Name: establishing organoids from human tooth as a powerful tool toward mechanistic research and regenerative therapy
Uploaded: 2022-04-13T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy at JoVE.com

Мы благодарны всем сотрудникам Челюстно-лицевой хирургии (MKA) UZ Leuven, а также пациентам, за их неоценимую помощь в сборе свежеизвлеченных третьих моляров. Мы также хотели бы поблагодарить д-ра Рейнхильду Джейкобс и д-ра Элизабет Тийскенс за их помощь в сборе образцов. Эта работа была поддержана грантами KU Leuven (BOF) и FWO-Flanders (G061819N). Л.Х. является доктором философии FWO (1S84718N).

Все методы, описанные здесь, были одобрены Комитетом по этике исследований UZ/KU Leuven (13/0104U). Удаленные третьи моляры (зубы мудрости) были получены после информированного согласия пациентов.
1. Препараты
<ol><li>Предварительно прогреть 48-луночную культуральную пласти?...

<ol>
	<li>Yu, T., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+cellular+mechanisms+of+tooth+development,+homeostasis+and+repair.">Molecular and cellular mechanisms of tooth development, homeostasis and repair.</a> Development (Cambridge). 147 (2), (2020).</li><li>Arrow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+enamel+defects,+caries+experience+and+oral+health-related+quality+of+life:+a+cohort+study.">Dental enamel defects, caries experience and oral health-related quality of life: a cohort study.</a> Australian Dental Journal. 62 (2), 165-172 (2017).</li><li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G., Jimenez-Rojo, L., Zavan, B., Bressan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+Stem+Cells+for+Tooth+Regeneration.">Dental Stem Cells for Tooth Regeneration.</a> Dental Stem Cells: Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine. , (2016).</li><li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editorial:+a+new+era+in+dentistry:+stem+cell-based+approaches+for+tooth+and+periodontal+tissue+regeneration.">Editorial: a new era in dentistry: stem cell-based approaches for tooth and periodontal tissue regeneration.</a> Frontiers in Physiology. 7, 357 (2016).</li><li>Miran, S., Mitsiadis, T. A., Pagella, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovative+dental+stem+cell-based+research+approaches:+the+future+of+dentistry.">Innovative dental stem cell-based research approaches: the future of dentistry.</a> Stem Cells International. 2016, 7231038 (2016).</li><li>Shinmura, Y., Tsuchiya, S., Hata, K. I., Honda, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiescent+epithelial+cell+rests+of+malassez+can+differentiate+into+ameloblast-like+cells.">Quiescent epithelial cell rests of malassez can differentiate into ameloblast-like cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 217 (3), 728-738 (2008).</li><li>Davis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+epithelial+cell+rests+of+Malassez+on+the+bicentennial+of+their+description.">A review of the epithelial cell rests of Malassez on the bicentennial of their description.</a> Journal of Veterinary Dentistry. 35 (4), 290-298 (2018).</li><li>Athanassiou-Papaefthymiou, M., Papagerakis, P., Papagerakis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+adult+epithelial+stem+cells+from+the+periodontal+ligament.">Isolation and characterization of human adult epithelial stem cells from the periodontal ligament.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1591-1600 (2015).</li><li>Kim, G. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+establishment+of+dental+epithelial-like+stem+cells+derived+from+human+ESCs+and+iPSCs.">Differentiation and establishment of dental epithelial-like stem cells derived from human ESCs and iPSCs.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (12), 1-16 (2020).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Hertwig's+epithelial+root+sheath/+epithelial+rests+of+malassez+cell+line+from+human+periodontium.">Establishment of Hertwig's epithelial root sheath/ epithelial rests of malassez cell line from human periodontium.</a> Molecules and Cells. 37 (7), 562-567 (2014).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profile+of+the+stem+cell+markers+in+human+hertwig's+epithelial+root+sheath/Epithelial+rests+of+Malassez+cells.">Expression profile of the stem cell markers in human hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells.</a> Molecules and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).</li><li>Tsunematsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+odontogenic+epithelial+cells+derived+from+epithelial+rests+of+Malassez+possess+stem+cell+properties.">Human odontogenic epithelial cells derived from epithelial rests of Malassez possess stem cell properties.</a> Laboratory Investigation; A Journal of Technical Methods and Pathology. 96 (10), 1063-1075 (2016).</li><li>Artegiani, B., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+and+application+of+3D-organoid+technology.">Use and application of 3D-organoid technology.</a> Human Molecular Genetics. 27 (2), 99-107 (2018).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Cox, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+pituitary+as+a+novel+research+model+toward+pituitary+stem+cell+exploration.">Organoids from pituitary as a novel research model toward pituitary stem cell exploration.</a> Journal of Endocrinology. 240 (2), 287-308 (2019).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+organoids+from+mouse+and+human+endometrium+showing+endometrial+epithelium+physiology+and+long-term+expandability.">Development of organoids from mouse and human endometrium showing endometrial epithelium physiology and long-term expandability.</a> Development (Cambridge). 144 (10), 1775-1786 (2017).</li><li>Schutgens, F., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+tools+for+understanding+biology+and+treating+diseases).">Human organoids: tools for understanding biology and treating diseases).</a> Annual Review of Pathology. 15, 211-234 (2020).</li><li>Hemeryck, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+human+tooth+showing+epithelial+stemness+phenotype+and+differentiation+potential.">Organoids from human tooth showing epithelial stemness phenotype and differentiation potential.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 79 (3), 153 (2022).</li><li>Gao, X., Wu, Y., Liao, L., Tian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+organoids:+progress+and+challenges.">Oral organoids: progress and challenges.</a> Journal of Dental Research. 100 (5), 454-463 (2021).</li><li>Binder, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategies+for+expansion+of+tooth+epithelial+stem+cells+and+ameloblast+generation.">Novel strategies for expansion of tooth epithelial stem cells and ameloblast generation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4963 (2020).</li><li>Xiong, J., Mrozik, K., Gronthos, S., Bartold, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+rests+of+malassez+contain+unique+stem+cell+populations+capable+of+undergoing+epithelial-mesenchymal+transition.">Epithelial cell rests of malassez contain unique stem cell populations capable of undergoing epithelial-mesenchymal transition.</a> Stem Cells and Development. 21 (11), 2012-2025 (2012).</li><li>Luan, X., Ito, Y., Diekwisch, T. G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+of+Hertwig's+epithelial+root+sheath.">Evolution and development of Hertwig's epithelial root sheath.</a> Developmental Dynamics. 235 (5), 1167-1180 (2006).</li><li>Fukumoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+functions+of+enamel+matrices+in+calcified+tissues.">New insights into the functions of enamel matrices in calcified tissues.</a> Japanese Dental Science Review. 50 (2), 47-54 (2014).</li><li>Consolaro, A., Consolaro, M. F. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERM+functions,+EGF+and+orthodontic+movement+or+Why+doesn't+orthodontic+movement+cause+alveolodental+ankylosis.">ERM functions, EGF and orthodontic movement or Why doesn't orthodontic movement cause alveolodental ankylosis.</a> Dental Press Journal of Orthodontics. 15 (2), 24-32 (2010).</li><li>Guajardo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+localization+of+epidermal+growth+factor+in+cat+paradental+tissues+during+tooth+movement.">Immunohistochemical localization of epidermal growth factor in cat paradental tissues during tooth movement.</a> American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. 118 (2), 210-219 (2000).</li><li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells.">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 25 (6), 681-686 (2007).</li><li>Gon&#231;alves, J., Sasso-Cerri, E., Cerri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+and+quantitative+reduction+of+rests+of+Malassez+according+to+age.">Cell death and quantitative reduction of rests of Malassez according to age.</a> Journal of Periodontal Research. 43 (4), 478-481 (2008).</li><li>Kim, J., Koo, B. -. K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+Model+systems+for+human+biology+and+medicine.">Human organoids: Model systems for human biology and medicine.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).</li><li>Razmi, M. T., Narang, T., Handa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADULT+(acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth)+syndrome:+a+case+report+from+India.">ADULT (acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth) syndrome: a case report from India.</a> Indian Dermatology Online Journal. 9 (3), 194 (2018).</li><li>. Future Health Biobank Available from: <a target="_blank" href="https://futurehealthbiobank.com/ch-en/">https://futurehealthbiobank.com/ch-en/</a> (2022)</li><li>Schreurs, R. R. C. E., Baumdick, M. E., Drewniak, A., Bunders, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+co-culture+of+human+intestinal+organoids+and+lamina+propria-derived+CD4++T+cells.">In vitro co-culture of human intestinal organoids and lamina propria-derived CD4+ T cells.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100519 (2021).</li><li>Fiorini, E., Veghini, L., Corbo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cell+communication+in+cancer+with+organoids:+Making+the+complex+simple.">Modeling cell communication in cancer with organoids: Making the complex simple.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 166 (2020).</li><li>Gjorevski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+matrices+for+intestinal+stem+cell+and+organoid+culture.">Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture.</a> Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyisocyanide+hydrogels+as+a+tunable+platform+for+mammary+gland+organoid+formation.">Polyisocyanide hydrogels as a tunable platform for mammary gland organoid formation.</a> Advanced Science. 7 (18), 2001797 (2020).</li><li>Mollaki, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethical+challenges+in+organoid+use.">Ethical challenges in organoid use.</a> BioTech. 10 (3), 12 (2021).</li></ol>

Этот протокол описывает эффективную и воспроизводимую генерацию органоидов, начиная с человеческого зуба. Насколько нам известно, это первая методология создания современно-концептуальных (эпителиальных) органоидов, начиная с зубной ткани человека. Органоиды являются долгосрочными ...

Зубы играют важную роль в жевании пищи, речи и психологическом благополучии (самооценке). Зуб человека состоит из высокоминерализованных тканей различной плотности и твердости1. Зубная эмаль, основной компонент коронки зуба, является самой высокой минерализованной тканью в организме человека. Во время образования эмали (амелогенеза), когда развиваются зубы, зубные эпителиальные стволовые клетки (DESC) дифференцируются в эмалообразующие клетки (амелобласты). После образования эмаль редко восстанавливается или обновляется из-за апоптотической потери амелобластов в начале прорезывания зуба1. Восстановление поврежденной ткани эмали, вызванной травмой или бактериальным заболеванием, в настоящее время осуществляется с использованием синтетических материалов; тем не менее, они обеспокоены важными недостатками, такими как микроразрыв, нижняя остеоинтеграция и крепление, конечная продолжительность жизни и отсутствие полностью функционального ремонта2. Следовательно, прочная и надежная культура человеческих DESC, обладающих способностью генерировать амелобласты и потенциалом для производства минерализованной ткани, станет важным шагом вперед в области регенеративной области зубов.
Знания о фенотипе DESC человека и биологической функции скудны 3,4,5. Интересно, что DESC человеческих зубов были предложены для существования в остатках эпителиальных клеток Малассеза (ERM), клеточных кластерах, присутствующих в зубном фолликуле (DF), который окружает неразъединенные зубы и остается присутствующим в периодонтальной связке вокруг корня после прорезывания зуба1. Было обнаружено, что клетки ERM, культивируемые совместно с пульпой зуба, дифференцируются в амелобластоподобные клетки и генерируют эмалеобразную ткань6. Однако глубокие исследования специфической роли ERM-клеток в генерации эмали (re-) были ограничены из-за отсутствия надежных моделей исследования7. Современные системы культивирования ERM in vitro затруднены ограниченной продолжительностью жизни и быстрой потерей фенотипа в 2D-условиях, стандартно используемых 8,9,10,11,12. Следовательно, крайне необходима разрешимая система in vitro для добросовестного расширения, изучения и дифференциации человеческих DESC.
В течение последнего десятилетия мощная техника выращивания эпителиальных стволовых клеток in vitro была успешно применена к нескольким типам (человеческих) эпителиальных тканей для изучения их биологии, а также заболеваний 13,14,15,16. Эта технология позволяет тканевым эпителиальным стволовым клеткам самостоятельно развиваться в 3D-клеточные конструкции (то есть органоиды) при посеве во внеклеточный матрикс (ECM), имитирующий каркас (обычно Matrigel), и культивируемый в определенной среде, реплицирующей нишу стволовых клеток ткани, сигнализирующую и / или эмбриогенез. Типичные факторы роста, необходимые для развития органоидов, включают эпидермальный фактор роста (EGF) и активаторы сайта интеграции MMTV бескрылого типа (WNT) 14,15,16. Полученные органоиды характеризуются длительной точностью в имитации оригинальных эпителиальных стволовых клеток ткани, а также высокой расширяемостью при сохранении их фенотипа и функциональных свойств, тем самым преодолевая часто ограниченную первичную доступность тканей человека, приобретенную в клинике. Для установления органоидов выделение эпителиальных стволовых клеток из гетерогенной ткани (т.е. содержащей другие типы клеток, таких как мезенхимальные клетки) до культивирования не требуется, поскольку мезенхимальные клетки не прикрепляются или не процветают в ECM, что в конечном итоге приводит к чисто эпителиальным органоидам 13,16,17,18,19 . Эта многообещающая и универсальная технология привела к разработке многообразных органоидных моделей из различных эпителиальных тканей человека. Однако органоиды человеческого происхождения, ценные для глубокого изучения развития, регенерации и заболеваний зубов, еще не были установлены20,21. Недавно нам удалось разработать такую новую органоидную модель, начиная с DF-ткани из третьих моляров (зубов мудрости), удаленных у пациентов подросткового возраста19.
Здесь мы описываем протокол развития эпителиальных органоидных культур из взрослого человеческого зуба (т.е. из DF третьих моляров) (рисунок 1A). Результирующие органоиды экспрессируют ERM-ассоциированные маркеры стволовости, будучи при этом долгосрочными расширяемыми. Интересно, что в отличие от большинства других органоидных моделей, обычно необходимый EGF является избыточным для устойчивого развития и роста органоидов. Интересно, что органоиды ствола проявляют свойства дифференцировки амелобласта, тем самым имитируя особенности и процессы ERM/DESC, происходящие in vivo. Новая и уникальная органоидная модель, описанная здесь, позволяет исследовать биологию, пластичность и дифференциацию DESC и открывает двери для первых шагов к зубо-регенеративным подходам.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Microcentrifuge tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120.086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well flat bottom plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin Bovine (cell culture grade)</td>
			<td>Serva</td>
			<td>47330.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMELX antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-365284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15200018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 (without vitamin A)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cassette</td>
			<td>VWR</td>
			<td>7202191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catalase from bovine liver</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD44 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab34485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 40 &#181;m</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CK14 antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MA5-11599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>6310146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryobox</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovial</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1:1 F12 without Fe</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>074-90715A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM powder high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>52100039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5025-15KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663 - 10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding workstation, 220 to 240 Vac</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute, &#8805;99.8% (EtOH)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E/0650DF/15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF2 (= basic FGF)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>234-FSE-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF8</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenElute Mammaliam Total RNA Miniprep Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RTN350-1KT</td>
			<td>Includes 1% &#946;-mercaptoethanol dissolved in lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Niko Mechanisms</td>
			<td>170-40050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101194M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGF-1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Y-27632 (ROCK inhibitor, RI)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>688001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I6634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITGA6 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HPA012696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (growth factor-reduced; phenol red-free)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15505739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GV Syringe Filter Unit, 0.22&#160;&#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum essential medium eagle (&#945;MEM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M4526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse IgG (Alexa 555) secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl L-cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P63 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab124762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pap Pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>Marking pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA), 16%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8.18715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin (Pen/Strep)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette (P20, P200, P1000)</td>
			<td>Eppendorf or others</td>
			<td>2231300006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic transfer pipette (3.5&#160;mL)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1171.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit IgG (Alexa 488) secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSPO1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190 (p38i)</td>
			<td>Biotechne (Tocris)</td>
			<td>1264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel (surgical blade)</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHH</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>464-SH-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone molds (Heating block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-1918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>BDH</td>
			<td>102415K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-pyruvate (C3H3NaO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Real-Time PCR System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit, 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1000 &#956;L pipette tips with filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>740288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 20 &#956;L pipette tips with filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>774288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 200 &#956;L pipette tips with and without filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>739288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile H2O</td>
			<td>Fresenius</td>
			<td>B230531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superscript III first-strand synthesis supermix</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11752-050</td>
			<td>Reverse transcription kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12505356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin</td>
			<td>Serva</td>
			<td>36760.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium+DAPI</td>
			<td>Labconsult NV</td>
			<td>H-1200</td>
			<td>Antifade mounting medium with DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>Biotechne (Tocris)</td>
			<td>5036-WN-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes, 99%, for biochemistry and histology</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2,89,75,325</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing organoids from human tooth as a powerful tool toward mechanistic research and regenerative therapy

Зубы имеют ключевое значение в жизни не только для жевания пищи и речи, но и для психологического благополучия. Знаний о развитии зубов человека и биологии мало. В частности, мало что известно об эпителиальных стволовых клетках зуба и их функции. Нам удалось разработать новую органоидную модель, начиная с ткани человеческого зуба (то есть зубного фолликула, выделенного из удаленных зубов мудрости). Органоиды надежно и в долгосрочной перспективе расширяются и повторяют предложенный компартмент эпителиальных стволовых клеток человеческого зуба с точки зрения экспрессии маркеров, а также функциональной активности. В частности, органоиды способны разворачивать процесс дифференцировки амелобласта, происходящий in vivo во время амелогенеза. Эта уникальная органоидная модель предоставит мощный инструмент для изучения не только развития зубов человека, но и стоматологической патологии, и может проложить путь к регенеративной терапии зубов. Замена потерянных зубов биологическим зубом, основанным на этой новой органоидной модели, может стать привлекательной альтернативой нынешней стандартной имплантации синтетических материалов.

Развитие органоидов зуба Мы предоставляем подробный протокол для установления органоидных культур из DF-ткани человека, приобретенной после удаления зуба мудрости (рисунок 1A). Изолированный ДФ ферментативно и механически диссоциирован. Полученные клетки ку?...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy at JoVE.com

Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy

Представлен протокол развития эпителиальных органоидных культур, начиная с зубов человека. Органоиды надежно расширяются и рекапитулируют эпителиальные стволовые клетки зуба, включая их способность дифференцировать амелобласты. Уникальная органоидная модель предоставляет многообещающий инструмент для изучения биологии зубов человека (стволовых клеток) с перспективами для зубо-регенеративных подходов.

Создание органоидов из человеческих зубов в качестве мощного инструмента для механистических исследований и регенеративной терапии

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development ...

Эта новая органоидная модель человеческого зуба обеспечивает первый мощный инструмент для расшифровки биологии стволовых клеток зубов человека с перспективами регенеративного применения зубов. В настоящее время эта зубная органоидная модель является единственным доступным инструментом для надежного и надежного выращивания и расширения эпителиальных стволовых клеток зубов человека. Этот органоидный протокол может быть применен для создания исследовательских моделей не только здоровых, но и больных зубов, таких как опухоли зубов и бактериальное воздействие.Исследование таких моделей заболеваний может выявить новые терапевтические цели. Эта органоидная модель играет важную роль в расшифровке процесса образования эмали в зубе человека и может позволить конструировать части зуба, такие как эмаль, для генеративных целей. Продемонстрировать процедуру будет Лара Хемерик, аспирант в моей исследовательской группе.Для начала соберите третьи моляры с ассоциированными зубными фолликулами в коллекционную среду, помещенную на лед, и перенесите содержимое трубок в чашку Петри. Удерживайте зуб пинцетом и тщательно изолируйте зубные фолликулы с помощью хирургического лезвия. Смойте оставшуюся кровь с зубных фолликулов, ненадолго поместив ткани зубного фолликула в первую лунку с 70% этанолом на 20 секунд, затем перенесите ее на следующую пластину этанола смерти на 20 секунд и далее в третий этаноловый колодец.Продолжайте промывать его в фосфатно-буферных солевых колодцах три раза, а затем промывать зубные фолликулы в трех оставшихся зубных фолликулах в средних колодцах сбора в течение максимум 20 минут в общей сложности. Перенесите промытые зубные фолликулы в новую чашку Петри. Вырежьте небольшой кусочек одного из зубных фолликулов для фиксации параформальдегида и храните его в микроцентрифужной трубке, содержащей 500 микролитров среды для сбора, в течение максимум шести часов.Измельчите остальные зубные фолликулы на мелкие кусочки и переложите их в 15-миллилитровую трубку, содержащую четыре миллилитра предварительной диссоциационной среды, затем высиживают трубку при 37 градусах Цельсия в течение двух часов на водяной бане. Каждые 15 минут пипеткой исследуйте среду диссоциации зубных фолликулов и смешивайте вверх и вниз с помощью стеклянной пипетки, чтобы ускорить распад тканей. Когда кусочки зубных фолликулов больше не наблюдаются, приступайте к диссоциации с помощью суженной, отполированной огнем пипетки Пастера.Тем временем готовят 10 миллилитров среды А, содержащей 100 микролитров ДНКазы, и добавляют пять миллилитров этой среды в каждую трубку с диссоциированными зубными фолликулами. Инкубировать в течение одной минуты при комнатной температуре. Смойте фильтр одним миллилитром среды А.На этом этапе соедините несколько трубок диссоциированных зубных фолликулов одного пациента и центрифугируйте отфильтрованную клеточную суспензию в 200 раз в г в течение 10 минут при 4 градусах Цельсия.Удалите супернатант. Повторно суспендируют гранулу в одном миллилитре безсыворочной определенной среды и перенесут клеточную суспензию в 1,5-миллилитрную микроцентрифужную трубку. Рассчитайте концентрацию ячеек с помощью автоматизированного счетчика ячеек и рассчитайте количество скважин, которые могут быть засеяны.Конечная смесь состоит из клеточной суспензии и матрицы базальной мембраны в соотношении 30 к 70. Удалите соответствующее количество супернатанта и медленно повторно суспендируйте его, чтобы получить соотношение 70 к 30 ледяной матрице базальной мембраны к клеточной суспензии для покрытия. После повторного суспендирования в матрице базальной мембраны держите трубку микроцентрифуги на льду, чтобы избежать затвердевания матрицы базальной мембраны.Пипетка 20 микролитров базальной мембраны матричной капли в центр предварительно нагретой 48-луночной культуральной пластины. Переверните пластину вверх дном и поместите ее для затвердевания в инкубаторе углекислого газа 1,9% при 37 градусах Цельсия в течение 20 минут. Добавьте rho-ассоциированный ингибитор киназы и амфотерицин B в органоидную среду зуба и предварительно разогрейте среду на водяной бане с температурой 37 градусов Цельсия.Возьмите 48-луночную пластину из инкубатора. Поместите его вертикально и добавьте 250 микролитров подготовленной предварительно расплавленной среды в каждую лунку с помощью капли матрицы базальной мембраны, содержащей клетки, и верните пластину в инкубатор углекислого газа. Чтобы освежить среду, наклоните пластину под углом 45 градусов.Аккуратно удалите предыдущую среду, избегая при этом прикосновения к капле матрицы базальной мембраны и добавляйте 250 микролитров новой предварительно расплавленной зубной органоидной среды каждые два-три дня. Чтобы осуществить прохождение органоидов, удаляют среду из лунок с органоидами и объединяют до четырех сливающихся лунок. Чтобы собрать органоиды, добавьте 400 микролитров ледяной сывороточной определенной среды на лунку непосредственно на каплю мембранного матрикса и многократно пипеткой на среду вверх и вниз, пока вся капля не будет смещена.Если скважины объединены, перенесите 400 микролитров из первой скважины в следующую, чтобы выбить органоид, содержащий капли. Перенесите смещенную органоидную сборку в микроцентрифужную трубку объемом 1,5 микролитра и повторите добавление безсыворочной определенной среды до тех пор, пока все органоидные структуры не будут собраны из скважин. Центрифугируйте его в 200 раз г в течение пяти минут при 4 градусах Цельсия.Извлеките супернатант из трубки центрифуги и повторно суспендируйте гранулу в предварительно расплавленной аликвоте TrypLE Express. Добавьте 400 микролитров ледяной безмятежной определенной среды, чтобы инактивировать фермент и центрифугировать его в 200 раз в г в течение пяти минут при 4 градусах Цельсия. Удалите супернатант.Предварительно покройте наконечник ледяной безмятежной определенной средой и повторно суспендируйте органоидную гранулу в стерильном состоянии. Повторно суспендировать гранулу в 200 микролитрах ледяной сыворотки без определенной среды для метода с низким проходом. Прижмите полностью опорожненный наконечник пипетки к нижней части трубки микроцентрифуги, чтобы уменьшить ее диаметр.Пипетка вверх и вниз в течение пяти минут, чтобы механически нарушить работу органоидов. Для метода с более высоким проходом повторно суспендируйте гранулу в 700 микролитров ледяной сывороточной определенной среды с наконечником P1000. Добавьте наконечник P200 к этому наконечнику P1000 и предварительно покройте ледяной сывороточной средой.Предотвратите образование пузырьков воздуха, регулируя настройку громкости пипетки. Стремитесь по крайней мере на 90% объема среды с органоидами и пипеткой вверх и вниз в течение пяти минут, чтобы механически разрушить органоиды. Органоиды обычно развиваются через две недели после посева клеток зубного фолликула.Органоиды имеют длительное расширение до 11 проходов. Посев около 20 000 клеток на каплю матрицы базальной мембраны дает оптимальную плотность органоидов, тогда как посев более высоких чисел клеток приводит к неоптимальному органоидному росту с аналогичными органоидами при слишком высокой плотности из-за недостаточного пространства для роста. Развитые органоиды показывают плотный вид и содержат клетки, демонстрирующие высокое нуклеоцитоплазматическое соотношение.Кроме того, органоиды экспрессируют маркер ERM цитокератин 14, подтверждающий их эпителиальное происхождение и другие предложенные маркеры ERM, такие как P63, CD44 и интегрин альфа-6. Органоиды экспрессируют SOX2, хорошо известный маркер DESC у мышей. Интересно, что основной компонент эмалевого матрикса, амелогенин, также экспрессируется в органоидах.Органоиды сохраняют фенотип ствола ERMM во время пассирования, о чем свидетельствует стабильная экспрессия маркеров. Для оптимального долгосрочного роста органоидов важно использовать рекомендуемые методы прохода, означающие или методы низкого прохода или методы более высокого прохода. После образования органоиды могут быть использованы для дальнейшего изучения процесса амелогенеза и осаждения эмалевой матрицы, которое в настоящее время не достигается в стоматологических исследованиях.Этот метод позволяет исследовать биологию зубных эпителиальных стволовых клеток, процесс образования эмали и взаимодействие с мезенхимой зуба, взаимодействие, необходимое для правильного формирования зубов.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Аденовируса генной терапии для больных сахарным диабетом Кератопатия: Влияние на заживление ран и стволовых клеток маркера выражение в человеческих органов культивируемых роговиц и лимбальных эпителиальных клеток

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Генерация интеграции свободных индуцированные плюрипотентные стволовые клетки из человеческих мононуклеарных клеток периферической крови с помощью эписомальные векторы

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Обработка тканей человека сердца к внеклеточного матрикса самостоятельной сборки Гидрогель для In Vitro и In Vivo приложений

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Поколение стандартизированных и воспроизводимые переднего мозга тип мозгового Organoids от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Поколение эшафот бесплатно, трехмерные инсулина выражая Pancreatoids от мыши поджелудочной железы прародителями в пробирке

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Поколение индуцированных нейронных стволовых клеток из периферических моноядерных клеток и дифференциация к дофаминергическим нейронным прекурсорам для трансплантационных исследований

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Formation of Human Periodontal Ligament Cell Spheroids on Chitosan Films

Формирование сферонтальных связок человека сфероиды на chitosan Фильмы

Periodontal ligament (PDL) cells hold great promise for periodontal tissue regeneration. Conventionally, PDL cells are cultured on two-dimensional (2D) ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Оценка окислительного повреждения в первичной мыши глазной поверхностных клеток / стволовых клеток в ответ на ультрафиолет-C (UV-C) Ущерб

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

Статический самостоятельно направленный метод генерации органов мозга из эмбриональных стволовых клеток человека

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Подготовка малых РНК-библиотек для секвенирования ранних эмбрионов мыши

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...