Name: a model for epilepsy of infectious etiology using theiler's murine encephalomyelitis virus
Uploaded: 2022-06-23T12:40:00
Duration: 5 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus at JoVE.com

एसबी को एफयू बर्लिन के शुरुआती अनुदान द्वारा समर्थित किया जाता है। केएसडब्ल्यू को R37 NS065434 और ALSAM फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया जाता है। LAB एक D-SPAN पुरस्कार 1F99NS125773-01 द्वारा समर्थित है। हम रॉबर्ट फुजीनामी, पीएचडी को हमें थेइलर वायरस और माइक्रोस्कोपी समर्थन के लिए यूटा सेल इमेजिंग कोर सुविधा विश्वविद्यालय प्रदान करने के लिए धन्यवाद देते हैं।

<ol>
	<li>Getts, D. R., Balcar, V. J., Matsumoto, I., M&#252;ller, M., King, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viruses+and+the+immune+system:+their+roles+in+seizure+cascade+development.">Viruses and the immune system: their roles in seizure cascade development.</a> Journal of Neurochemistry. 104 (5), 1167-1176 (2008).</li><li>Libbey, J. E., Fujinami, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotropic+viral+infections+leading+to+epilepsy:+Focus+on+Theiler's+murine+encephalomyelitis+virus.">Neurotropic viral infections leading to epilepsy: Focus on Theiler's murine encephalomyelitis virus.</a> Future Virology. 6 (11), 1339-1350 (2011).</li><li>Vezzani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infections,+inflammation+and+epilepsy.">Infections, inflammation and epilepsy.</a> Acta Neuropathologica. 131 (2), 211-234 (2016).</li><li>Misra, U. K., Tan, C. T., Kalita, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+encephalitis+and+epilepsy.">Viral encephalitis and epilepsy.</a> Epilepsia. 49, 13-18 (2008).</li><li>Libbey, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures+following+picornavirus+infection).">Seizures following picornavirus infection).</a> Epilepsia. 49 (6), 1066-1074 (2008).</li><li>Stewart, K. A., Wilcox, K. S., Fujinami, R. S., White, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+postinfection+epilepsy+after+Theiler's+virus+infection+of+C57BL/6+mice.">Development of postinfection epilepsy after Theiler's virus infection of C57BL/6 mice.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 69 (12), 1210-1219 (2010).</li><li>Stewart, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+of+zebrafish+models+of+epilepsy:+What,+how+and+where+next.">Perspectives of zebrafish models of epilepsy: What, how and where next.</a> Brain Research Bulletin. 87 (2-3), 135-143 (2012).</li><li>Br&#246;er, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+inflammation,+neurodegeneration+and+seizure+development+following+picornavirus+infection+markedly+differ+among+virus+and+mouse+strains+and+substrains.">Brain inflammation, neurodegeneration and seizure development following picornavirus infection markedly differ among virus and mouse strains and substrains.</a> Experimental Neurology. 279, 57-74 (2016).</li><li>Br&#246;er, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+mouse+models+of+multiple+sclerosis+and+epilepsy:+Marked+differences+in+neuropathogenesis+following+infection+with+two+naturally+occurring+variants+of+Theiler's+virus+BeAn+strain.">Viral mouse models of multiple sclerosis and epilepsy: Marked differences in neuropathogenesis following infection with two naturally occurring variants of Theiler's virus BeAn strain.</a> Neurobiology of Disease. 99, 121-132 (2017).</li><li>Loewen, J. L., Barker-Haliski, M. L., Dahle, E. J., White, H. S., Wilcox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Injury,+gliosis,+and+glial+proliferation+in+two+models+of+temporal+lobe+epilepsy.">Neuronal Injury, gliosis, and glial proliferation in two models of temporal lobe epilepsy.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 75 (4), 366-378 (2016).</li><li>Bell, L. A., Wallis, G. J., Wilcox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivity+and+increased+proliferation+of+NG2+cells+following+central+nervous+system+infection+with+Theiler's+murine+encephalomyelitis+virus.">Reactivity and increased proliferation of NG2 cells following central nervous system infection with Theiler's murine encephalomyelitis virus.</a> Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 369 (2020).</li><li>Stewart, K. A., Wilcox, K. S., Fujinami, R. S., White, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theiler's+virus+infection+chronically+alters+seizure+susceptibility.">Theiler's virus infection chronically alters seizure susceptibility.</a> Epilepsia. 51 (8), 1418-1428 (2010).</li><li>Buenz, E. J., Rodriguez, M., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disrupted+spatial+memory+is+a+consequence+of+picornavirus+infection.">Disrupted spatial memory is a consequence of picornavirus infection.</a> Neurobiology of Disease. 24 (2), 266-273 (2006).</li><li>Tramoni-Negre, E., Lambert, I., Bartolomei, F., Felician, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+memory+deficits+in+temporal+lobe+epilepsy.">Long-term memory deficits in temporal lobe epilepsy.</a> Revue Neurologique. 173 (7-8), 490-497 (2017).</li><li>Ponds, R. W., Hendriks, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+rehabilitation+of+memory+problems+in+patients+with+epilepsy.">Cognitive rehabilitation of memory problems in patients with epilepsy.</a> Seizure. 15 (4), 267-273 (2006).</li><li>Sloviter, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+status+epilepticus+in+animals:+What+are+we+modeling.">Experimental status epilepticus in animals: What are we modeling.</a> Epilepsia. 12, 11-13 (2009).</li><li>L&#246;scher, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+seizures+and+epilepsy:+Past,+present,+and+future+role+for+the+discovery+of+antiseizure+drugs.">Animal models of seizures and epilepsy: Past, present, and future role for the discovery of antiseizure drugs.</a> Neurochemical Research. 42 (7), 1873-1888 (2017).</li><li>Kehne, J. H., Klein, B. D., Raeissi, S., Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+National+Institute+of+Neurological+Disorders+and+Stroke+(NINDS)+Epilepsy+Therapy+Screening+Program+(ETSP).">The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) Epilepsy Therapy Screening Program (ETSP).</a> Neurochemical Research. 42 (7), 1894-1903 (2017).</li><li>Metcalf, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+prototype+antiseizure+and+anti-inflammatory+compounds+in+the+Theiler's+murine+encephalomyelitis+virus+model+of+epilepsy.">Screening of prototype antiseizure and anti-inflammatory compounds in the Theiler's murine encephalomyelitis virus model of epilepsy.</a> Epilepsia Open. 7 (1), 46-58 (2021).</li><li>Daniels, J. B., Pappenheimer, A. M., Richardson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+encephalomyelitis+of+mice+(DA+strain).">Observations on encephalomyelitis of mice (DA strain).</a> Journal of Experimental Medicine. 96 (6), 517-530 (1952).</li><li>K&#228;ufer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+receptors+CCR2+and+CX3CR1+regulate+viral+encephalitis-induced+hippocampal+damage+but+not+seizures.">Chemokine receptors CCR2 and CX3CR1 regulate viral encephalitis-induced hippocampal damage but not seizures.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (38), 8929-8938 (2018).</li><li>Libbey, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+diet+on+the+severity+of+central+nervous+system+disease:+One+part+of+lab-to-lab+variability.">The effects of diet on the severity of central nervous system disease: One part of lab-to-lab variability.</a> Nutrition. 32 (7-8), 877-883 (2016).</li><li>Racine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+seizure+activity+by+electrical+stimulation.+II.+Motor+seizure.">Modification of seizure activity by electrical stimulation. II. Motor seizure.</a> Electroencephalography and Clinical Neurophysiology. 32 (3), 281-294 (1972).</li><li>Kim, J. E., Cho, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pilocarpine+model+of+temporal+lobe+epilepsy+and+EEG+monitoring+using+radiotelemetry+system+in+mice.">The pilocarpine model of temporal lobe epilepsy and EEG monitoring using radiotelemetry system in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56831 (2018).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Tu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-floating+immunostaining+of+mouse+brains.">Free-floating immunostaining of mouse brains.</a> Journal of Visualized Experiments. (176), e62876 (2021).</li></ol>

लेखक घोषणा करते हैं कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित नहीं हैं।

यह मिर्गी के लिए पहला संक्रमण-आधारित कृंतक मॉडल है जो तीव्र और पुरानी जब्ती विकास की जांच की अनुमति देता है। यह मिर्गी के सबसे आम ईटियोलॉजी में से एक के लिए रोग की रोकथाम या संशोधन के लिए दवा लक्ष्यों और नए यौगिकों की पहचान करने में मदद करेगा।
जैसा कि ऊपर वर्णित है, बैच और वायरल टिटर का सावधानीपूर्वक विचार यह सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक हो सकता है कि टीएमईवी-उपचारित चूहों का पर्याप्त अनुपात हैंडलिंग-प्रेरित दौरे का प्रदर्शन करता है। यदि जानवरों को सामान्य से कम दौरे पड़ते हैं, तो वायरस दक्षता को सत्यापित करने के लिए एन = 20 जानवरों के बैच का उपयोग करें। यदि इसकी गतिविधि कम हो जाती है (50% से कम), तो नए एलिकोट बनाने और उन्हें एन = 20 जानवरों के साथ परीक्षण करने का समय है। यदि नए एलिकोट अधिक कुशल नहीं हैं, तो वायरस के एक नए बैच को शुद्ध किया जाना चाहिए। कुछ ट्रांसजेनिक माउस लाइनों के लिए, कम वायरल टिटर का उपयोग करना आवश्यक हो सकता है; इसलिए, प्रारंभिक प्रयोगों के बाद वायरल टिटर को आवश्यकतानुसार पतला किया जाना चाहिए। बी 6 चूहों पर उपलब्ध अधिकांश डेटा जैक्सन प्रयोगशालाओं (बार हार्बर, एमई, यूएसए या चार्ल्स नदी, सल्ज़फेल्ड, जर्मनी) से उत्पन्न हुए; हालांकि, हार्लन (आइस्ट्रप, जर्मनी) से प्राप्त बी 6 चूहों में समान जब्तीदर की पुष्टि की गई है। बी 6 पृष्ठभूमि वाले ट्रांसजेनिक जानवरों की जब्ती दर जंगली प्रकार के बी 6 चूहों के बराबर है, लेकिन यदि आनुवंशिक परिवर्तनों का वायरस आक्रमण, भड़काऊ प्रतिक्रिया या न्यूरोडीजेनेरेशन21 पर प्रभाव पड़ता है तो यह भिन्न हो सकता है। तीव्र दौरे अनायास देखे जाते हैं लेकिन हैंडलिंग और शोर से ट्रिगर होते हैं, इसलिए जब जब्ती दरों की तुलना की जा रही है तो सभी जानवरों को समान तरीके से संभालना अत्यंत महत्वपूर्ण है। दो बार दैनिक हैंडलिंग सत्रों ने पहले एक उच्च जब्ती बोझ और संक्रमण 6,8,19 के बाद 3-7 दिनों के दौरान दौरे का प्रदर्शन करने वाले चूहोंके अधिक अनुपात को प्रदान किया है। जब्ती बोझ बढ़ाने के लिए अतिरिक्त हैंडलिंग सत्र (दिन 1 और दिन 2) भी नियोजित किए जा सकते हैं। इसके अलावा, जानवरों को प्रत्येक हैंडलिंग सत्र से पहले देखा जा सकता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि सहज दौरे नहीं हो रहे हैं। उदाहरण के लिए, एक जोर से प्रयोगशाला वातावरण, दौरे पैदा कर सकता है, जो बदले में, जानवरों को परीक्षण के समय के दौरान हैंडलिंग-प्रेरित दौरे के लिए दुर्दम्य बना सकता है।
जबकि टीएमईवी संक्रमण चूहों के बहुमत में हैंडलिंग-प्रेरित दौरे पैदा करता है, यह अज्ञात है कि कुछ जानवर इस उपचार के लिए प्रतिरोधी क्यों हैं। जैसा कि ऊपर वर्णित है, यह हो सकता है कि इलेक्ट्रोग्राफिक दौरे (न्यूनतम या कोई संबद्ध व्यवहार के साथ) होते हैं और सामान्य रूप से सहवर्ती ईईजी रिकॉर्डिंग के बिना परिमाणित नहीं होते हैं। यह भी हो सकता है कि इंजेक्शन स्थान में छोटे अंतर मस्तिष्क में कम वायरल प्रभाव की सुविधा प्रदान करते हैं; हालांकि, हिप्पोकैम्पस में वायरस के ट्रोपिज्मके कारण कॉर्टिकल और स्ट्रिएटल संक्रमण 5,6,8,9 के बाद दौरे की सूचना मिली है। इस मॉडल में ड्रग स्क्रीनिंग अध्ययनों के लिए, बरामदगी में कमी की पहचान करने के लिए (उदाहरण के लिए, जब्ती बोझ में 50% की कमी), प्रत्येक समूह के लिए जानवरों की एक बड़ी संख्या की आवश्यकता होती है (उदाहरण के लिए, एन = 20)। इसके अलावा, इस मॉडल में जब्ती व्यवहार में परिवर्तनशीलता एक महत्वपूर्ण जब्ती कमी की पहचान करने के लिए दवा बनाम वाहन प्रभाव में बड़े अंतर की आवश्यकता होती है। इसलिए, इस मॉडल की एक सीमा बड़े समूह आकारों की आवश्यकता है। फिर भी, पर्याप्त समूह आकार भी इस मॉडल 19 में विरोधी जब्ती और विरोधी भड़काऊ प्रभावों की पहचान के लिए अनुमतिदेते हैं।
इस मॉडल में अवलोकन योग्य दौरे का विशाल बहुमत तीव्र संक्रमण अवधि के दौरान होता है। टीएमईवी के साथ इलाज किए गए चूहों में हिप्पोकैम्पल अपघटन, प्रतिरक्षा कोशिका सक्रियण और संज्ञानात्मक घाटे की घटना के बावजूद, इलाज किए गए जानवरों का केवल एक छोटा सा हिस्सा अंततः पुरानी, सहज दौरे विकसित करता है। इस कम समग्र जब्ती बोझ को इस मॉडल में सहज दौरे का ठीक से अध्ययन करने के लिए बड़ी संख्या में संक्रमित चूहों की आवश्यकता होगी, जो कई परियोजनाओं के दायरे और क्षमता से परे है। गहराई इलेक्ट्रोड आरोपण और ईईजी निगरानी भी प्रयोगात्मक जानवरों पर बोझ बढ़ाएगी। जबकि गहराई इलेक्ट्रोड सहज जब्ती गतिविधि की पहचान में सहायता कर सकते हैं, संक्रमण के बाद हिप्पोकैम्पल शरीर रचना विज्ञान में परिवर्तन लगातार इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट को एक चुनौती बना सकता है।
मिर्गी के लिए नए उपचारों की पहचान करने की तत्काल आवश्यकता के लिए उन मॉडलों के विकास की आवश्यकता होती है जिनका उपयोग एंटीसेज़्योर प्रभावकारिता के लिए त्वरित स्क्रीनिंग विधि के रूप में किया जा सकता है। यह मॉडल इस तत्काल अनुरोध को संबोधित करने के लिए सुविधाएँ प्रदान करता है। इसके अलावा, तथ्य यह है कि इसे किसी भी स्टीरियोटैक्टिकल सर्जरी की आवश्यकता नहीं है, यह एंटीसेज़्योर यौगिकों की जांच के लिए एक उपयुक्त और आसान प्रदर्शन मॉडल बनाता है।

वायरल एन्सेफलाइटिस के लगातार परिणामों में से एक मिर्गी के दौरे हैं। कई वायरल संक्रमण संक्रमण के तीव्र चरण के दौरान रोगसूचक दौरे को ट्रिगर करते हैं; आम जनता के बीच इस तरह के दौरे का जोखिम 20% से अधिक बढ़ जाता है 1,2,3. संक्रमण से बचने वाले रोगियों में संक्रमण 1,4 के बाद महीनों से वर्षों में पुरानी मिर्गी के विकास का 4% -20% का खतरा बढ़ जाता है। वायरल एन्सेफलाइटिस 5,6,7 के माउस मॉडल में तीव्र और पुरानी बरामदगी का अध्ययन करने के लिए थेइलर के मुराइन एन्सेफलोमाइलाइटिस वायरस (टीएमईवी) को एक उपयुक्त वायरस के रूप में पहचाना गया है। टीएमईवी पिकोर्नविरिडे परिवार का एक गैर-आवरण, सकारात्मक-भावना, एकल-फंसे आरएनए वायरस है और पारंपरिक रूप से एसजेएल चूहों की रीढ़ की हड्डी में डिमाइलिनेशन का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है, जिससे सी 57बीएल / 6 (बी 6) चूहों को बचाया जाता है क्योंकि उनके पास संक्रमण के बाद वायरस को तेजी से साफ करने की क्षमता होती है। हालांकि, टीएमईवी पहले सप्ताह के भीतर पुरुष और महिला बी 6 चूहों के 50% -75% में तीव्र दौरे को प्रेरित करता है, जबकि लगभग 25% -40% पुरानी मिर्गी के हफ्तों से लेकर महीनोंतक 2,5,6,8,9 तक विकसित करते हैं। दौरे के अलावा, चूहे न्यूरोडीजेनेरेशन और ग्लिओसिस 5,6,8,10,11,12 के साथ मिर्गी हिप्पोकैम्पस की सामान्य हिस्टोपैथोलॉजी भी प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, टीएमईवी-संक्रमित बी 6 चूहे सीखने और स्मृति के लिए व्यवहार परीक्षणों में काफी खराब प्रदर्शन करते हैं और संज्ञानात्मक कोमोर्बिडिटी होती है, जो मिर्गी13,14,15 के नैदानिक रोगियों में भी देखी जाती है।
परंपरागत रूप से, मिर्गी और दौरे के मॉडल या तो केमोकोनवल्सेंट पदार्थों के आवेदन या दौरे को प्रेरित करने के लिए विद्युत उत्तेजना का उपयोग करते हैं; हालांकि, इन मॉडलों में निर्माण वैधता की कमी होती है और अक्सर नैदानिक रोगियों की तुलना में अधिक गंभीर दौरे और मस्तिष्क क्षति प्रदर्शित होतीहै। ऐसा कोई मॉडल नहीं है जो प्रत्येक शोध प्रश्न17 के लिए उपयुक्त हो। टीएमईवी मॉडल का उपयोग करना विशेष रूप से दिलचस्प है यदि सीएनएस के संक्रमण के बाद जब्ती विकास के पूर्ववर्ती कारकों पर शोध किया जाता है या यदि यौगिकों को उनकी एंटीसेज़्योर दक्षता के लिए जांच की जाती है।
चूंकि टीएमईवी मॉडल को अंतरराष्ट्रीय स्तर पर कई अलग-अलग प्रयोगशालाओं में स्थापित और उपयोग किया गया है, लेखकों ने कई विवरणों की पहचान की है जो मॉडल के सफल कार्यान्वयन की अनुमति देते हैं, उदाहरण के लिए, विभिन्न वायरस और माउस उपभेदों की विशिष्टता। सबसे विश्वसनीय जब्ती प्रेरण टीएमईवी और बी 6 जे चूहों 2,5,6,8,9 के डैनियल के तनाव के साथ उत्पन्न हुआ था। मॉडल वर्तमान में नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ न्यूरोलॉजिकल डिसऑर्डर एंड स्ट्रोक (एनआईएनडीएस) द्वारा मिर्गी और दौरे के खिलाफ नई दवाओं की पहचान करने के लिए एक मंच के रूप में उपयोगकिया जाता है। इस पेपर में वायरस प्रेरण और नैदानिक निगरानी के विस्तृत प्रोटोकॉल शामिल हैं ताकि अन्य शोधकर्ताओं को रोग तंत्र की समझ को आगे बढ़ाने के साथ-साथ दवा परीक्षण के लिए वायरल एन्सेफलाइटिस के इस मॉडल का उपयोग करने की अनुमति मिल सके।
निम्नलिखित प्रोटोकॉल इस मॉडल में यौगिक परीक्षण के लिए डिज़ाइन किए गए एक अध्ययन को दर्शाता है, हालांकि कई अन्य प्रकार के अध्ययन किए जा सकते हैं। चूहों को दाहिने गोलार्ध के अस्थायी क्षेत्र (दाईं आंख के पीछे और औसत दर्जे) में टीएमईवी के डैनियल के तनाव के साथ इंजेक्शन से पहले संक्षेप में एनेस्थेटाइज किया जाता है। शोध प्रश्न के आधार पर, यदि गैर-संक्रमित नियंत्रण जानवरों की आवश्यकता होती है, तो चूहों को टीएमईवी के बजाय बाँझ फॉस्फेट-बफर्ड खारा (पीबीएस, पीएच7.4, केएच2पीओ 4 [1.06 एमएम], एनएसीएल [155.17 एमएम], और एनए2एचपीओ4.7 एच2ओ [2.97 एमएम]) प्राप्त होता है। टीएमईवी-संक्रमित चूहों में पिछले अनुभव ने संकेत दिया है कि हैंडलिंग-प्रेरित दौरे संक्रमण के दिन 3 और दिन 7 के बीच होते हैं। इंजेक्शन की आवृत्ति, मार्ग और प्रयोगात्मक यौगिकों के परीक्षण का समय उनके गुणों के अनुसार भिन्न होता है। शुक्रवार को वायरस टीकाकरण करने की सिफारिश की जाती है, जो अगले सप्ताह, सोमवार-शुक्रवार को दिन 3-7 जब्ती निगरानी करने की अनुमति देता है। जब्ती निगरानी सप्ताह के दौरान, प्रयोगात्मक यौगिकों को दिन में दो बार (कम से कम 4 घंटे अलग) प्रशासित किया जा सकता है जब तक कि यौगिक के कैनेटीक्स या कार्रवाई के तंत्र द्वारा अन्यथा सुझाव नहीं दिया जाता है। उपचार के दौरान जब्ती निगरानी पहले से निर्धारित समय बिंदु पर की जा सकती है। इंजेक्शन और अवलोकन समय अलग-अलग यौगिकों के आधार पर भिन्न होते हैं। जानवरों को परीक्षण यौगिक के साथ या दवा यौगिक के बदले एक वाहन के साथ इंजेक्शन दिया जाता है। इन दो समूहों को प्रयोगात्मक समूह के अनुरूप संभाला और देखा जा सकता है। प्रयोग के दौरान, चूहों को संभालने और दौरे को स्कोर करने वाले एक व्यक्ति को उपचार के लिए अंधा कर दिया जाना चाहिए।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Absorbent paper</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>any</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo (Columbus, OH, U.S.A.)</td>
			<td>30216542</td>
			<td>0. 1 mg&#8211;220 g&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal balance</td>
			<td>Ohaus (Parsippany, NJ, U.S.A.)</td>
			<td>STX2202</td>
			<td>0.01 g&#8211;2200 g&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Lo-Dose U-100 Insulin Syringes</td>
			<td>BD (Mississauga, ON, Canada)&#160;</td>
			<td>BD329461</td>
			<td>Lo-Dose sterile syringes with permanent BD Micro-Fine IV needle - 1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Daniel&#39;s strain of TMEV</td>
			<td>kindly provided by Robert Fujinami (University of Utah)</td>
			<td>-</td>
			<td>3 x 105 plaque-forming units aliquot(s)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant, e.g. VennoVet 1 super</td>
			<td>Menno Chemie Vertriebsgesellschaft GmbH, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td>Recommended by campus veterinarians with less than or equal to 5% alcohol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand medium sterile Alcohol prep pad C7&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, U.S.A.)</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluriso</td>
			<td>VETone (Boise, ID, U.S.A)</td>
			<td>502017</td>
			<td>Isoflurane 250 mL, 2%&#8211;5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fume absorber&#160;</td>
			<td>Labconco (Kansas City, MO, U.S.A.)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Protection Disposable SMS White Lab Coats&#160;&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, U.S.A.)</td>
			<td>17-100-810A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism version 9&#160;</td>
			<td>(La Jolla, CA, U.S.A.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bucket</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>any</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel Microsoft&#160;</td>
			<td>(Redmond, WA, U.S.A.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Word Microsoft&#160;</td>
			<td>(Redmond, WA, U.S.A.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse cage</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>any mouse cage holding at least 5 mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide needles&#160;</td>
			<td>BD (Mississauga, ON, Canada)</td>
			<td>329652</td>
			<td>BD Slip Tip with PrecisionGlide Needle Insulin Syringes - 26 G x 3/8 - 0.45 mm x 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-Sealing Sterilizing Pouch&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific (Hampton, NY, U.S.A.)</td>
			<td>NC9241087&#160;</td>
			<td>12.6 x 25.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small glass flask</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>any, volume 25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, U.S.A.)</td>
			<td>10010056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir bar</td>
			<td>Carl Roth GmbH &#38; CO. KG</td>
			<td>X171.1</td>
			<td>size according to volume of solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir plate</td>
			<td>Carl Roth GmbH &#38; CO. KG</td>
			<td>AAN2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Luer-Lok</td>
			<td>BD (Mississauga, ON, Canada)</td>
			<td>309628</td>
			<td>1 mL syringe only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Cleaner, Heater/Mechanical Timer</td>
			<td>Cole-Parmer (Vernon Hills, IL, U.S.A.)</td>
			<td>EW-08895-23</td>
			<td>Bath sonicator - 0.5 gal, 115 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vehicle solution</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>depending on compound vehicle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex REAX&#160;</td>
			<td>Heidolph Instruments GmbH &#38; Co. KG, Germany</td>
			<td>541-10000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model for epilepsy of infectious etiology using theiler's murine encephalomyelitis virus

मिर्गी के मुख्य कारणों में से एक केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) का संक्रमण है; इस तरह के संक्रमण से बचने वाले लगभग 8% रोगी परिणामस्वरूप मिर्गी विकसित करते हैं, कम आर्थिक रूप से विकसित देशों में दर काफी अधिक होती है। यह काम संक्रामक एटियलजि के मिर्गी मॉडलिंग का अवलोकन प्रदान करता है और इसे उपन्यास एंटीसेज़्योर यौगिक परीक्षण के लिए एक मंच के रूप में उपयोग करता है। सी 57बीएल /6 चूहों में थीइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस (टीएमईवी) के गैर-स्टीरियोटैक्टिक इंट्रासेरेब्रल इंजेक्शन द्वारा मिर्गी प्रेरण का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है, जो मानव रोगियों में वायरल एन्सेफलाइटिस और बाद में मिर्गी के कई शुरुआती और पुराने नैदानिक लक्षणों को दोहराता है। जब्ती गतिविधि की निगरानी करने और नए यौगिकों के संभावित एंटीसेज़्योर प्रभावों का पता लगाने के लिए एन्सेफलाइटिस के दौरान चूहों का नैदानिक मूल्यांकन वर्णित है। इसके अलावा, वायरल एन्सेफलाइटिस और हिप्पोकैम्पल क्षति और न्यूरोइन्फ्लेमेशन जैसे दौरे के हिस्टोपैथोलॉजिकल परिणाम दिखाए जाते हैं, साथ ही साथ सहज मिर्गी के दौरे जैसे दीर्घकालिक परिणाम भी दिखाए जाते हैं। टीएमईवी मॉडल सीएनएस संक्रमण के परिणामस्वरूप मिर्गी के विकास के तंत्र की जांच की अनुमति देने के लिए पहले ट्रांसलेशनल, संक्रमण-संचालित, प्रयोगात्मक प्लेटफार्मों में से एक है। इस प्रकार, यह सीएनएस संक्रमण के बाद मिर्गी के विकास के जोखिम वाले रोगियों के लिए संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों और यौगिकों की पहचान करने का भी कार्य करता है।

तीव्र दौरे पर यौगिक प्रभाव व्यवहार संबंधी दौरे दर्ज किए जाते हैं यदि वे ड्रग इंजेक्शन (डीआई) के दौरान या बाद के एएम / पीएम जब्ती हैंडलिंग / निगरानी सत्रों के दौरान होते हैं। बरामदगी से निपटने के दौरान देखे गए दौरे को गर्मी मानचित्र के रूप में प्रस्तुत किया जा सकता है, जिसे एलईवी (350 मिलीग्राम / किग्रा) के लिए चित्रा 2 में दिखाया गया है। जब्ती बोझ के विश्लेषण के लिए, वाहन-उपचारित समूह के लिए अंतिम (दिन 7) संचयी जब्ती बोझ मूल्यों का औसत लिया जाता है और मान-व्हिटनी यू परीक्षण द्वारा यौगिक उपचारित समूह से तुलना की जाती है (जब्ती बोझ मूल्यों में इंजेक्शन के बाद के अवलोकन में एकत्र किए गए शामिल हैं)। यौगिक प्रभावकारिता के लिए, फिशर का सटीक परीक्षण यह निर्धारित करता है कि वाहन- और दवा-उपचारित समूहों के बीच प्रभावकारिता में सांख्यिकीय अंतर है या नहीं। इसी तरह, फिशर के सटीक परीक्षण के साथ सहनशीलता डेटा का विश्लेषण किया जाता है। प्रयोग के दौरान परिवर्तनों को निर्धारित करने के लिए बॉडीवेट विश्लेषण एनोवा को बार-बार मापकर किया जाता है, साथ ही यौगिक- और वाहन-उपचारित चूहों के बीच अंतर भी।
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63673/63673fig02.jpg"> चित्रा 2: वाहन (0.5% मिथाइलसेल्यूलोज) या एलईवी (350 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ परीक्षण के बाद व्यवहार संबंधी दौरे का एक गर्मी मानचित्र। हैंडलिंग और जब्ती अवलोकन से 1 घंटे पहले दो बार दैनिक इंजेक्शन हुए। व्यवहार संबंधी दौरे दर्ज किए गए थे यदि वे ड्रग इंजेक्शन (डीआई) के दौरान या बाद में एएम / पीएम जब्ती हैंडलिंग / निगरानी सत्रों के दौरान हुए थे। लेव (350 मिलीग्राम / किग्रा) 5 दिन की अवलोकन अवधि में हैंडलिंग सत्र (वाहन जब्ती बोझ का 35.9%) के दौरान देखे गए दौरे को काफी कम कर देता है। गर्मी का नक्शा हरे रंग में चरण 1-3, पीले रंग में 4 और नारंगी में 5 को चित्रित करके बनाया गया है। यह नया आंकड़ा प्रकाशित डेटासेट19 से बनाया गया था। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63673/63673fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
पुरानी मिर्गी पहले सप्ताह पाई में रिपोर्ट किए गए जब्ती बोझ के अलावा, कई रीडआउट हैं जो अध्ययन और परिकल्पना के आधार पर उपयोगी हो सकते हैं। यदि जानवरों को लंबे समय तक रखा जाता है, तो संक्रमित जानवरों का एक उप-समूह कई हफ्तों में सहज मिर्गी के दौरे विकसित करेगा, जो तीव्र दौरे की तुलना में कम बार होता है और इस प्रकार, ईईजी रिकॉर्डिंग की आवश्यकता होती है। चूहों से ईईजी रिकॉर्ड करने के लिए, इलेक्ट्रोड को स्टीरियोटैक्सिक सर्जरी24 में प्रत्यारोपित करने की आवश्यकता होती है। चित्रा 3 टीएमईवी 8 से संक्रमित चूहों में ईईजी रिकॉर्डिंग द्वारा पुराने चरण में विभिन्न मिर्गी की घटनाओं को दर्शाताहै।
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63673/63673fig03.jpg"> चित्र 3: चूहों में डीए वायरस संक्रमण के बाद क्रोनिक चरण (14 सप्ताह पाई) में विशिष्ट ईईजी निशान। (ए-सी) प्रतिनिधि ईईजी घटनाएं जिनमें कोई व्यवहार मोटर सहसंबंध नहीं देखा गया था, यानी, (ए) एकल स्पाइक्स, (बी) स्पाइक क्लस्टर, (सी) के साथ-साथ एक इलेक्ट्रोग्राफिक, संभवतः फोकल जब्ती। (डी-एफ) व्यवहार संबंधी सहसंबंधों के साथ प्रतिनिधि ईईजी घटनाएं। डी में चित्रित माउस में मायोक्लोनिक स्विच ("एम" द्वारा इंगित, आंदोलन कलाकृतियों के साथ), रूढ़िवादी आंदोलनों ("हेड प्रेस" द्वारा इंगित, जब माउस ने सिर को जमीन पर सपाट रूप से दबाया), या व्यवहार गिरफ्तारी के साथ जब्ती जैसी घटनाएं थीं; "एससीआर" खरोंच के एक आंदोलन विरूपण साक्ष्य का वर्णन करता है, (ई) और (एफ) सामान्यीकृत स्वास्थ्य दौरे के दौरान विशिष्ट ईईजी परिवर्तन दिखाते हैं: (ई) 22 एस और 1 हर्ट्ज की अवधि के साथ एक रेसीन चरण 3 जब्ती, और (एफ) 34 एस और 5.4 हर्ट्ज की अवधि के साथ चरण 5 दौरे। यह आंकड़ा8 से पहले प्रकाशित किया गया है और एल्सेवियर की अनुमति से पुनर्मुद्रित किया गया है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63673/63673fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
प्रोटोकॉल चूंकि मिर्गी और दौरे आमतौर पर रोगियों में हिप्पोकैम्पल पैथोलॉजी के साथ होते हैं, जिसे प्रयोगात्मक मॉडल में पुन: परिभाषित किया जाता है, इसलिए अधिकांश प्रयोगशालाएं हिप्पोकैम्पल परिवर्तनों या पैथोलॉजी पर संभावित एंटीसेज़्योर उपचार के प्रभाव का भी विश्लेषण करती हैं। आमतौर पर विश्लेषण किए गए मापदंडों में हिप्पोकैम्पल न्यूरोडीजेनेरेशन और सिकुड़न, साथ ही विशिष्ट प्रतिरक्षा कोशिका आबादी के लिए लेबलिंग द्वारा सूजन शामिल है। इस तरह के विश्लेषणों के लिए, प्रयोग के अंत में, चूहों को गहराई से एनेस्थेटाइज किया जाता है जब तक कि श्वास गिरफ्तारी नहीं होती है और हृदय गति काफी धीमी हो जाती है या अतालता दिखाती है। ऊतक को ठीक करने के लिए पीबीएस के इंट्राकार्डियल छिड़काव द्वारा रक्त को हटा दिया जाता है, जिसके बाद 4% पैराफॉर्मलडिहाइड (पीएफए) 25 होता है। ऊतक को तब क्रायोसेक्शनिंग और (प्रतिरक्षा-) धुंधला26 द्वारा संसाधित किया जाता है, इसके बाद सूक्ष्म विश्लेषण किया जाता है।
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63673/63673fig04.jpg"> (ए, बी) क्रेसिल वायलेट-सना हुआ कोरोनल सेक्शन एक (ए) नियंत्रण (पीबीएस) माउस में सामान्य साइटोआर्किटेक्चर और 2 महीने की पाई पर एक (बी) टीएमईवी माउस में हिप्पोकैम्पल अपघटन दिखाते हैं। नोट: बढ़े हुए पार्श्व वेंट्रिकल्स, एल्वस का पतन, और पिरामिड सेल परत का पतला होना। (सी) इस क्षति का परिमाणीकरण हिप्पोकैम्पल क्षेत्र में उल्लेखनीय कमी और टीएमईवी चूहों (एन = 7) बनाम पीबीएस चूहों (एन = 6) के वेंट्रिकुलर क्षेत्र में इसी वृद्धि को दर्शाता है; डेटा एसईएम ± औसत है; पी < 0.001; छात्र का टी-टेस्ट)। (D, E) न्यून लेबलिंग आगे 6 महीने पाई पर लिए गए वर्गों में न्यूरोनल सेल हानि के परिमाण को दर्शाता है। तीर पूर्ण पिरामिड सेल हानि वाले क्षेत्रों को इंगित करते हैं। (ई) डेंटेट गाइरस मिर्गी चूहों में भी अपेक्षाकृत बरकरार प्रतीत होता है। स्केल बार = (ए, बी) 2 मिमी; (डी, ई) 0.5 मिमी। यह आंकड़ा6 से पहले प्रकाशित किया गया है और ऑक्सफोर्ड यूनिवर्सिटी प्रेस की अनुमति से पुनर्मुद्रित किया गया <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63673/63673fig04large.jpg" target="_blank">है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63673/63673fig05.jpg"> चित्रा 5: संक्रमण के 7 दिनों के बाद तीव्र एन्सेफलाइटिस के कारण टी सेल घुसपैठ की विभिन्न गंभीरता के प्रतिनिधि फोटोमाइक्रोग्राफ। टी-लिम्फोसाइटों को लेबल करने के लिए पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस वाले सीरियल सेक्शन को सीडी 3 के खिलाफ एंटीबॉडी से दाग दिया गया था। (ए, डी) टी सेल घुसपैठ के बिना एक सामान्य हिप्पोकैम्पस जैसा कि यह नकली संक्रमित जानवरों में दिखाई देता है। (बी, ई) मध्यम टी सेल घुसपैठ जैसा कि टीएमईवी-संक्रमित चूहों के बहुमत में देखा जाता है। (C, F) टी लिम्फोसाइटों की एक गंभीर घुसपैठ, जो केवल कुछ संक्रमित चूहों में देखी गई थी। यह आंकड़ा8 से पहले प्रकाशित किया गया है और एल्सेवियर की अनुमति से पुनर्मुद्रित किया गया है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63673/63673fig05large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
पूरक फ़ाइल 1: पूरक फ़ाइल में टीएमईवी मॉडल में यौगिक परीक्षण के लिए उपयोग किया जाने वाला फॉर्म होता है। पृष्ठ 1 प्रयोगात्मक सेटअप का अवलोकन देता है। यौगिक, वाहन और यौगिक समाधान तैयार करने की जानकारी पृष्ठ 1-2 पर दर्ज की गई है। यौगिक अनुप्रयोग पृष्ठ 3 पर दर्ज किया गया है। पृष्ठ 4-5 पर स्कोरिंग शीट का उपयोग यौगिक इंजेक्शन करने वाले प्रयोगकर्ता द्वारा देखे गए और परिमाणित बरामदगी को रिकॉर्ड करने के लिए किया जाता है। पृष्ठ 4 पर, प्रत्येक 5 चूहों के पिंजरों 1-4 के लिए डेटा एकत्र किया जा सकता है, और पृष्ठ 5 पर, पिंजरों 5-8 को दर्ज किया जा सकता है, जो हमारे हाथों में यौगिक परीक्षण के लिए जानवरों की मानक संख्या है। पृष्ठ 6-7 पर स्कोरिंग शीट का उपयोग अंधे पर्यवेक्षक द्वारा किया जाता है जो प्रत्येक यौगिक इंजेक्शन के 1 घंटे बाद अवलोकन, हैंडलिंग और कोमल पिंजरे हिला रहा है। फिर, इन अनुकरणीय स्कोर शीटों पर कुल आठ पिंजरों के लिए जब्ती स्कोर नोट किया जा सकता है। अंतिम पृष्ठ 8 का उपयोग किसी भी अन्य अवलोकन या नोट्स को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63673/Suppl.%20File%201.zip" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus at JoVE.com

A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus

सी 57बीएल /6 चूहों में थेइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस (टीएमईवी) के साथ इंट्रासेरेब्रल संक्रमण मानव रोगियों में वायरल एन्सेफलाइटिस और बाद में मिर्गी के कई शुरुआती और पुराने नैदानिक लक्षणों को दोहराता है। यह पेपर टीएमईवी मॉडल के वायरस संक्रमण, लक्षण और हिस्टोपैथोलॉजी का वर्णन करता है।

थेइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस का उपयोग करके संक्रामक एटियलजि के मिर्गी के लिए एक मॉडल

One of the main causes of epilepsy is an infection of the central nervous system (CNS); approximately 8% of patients who survive such an infection develop ...

टीएमईवी मॉडल सीएनएस संक्रमण के परिणामस्वरूप जब्ती विकास के तंत्र की जांच की अनुमति देने के लिए पहले प्रयोगात्मक प्लेटफार्मों में से एक है। सीएनएस संक्रमण मिर्गी के जोखिम को काफी बढ़ाता है। ये मॉडल जोखिम वाले रोगियों के लिए संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों और यौगिकों की पहचान करने में मदद करता है।प्रयोगकर्ताओं को चूहों के साथ काम करने में प्रशिक्षित किया जाना चाहिए। पर्याप्त परिशुद्धता और दिनचर्या प्राप्त करने के लिए मृत जानवरों में डाई इंजेक्ट करके वायरस इंजेक्शन का बहुत अच्छी तरह से अभ्यास किया जा सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन लौरा बेल, मेरी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र होगा।शुरू करने के लिए, इंसुलिन सिरिंज की टोपी को हटा दें और 2.5 मिलीमीटर की पर्याप्त इंजेक्शन गहराई सुनिश्चित करने के लिए सुई के चारों ओर कॉलर के रूप में पॉलीथीन ट्यूबिंग जोड़ें। फिर सिरिंज को इथेनॉल में 30 मिनट के लिए डुबोएं और सिरिंज को 30 मिनट के लिए यूवी प्रकाश के नीचे रखें। इसके बाद, टोपी को सुई पर वापस रखें और सिरिंज को एक स्टरलाइज़िंग थैली में लपेटें।थैली को बंद करने के लिए टेप करें और तैयारी की तारीख के साथ लेबल करें। वायरस इंजेक्शन करने के लिए, माइनस 80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर से टीएमईवी के डेनियल स्ट्रेन के एलिकोट प्राप्त करें। वायरस को पिघलाएं और इसे बर्फ पर रखें।फिर वायरस निलंबन के साथ सिरिंज लोड करें। बाद में, बेंच को कीटाणुनाशक से साफ करें और फ्यूम अवशोषक के तहत काम करें। एनेस्थेटाइज्ड माउस को हुड के नीचे एनेस्थीसिया बॉक्स से स्थानांतरित करें और पैर की अंगुली चुटकी करके सर्जिकल सहिष्णुता की जांच करें।फिर अल्कोहल पैड से जानवर के सिर को साफ करें और माउस के सिर को बाईं ओर थोड़ा झुकाएं ताकि इंजेक्शन साइट ऊपर की ओर इशारा कर रही हो। त्वचा को थोड़ा पीछे की ओर खींचें और सुई को सिर में डालें। इसके बाद, दाएं गोलार्ध के अस्थायी क्षेत्र में 2.5 मिलीमीटर की गहराई तक इंट्राकॉर्डिक रूप से 20 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें।सिरिंज को पांच से 15 सेकंड के लिए छोड़ दें और इंजेक्शन से किसी भी रिसाव की जांच करें या अगर हवा के बुलबुले दिखाई देते हैं, तो एक नई सिरिंज तैयार करें। सिरिंज को ध्यान से खींचते समय, इसे थोड़ा घुमाएं। फिर जानवर को एक नए पिंजरे में स्थानांतरित करें, जिसे संज्ञाहरण से वसूली के दौरान आधा-ऑन, आधा हीटिंग पैड रखा जाता है।और जानवरों को तब तक लावारिस न छोड़ें जब तक कि वे उरोस्थि पुनरावृत्ति बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त न कर लें। सबसे पहले, सभी पिंजरों को बेंच पर लाएं और प्रकाश चरण के दौरान रोजाना दो बार दौरे के लिए जानवरों का निरीक्षण करें। एक संशोधित रेसिंग पैमाने द्वारा जब्ती गतिविधि को स्कोर करें और बरामदगी की संख्या और तीव्रता की रिपोर्ट करें।इसके बाद, कुछ शोर मचाने के लिए पिंजरे के पार एक पेन स्लाइड करें और प्रत्येक जानवर को दूसरे बॉक्स और वापस स्थानांतरित करें। उन जानवरों के लिए जिन्होंने अनायास या कोमल पिंजरे के झटकों के बाद जब्त नहीं किया है, माउस को बाएं से दाएं उसकी पूंछ पर पलटकर सावधानीपूर्वक घुमाते हुए अधिक तीव्र हैंडलिंग द्वारा दौरे को ट्रिगर करते हैं। जब्ती व्यवहार के लिए प्रत्येक जानवर को फिर से देखें और बाद के पिंजरों के लिए प्रक्रिया को दोहराएं।व्यवहार संबंधी दौरे दर्ज किए गए थे यदि वे दवा इंजेक्शन के दौरान या बाद में जब्ती हैंडलिंग निगरानी सत्रों के दौरान हुए थे। देखे गए डेटा को विभिन्न रंगों में जब्ती चरणों को चित्रित करके बनाए गए गर्मी मानचित्र के रूप में प्रस्तुत किया गया था। ईईजी रिकॉर्ड करके, टीएमईवी के संक्रमण के महीनों बाद, पुराने चरण में विभिन्न मिर्गी की घटनाओं की पहचान की जा सकती है।हिप्पोकैम्पल अपघटन और मिर्गी टीएमईवी-संक्रमित चूहों की मात्रा का परिमाणीकरण हिप्पोकैम्पल क्षेत्र में उल्लेखनीय कमी और नियंत्रण की तुलना में टीएमईवी चूहों के वेंट्रिकुलर क्षेत्र में इसी वृद्धि को दर्शाता है। इम्यूनोहिस्टोलॉजिकल विश्लेषण भड़काऊ कोशिकाओं की उपस्थिति जैसे विभिन्न मापदंडों पर जानकारी प्रदान कर सकता है। इस मामले में, हिप्पोकैम्पस वाले वर्गों को टी लिम्फोसाइटों को लेबल करने के लिए एंटीबॉडी के साथ दाग दिया गया था।नकली संक्रमित जानवर कोई टी-सेल घुसपैठ नहीं दिखाते हैं, जबकि टीएमईवी-संक्रमित चूहों के बहुमत में मध्यम घुसपैठ देखी गई थी। संक्रमित चूहों में से कुछ टी लिम्फोसाइटों की गंभीर घुसपैठ दिखाते हैं। प्रत्येक अवलोकन अवधि के दौरान सभी जानवरों को दौरे नहीं पड़ते हैं।इसके अलावा, दौरे की सबसे अधिक घटनाएं टीकाकरण के बाद पांच और छह दिनों में होती हैं। हम संक्रमण-प्रेरित दौरे के खिलाफ नई एंटी-जब्ती दवाओं की प्रभावकारिता का परीक्षण करने के लिए टीएमईवी मॉडल का उपयोग करते हैं। कोमोरिड व्यवहार परिवर्तन और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परिवर्तनों की जांच करने वाले परखों का भी मूल्यांकन किया जा सकता है।टीएमईवी मॉडल ने मिर्गी अनुसंधान समुदाय को टेम्पोरल लोब मिर्गी के पहले सीएनएस संक्रमण-प्रेरित मॉडल के साथ प्रदान किया है, जिससे संक्रमण के बाद एपिलेप्टोजेनेसिस के अंतर्निहित तंत्र की जांच की अनुमति मिलती है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

अग्रमस्तिष्क लारवल Zebrafish में electrophysiological रिकॉर्डिंग

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Establishing Mouse Models for Zika Virus-induced Neurological Disorders Using Intracerebral Injection Strategies: Embryonic, Neonatal, and Adult

Zika वायरस के लिए माउस मॉडल की स्थापना-प्रेरित मस्तिष्क संबंधी विकार इंट्रा इंजेक्शन रणनीतियों का उपयोग: भ्रूण, नवजात, और वयस्क

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

अवजालतनिका नकसीर के एक Murine मॉडल में सेरेब्रल Vasospasm के ठहराव के लिए एक Volumetric विधि

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Analyzing Neural Activity and Connectivity Using Intracranial EEG Data with SPM Software

का विश्लेषण तंत्रिका गतिविधि और एसपीएम सॉफ्टवेयर के साथ Intracranial ईईजी डेटा का उपयोग कर कनेक्टिविटी

Measuring neural activity and connectivity associated with cognitive functions at high spatial and temporal resolutions is an important goal in cognitive ...

Inducement and Evaluation of a Murine Model of Experimental Myopia

प्रलोभन और प्रायोगिक अदूरदर्शिता के एक Murine मॉडल का मूल्यांकन

Murine model of myopia can be a powerful tool for myopia research because of the comparatively easy genetic manipulation. One way to induce myopia in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

मिर्गी के एक ज़ेब्राफ़िश मॉडल में व्यवहार और शारीरिक विश्लेषण

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

A Human Blood-Brain Interface Model to Study Barrier Crossings by Pathogens or Medicines and Their Interactions with the Brain

एक मानव रक्त मस्तिष्क इंटरफेस मॉडल रोगजनकों या दवाओं और मस्तिष्क के साथ उनकी बातचीत द्वारा बैरियर क्रॉसिंग का अध्ययन करने के लिए

The early screening of nervous system medicines on a pertinent and reliable in cellulo BBB model for their penetration and their interaction with the ...

Analysis of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage with High Frequency Transcranial Duplex Ultrasound

उच्च आवृत्ति ट्रांसक्रैनियल डुप्लेक्स अल्ट्रासाउंड के साथ सुबाराक्नॉइड हेमरेज के मुरीन मॉडल में सेरेब्रल वासोस्पास्म का विश्लेषण

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

मिर्गी के माउस मॉडल में गर्मी प्रेरित दौरे के लिए एक व्यवहार स्क्रीन

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...