</td>
			<td>Manufactured by Corning, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Wnt Antagonist I, IWR-1-endo</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5.04462</td>
			<td>Manufactured by Calbiochem; 25 mM in DMSO; check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue (powder)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP117-100</td>
			<td>Also available as a premade aqeuous solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole (MTZ)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M3761</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-phenylthiourea (PTU)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td>Check instiutional chemical waste disposal requirements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (16 % w/v) methanol free</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AA433689M</td>
			<td>Chemical waste, proper disposal required</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td>10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (powder packets)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Used to make 10 X PBS stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>PRON-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>H2010</td>
			<td>Used for incubating MTZ for 1 hour at 37 degrees Celcius</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S9i</td>
			<td>Or similar, with transmitted light illumination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Dumont #5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91150-20</td>
			<td>Fine-tipped forceps for manual dechorionation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabletop rotator/shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>SK-D1807-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z135003</td>
			<td>3.2 mL bulb draw, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (MS-222)</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>TRS1, TRS2, TRS5</td>
			<td>Also available from Fisher Scientific (NC0342409)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>FIJI (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>https://imagej.net/software/fiji/</td>
			<td>Version: 2.0.0-rc-69/1.52p; Build: 269a0ad53f; Plugin needed: Bio-Formats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GRAMM examples and how-tos</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/54465-gramm-complete-data-visualization-toolbox-ggplot2-r-like.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/get-matlab.html</td>
			<td>Toolboxes needed to run RpEGEN: Image Processing Toolbox, Curve Fitting Toolbox, Statistics and Machine Learning Toolbox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB support</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/support.html</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nitroreductase/metronidazole-mediated ablation and a matlab platform (rpegen) for studying regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium

Пигментный эпителий сетчатки (RPE) находится в задней части глаза и выполняет функции, необходимые для поддержания здоровья и целостности соседних тканей сетчатки и сосудов. В настоящее время ограниченная репаративная способность RPE млекопитающих, которая ограничена небольшими травмами, препятствует прогрессу в понимании регенеративных процессов RPE in vivo . Здесь представлена подробная методология, облегчающая изучение восстановления RPE in vivo с использованием рыбки данио, модели позвоночных, способной к надежной регенерации тканей. Этот протокол описывает трансгенную нитроредуктазу/метронидазол (NTR/MTZ)-опосредованную парадигму повреждения (rpe65a:nfsB-eGFP), которая приводит к абляции центральных двух третей RPE после 24-часового лечения MTZ с последующим восстановлением тканей. Основное внимание уделяется абляции RPE у личинок рыбок данио, а также изложены методы тестирования влияния фармакологических соединений на регенерацию RPE. Также обсуждается генерация и валидация RpEGEN, скрипта MATLAB, созданного для автоматизации количественной оценки регенерации RPE на основе пигментации. Помимо активных механизмов восстановления RPE, этот протокол может быть расширен до исследований дегенерации RPE и реакций на травмы, а также влияния повреждения RPE на соседние ткани сетчатки и сосудов, среди других клеточных и молекулярных процессов. Эта система рыбок данио имеет значительные перспективы в выявлении генов, сетей и процессов, которые управляют регенерацией RPE и механизмами, связанными с болезнью RPE, с долгосрочной целью применения этих знаний к системам млекопитающих и, в конечном счете, к терапевтическому развитию.

Известно, что ингибирование канонического сигнального пути Wnt значительно ухудшает регенерацию RPE рыбок данио с использованием парадигмы генетической абляции (rpe65a: nfsB-eGFP) и методологии фармакологических манипуляций (IWR-1), описанной в протоколе3. Этот эксперимент был п?...

Watch this Scientific Journal Video about Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium at JoVE.com

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

Этот протокол описывает методологию генетической абляции пигментного эпителия сетчатки (RPE) с использованием трансгенной модели рыбок данио. Адаптация протокола для включения модуляции сигнального пути с использованием фармакологических соединений подробно описана. Была разработана и обсуждается платформа MATLAB для количественной оценки регенерации RPE на основе пигментации.

Нитроредуктаза/метронидазол-опосредованная абляция и платформа MATLAB (RpEGEN) для изучения регенерации пигментного эпителия сетчатки рыбок данио

The retinal pigment epithelium (RPE) resides at the back of the eye and performs functions essential for maintaining the health and integrity of adjacent ...

Рыбка данио уникальна своей внутренней способностью регенерировать многие различные типы тканей, включая RPE. Этот протокол может быть использован для идентификации молекулярных путей, которые управляют регенерацией RPE и механизмами, связанными с болезнью RPE. Универсальность является основным преимуществом этой методологии.В дополнение к изучению регенерации RPE, этот протокол может быть использован для изучения дегенеративных процессов RPE и влияния повреждения RPE на соседние ткани в глазу. Млекопитающие, включая людей, не в состоянии восстановить большие повреждения RPE в результате травмы или дегенеративного заболевания. Использование рыбок данио в качестве инструмента для обнаружения прорегенеративных факторов RPE является значительным шагом на пути к содействию регенерации RPE млекопитающих.Чтобы приготовить свежий 10-миллимолярный раствор МТЗ, через пять дней после оплодотворения, добавьте порошок МТЗ в системную воду без ПТУ и тщательно перемешайте путем энергичного встряхивания в течение одного часа при 37 градусах Цельсия. Охладите 10-миллимолярный раствор МТЗ в течение одного часа при комнатной температуре на настольном ротаторе или шейкере. Чтобы отсеять личинок рыбок данио от трансгена rpe65a:nsfB-eGFP, отделите трансгенных положительных личинок eGFP от нетрансгенных отрицательных личинок eGFP с помощью флуоресцентного стереомикроскопа с 488-нанометровым лазером возбуждения.Проснуться отсеивают личинок немедленно, пипетируя непосредственно в чашку Петри со свежим 1,5-кратным ПТЮ без трицина. По завершении скрининга далее разделяйте eGFP-положительных личинок на две группы чашек Петри, одну группу для получения обработки MTZ и одну группу, чтобы быть неабляционным контролем. Затем абляцию пигментного эпителия сетчатки удаляют 1,5X PTU из абляционной посуды для лечения и добавляют свежеприготовленный 10-миллимолярный раствор MTZ.Также удалите 1,5X PTU из неабляционной контрольной посуды и добавьте пресную системную воду без PTU. Удалите 10-миллимолярный раствор МТЗ ровно через 24 часа и добавьте пресную системную воду без ПТЭ. Поменяйте пресную систему воды без ПТУ на отрицательной посуде МТЗ.Скрининг положительных личинок eGFP на четыре дня после оплодотворения. eGFP виден через четыре дня после оплодотворения, но на пятый день кажется более тусклым, чем интенсивность сигнала. Поместите eGFP положительных личинок в шестилуночные пластины вместо чашек Петри при плотности не более 10 личинок на лунку для фармакологического лечения.Назначают отдельные шестилуночные пластины для абляционных и неабляционных личинок. Определите объем 15 микромоляров IWR-1 или объем dmso, соответствующий необходимой предварительной обработке, и аликвотите 1,5X PTU в конические трубки соответственно. Добавьте запас IWR-1 к 1,5X PTU для конечной концентрации 15 микромоляров IWR-1.Добавьте соответствующий объем запасов DMSO в 1,5X PTU. Хорошо перемешать путем вихря и визуально подтвердить растворение соединений. Удалите 1,5X PTU из положительных личинок eGFP в шестилуночных пластинах и добавьте пять миллилитров на лунку свежеприготовленных 0,06% DMSO или 15 микромолярных IWR-1 обработок.Удалите RPE на следующий день. Через пять дней после оплодотворения определите объем фармакологических и контрольных обработок транспортных средств, необходимых как для неаблированных, так и для абляционных шестилуночных пластин и аликвотных соответствующих объемов либо пресной системной воды без ПТУ, либо 10-миллимолярного раствора МТЗ в конические трубки. Добавьте растворы IWR-1 и DMSO в соответствующие конические трубы, как это было выполнено ранее.Хорошо перемешать путем вихря и визуально подтвердить растворение соединений. Удалите 0,06% DMSO и 15 микромолярной предварительной обработки IWR-1 в 1,5X PTU из назначенных неабляционных и абляционных шестилуночных пластин. Пополняйте запасы воды соответствующей пресной системой без обработки раствором ПТУ и МТЗ.Удалите 0,06% DMSO и 15 микромолярных IWR-1 в 10-миллимолярном растворе MTZ ровно через 24 часа и пополните их обработками в пресной системе воды без ПТУ. Восполняйте 0,06% DMSO и 15 микромолярной обработки IWR-1 в пресной системной воде без ПТУ на небляционной шестилуночной плите. Следите за успехом и степенью абляции in vivo с помощью пропускаемого светового освещения на стереомикроскопе для поддержания личинок постгенетической абляцией.Чтобы создать интересующую область RPE или рентабельность инвестиций с помощью Фиджи, откройте восьмибитное изображение TIFF, переориентируйте изображение так, чтобы дорсальная сторона была вверху, а дистальная часть оставалась, выбирая изображение, преобразуя и переворачивая горизонтально. Для последней команды выберите параметр, который наилучшим образом соответствует направленности, необходимой для этого изображения. Запустите менеджер ROI, выбрав анализ, инструменты, менеджер ROI.Используйте изображение, масштабирование и переключение между каналами DAPI и Brightfield. Используйте сочетания клавиш для повышения эффективности. Определите точку, в которой апикальная сторона RPE примыкает к кончику внешней ограничивающей мембраны, и используйте этот анатомический ориентир в качестве отправной точки ROI.Создайте рентабельность инвестиций в RPE с помощью инструмента выделения полигонов на панели инструментов Fiji, используя каналы изображения DAPI и Brightfield, а также функцию масштабирования изображения для определения апикальных и базальных границ RPE. Доведите дорсальный и вентральный концы ROI до острой точки, а не притупляйте или округляйте. Добавьте ROI, нажав на добавить в менеджере ROI.Сохраните файл ROI, выбрав больше, и сохраните в менеджере ROI. Дважды щелкните по рпегену. m файл для открытия в области редактора.Под заданным пользователем переменным разделом rpegen. m file, введите расположение каталогов для папок, содержащих файлы roi, файлы изображений tiff и места, где должны быть сохранены выходные файлы. Введите имя группы для экспортируемого матового файла и расположение канала Brightfield в стеке изображений TIFF.Запустите скрипт, нажав на кнопку «Выполнить» в меню редактора в верхней части MATLAB. После сохранения файла MAT появится рисунок из трех панелей, который также будет сохранен в формате PDF в выходном каталоге для каждого запуска изображения. Подождите, пока эти PDF-файлы контроля качества не будут сохранены в выходной папке, и последний рисунок исчезнет.Откройте отдельные PDF-файлы и убедитесь, что все ROI соответствуют изображениям Brightfield. Дважды щелкните по rpegen_permplot. m файл для открытия в новой вкладке редактора.В разделе Переменные, определяемые одним пользователем, введите расположение каталога выходной папки, содержащей файлы MAT, запущенные при запуске rpegen. m скрипт. Введите имя каждого загружаемого ФАЙЛА MAT.Запустите этот раздел скрипта, нажав на кнопку выполнить раздел в меню редактора. Во втором разделе введите названия двух групп для статистического сравнения в переменных данных A и данных B и обозначьте количество повторений моделирования перестановок в переменной reps. Только 2000 повторений были использованы для этой демонстрации, чтобы уменьшить время обработки.Запустите этот раздел скрипта, нажав на кнопку выполнить раздел в меню редактора. Выполняйте рисунок тепловой карты и группируйте результаты и разделы P-value независимо друг от друга с помощью кнопки run section. Полное повреждение пятидневной личинки после оплодотворения показало яркую трансгенную экспрессию в РПЭ во время скрининга на генетическую абляцию.Поперечная криосекция неиблированной шестидневной личинки после оплодотворения показала, что трансгенная экспрессия была ограничена зрелыми клетками RPE с самой яркой экспрессией, ограниченной центральной 2/3 RPE. Наконечники стрел указывают на апикальные микроворсинки. Поперечная криосекция абляционной однодневной посттравматической личинки выявила нарушение морфологии eGFP-положительных клеток.Стрелки указывают на пикнотические ядра. Целые повреждения неаблированных семидневных личинок после оплодотворения показали пигментацию RPE по всему глазу, а абляционные двухдневные личинки после травмы показали зону абляции, в которой отсутствовал пигмент в центральной RPE. График, сгенерированный с использованием RpEGEN, показал сходство между неабляционными девятидневными группами DMSO и IWR-1 по всей длине RPE.График показал общую более легкую интенсивность пикселей в абляционных четырехдневных группах DMSO и IWR-1 после травмы, которые оказались самыми легкими в абляционной IWR-1 по сравнению с любой другой группой лечения. Различия в центральной пигментации RPE были значительными при сравнении абляционных личинок, обработанных IWR-1, с контрольными группами, обработанными абляционным DMSO. Используя эту парадигму абляции рыбок данио, мы смогли идентифицировать несколько молекулярных сигнальных путей, таких как передача сигналов ветра, которые мы показали здесь, которые являются критическими регуляторами регенерации RPE.

Research

JoVE Journal

Biology

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

Система для культивирования Ирис пигмента эпителиальных клеток по изучению регенерации линз в Ньют

Salamanders like newt and axolotl possess the ability to regenerate many of its lost body parts such as limbs, the tail with spinal cord, eye, brain, ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Лазерной абляции предпочки данио рерио по изучению почечных эпителиальных Регенерация

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

Профили микроРНК выражение человеческой плюрипотентных клеток, пигментного эпителия сетчатки, полученных из IPS, и плода пигментного эпителия сетчатки

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

Methylnitrosourea MNU-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

Метилнитрозомочевины (МНУ) -индуцированных дегенерации сетчатки и регенерации в данио рерио: гистологические и функциональные характеристики

Retinal degenerative diseases, e.g. retinitis pigmentosa, with resulting photoreceptor damage account for the majority of vision loss in the industrial ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Культуры главной ячейки от мыши пигментный эпителий сетчатки

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation of Primary Mouse Retinal Pigmented Epithelium Cells

Выделение первичных пигментированных клеток эпителия сетчатки мыши

The retinal pigmented epithelium (RPE) layer lies immediately behind the photoreceptors and harbors a complex metabolic system that plays several critical ...

Efficient and Consistent Generation of Retinal Pigment Epithelium/Choroid Flatmounts from Human Eyes for Histological Analysis

Эффективная и последовательная генерация пигментных эпителиев сетчатки / плоских гор сосудистой оболочки из глаз человека для гистологического анализа

The retinal pigment epithelium (RPE) and retina are functionally and structurally connected tissues that work together to regulate light perception and ...