Name: establishing organoids from human tooth as a powerful tool toward mechanistic research and regenerative therapy
Uploaded: 2022-04-13T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy at JoVE.com

Vi är tacksamma för alla anställda vid oral och maxillofacial kirurgi (MKA) av UZ Leuven, liksom patienterna, för deras ovärderliga hjälp med att samla in nyligen extraherade tredje molarer. Vi vill också tacka Dr. Reinhilde Jacobs och Dr. Elisabeth Tijskens för deras hjälp med provinsamlingen. Detta arbete stöddes av bidrag från KU Leuven (BOF) och FWO-Flandern (G061819N). L.H. är en FWO Ph.D. Fellow (1S84718N).

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av etikkommittén Research UZ/KU Leuven (13/0104U). Extraherade tredje molarer (visdomständer) erhölls efter patienternas informerade samtycke.
1. Förberedelser
<ol><li>Förvarma en odlingsplatta med 48 brunnar i 15-20 timmar i en 1,9%CO2-inkubator vid 37 °C.</li>
	<li>Kondensera en Matrigel alikvot (tillväxtfaktorreducerad; fenol rödfri; vidare kallad källarmembranmatris; BMM) på is (4 °C) i minst 2 timmar fö...

<ol>
	<li>Yu, T., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+cellular+mechanisms+of+tooth+development,+homeostasis+and+repair.">Molecular and cellular mechanisms of tooth development, homeostasis and repair.</a> Development (Cambridge). 147 (2), (2020).</li><li>Arrow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+enamel+defects,+caries+experience+and+oral+health-related+quality+of+life:+a+cohort+study.">Dental enamel defects, caries experience and oral health-related quality of life: a cohort study.</a> Australian Dental Journal. 62 (2), 165-172 (2017).</li><li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G., Jimenez-Rojo, L., Zavan, B., Bressan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+Stem+Cells+for+Tooth+Regeneration.">Dental Stem Cells for Tooth Regeneration.</a> Dental Stem Cells: Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine. , (2016).</li><li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editorial:+a+new+era+in+dentistry:+stem+cell-based+approaches+for+tooth+and+periodontal+tissue+regeneration.">Editorial: a new era in dentistry: stem cell-based approaches for tooth and periodontal tissue regeneration.</a> Frontiers in Physiology. 7, 357 (2016).</li><li>Miran, S., Mitsiadis, T. A., Pagella, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovative+dental+stem+cell-based+research+approaches:+the+future+of+dentistry.">Innovative dental stem cell-based research approaches: the future of dentistry.</a> Stem Cells International. 2016, 7231038 (2016).</li><li>Shinmura, Y., Tsuchiya, S., Hata, K. I., Honda, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiescent+epithelial+cell+rests+of+malassez+can+differentiate+into+ameloblast-like+cells.">Quiescent epithelial cell rests of malassez can differentiate into ameloblast-like cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 217 (3), 728-738 (2008).</li><li>Davis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+epithelial+cell+rests+of+Malassez+on+the+bicentennial+of+their+description.">A review of the epithelial cell rests of Malassez on the bicentennial of their description.</a> Journal of Veterinary Dentistry. 35 (4), 290-298 (2018).</li><li>Athanassiou-Papaefthymiou, M., Papagerakis, P., Papagerakis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+adult+epithelial+stem+cells+from+the+periodontal+ligament.">Isolation and characterization of human adult epithelial stem cells from the periodontal ligament.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1591-1600 (2015).</li><li>Kim, G. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+establishment+of+dental+epithelial-like+stem+cells+derived+from+human+ESCs+and+iPSCs.">Differentiation and establishment of dental epithelial-like stem cells derived from human ESCs and iPSCs.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (12), 1-16 (2020).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Hertwig's+epithelial+root+sheath/+epithelial+rests+of+malassez+cell+line+from+human+periodontium.">Establishment of Hertwig's epithelial root sheath/ epithelial rests of malassez cell line from human periodontium.</a> Molecules and Cells. 37 (7), 562-567 (2014).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profile+of+the+stem+cell+markers+in+human+hertwig's+epithelial+root+sheath/Epithelial+rests+of+Malassez+cells.">Expression profile of the stem cell markers in human hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells.</a> Molecules and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).</li><li>Tsunematsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+odontogenic+epithelial+cells+derived+from+epithelial+rests+of+Malassez+possess+stem+cell+properties.">Human odontogenic epithelial cells derived from epithelial rests of Malassez possess stem cell properties.</a> Laboratory Investigation; A Journal of Technical Methods and Pathology. 96 (10), 1063-1075 (2016).</li><li>Artegiani, B., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+and+application+of+3D-organoid+technology.">Use and application of 3D-organoid technology.</a> Human Molecular Genetics. 27 (2), 99-107 (2018).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening.">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li><li>Cox, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+pituitary+as+a+novel+research+model+toward+pituitary+stem+cell+exploration.">Organoids from pituitary as a novel research model toward pituitary stem cell exploration.</a> Journal of Endocrinology. 240 (2), 287-308 (2019).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+organoids+from+mouse+and+human+endometrium+showing+endometrial+epithelium+physiology+and+long-term+expandability.">Development of organoids from mouse and human endometrium showing endometrial epithelium physiology and long-term expandability.</a> Development (Cambridge). 144 (10), 1775-1786 (2017).</li><li>Schutgens, F., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+tools+for+understanding+biology+and+treating+diseases).">Human organoids: tools for understanding biology and treating diseases).</a> Annual Review of Pathology. 15, 211-234 (2020).</li><li>Hemeryck, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+from+human+tooth+showing+epithelial+stemness+phenotype+and+differentiation+potential.">Organoids from human tooth showing epithelial stemness phenotype and differentiation potential.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 79 (3), 153 (2022).</li><li>Gao, X., Wu, Y., Liao, L., Tian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+organoids:+progress+and+challenges.">Oral organoids: progress and challenges.</a> Journal of Dental Research. 100 (5), 454-463 (2021).</li><li>Binder, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategies+for+expansion+of+tooth+epithelial+stem+cells+and+ameloblast+generation.">Novel strategies for expansion of tooth epithelial stem cells and ameloblast generation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4963 (2020).</li><li>Xiong, J., Mrozik, K., Gronthos, S., Bartold, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+rests+of+malassez+contain+unique+stem+cell+populations+capable+of+undergoing+epithelial-mesenchymal+transition.">Epithelial cell rests of malassez contain unique stem cell populations capable of undergoing epithelial-mesenchymal transition.</a> Stem Cells and Development. 21 (11), 2012-2025 (2012).</li><li>Luan, X., Ito, Y., Diekwisch, T. G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+of+Hertwig's+epithelial+root+sheath.">Evolution and development of Hertwig's epithelial root sheath.</a> Developmental Dynamics. 235 (5), 1167-1180 (2006).</li><li>Fukumoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+functions+of+enamel+matrices+in+calcified+tissues.">New insights into the functions of enamel matrices in calcified tissues.</a> Japanese Dental Science Review. 50 (2), 47-54 (2014).</li><li>Consolaro, A., Consolaro, M. F. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERM+functions,+EGF+and+orthodontic+movement+or+Why+doesn't+orthodontic+movement+cause+alveolodental+ankylosis.">ERM functions, EGF and orthodontic movement or Why doesn't orthodontic movement cause alveolodental ankylosis.</a> Dental Press Journal of Orthodontics. 15 (2), 24-32 (2010).</li><li>Guajardo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+localization+of+epidermal+growth+factor+in+cat+paradental+tissues+during+tooth+movement.">Immunohistochemical localization of epidermal growth factor in cat paradental tissues during tooth movement.</a> American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. 118 (2), 210-219 (2000).</li><li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells.">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 25 (6), 681-686 (2007).</li><li>Gon&#231;alves, J., Sasso-Cerri, E., Cerri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+and+quantitative+reduction+of+rests+of+Malassez+according+to+age.">Cell death and quantitative reduction of rests of Malassez according to age.</a> Journal of Periodontal Research. 43 (4), 478-481 (2008).</li><li>Kim, J., Koo, B. -. K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+Model+systems+for+human+biology+and+medicine.">Human organoids: Model systems for human biology and medicine.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).</li><li>Razmi, M. T., Narang, T., Handa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADULT+(acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth)+syndrome:+a+case+report+from+India.">ADULT (acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth) syndrome: a case report from India.</a> Indian Dermatology Online Journal. 9 (3), 194 (2018).</li><li>. Future Health Biobank Available from: <a target="_blank" href="https://futurehealthbiobank.com/ch-en/">https://futurehealthbiobank.com/ch-en/</a> (2022)</li><li>Schreurs, R. R. C. E., Baumdick, M. E., Drewniak, A., Bunders, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+co-culture+of+human+intestinal+organoids+and+lamina+propria-derived+CD4++T+cells.">In vitro co-culture of human intestinal organoids and lamina propria-derived CD4+ T cells.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100519 (2021).</li><li>Fiorini, E., Veghini, L., Corbo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cell+communication+in+cancer+with+organoids:+Making+the+complex+simple.">Modeling cell communication in cancer with organoids: Making the complex simple.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 166 (2020).</li><li>Gjorevski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+matrices+for+intestinal+stem+cell+and+organoid+culture.">Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture.</a> Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyisocyanide+hydrogels+as+a+tunable+platform+for+mammary+gland+organoid+formation.">Polyisocyanide hydrogels as a tunable platform for mammary gland organoid formation.</a> Advanced Science. 7 (18), 2001797 (2020).</li><li>Mollaki, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethical+challenges+in+organoid+use.">Ethical challenges in organoid use.</a> BioTech. 10 (3), 12 (2021).</li></ol>

Detta protokoll beskriver den effektiva och reproducerbara genereringen av organoider med utgångspunkt från den mänskliga tanden. Såvitt vi vet är detta den första metoden för att etablera nuvarande koncept (epiteliala) organoider med utgångspunkt från mänsklig tandvävnad. Organoiderna är långsiktigt expanderbara och uppvisar en tandepitelstamhetsfenotyp, som duplicerar DESC som tidigare rapporterats i ERM-facket i DF7. Dessutom replikerar organoiderna funktionella DESC / ERM-egenskap...

Tänder har viktiga roller i matmasticering, tal och psykologiskt välbefinnande (självbild). Den mänskliga tanden består av mycket mineraliserade vävnader med varierande densitet och hårdhet1. Tandemaljen, huvudkomponenten i tandkronan, är den högsta mineraliserade vävnaden i människokroppen. Under emaljbildning (amelogenes), när tänderna utvecklas, differentieras tandepitelstamceller (DESC) till emaljbildande celler (ameloblaster). När den väl har bildats repareras eller förnyas emaljen sällan på grund av den apoptotiska förlusten av ameloblasterna vid början av tandutbrott1. Restaurering av skadad emaljvävnad, orsakad av trauma eller bakteriell sjukdom, utförs för närvarande med hjälp av syntetiska material; dessa är dock oroliga med viktiga brister som mikroleakage, sämre osseointegration och förankring, ändlig livslängd och brist på fullt fungerande reparation2. Därför skulle en robust och pålitlig odling av humana DESC med kapacitet att generera ameloblaster och potential att producera mineraliserad vävnad vara ett stort steg framåt inom det dentala regenerativa området.
Kunskap om human DESC fenotyp och biologisk funktion är knapp 3,4,5. Intressant nog har DESC av mänskliga tänder föreslagits att existera i Epitelcellsvila i Malassez (ERM), cellkluster som finns i tandfollikeln (DF), som omger oeruperade tänder och förblir närvarande i det parodontala ligamentet runt roten när tanden bryter ut1. ERM-celler samodlade med tandmassa har visat sig differentieras till ameloblastliknande celler och generera emaljliknande vävnad6. Djupgående studier av ERM-cellernas specifika roll i emaljgenerering (åter) har dock begränsats på grund av bristen på tillförlitliga studiemodeller7. Nuvarande ERM-in vitro-odlingssystem hämmas av begränsad livslängd och snabb förlust av fenotyp under de 2D-förhållanden som vanligtvis används 8,9,10,11,12. Därför behövs ett lätthanterligt in vitro-system för att troget expandera, studera och differentiera humana DESC.
Under det senaste decenniet har en kraftfull teknik för att odla epitelstamceller in vitro framgångsrikt tillämpats på flera typer av (mänskliga) epitelvävnader för att studera deras biologi såväl som sjukdom 13,14,15,16. Denna teknik gör det möjligt för vävnadsepitelstamcellerna att självutvecklas till 3D-cellkonstruktioner (dvs. organoider) när de sås in i en extracellulär matris (ECM) -härmande ställning (vanligtvis Matrigel) och odlas i ett definierat medium som replikerar vävnadens stamcellsnischsignalering och / eller embryogenes. Typiska tillväxtfaktorer som behövs för organoidutveckling inkluderar epidermal tillväxtfaktor (EGF) och mmtv-integrationsställen (WNT) av vinglös typ 14,15,16. De resulterande organoiderna kännetecknas av varaktig trohet när det gäller att efterlikna vävnadens ursprungliga epitelstamceller, liksom hög expanderbarhet samtidigt som de behåller sin fenotyp och funktionella egenskaper och därigenom övervinner den ofta begränsade primära mänskliga vävnadstillgängligheten som förvärvats från kliniken. För att etablera organoider krävs inte isolering av epitelstamcellerna från den heterogena vävnaden (dvs. innefattande andra celltyper såsom mesenkymala celler) före odling eftersom mesenkymala celler inte fäster vid eller trivs i ECM, vilket så småningom resulterar i rent epitelorganoider 13,16,17,18,19 . Denna lovande och mångsidiga teknik har lett till utvecklingen av mångfaldiga organoidmodeller från olika mänskliga epitelvävnader. Emellertid var mänskliga tand-härledda organoider, värdefulla för djup studie av tandutveckling, regenerering och sjukdom, inte etablerade ännu20,21. Vi lyckades nyligen utveckla en sådan ny organoidmodell med utgångspunkt från DF-vävnad från tredje molar (visdomständer) extraherade från ungdomar19.
Här beskriver vi protokollet för att utveckla epitelorganoidkulturer från den vuxna mänskliga tanden (dvs från DF för tredje molar) (Figur 1A). De resulterande organoiderna uttrycker ERM-associerade stamhetsmarkörer samtidigt som de är långsiktigt expanderbara. Intressant nog, i motsats till de flesta andra organoidmodeller, är den vanligtvis nödvändiga EGF överflödig för robust organoidutveckling och tillväxt. Intressant nog visar stamorganoiderna ameloblastdifferentieringsegenskaper och efterliknar därmed ERM / DESC-egenskaper och processer som förekommer in vivo. Den nya och unika organoidmodellen som beskrivs här gör det möjligt att utforska DESC-biologi, plasticitet och differentieringskapacitet och öppnar dörren för att ta de första stegen mot tandregenerativa tillvägagångssätt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Microcentrifuge tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120.086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well flat bottom plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin Bovine (cell culture grade)</td>
			<td>Serva</td>
			<td>47330.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMELX antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-365284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15200018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 (without vitamin A)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cassette</td>
			<td>VWR</td>
			<td>7202191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catalase from bovine liver</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD44 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab34485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 40 &#181;m</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CK14 antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MA5-11599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>6310146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryobox</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovial</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1:1 F12 without Fe</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>074-90715A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM powder high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>52100039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5025-15KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663 - 10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding workstation, 220 to 240 Vac</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12587976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute, &#8805;99.8% (EtOH)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E/0650DF/15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF2 (= basic FGF)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>234-FSE-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF8</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenElute Mammaliam Total RNA Miniprep Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RTN350-1KT</td>
			<td>Includes 1% &#946;-mercaptoethanol dissolved in lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Niko Mechanisms</td>
			<td>170-40050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101194M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGF-1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InSolution Y-27632 (ROCK inhibitor, RI)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>688001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I6634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITGA6 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HPA012696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (growth factor-reduced; phenol red-free)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15505739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GV Syringe Filter Unit, 0.22&#160;&#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum essential medium eagle (&#945;MEM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M4526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse IgG (Alexa 555) secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl L-cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P63 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab124762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pap Pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>Marking pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA), 16%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8.18715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin (Pen/Strep)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette (P20, P200, P1000)</td>
			<td>Eppendorf or others</td>
			<td>2231300006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic transfer pipette (3.5&#160;mL)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1171.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit IgG (Alexa 488) secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSPO1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190 (p38i)</td>
			<td>Biotechne (Tocris)</td>
			<td>1264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel (surgical blade)</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHH</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>464-SH-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone molds (Heating block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-1918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>BDH</td>
			<td>102415K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-pyruvate (C3H3NaO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-5280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Real-Time PCR System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit, 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1000 &#956;L pipette tips with filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>740288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 20 &#956;L pipette tips with filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>774288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 200 &#956;L pipette tips with and without filter</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>739288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile H2O</td>
			<td>Fresenius</td>
			<td>B230531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superscript III first-strand synthesis supermix</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11752-050</td>
			<td>Reverse transcription kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12505356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin</td>
			<td>Serva</td>
			<td>36760.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium+DAPI</td>
			<td>Labconsult NV</td>
			<td>H-1200</td>
			<td>Antifade mounting medium with DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>Biotechne (Tocris)</td>
			<td>5036-WN-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes, 99%, for biochemistry and histology</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2,89,75,325</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing organoids from human tooth as a powerful tool toward mechanistic research and regenerative therapy

Tänder är av avgörande betydelse i livet, inte bara för matmastik och tal utan också för psykologiskt välbefinnande. Kunskap om mänsklig tandutveckling och biologi är knapp. I synnerhet är inte mycket känt om tandens epitelstamceller och deras funktion. Vi lyckades utveckla en ny organoidmodell med utgångspunkt från mänsklig tandvävnad (dvs. tandfollikel, isolerad från extraherade visdomständer). Organoiderna är robust och långsiktigt expanderbara och rekapitulerar det föreslagna humana tandepiteliala stamcellsfacket när det gäller marköruttryck såväl som funktionell aktivitet. I synnerhet kan organoiderna utveckla en ameloblastdifferentieringsprocess som förekommer in vivo under amelogenes. Denna unika organoidmodell kommer att ge ett kraftfullt verktyg för att studera inte bara mänsklig tandutveckling utan också tandpatologi och kan bana väg för tandregenerativ terapi. Att ersätta förlorade tänder med en biologisk tand baserad på denna nya organoidmodell kan vara ett tilltalande alternativ till den nuvarande standardimplantationen av syntetiska material.

Tandorganoid utveckling Vi tillhandahåller ett detaljerat protokoll för att etablera organoidkulturer från mänsklig DF-vävnad som förvärvats efter extraktion av visdomstand (figur 1A). Isolerad DF dissocieras enzymatiskt och mekaniskt. De erhållna cellerna odlas inom BMM i media som empiriskt definierades för optimal organoidutveckling och tillväxt (tandorganoidmedium; TOM)19.
Organoiderna utvecklas vanligtvis ...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy at JoVE.com

Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy

Vi presenterar ett protokoll för att utveckla epitelorganoidkulturer med utgångspunkt från mänsklig tand. Organoiderna är robust expanderbara och rekapitulerar tandens epitelstamceller, inklusive deras ameloblastdifferentieringskapacitet. Den unika organoidmodellen ger ett lovande verktyg för att studera människans tandbiologi med perspektiv för tandregenerativa metoder.

Etablera organoider från mänsklig tand som ett kraftfullt verktyg mot mekanistisk forskning och regenerativ terapi

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development ...

Denna nya mänskliga tand-härledda organoidmodell ger det första kraftfulla verktyget för att dechiffrera mänsklig tandstamcellsbiologi med perspektiv mot tandregenerativa applikationer. För närvarande är denna tandorganoidmodell det enda tillgängliga verktyget för att på ett tillförlitligt och robust sätt växa och expandera mänskliga tandepitelstamceller. Detta organoidprotokoll kan tillämpas för att etablera forskningsmodeller, inte bara från friska utan också sjuka tänder som tandtumörer och bakteriell påverkan.Utforskning av sådana sjukdomsmodeller kan avslöja nya terapeutiska mål. Denna organoidmodell är mycket avgörande för att dechiffrera emaljbildningsprocessen i den mänskliga tanden och kan möjliggöra konstruktion av tanddelar som emalj för generativa ändamål. Visar proceduren kommer att vara Lara Hemeryck, doktorand i min forskargrupp.För att börja, samla de tredje molarna med tillhörande tandsäckar i uppsamlingsmediet placerat på is och överför innehållet i rören till en petriskål. Håll tanden med en pincett och isolera försiktigt tandfolliklarna med ett kirurgiskt blad. Tvätta det återstående blodet från tandfolliklarna genom att kort placera tandfollikelvävnaderna i den första brunnen av 70% etanol i 20 sekunder, överför det sedan till nästa dödsetanolplatta i 20 sekunder och vidare till den tredje etanolbrunnen.Fortsätt skölja den i fosfatbuffrade saltlösningsbrunnar tre gånger följt av sköljning av tandfolliklarna i de tre återstående tandfolliklarnas uppsamlingsmediumbrunnar i högst 20 minuter totalt. Överför de sköljda tandsäckarna till en ny petriskål. Skär en liten bit av en av tandfolliklarna för en paraformaldehydfixering och förvara den i ett mikrocentrifugrör som innehåller 500 mikroliter uppsamlingsmedium i högst sex timmar.Hacka resten av tandfolliklarna i små bitar och överför dem till ett 15-milliliter rör som innehåller fyra milliliter förvärmt dissociationsmedium och inkubera sedan röret vid 37 grader Celsius i två timmar i vattenbad. Var 15: e minut, pipettera tandfolliklarnas dissociationsmedium och blanda upp och ner med en glaspipett för att påskynda vävnadsupplösningen. När bitar av tandfolliklar inte längre observeras, fortsätt med dissociationen med en smalare, eldpolerad Pasteur-pipett.Under tiden beredde du 10 ml medium A innehållande 100 mikroliter DNase och tillsätt fem milliliter av detta medium till varje rör med dissocierade tandfolliklar. Inkubera i en minut vid rumstemperatur. Skölj filtret med en milliliter medium A.Kombinera flera rör av dissocierade tandsäckar från en patient i detta steg och centrifugera den filtrerade cellsuspensionen vid 200 gånger g i 10 minuter vid 4 grader Celsius.Ta bort supernatanten. Resuspendera pelleten i en milliliter serumfritt definierat medium och överför cellsuspensionen till ett 1,5 ml mikrocentrifugrör. Beräkna cellkoncentrationen med hjälp av en automatiserad cellräknare och beräkna antalet brunnar som kan utsädes.Den slutliga blandningen består av cellsuspension och källarmembranmatris i ett förhållande av 30 till 70. Ta bort lämplig mängd supernatant och återsuspendera den långsamt för att få ett 70-till-30-förhållande mellan iskall källarmembranmatris och cellsuspension för plätering. När den har återsuspenderats i källarmembranmatrisen, håll mikrocentrifugröret på is för att undvika stelning av basalmembranmatrisen.Pipettera de 20 mikroliterna av källarmembranmatrisdroppar i mitten av den förvärmda 48-brunnsodlingsplattan. Vänd plattan upp och ner och placera den för att stelna i en 1,9% koldioxidinkubator vid 37 grader Celsius i 20 minuter. Tillsätt rho-associerad kinashämmare och amfotericin B till tandorganoidmedium och förvarda mediet i ett 37-grader Celsius vattenbad.Ta 48-brunnsplattan från inkubatorn. Placera den upprätt och tillsätt 250 mikroliter av det beredda förvärmda mediet till varje brunn med en källarmembranmatrisdroppe som innehåller cellerna och återför plattan till koldioxidinkubatorn. För att uppdatera mediet, luta plattan i 45 graders vinkel.Ta försiktigt bort det tidigare mediet, samtidigt som du undviker att röra vid källarmembranmatrisdroppen och tillsätt 250 mikroliter av nytt förvärmt tandorganoidmedium varannan till var tredje dag. För att utföra organoidernas passage, ta bort mediet från brunnarna med organoider och poola upp till fyra konfluenta brunnar. För att samla organoiderna, tillsätt 400 mikroliter iskallt serumfritt definierat medium per brunn direkt på membranmatrisdroppen och pipettera upprepade gånger mediet upp och ner tills hela droppen lossnar.Om brunnar slås samman, överför de 400 mikrolitererna från den första brunnen till nästa för att lossa organoiden som innehåller droppar. Överför den lossnade organoidenheten till ett 1,5 mikroliter mikrocentrifugrör och upprepa tillsatsen av serumfritt definierat medium tills alla organoidstrukturer har samlats upp från brunnarna. Centrifugera den vid 200 gånger g i fem minuter vid 4 grader Celsius.Ta bort supernatanten från centrifugröret och återsuspendera pelleten i en förvärmd alikvot av TrypLE Express. Tillsätt 400 mikroliter iskallt serumfritt definierat medium för att inaktivera enzymet och centrifugera det vid 200 gånger g i fem minuter vid 4 grader Celsius. Ta bort supernatanten.Förbelägg en spets med iskallt serumfritt definierat medium och suspendera organoidpelleten igen i sterilt tillstånd. Suspendera pelleten på nytt i 200 mikroliter av iskallt serumfritt definierat medium för metoden med låg passage. Tryck den helt tömda pipettspetsen mot botten av mikrocentrifugröret för att minska dess diameter.Pipettera upp och ner i fem minuter för att mekaniskt störa organoiderna. För den högre passagemetoden, resuspendera pelleten i 700 mikroliter iskallt serumfritt definierat medium med en P1000-spets. Lägg till en P200-spets till denna P1000-spets och förbelägg med iskallt serumfritt definierat medium.Förhindra luftbubbelbildning genom att justera pipettens volyminställning. Sträva efter minst 90% av medelvolymen med organoider och pipett upp och ner i fem minuter för att mekaniskt störa organoiderna. Organoiderna utvecklas vanligtvis två veckor efter tandfollikelcellsådd.Organoiderna är långsiktigt expanderbara upp till 11 passager. Sådd av cirka 20 000 celler per källarmembranmatrisdroppe ger en optimal densitet av organoider, medan sådd av högre cellnummer leder till suboptimal organoidutväxt med liknande organoider med för hög densitet på grund av otillräckligt utrymme att växa. De utvecklade organoiderna visar ett tätt utseende och innehåller celler som uppvisar ett högt nukleocytoplasmatiskt förhållande.Dessutom uttrycker organoiderna ERM-markören cytokeratin 14 som bekräftar deras epiteliala ursprung och andra föreslagna ERM-markörer, såsom P63, CD44 och integrin alfa-6. Organoider uttrycker SOX2, en välkänd DESC-markör hos möss. Intressant är huvudkomponenten i emaljmatrisen, amelogenin, också uttryckt i organoiderna.Organoiderna behåller sin ERMM-stamhetsfenotyp under passering, vilket framgår av det stabila uttrycket av markörer. För optimal långsiktig organoidtillväxt är det viktigt att använda de rekommenderade passagemetoderna som betyder eller den låga passagen eller de högre passagemetoderna. När de väl har bildats kan organoiderna användas för att granska amelogenesprocessen ytterligare och emaljmatrisavsättning som för närvarande inte uppnås inom tandvårdsforskning.Denna teknik möjliggör utforskning av tandepitelial stamcellsbiologi, processen för emaljbildning och interaktionen med tandmesenkymet, ett samspel som är viktigt för korrekt tandbildning.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral genterapi för Diabetic keratopati: Effekter på sårläkning och Stamcells Marker Expression in Human Organ-odlade hornhinnor och limbus epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Generation Integrations-fria inducerade pluripotenta stamceller från humant perifert blod mononukleära celler med användning av episomala vektorer

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Processing of Human Cardiac Tissue Toward Extracellular Matrix Self-assembling Hydrogel for In Vitro and In Vivo Applications

Bearbetning av mänskliga hjärtvävnad mot extracellulära Matrix självmonterande Hydrogel för In Vitro och In Vivo applikationer

Acellular extracellular matrix preparations are useful for studying cell-matrix interactions and facilitate regenerative cell therapy applications. ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation av standardiserade och reproducerbara framhjärnan-typ Cerebral Organoids från mänskliga inducerade pluripotenta stamceller

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation av byggnadsställning-fri, tredimensionella Insulin att uttrycka Pancreatoids från mus bukspottskörteln föräldraparets In Vitro

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Generering av inducerade neurala stamceller från perifera mononukleära celler och differentiering mot dopaminerga neuron prekursorer för transplantations studier

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Formation of Human Periodontal Ligament Cell Spheroids on Chitosan Films

Bildandet av mänskliga parodontala ligament cell Sfäroider på Chitosan Films

Periodontal ligament (PDL) cells hold great promise for periodontal tissue regeneration. Conventionally, PDL cells are cultured on two-dimensional (2D) ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Bedömning av oxidativ skada i de primära musokulära ytcellerna/stamcellerna som svar på ultraviolett-C (UV-C) Skada

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

En statisk självstyrd metod för att generera hjärnorganoider från mänskliga embryonala stamceller

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Beredning av små RNA-bibliotek för sekvensering från tidiga musembryon

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...