Name: establishing organoids from human tooth as a powerful tool toward mechanistic research and regenerative therapy
Uploaded: 2022-04-13T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy at JoVE.com

Vi er taknemmelige for alle medarbejdere i oral og maxillofacial kirurgi (MKA) i UZ Leuven, såvel som patienterne, for deres uvurderlige hjælp til at indsamle frisk ekstraherede tredje molarer. Vi vil også gerne takke Dr. Reinhilde Jacobs og Dr. Elisabeth Tijskens for deres hjælp med prøvesamlingen. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra KU Leuven (BOF) og FWO-Flandern (G061819N). L.H. er ph.d.-stipendiat (1S84718N).

Alle metoder, der er beskrevet her, er godkendt af Den Etiske Komité Forskning UZ/KU Leuven (13/0104U). Ekstraherede tredje kindtænder (visdomstænder) blev opnået efter patienternes informerede samtykke.
1. Præparater
<ol><li>Forvarm en 48-brønds kulturplade i 15-20 timer i en 1,9% CO2-inkubator ved 37 °C.</li>
	<li>Flydende en Matrigel aliquot (vækstfaktor-reduceret; phenol rødfri; yderligere benævnt kældermembranmatrix; BMM) på is (4 °C) i mindst 2 ...

<ol>
	<li>Yu, T., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+cellular+mechanisms+of+tooth+development,+homeostasis+and+repair.">Molecular and cellular mechanisms of tooth development, homeostasis and repair.</a> Development (Cambridge). 147 (2), (2020).</li><li>Arrow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+enamel+defects,+caries+experience+and+oral+health-related+quality+of+life:+a+cohort+study.">Dental enamel defects, caries experience and oral health-related quality of life: a cohort study.</a> Australian Dental Journal. 62 (2), 165-172 (2017).</li><li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G., Jimenez-Rojo, L., Zavan, B., Bressan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+Stem+Cells+for+Tooth+Regeneration.">Dental Stem Cells for Tooth Regeneration.</a> Dental Stem Cells: Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine. , (2016).</li><li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editorial:+a+new+era+in+dentistry:+stem+cell-based+approaches+for+tooth+and+periodontal+tissue+regeneration.">Editorial: a new era in dentistry: stem cell-based approaches for tooth and periodontal tissue regeneration.</a> Frontiers in Physiology. 7, 357 (2016).</li><li>Miran, S., Mitsiadis, T. A., Pagella, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovative+dental+stem+cell-based+research+approaches:+the+future+of+dentistry.">Innovative dental stem cell-based research approaches: the future of dentistry.</a> Stem Cells International. 2016, 7231038 (2016).</li><li>Shinmura, Y., Tsuchiya, S., Hata, K. I., Honda, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiescent+epithelial+cell+rests+of+malassez+can+differentiate+into+ameloblast-like+cells.">Quiescent epithelial cell rests of malassez can differentiate into ameloblast-like cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 217 (3), 728-738 (2008).</li><li>Davis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+epithelial+cell+rests+of+Malassez+on+the+bicentennial+of+their+description.">A review of the epithelial cell rests of Malassez on the bicentennial of their description.</a> Journal of Veterinary Dentistry. 35 (4), 290-298 (2018).</li><li>Athanassiou-Papaefthymiou, M., Papagerakis, P., Papagerakis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+adult+epithelial+stem+cells+from+the+periodontal+ligament.">Isolation and characterization of human adult epithelial stem cells from the periodontal ligament.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1591-1600 (2015).</li><li>Kim, G. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+establishment+of+dental+epithelial-like+stem+cells+derived+from+human+ESCs+and+iPSCs.">Differentiation and establishment of dental epithelial-like stem cells derived from human ESCs and iPSCs.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (12), 1-16 (2020).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Hertwig's+epithelial+root+sheath/+epithelial+rests+of+malassez+cell+line+from+human+periodontium.">Establishment of Hertwig's epithelial root sheath/ epithelial rests of malassez cell line from human periodontium.</a> Molecules and Cells. 37 (7), 562-567 (2014).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profile+of+the+stem+cell+markers+in+human+hertwig's+epithelial+root+sheath/Epithelial+rests+of+Malassez+cells.">Expression profile of the stem cell markers in human hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells.</a> Molecules and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).</li><li>Tsunematsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+odontogenic+epithelial+cells+derived+from+epithelial+rests+of+Malassez+possess+stem+cell+properties.">Human odontogenic epithelial cells derived from epithelial rests of Malassez possess stem cell properties.</a> Laboratory Investigation; A Journal of Technical Methods and Pathology. 96 (10), 1063-1075 (2016).</li><li>Artegiani, B., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+and+application+of+3D-organoid+technology.">Use and application of 3D-organoid technology.</a> Human Molecular Genetics. 27 (2), 99-107 (2018).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Cox, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+pituitary+as+a+novel+research+model+toward+pituitary+stem+cell+exploration.">Organoids from pituitary as a novel research model toward pituitary stem cell exploration.</a> Journal of Endocrinology. 240 (2), 287-308 (2019).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+organoids+from+mouse+and+human+endometrium+showing+endometrial+epithelium+physiology+and+long-term+expandability.">Development of organoids from mouse and human endometrium showing endometrial epithelium physiology and long-term expandability.</a> Development (Cambridge). 144 (10), 1775-1786 (2017).</li><li>Schutgens, F., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+tools+for+understanding+biology+and+treating+diseases).">Human organoids: tools for understanding biology and treating diseases).</a> Annual Review of Pathology. 15, 211-234 (2020).</li><li>Hemeryck, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+human+tooth+showing+epithelial+stemness+phenotype+and+differentiation+potential.">Organoids from human tooth showing epithelial stemness phenotype and differentiation potential.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 79 (3), 153 (2022).</li><li>Gao, X., Wu, Y., Liao, L., Tian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+organoids:+progress+and+challenges.">Oral organoids: progress and challenges.</a> Journal of Dental Research. 100 (5), 454-463 (2021).</li><li>Binder, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategies+for+expansion+of+tooth+epithelial+stem+cells+and+ameloblast+generation.">Novel strategies for expansion of tooth epithelial stem cells and ameloblast generation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4963 (2020).</li><li>Xiong, J., Mrozik, K., Gronthos, S., Bartold, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+rests+of+malassez+contain+unique+stem+cell+populations+capable+of+undergoing+epithelial-mesenchymal+transition.">Epithelial cell rests of malassez contain unique stem cell populations capable of undergoing epithelial-mesenchymal transition.</a> Stem Cells and Development. 21 (11), 2012-2025 (2012).</li><li>Luan, X., Ito, Y., Diekwisch, T. G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+of+Hertwig's+epithelial+root+sheath.">Evolution and development of Hertwig's epithelial root sheath.</a> Developmental Dynamics. 235 (5), 1167-1180 (2006).</li><li>Fukumoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+functions+of+enamel+matrices+in+calcified+tissues.">New insights into the functions of enamel matrices in calcified tissues.</a> Japanese Dental Science Review. 50 (2), 47-54 (2014).</li><li>Consolaro, A., Consolaro, M. F. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERM+functions,+EGF+and+orthodontic+movement+or+Why+doesn't+orthodontic+movement+cause+alveolodental+ankylosis.">ERM functions, EGF and orthodontic movement or Why doesn't orthodontic movement cause alveolodental ankylosis.</a> Dental Press Journal of Orthodontics. 15 (2), 24-32 (2010).</li><li>Guajardo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+localization+of+epidermal+growth+factor+in+cat+paradental+tissues+during+tooth+movement.">Immunohistochemical localization of epidermal growth factor in cat paradental tissues during tooth movement.</a> American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. 118 (2), 210-219 (2000).</li><li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells.">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 25 (6), 681-686 (2007).</li><li>Gon&#231;alves, J., Sasso-Cerri, E., Cerri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+and+quantitative+reduction+of+rests+of+Malassez+according+to+age.">Cell death and quantitative reduction of rests of Malassez according to age.</a> Journal of Periodontal Research. 43 (4), 478-481 (2008).</li><li>Kim, J., Koo, B. -. K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+Model+systems+for+human+biology+and+medicine.">Human organoids: Model systems for human biology and medicine.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).</li><li>Razmi, M. T., Narang, T., Handa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADULT+(acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth)+syndrome:+a+case+report+from+India.">ADULT (acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth) syndrome: a case report from India.</a> Indian Dermatology Online Journal. 9 (3), 194 (2018).</li><li>. Future Health Biobank Available from: <a target="_blank" href="https://futurehealthbiobank.com/ch-en/">https://futurehealthbiobank.com/ch-en/</a> (2022)</li><li>Schreurs, R. R. C. E., Baumdick, M. E., Drewniak, A., Bunders, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+co-culture+of+human+intestinal+organoids+and+lamina+propria-derived+CD4++T+cells.">In vitro co-culture of human intestinal organoids and lamina propria-derived CD4+ T cells.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100519 (2021).</li><li>Fiorini, E., Veghini, L., Corbo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cell+communication+in+cancer+with+organoids:+Making+the+complex+simple.">Modeling cell communication in cancer with organoids: Making the complex simple.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 166 (2020).</li><li>Gjorevski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+matrices+for+intestinal+stem+cell+and+organoid+culture.">Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture.</a> Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyisocyanide+hydrogels+as+a+tunable+platform+for+mammary+gland+organoid+formation.">Polyisocyanide hydrogels as a tunable platform for mammary gland organoid formation.</a> Advanced Science. 7 (18), 2001797 (2020).</li><li>Mollaki, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethical+challenges+in+organoid+use.">Ethical challenges in organoid use.</a> BioTech. 10 (3), 12 (2021).</li></ol>

Denne protokol beskriver den effektive og reproducerbare generation af organoider startende fra den menneskelige tand. Så vidt vi ved, er dette den første metode til etablering af nuværende koncept (epitel) organoider startende fra humant tandvæv. Organoiderne kan udvides på lang sigt og viser en tandepitelstammefænotype, der duplikerer DESC'er, der tidligere er rapporteret i ERM-rummet i DF7. Desuden replikerer organoiderne funktionelle DESC/ERM-egenskaber, herunder udfoldelsen af en amelob...

Tænder har vigtige roller i madmastikation, tale og psykologisk velvære (selvbillede). Den menneskelige tand består af stærkt mineraliserede væv med varierende tæthed og hårdhed1. Tandemalje, hovedkomponenten i tandkronen, er det højeste mineraliserede væv i menneskekroppen. Under emaljedannelse (amelogenese), når tænderne udvikler sig, differentierer dental epitelstamceller (DESC'er) sig til emaljedannende celler (ameloblaster). Når emaljen er dannet, repareres eller fornyes emaljen sjældent på grund af det apoptotiske tab af ameloblasterne ved begyndelsen af tandudbrud1. Restaurering af beskadiget emaljevæv, som forårsaget af traume eller bakteriel sygdom, udføres i øjeblikket ved hjælp af syntetiske materialer; disse er dog plaget af vigtige mangler såsom mikroleakage, ringere osseointegration og forankring, begrænset levetid og mangel på fuldt funktionel reparation2. Derfor ville en robust og pålidelig kultur af humane DESC'er med kapacitet til at generere ameloblaster og potentialet til at producere mineraliseret væv være et stort skridt fremad på det dentalregenerative område.
Viden om human DESC-fænotype og biologisk funktion er knap 3,4,5. Interessant nok er DESC'er af menneskelige tænder blevet foreslået at eksistere i Epitelcelle hviler af Malassez (ERM), celleklynger til stede i tandfollikel (DF), som omgiver ubrudte tænder og forbliver til stede i periodontal ledbånd omkring roden, når tanden bryder ud1. ERM-celler, der er dyrket sammen med tandmasse, har vist sig at differentiere sig til ameloblastlignende celler og generere emaljelignende væv6. Imidlertid har dybtgående undersøgelser af ERM-cellernes specifikke rolle i emaljegenerering (re-) været begrænsede på grund af manglen på pålidelige undersøgelsesmodeller7. Nuværende ERM in vitro-kultursystemer hæmmes af begrænset levetid og hurtigt tab af fænotype under de 2D-betingelser, der normalt anvendes 8,9,10,11,12. Derfor er der et stærkt behov for et medgørligt in vitro-system til trofast at udvide, studere og differentiere humane DESC'er.
I løbet af det sidste årti er en kraftfuld teknik til at dyrke epitelstamceller in vitro med succes blevet anvendt på flere typer (humane) epitelvæv for at studere deres biologi såvel som sygdom 13,14,15,16. Denne teknologi gør det muligt for vævsepitelstamcellerne at udvikle sig selv til 3D-cellekonstruktioner (dvs. organoider), når de podes i et ekstracellulært matrix (ECM) -efterlignende stillads (typisk Matrigel) og dyrkes i et defineret medium, der replikerer vævets stamcelle niche signalering og / eller embryogenese. Typiske vækstfaktorer, der er nødvendige for organoid udvikling, omfatter epidermal vækstfaktor (EGF) og vingeløs type MMTV-integrationssted (WNT) aktivatorer 14,15,16. De resulterende organoider er kendetegnet ved varig troskab ved at efterligne vævets oprindelige epitelstamceller samt høj ekspanderbarhed, samtidig med at deres fænotype og funktionelle egenskaber bevares, hvorved den ofte begrænsede primære humane vævstilgængelighed som erhvervet fra klinikken bevares. For at etablere organoider er isolering af epitelstamcellerne fra det heterogene væv (dvs. omfattende andre celletyper såsom mesenkymale celler) før dyrkning ikke påkrævet, da mesenkymale celler ikke binder sig til eller trives i ECM, hvilket i sidste ende resulterer i rent epitelorganoider 13,16,17,18,19 . Denne lovende og alsidige teknologi har ført til udviklingen af mangfoldige organoidmodeller fra forskellige humane epitelvæv. Imidlertid blev menneskelige tandafledte organoider, der er værdifulde til dyb undersøgelse af tandudvikling, regenerering og sygdom, endnu ikke etableret20,21. Det lykkedes os for nylig at udvikle en sådan ny organoidmodel, der starter fra DF-væv fra tredje kindtænder (visdomstænder) udtrukket fra unge patienter19.
Her beskriver vi protokollen til udvikling af epitelorganoidkulturer fra den voksne menneskelige tand (dvs. fra DF af tredje molarer) (figur 1A). De resulterende organoider udtrykker ERM-associerede stamhedsmarkører, mens de er langsigtede ekspanderbare. Interessant nok, modsat de fleste andre organoidmodeller, er den typisk nødvendige EGF overflødig for robust organoidudvikling og vækst. Interessant nok viser stamhedsorganoiderne ameloblastdifferentieringsegenskaber og efterligner derved ERM / DESC-funktioner og processer, der forekommer in vivo. Den nye og unikke organoidmodel, der er beskrevet her, gør det muligt at udforske DESC-biologi, plasticitet og differentieringskapacitet og åbner døren for at tage de første skridt mod tandregenerative tilgange.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Microcentrifuge tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120.086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well flat bottom plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin Bovine (cell culture grade)</td>
			<td>Serva</td>
			<td>47330.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMELX antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-365284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15200018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 (without vitamin A)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cassette</td>
			<td>VWR</td>
			<td>7202191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catalase from bovine liver</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD44 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab34485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 40 &#181;m</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CK14 antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MA5-11599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>6310146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryobox</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovial</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1:1 F12 without Fe</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>074-90715A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM powder high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>52100039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5025-15KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663 - 10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding workstation, 220 to 240 Vac</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute, &#8805;99.8% (EtOH)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E/0650DF/15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF2 (= basic FGF)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>234-FSE-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF8</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenElute Mammaliam Total RNA Miniprep Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RTN350-1KT</td>
			<td>Includes 1% &#946;-mercaptoethanol dissolved in lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Niko Mechanisms</td>
			<td>170-40050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101194M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGF-1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Y-27632 (ROCK inhibitor, RI)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>688001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I6634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITGA6 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HPA012696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (growth factor-reduced; phenol red-free)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15505739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GV Syringe Filter Unit, 0.22&#160;&#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum essential medium eagle (&#945;MEM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M4526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse IgG (Alexa 555) secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl L-cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P63 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab124762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pap Pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>Marking pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA), 16%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8.18715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin (Pen/Strep)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette (P20, P200, P1000)</td>
			<td>Eppendorf or others</td>
			<td>2231300006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic transfer pipette (3.5&#160;mL)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1171.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit IgG (Alexa 488) secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSPO1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190 (p38i)</td>
			<td>Biotechne (Tocris)</td>
			<td>1264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel (surgical blade)</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHH</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>464-SH-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone molds (Heating block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-1918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>BDH</td>
			<td>102415K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-pyruvate (C3H3NaO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Real-Time PCR System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit, 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1000 &#956;L pipette tips with filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>740288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 20 &#956;L pipette tips with filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>774288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 200 &#956;L pipette tips with and without filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>739288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile H2O</td>
			<td>Fresenius</td>
			<td>B230531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superscript III first-strand synthesis supermix</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11752-050</td>
			<td>Reverse transcription kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12505356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin</td>
			<td>Serva</td>
			<td>36760.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium+DAPI</td>
			<td>Labconsult NV</td>
			<td>H-1200</td>
			<td>Antifade mounting medium with DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>Biotechne (Tocris)</td>
			<td>5036-WN-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes, 99%, for biochemistry and histology</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2,89,75,325</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing organoids from human tooth as a powerful tool toward mechanistic research and regenerative therapy

Tænder er af afgørende betydning i livet, ikke kun for madmastikation og tale, men også for psykologisk velvære. Viden om menneskets tandudvikling og biologi er knap. Især er der ikke meget kendt om tandens epitelstamceller og deres funktion. Det lykkedes os at udvikle en ny organoidmodel, der starter fra menneskeligt tandvæv (dvs. tandfollikel, isoleret fra ekstraherede visdomstænder). Organoiderne er robust og langsigtede udvidelige og rekapitulerer det foreslåede menneskelige tandepitel stamcellerum med hensyn til markørekspression såvel som funktionel aktivitet. Især er organoiderne i stand til at udfolde en ameloblastdifferentieringsproces som forekommer in vivo under amelogenese. Denne unikke organoidmodel vil give et kraftfuldt værktøj til at studere ikke kun menneskelig tandudvikling, men også tandpatologi og kan bane vejen for tandregenerativ terapi. Udskiftning af tabte tænder med en biologisk tand baseret på denne nye organoidmodel kan være et tiltalende alternativ til den nuværende standardimplantation af syntetiske materialer.

Tandorganoid udvikling Vi leverer en detaljeret protokol til etablering af organoidkulturer fra humant DF-væv erhvervet efter visdomstandekstraktion (figur 1A). Isoleret DF er enzymatisk og mekanisk dissocieret. De opnåede celler dyrkes inden for BMM i medier, der empirisk blev defineret for optimal organoid udvikling og vækst (tandorganoid medium; TOM)19.
Organoiderne udvikler sig typisk inden for 2 uger efter DF-cel...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy at JoVE.com

Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy

Vi præsenterer en protokol til udvikling af epitelorganoidkulturer startende fra menneskelig tand. Organoiderne er robust udvidelige og rekapitulerer tandens epitelstamceller, herunder deres ameloblastdifferentieringskapacitet. Den unikke organoidmodel giver et lovende værktøj til at studere human dental (stamcelle) biologi med perspektiver for tandregenerative tilgange.

Etablering af organoider fra menneskelig tand som et kraftfuldt værktøj mod mekanistisk forskning og regenerativ terapi

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development ...

Denne nye humane tandafledte organoidmodel giver det første kraftfulde værktøj til at dechiffrere human dental stamcellebiologi med perspektiver mod tandregenerative applikationer. På nuværende tidspunkt er denne tandorganoidmodel det eneste tilgængelige værktøj til pålideligt og robust at vokse og udvide menneskelige tandepitelstamceller. Denne organoidprotokol kan anvendes til at etablere forskningsmodeller, ikke kun fra sunde, men også syge tænder såsom tandtumorer og bakteriel indvirkning.Udforskning af sådanne sygdomsmodeller kan afdække nye terapeutiske mål. Denne organoidmodel er stærkt medvirkende til at dechiffrere emaljedannelsesprocessen i den menneskelige tand og kan muliggøre konstruktion af tanddele såsom emalje til generative formål. Det vil være Lara Hemeryck, ph.d.-studerende i min forskningsgruppe, der demonstrerer proceduren.Til at begynde med skal du samle de tredje molarer med tilhørende tandfollikler i opsamlingsmediet placeret på is og overføre indholdet af rørene til en petriskål. Hold tanden med en pincet og isoler forsigtigt tandsækkene ved hjælp af et kirurgisk blad. Vask det resterende blod af tandsækkene ved kort at placere tandfollikelvævene i den første brønd med 70% ethanol i 20 sekunder, og overfør det derefter til den næste død ethanolplade i 20 sekunder og videre til den tredje ethanolbrønd.Fortsæt med at skylle det i fosfatbufferede saltvandsbrønde tre gange efterfulgt af skylning af tandsækkene i de tre resterende tandfollikler opsamlingsmediumbrønde i højst 20 minutter i alt. Overfør de skyllede tandfollikler til en ny petriskål. Skær et lille stykke af en af tandsækkene til en paraformaldehydfiksering og opbevar det i et mikrocentrifugerør indeholdende 500 mikroliter opsamlingsmedium i højst seks timer.Hak resten af tandsækkene i små stykker og overfør dem til et 15 ml rør indeholdende fire milliliter forvarmet dissociationsmedium, og inkuber derefter røret ved 37 grader Celsius i to timer i vandbad. Hvert 15. minut pipetteres tandsækkens dissociationsmedium og blandes op og ned ved hjælp af en glaspipette for at fremskynde vævets opløsning. Når stykker af tandfollikler ikke længere observeres, skal du fortsætte med dissociationen ved hjælp af en indsnævret, brandpoleret Pasteur-pipette.I mellemtiden forberedes 10 ml medium A indeholdende 100 mikroliter DNase og tilsættes fem milliliter af dette medium til hvert rør med dissocierede tandfollikler. Inkuberes i et minut ved stuetemperatur. Skyl filteret med en milliliter medium A.Kombiner de flere rør med dissocierede tandfollikler fra en patient på dette trin, og centrifuger den filtrerede cellesuspension ved 200 gange g i 10 minutter ved 4 grader Celsius.Fjern supernatanten. Resuspend pelleten i en milliliter serumfrit defineret medium og overfør cellesuspensionen til et 1,5 ml mikrocentrifugerør. Beregn cellekoncentrationen ved hjælp af en automatiseret celletæller og beregn antallet af brønde, der kan podes.Den endelige blanding består af cellesuspension og kældermembranmatrix i et forhold på 30 til 70. Fjern den passende mængde supernatant, og resuspender den langsomt for at opnå et forhold på 70 til 30 mellem iskold kældermembranmatrix og cellesuspension til plettering. Når det er resuspended i kældermembranmatrixen, skal du holde mikrocentrifugerøret på is for at undgå størkning af membranmatrixen.Pipetter de 20 mikroliter af kældermembranmatrixdråber i midten af den forvarmede 48-brønds kulturplade. Vend pladen på hovedet og placer den for at størkne i en 1,9% kuldioxidinkubator ved 37 grader Celsius i 20 minutter. Tilsæt rho-associeret kinasehæmmer og amphotericin B til tandorganoidmedium og forvarm mediet i et 37 grader Celsius vandbad.Tag 48-brøndpladen fra inkubatoren. Placer det lodret og tilsæt 250 mikroliter af det forberedte forvarmede medium til hver brønd med en kældermembranmatrixdråbe indeholdende cellerne og returner pladen til kuldioxidinkubatoren. For at opdatere mediet skal du vippe pladen i en 45 graders vinkel.Fjern forsigtigt det forrige medium, mens du undgår at røre ved kældermembranmatrixdråben, og tilsæt 250 mikroliter af nyt forvarmet tandorganoidmedium hver anden til tredje dag. For at udføre organoidernes passage skal du fjerne mediet fra brøndene med organoider og samle op til fire sammenløbsbrønde. For at opsamle organoiderne tilsættes 400 mikroliter iskoldt serumfrit defineret medium pr. brønd direkte på membranmatrixdråben og pipetteres gentagne gange mediet op og ned, indtil hele dråben er løsnet.Hvis brønde samles, overføres de 400 mikroliter fra den første brønd til den næste for at løsne organoidet indeholdende dråber. Overfør den løsnede organoidsamling til et 1,5 mikroliter mikrocentrifugerør og gentag tilsætningen af serumfrit defineret medium, indtil alle organoidstrukturer er opsamlet fra brøndene. Centrifuger det ved 200 gange g i fem minutter ved 4 grader Celsius.Fjern supernatanten fra centrifugerøret, og resuspender pelleten i et forvarmt aliquot af TrypLE Express. Der tilsættes 400 mikroliter iskoldt serumfrit defineret medium for at inaktivere enzymet og centrifugeres ved 200 gange g i fem minutter ved 4 grader Celsius. Fjern supernatanten.Forspænd en spids med iskoldt serumfrit defineret medium, og suspender organoidpellet igen i steril tilstand. Re-suspension pellet i 200 mikroliter iskold serumfrit defineret medium til lavpassagemetoden. Skub den helt tømte pipettespids mod bunden af mikrocentrifugerøret for at reducere dens diameter.Pipetter op og ned i fem minutter for mekanisk at forstyrre organoiderne. Til metoden med højere passage skal pelleten resuspenderes i 700 mikroliter iskoldt serumfrit defineret medium med en P1000-spids. Tilføj en P200-spids til denne P1000-spids, og forlakér med iskoldt serumfrit defineret medium.Undgå dannelse af luftboble ved at justere pipettens lydstyrkeindstilling. Aspirere mindst 90% af mediumvolumenet med organoider og pipette op og ned i fem minutter for mekanisk at forstyrre organoiderne. Organoiderne udvikler sig typisk to uger efter dental follikelcellesåning.Organoiderne kan forlænges på lang sigt op til 11 passager. Såning omkring 20.000 celler pr. kældermembranmatrixdråbe giver en optimal tæthed af organoider, mens såning af højere celletal fører til suboptimal organoidudvækst med lignende organoider ved for høj densitet på grund af utilstrækkelig plads til at vokse. De udviklede organoider viser et tæt udseende og indeholder celler, der viser et højt nukleocytoplasmatisk forhold.Desuden udtrykker organoiderne ERM-markøren cytokeratin 14, der bekræfter deres epiteloprindelse og andre foreslåede ERM-markører, såsom P63, CD44 og integrin alfa-6. Organoider udtrykker SOX2, en velkendt DESC-markør hos mus. Interessant nok er hovedkomponenten i emaljematrixen, amelogenin, også udtrykt i organoiderne.Organoiderne bevarer deres ERMM-stammefænotype under passaging som vist ved den stabile ekspression af markører. For optimal langsigtet organoidvækst er det vigtigt at anvende de anbefalede passagemetoder, der betyder eller de lave passage- eller højere passagemetoder. Når de er dannet, kan organoiderne bruges til at undersøge amelogeneseprocessen yderligere, og emaljematrixaflejring opnås i øjeblikket ikke i tandplejeforskning.Denne teknik muliggør udforskning af tandepitel stamcellebiologi, processen med emaljedannelse og interaktionen med tandmesenchymet, et samspil, der er afgørende for korrekt tanddannelse.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral Genterapi for Diabetic keratopati: Virkninger på sårheling og Stem Cell Marker Expression i Human Organ-dyrkede hornhinder og limbal epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Generation af Integration-fri induceret pluripotente stamceller fra humane perifere mononucleære blodceller Brug episomale vektorer

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Behandling af menneskelige hjerte væv mod ekstracellulære Matrix selv samle Hydrogel for In Vitro og In Vivo applikationer

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation af standardiserede og reproducerbare forhjernen-type Cerebral Organoids fra menneskelige induceret pluripotente stamceller

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation af stillads-fri, tre-dimensionelle Insulin udtrykker Pancreatoids fra mus i bugspytkirtlen stamfaderen In Vitro

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Generation af inducerede neurale stamceller fra perifere mononukleære celler og differentiering mod dopaminerge neuron-prækursorer til transplantations studier

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Formation of Human Periodontal Ligament Cell Spheroids on Chitosan Films

Dannelsen af humane Periodontal ligament Cell Sfæroider på chitosan Films

Periodontal ligament (PDL) cells hold great promise for periodontal tissue regeneration. Conventionally, PDL cells are cultured on two-dimensional (2D) ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Vurdering af oxidative skader i den primære mus okulære overfladeceller / stamceller som reaktion på Ultraviolet-C (UV-C) Skader

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

En statisk selvstyret metode til generering af hjerneorganoider fra menneskelige embryonale stamceller

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Forberedelse af små RNA-biblioteker til sekventering fra tidlige museembryoner

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...